一種殼聚糖磁性納米微球的制備方法及其用途
【專利摘要】一種殼聚糖磁性納米微球的制備方法及其用途，用水溶性殼聚糖緊密包封超順磁性納米粒子合成。本發(fā)明的殼聚糖磁性納米微球合成簡單、綠色、快捷，尺寸和磁性顆粒包覆量可以調控，具有較高的生物相容性和穩(wěn)定性。從尺寸和弛豫率角度考慮，這種磁性殼聚糖納米微球作為磁共振造影劑，在腫瘤早期診斷及影像跟蹤療效評估等醫(yī)學領域具有較大的應用潛能。
【專利說明】一種殼聚糖磁性納米微球的制備方法及其用途
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種納米復合材料的制備，具體設計一種殼聚糖磁性納米微球的制備方法及其用途。
【背景技術】
[0002]磁共振成像是一種用于疾病或組織壞死等無創(chuàng)實時檢測的強大診斷工具，在病變的早期診斷方面可能很有用。盡管磁共振成像技術可以提供軟組織高分辨率的解剖學圖像，但正常組織與病變部位在質子弛豫時間上的較小的差別，導致純粹圖像難以支撐精確醫(yī)學診斷。為此，增強圖像對比度的材料一磁共振成像造影劑被開發(fā)，使得影像學圖像細節(jié)對比更明顯。通常順磁性的釓配合物能夠縮短質子縱向弛豫時間T1，從而引起更亮化的磁共振顯影對比，是為正染色效應；另外，超順磁性氧化鐵基納米粒子可以縮短質子橫向弛豫時間T2,由暗化增加信號對比度，是為負染色效應。
[0003]由于卓越的磁性質和活體內較長的循環(huán)時間，超順磁性納米粒子成為下一代磁共振成像造影劑。從簡化合成工藝、降低成本、提高磁化強度及成像效果角度考慮，超順磁性氧化鐵基納米粒子無疑是一種最優(yōu)化的選擇。然而，這一類造影劑在組織成像應用中遭遇了定位性不足和靈敏性低的缺陷，進而由較高的次均注射量引起對正常組織的毒性。面臨這一難題，涌現(xiàn)出了很多巧妙的設計和優(yōu)異的工作，諸如:給納米粒子表面修飾靶向基團或聚乙二醇(PEG)以提高其對病變組織尤其是癌細胞的富集能力，進而增強造影效果并降低毒性；優(yōu)化條件合成高質量、大粒徑的超順磁性納米顆粒，通過提高磁共振橫向弛豫率(r2)來增加造影效能。但是，基于延長在體內循環(huán)時間、增加造影劑在腫瘤內被動靶向富集量的考慮，一般進入市場和臨床試用較多的主要是由高分子包裹超順磁性納米顆粒簇所構造的一系列有效造影劑，如:Feridex(菲立磁)、Resovist及Endorem等。這些造影產品主要是由疏水高分子鏈段包覆磁性顆粒團簇成核，表面以親水聚合物鏈段維持穩(wěn)定。因此，造影劑粒徑分布較難控制、橫向弛豫率值1"2提高有限，激起了科學工作者開發(fā)新產品的熱情。
[0004]提取自蝦蟹殼的殼聚糖是一種可生物降解聚多糖，無毒和生物相容性賦予了其在生物醫(yī)藥領域的廣泛應用。與其他生物降解聚合物相比，聚陽離子的殼聚糖對細胞膜具有更強的親和力并極易將各種功能材料內化入細胞。此外，膜黏著性延長了其在目標基質上的停留時間。豐富的官能團為進一步修飾殼聚糖提供了空間，若殼聚糖用作復合基質構造功能器件可以為功能材料形成穩(wěn)定且足夠大的封裝空間，因此，該多糖將有為疾病診斷、生物活性分子傳輸和組織修復等領域搭建器件平臺的巨大潛能。
【發(fā)明內容】
[0005]本發(fā)明提供一種殼聚糖磁性納米微球的制備方法，用水溶性殼聚糖緊密包封超順磁性納米粒子團簇合成。
[0006]本發(fā)明還提供了一種殼聚糖磁性納米微球的應用，作為一種造影劑，有超高的r2弛豫率值。
[0007]本發(fā)明提供的一種殼聚糖磁性納米微球的制備方法，包括以下步驟:
[0008](I)、制備超順磁性氧化鐵基納米顆粒；
[0009](2)、制備緊密包裹超順磁性氧化鐵納米粒子團簇的殼聚糖微球。
