碳點(diǎn)作為抗腫瘤藥物載體的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了碳點(diǎn)作為抗腫瘤藥物載體的應(yīng)用，包括以下步驟：氨基化碳點(diǎn)的制備：采用微波合成法，以含氨基的硅烷試劑和甘油為原料，制得氨基化碳點(diǎn)；碳點(diǎn)表面馬來酰亞胺化：氨基化碳點(diǎn)與一端帶有N-羥基琥珀酰亞胺酯、另一端帶有馬來酰亞胺的短鏈聚乙二醇分子NHS-EGn-MAL反應(yīng)，得馬來酰亞胺化的碳點(diǎn)；碳點(diǎn)-藥物分子復(fù)合物的制備：馬來酰亞胺化的碳點(diǎn)與帶有巰基的藥物反應(yīng)，得碳點(diǎn)-藥物分子復(fù)合物。該方法制備得到的氨基化碳點(diǎn)熒光量子產(chǎn)率高、水溶性好、細(xì)胞毒性低、表面具有大量的可修飾基團(tuán)、并且在進(jìn)行短鏈聚乙二醇鏈段修飾后不聚沉，是一種十分理想的藥物載體。
【專利說明】碳點(diǎn)作為抗腫瘤藥物載體的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及碳點(diǎn)作為抗腫瘤藥物載體的應(yīng)用，屬于納米醫(yī)學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]碳是構(gòu)成有機(jī)生物體最基本的元素之一，對(duì)于現(xiàn)有已知的所有生命系統(tǒng)都是不可或缺的，沒有它，生命不可能存在。近年來，各種各樣的碳材料(如碳納米管、石墨烯、富勒烯等)被廣泛地應(yīng)用于生物檢測(cè)、催化、能源、電子器件以及載藥等方面。而熒光碳納米顆粒作為一種新型的零維的碳材料，由于其廉價(jià)的原料、良好的生物兼容性、良好的光穩(wěn)定性及易表面修飾等優(yōu)點(diǎn)而備受關(guān)注。
[0003]由于碳基材料良好的生物相容性及易修飾性，近年來被廣泛的應(yīng)用于載藥方面，早期相關(guān)報(bào)道中已經(jīng)提到氧化石墨烯及碳納米管載藥，但由于氧化石墨烯及碳納米管的尺寸較大，不能通過血腦屏障并且載體-藥物復(fù)合物無法透過腎小球血管壁進(jìn)入尿液(要求小于20nm)，其結(jié)果是被大量的滯留在體內(nèi)，這就埋下了可能引發(fā)長(zhǎng)期生物毒性的巨大隱患。而碳點(diǎn)(carbon dots)作為一種重要的零維納米材料(<5nm)，不但繼承了碳元素良好的生物相容性，同時(shí)其較小的量子尺寸(<5nm)又賦予它良好的熒光性質(zhì)，為跟蹤藥物成分在人體內(nèi)的代謝作用途徑提供了方法依據(jù)?；谄涑叽缧?、生物相容性好及易修飾性等優(yōu)良性質(zhì)，碳點(diǎn)有作為抗癌藥物載體的潛質(zhì)。
[0004]目前，相關(guān)小組報(bào)道了抗癌藥物阿霉素分子和碳點(diǎn)的共價(jià)連接或者靜電物理吸附，實(shí)現(xiàn)了將碳點(diǎn)作為抗癌藥物阿霉素的載體(Lee H.U., Park S.Y.and Park E.S.etal., Sc1.Rep.2014, 4, 4665 ；Mewada A., Pandey S.and Thakur M.et al., J.Mater.Chem.B，2014，2，698.)。但是，基于物理吸附作用將阿霉素負(fù)載在碳點(diǎn)上的方法(Lee H.U., ParkS.Y.and Park E.S.et al.，Sc1.Rep.2014，4，4665.)具有藥物負(fù)載穩(wěn)定性差的缺點(diǎn)，可能會(huì)造成藥物分子在到達(dá)靶標(biāo)之前釋放，從而會(huì)增大藥物的副作用，降低療效。而直接把阿霉素分子以共價(jià)鍵方式連接到碳點(diǎn)上的策略(Mewada A., Pandey S.and Thakur M.et al., J.Mater.Chem.B, 2014, 2，698.)，由于阿霉素本身的溶解性較差會(huì)造成最終產(chǎn)物的不穩(wěn)定及蛋白質(zhì)非特異性吸附。因此，發(fā)展一種能夠克服以上兩種藥物負(fù)載方式的碳點(diǎn)載藥體系具有重要的實(shí)際意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]發(fā)明目的:本發(fā)明目的是提供碳點(diǎn)作為抗腫瘤藥物載體的應(yīng)用，制備得到一種新型的帶功能化基團(tuán)(氨基)的熒光碳點(diǎn)材料，并通過引入功能化的短鏈聚乙二醇分子，采用共價(jià)方式把抗癌藥物阿霉素分子與碳點(diǎn)連接起來，克服其他碳點(diǎn)載藥策略的缺點(diǎn)，達(dá)到藥物穩(wěn)定負(fù)載、可控釋放、容易滲透且易代謝排出的效果。
[0006]技術(shù)方案:本發(fā)明提供了碳點(diǎn)作為抗腫瘤藥物載體的應(yīng)用，包括以下步驟:
[0007](1)氨基化碳點(diǎn)的制備:采用微波合成法，以含氨基的硅烷試劑和甘油為原料，制得氨基化碳點(diǎn)；
[0008](2)碳點(diǎn)表面馬來酰亞胺化:氨基化碳點(diǎn)與一端帶有N-羥基琥珀酰亞胺酯(N-hydroxysuccinimide ester，簡(jiǎn)稱 NHS)、另一端帶有馬來酰亞胺(maleimide，簡(jiǎn)稱 MAL)的短鏈聚乙二醇分子NHS-EGn-MAL反應(yīng)，得馬來酰亞胺化的碳點(diǎn)；
[0009](3)碳點(diǎn)-藥物分子復(fù)合物的制備:馬來酰亞胺化的碳點(diǎn)與