[0010]步驟(I)所述超順磁性氧化鐵基納米顆粒包括超順磁性Fe3O4納米粒子和超順磁性MnFe2O4納米粒子。
[0011]步驟(I)制備超順磁性Fe3O4納米粒子的步驟為:
[0012]進一步的，步驟(I)制備超順磁性Fe3O4納米粒子的步驟為:將2.12克乙酰丙酮鐵與50毫升四甘醇的混合液在攪拌下110°C加熱I小時，而后在210-295?范圍內持續(xù)加熱回流3小時，氮氣氛全程保護，產物于室溫下用乙醚沉淀分離，并以乙醚與乙醇混合液洗滌兩次，干燥得超順磁性Fe3O4納米粒子,粒徑為7.7-10.4nm。
[0013]步驟⑴制備超順磁性MnFe2O4納米粒子的步驟為:將0.7克乙酰丙酮錳、1.41克乙酰丙酮鐵與50毫升四甘醇的混合液在攪拌下110°C加熱I小時，而后在210-295?范圍內持續(xù)加熱回流3小時，氮氣份全程保護，產物于室溫下用乙醚沉淀分離，并以乙醚與乙醇混合液洗漆兩次，干燥得超順磁性MnFe2O4納米粒子,粒徑為5.1-7.5nm。
[0014]步驟(2)制備緊密包裹超順磁性氧化鐵納米粒子團簇的殼聚糖微球:將水溶性殼聚糖溶于蒸餾水中，加入乙二胺四乙酸，混勻后，加入步驟(I)制備的超順磁性氧化鐵基納米顆粒溶液，超聲、攪拌，在攪拌條件下加入無水乙醇，過濾，用戊二醛交聯(lián)，反應后，透析，得到殼聚糖緊密包裹超順磁性氧化鐵納米粒子簇的微球。
[0015]步驟(2)中水溶性殼聚糖在蒸餾水中濃度為6.25g/L ;加入的超順磁性氧化鐵基納米顆粒溶液濃度為2.5-5g/L ;超順磁性氧化鐵基納米顆粒與水溶性殼聚糖的質量比為0.1-0.2:1 ;加入的乙二胺四乙酸、水溶性殼聚糖與無水乙醇的質量比1:2-10 =90-160,乙二胺四乙酸、水溶性殼聚糖是質量數(shù)，單位是g，無水乙醇是體積數(shù)，單位是ml，無水乙醇的用量隨水溶性殼聚糖用量的增加而增加；加入25%戊二醛含有的醛基與水溶性殼聚糖的氨基的摩爾比為1:4 ;所述超聲時間為5-15min，所述攪拌時間為3_5h，所述透析是用Cut-off分子量為10000的透析袋，透析時間為36-60h，所獲得的緊密包裹超順磁性氧化鐵納米粒子殼聚糖微球粒徑為175.8-419nm，超順磁性氧化鐵納米粒子質量百分比為16% -45%，包覆效率為 80% -96.3%。
[0016]本發(fā)明提供的一種殼聚糖磁性納米微球的應用，作為一種磁共振成像造影劑。
[0017]本發(fā)明所涉及的超順磁性納米粒子、殼聚糖和乙二胺四乙酸均具有水溶性，能夠在水中由不良溶劑輔助通過靜電及氫鍵作用組裝成緊密包裹磁性納米團簇的大分子微球。每個微球內殼聚糖基質包裹數(shù)十顆磁性納米粒子組成的團簇，沒有顆粒間隙的存在。納米微球內外都是親水環(huán)境，極其有利于其作為造影劑的橫向弛豫率的提升，從而獲得較少見的、高達533.3Fe mT1^1的弛豫效率，極大的提高了診斷造影效果、降低了造影劑實際使用量，降低了醫(yī)療上的活體毒性。同時，減小的微球尺寸(200nm)結合高選擇通透性和滯留性效應(EPR)，該類造影劑可以實現(xiàn)針對腫瘤的早期診斷，有效降低惡性腫瘤的致死率。此外，微球本身所攜帶豐富的氨基與羥基等官能團，可以負載藥物進行控釋(如:順鉬)，實現(xiàn)對腫瘤確診后的同步治療。
[0018]本發(fā)明利用水溶性殼聚糖緊密包封超順磁性納米粒子，合成簡單、綠色、快捷，尺寸和磁性顆粒包覆量可以調控，該類納米微球中同等投料量超順磁性納米顆粒的包覆量隨微球尺寸的降低而增大，進而引起磁共振橫向弛豫率的升高。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0019]圖1為包覆量是45%的殼聚糖磁性納米微球的投射電子顯微鏡圖片；
[0020]圖2為包覆量是45%的殼聚糖磁性納米微球存儲在水中三個月的水合粒徑變化；
[0021]圖3為各種造影劑微球及裸磁性顆粒溶液橫向弛豫時間與鐵離子濃度間的關系圖，圖中顯示了它們的弛豫率；
[0022]圖4為實施例7中載有順鉬的磁性殼聚糖微球的體外釋放曲線；
[0023]圖5為包覆量45%的造影劑微球及裸磁性顆粒在不同鐵濃度下的體外T2磁共振成像圖；
[0024]圖6為包覆量45%的殼聚糖磁性納米微球注入荷載H22固體瘤的小鼠，注射前及注射后8小時的活體磁共振成像圖。
[0025]具體實施方法
[0026]實施例1
[0027]一種殼聚糖磁性納米微球的制備方法，包括以下步驟:
[0028](I)、制備超順磁性氧化鐵基納米顆粒:
[0029]將2.12克乙酰丙酮鐵與50毫升四甘醇的混合液在攪拌下110°C加熱I小時，而后在210°C范圍內持續(xù)加熱回流3小時，氮氣份全程保護。產物于室溫下用乙醚沉淀分離，并以乙醚與乙醇混合液洗滌兩次，干燥得超順磁性Fe3O4納米粒子。產品顆粒尺寸大約8.8nm。
[0030](2)、緊密包裹超順磁性氧化鐵納米粒子簇的殼聚糖微球:
[0031]取0.5克水溶性殼聚糖溶于80毫升蒸餾水中，加入乙二胺四乙酸，質量為殼聚糖的1/2，溶解后注入20毫升分散有0.1克Fe3O4納米顆粒的水溶液。對混合液進行超聲5分鐘并攪拌4小時。之后，于攪拌下向體系中逐漸加入90毫升無水乙醇，得到顯藍光的乳液即產生了磁性復合微球。過濾后，用0.3毫升25%的戊二醛進行交聯(lián)，室溫攪拌反應4小時。反應后將所得溶液裝入透析袋(Cut-off分子量為10000)中透析48小時以除去乙醇和小分子乙二胺四乙酸。動態(tài)光散射檢測顯示所得納米微球粒徑為419nm，而熱重分析和電感耦合等離子光譜(ICP-AES)研究表明:該微球中超順磁性氧化鐵納米顆粒的包覆效率和包覆量分別為80%及16%。
[0032]一種殼聚糖磁性納米微球的應用，作為一種磁共振成像造影劑。
[0033]實施例2
[0034]一種殼聚糖磁性納米微球的制備方法，包括以下步驟:
[0035](I)、制備超順磁性氧化鐵基納米顆粒:
[0036]將2.12克乙酰丙酮鐵與50毫升四甘醇的混合液在攪拌下110°C加熱I小時，而后在230°C范圍內持續(xù)加熱回流3小時，氮氣份全程保護。產物于室溫下用乙醚沉淀分離，并以乙醚與乙醇混合液洗滌兩次，干燥得超順磁性Fe3O4納米粒子。產品顆粒尺寸大約8.8nm。
[0037](2)、緊密包裹超順磁性氧化鐵納米粒子簇的殼聚糖微球:
[0038]取0.5克水溶性殼聚糖溶于80毫升蒸餾水中，加入乙二胺四乙酸，質量為殼聚糖的1/3，溶解后注入20毫升分散有0.1克Fe3O4納米顆粒的水溶液。對混合液進行超聲15分鐘并攪拌5小時。之后，于攪拌下向體系中逐漸加入120毫升無水乙醇，得到顯藍光的乳液即產生了磁性復合微球。過濾后，用0.3毫升25%的戊二醛進行交聯(lián)，室溫攪拌反應4小時。反應后將所得溶液裝入透析袋(Cut-off分子量為10000)中透析48小時以除去乙醇和小分子乙二胺四乙酸。動態(tài)光散射檢測顯示所得納米微球粒徑為351nm，而ICP-AES研究表明:該微球中超順磁性氧化鐵納米顆粒的包覆效率和包覆量分別為88.3%及22%。
[0039]一種殼聚糖磁性納米微球的應用，作為一種磁共振成像造影劑。
[0040]實施例3
[0041]一種殼聚糖磁性納米微球的制備方法，包括以下步驟:
[0042](I)、制備超順磁性氧化鐵基納米顆粒:
[0043]將0.7克乙酰丙酮錳、1.41克乙酰丙酮鐵與50毫升四甘醇的混合液在攪拌下110°C加熱I小時，而后在240°C范圍內持續(xù)加熱回流3小時，氮氣份全程保護。產物于室溫下用乙醚沉淀分離，并以乙醚與乙醇混合液洗滌兩次，干燥得超順磁性MnFe2O4納米粒子。產品顆粒尺寸大約6.5nm。
[0044](2)、緊密包裹超順磁性氧化鐵納米粒子簇的殼聚糖微球:
[0045]取0.5克水溶性殼聚糖溶于80毫升蒸餾水中，加入乙二胺四乙酸，質量為殼聚糖的1/5，溶解后注入20毫升分散有0.1克MnFe2O4納米顆粒的水溶液。對混合液進行超聲10分鐘并攪拌3小時。之后，于攪拌下向體系中逐漸加入140毫升無水乙醇，得到顯藍光的乳液即產生了磁性復合微球。過濾后，用0.3毫升25%的戊二醛進行交聯(lián)，室溫攪拌反應4小時。反應后將所得溶液裝入透析袋(Cut-off分子量為10000)中透析48小時以除去乙醇和小分子乙二胺四乙酸。動態(tài)光散射檢測顯示所得納米微球粒徑為277nm，而ICP-AES研究表明:該微球中超順磁性氧化鐵納米顆粒的包覆效率和包覆量分別為94%及30%。
[0046]一種殼聚糖磁性納米微球的應用，作為一種磁共振成像造影劑。
[0047]實施例4
[0048]一種殼聚糖磁性納米微球的制備方法，包括以下步驟:
[0049](I)、制備超順磁性氧化鐵基納米顆粒:
[0050]將2.12克乙酰丙酮鐵與50毫升四甘醇的混合液在攪拌下110°C加熱I小時，而后在280°C范圍內持續(xù)加熱回流3小時，氮氣份全程保護。產物于室溫下用乙醚沉淀分離，并以乙醚與乙醇混合液洗滌兩次，干燥得超順磁性Fe3O4納米粒子。產品顆粒尺寸大約8.8nm。
[0051](2)、緊密包裹超順磁性氧化鐵納米粒子簇的殼聚糖微球:
[0052]取0.5克水溶性殼聚糖溶于80毫升蒸餾水中，加入乙二胺四乙酸，質量為殼聚糖的1/10，溶解后注入20毫升分散有0.1克Fe3O4納米顆粒的水溶液。對混合液進行超聲10分鐘并攪拌4小時。之后，于攪拌下向體系中逐漸加入160毫升無水乙醇，得到顯藍光的乳液即產生了磁性復合微球。過濾后，用0.3毫升25%的戊二醛進行交聯(lián)，室溫攪拌反應4小時。反應后將所得溶液裝入透析袋(Cut-off分子量為10000)中透析48小時以除去乙醇和小分子乙二胺四乙酸。動態(tài)光散射檢測顯示所得納米微球粒徑為200nm，而熱重分析和ICP-AES研究表明:該微球中超順磁性氧化鐵納米顆粒的包覆效率和包覆量分別為96.3%及 45%。
[0053]一種殼聚糖磁性納米微球的應用，作為一種磁共振成像造影劑。
[0054]實施例5
[0055]一種殼聚糖磁性納米微球的制備方法，包括以下步驟:
[0056](I)、制備超順磁性氧化鐵基納米顆粒:
[0057]將0.7克乙酰丙酮錳、1.41克乙酰丙酮鐵與50毫升四甘醇的混合液在攪拌下110°C加熱I小時，而后在295°C范圍內持續(xù)加熱回流3小時，氮氣份全程保護。產物于室溫下用乙醚沉淀分離，并以乙醚與乙醇混合液洗滌兩次，干燥得超順磁性MnFe2O4納米粒子。產品顆粒尺寸大約6.5nm。
[0058](2)、緊密包裹超順磁性氧化鐵納米粒子簇的殼聚糖微球:
[0059]取0.5克水溶性殼聚糖溶于80毫升蒸餾水中，加入乙二胺四乙酸，質量為殼聚糖的1/10，溶解后注入20毫升分散有0.075克MnFe2O4納米顆粒的水溶液。對混合液進行超聲10分鐘并攪拌4小時。之后，于攪拌下向體系中逐漸加入160毫升無水乙醇，得到顯藍光的乳液即產生了磁性復合微球。過濾后，用0.3毫升25%的戊二醛進行交聯(lián)，室溫攪拌反應4小時。反應后將所得溶液裝入透析袋(Cut-off分子量為10000)中透析48小時以除去乙醇和小分子乙二胺四乙酸。動態(tài)光散射檢測顯示所得納米微球粒徑為187nm，而熱重分析和ICP-AES研究表明:該微球中超順磁性氧化鐵納米顆粒的包覆效率和包覆量分別為95.1%R 36%。
[0060]一種殼聚糖磁性納米微球的應用，作為一種磁共振成像造影劑。
[0061]實施例6
[0062]一種殼聚糖磁性納米微球的制備方法，包括以下步驟:
[0063](I)、制備超順磁性氧化鐵基納米顆粒:
[0064]將0.7克乙酰丙酮錳、1.41克乙酰丙酮鐵與50毫升四甘醇的混合液在攪拌下110°C加熱I小時，而后在275°C范圍內持續(xù)加熱回流3小時，氮氣份全程保護。產物于室溫下用乙醚沉淀分離，并以乙醚與乙醇混合液洗滌兩次，干燥得超順磁性MnFe2O4納米粒子。產品顆粒尺寸大約6.5nm。
[0065](2)、緊密包裹超順磁性氧化鐵納米粒子簇的殼聚糖微球:
[0066]取0.5克水溶性殼聚糖溶于80毫升蒸餾水中，加入乙二胺四乙酸，質量為殼聚糖的1/10，溶解后注入20毫升分散有0.05克MnFe2O4納米顆粒的水溶液。對混合液進行超聲10分鐘并攪拌4小時。之后，于攪拌下向體系中逐漸加入160毫升無水乙醇，得到顯藍光的乳液即產生了磁性復合微球。過濾后，用0.3毫升25%的戊二醛進行交聯(lián)，室溫攪拌反應4小時。反應后將所得溶液裝入透析袋(Cut-off分子量為10000)中透析48小時以除去乙醇和小分子乙二胺四乙酸。動態(tài)光散射檢測顯示所得納米微球粒徑為175.8nm，而熱重分析和ICP-AES研究表明:該微球中超順磁性氧化鐵納米顆粒的包覆效率和包覆量分別為94.5%及 28%。
[0067]一種殼聚糖磁性納米微球的應用，作為一種磁共振成像造影劑。
[0068]實施例7
[0069]殼聚糖磁性微球對順鉬的負載及體外釋放:
[0070]取實施例4得到的磁性納米微球溶液40mL，加入0.01克的順鉬，37°C下攪拌72小時。取出后于中性水中超濾，以移除游離的順鉬，用電感耦合等離子質譜(ICP-MS)法測定該微球的載藥量為5%。
[0071]將含順鉬量為2毫克的載藥磁性納米微球置于透析袋(Cut-off分子量為10000)中，并將透析袋完全浸入1mL磷酸鹽緩沖液(0.01mol/L PBS, pH = 7.4)中，37°C攪拌下釋放，每隔一定時間取出4mL釋放介質，并補充等量的新PBS液。以ICP-MS測定不同時間點的介質鉬含量，根據含量計算釋放百分率，如圖4所示，表明磁性納米微球所載藥物能夠實現(xiàn)較持續(xù)穩(wěn)定的釋放。
[0072]實施例8
[0073]殼聚糖微球作為橫向磁共振造影劑的弛豫時間和體外造影效果測試:
[0074]以電感耦合等離子光譜法測定實施例2、3、4中三種不同包覆量的造影劑微球溶液和裸Fe3O4納米顆粒液中鐵濃度，并對四種材料配制一系列具有不同鐵濃度的水溶液。室溫下，應用7.0T動物磁共振掃描儀(Bruker，自旋回波序列:TR/TE = 3000ms/40ms)測量上述材料的不同鐵濃度溶液的體外弛豫時間和造影效果，其中所涉及的鐵離子濃度為:0.01、0.025,0.05,0.075,0.1,0.15,0.2和0.4mM Fe。不同鐵濃度下裸氧化鐵顆粒及三種超順磁性微球的橫向弛豫率如5圖所示，在實驗條件下，由水溶性殼聚糖包裹超順磁性納米粒子所制備的造影劑的橫向弛豫效能可高達533.3Fe HiT1s'從造影效果中可以觀察到:殼聚糖包裹磁性粒子所得微球的負信號明顯強于裸磁性粒子。
[0075]實施例9
[0076]殼聚糖微球作為橫向磁共振造影劑的體內腫瘤造影檢測:
[0077]將包覆量為45%的殼聚糖磁性微球通過尾靜脈注射入荷有H22固體瘤的ICR小鼠體內，注射計量為5毫克/千克體重。利用7.0T動物磁共振掃描儀掃描注射造影劑前和注射后8小時的該小鼠，并拍攝磁共振圖像圖6。掃描實驗全程中，小鼠處于麻醉狀態(tài)。自旋回波序列:TR/TE = 2500ms/33ms,視場:F0V = 4.0X4.0cm。
【權利要求】
1.一種殼聚糖磁性納米微球的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟: (1)、制備超順磁性氧化鐵基納米顆粒； (2)、制備緊密包裹超順磁性氧化鐵納米粒子團簇的殼聚糖微球。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(I)所述超順磁性氧化鐵基納米顆粒包括超順磁性Fe3O4納米粒子和超順磁性MnFe2O4納米粒子。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，進一步的，步驟(I)制備超順磁性Fe3O4納米粒子的步驟為:將2.12克乙酰丙酮鐵與50毫升四甘醇的混合液在攪拌下110°C加熱I小時，而后在210-295°C范圍內持續(xù)加熱回流3小時，氮氣氛全程保護，產物于室溫下用乙醚沉淀分離，并以乙醚與乙醇混合液洗滌兩次，干燥得超順磁性Fe3O4納米粒子，粒徑為 7.7-10.4nm。
4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟⑴制備超順磁性MnFe2O4納米粒子的步驟為:將0.7克乙酰丙酮錳、1.41克乙酰丙酮鐵與50毫升四甘醇的混合液在攪拌下110°C加熱I小時，而后在210-295°C范圍內持續(xù)加熱回流3小時，氮氣份全程保護，產物于室溫下用乙醚沉淀分離，并以乙醚與乙醇混合液洗滌兩次，干燥得超順磁性MnFe2O4納米粒子，粒徑為5.1-7.5nm。
5.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)制備緊密包裹超順磁性氧化鐵納米粒子團簇的殼聚糖微球:將水溶性殼聚糖溶于蒸餾水中，加入乙二胺四乙酸，混勻后，加入步驟(I)制備的超順磁性氧化鐵基納米顆粒溶液，超聲、攪拌，在攪拌條件下加入無水乙醇，過濾，用戊二醛交聯(lián)，反應后，透析，得到殼聚糖緊密包裹超順磁性氧化鐵納米粒子簇的微球。
6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中水溶性殼聚糖在蒸餾水中濃度為6.25g/L ;加入的乙二胺四乙酸、水溶性殼聚糖與無水乙醇的質量比1:2-10:90-160，乙二胺四乙酸、水溶性殼聚糖是質量數(shù)，單位是g,無水乙醇是體積數(shù)，單位是ml，無水乙醇的用量隨水溶性殼聚糖用量的增加而增加。
7.根據權利要求5或6所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中超順磁性氧化鐵基納米顆粒溶液濃度為2.5-5g/L ;超順磁性氧化鐵基納米顆粒與水溶性殼聚糖的質量比為0.1-0.2:1。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，加入25%戊二醛的醛基與水溶性殼聚糖的氨基摩爾比控制為1:4。
9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述超聲時間為5-15min,所述攪拌時間為3_5h，所述透析是用Cut-off分子量為10000的透析袋，透析時間為36-60h，所獲得的緊密包裹超順磁性氧化鐵納米顆粒簇的殼聚糖微球粒徑為175.8-419nm，超順磁性氧化鐵納米粒子質量百分比為16 % -45 %，包覆效率為80% -96.3%。
10.一種權利要求1所制備的殼聚糖磁性納米微球的應用，其特征在于作為一種磁共振成像造影劑。
【文檔編號】A61K49/18GK104436220SQ201410764528
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月12日 優(yōu)先權日:2014年12月12日
【發(fā)明者】林英, 洪艷, 洪柳, 高建剛 申請人:安徽工程大學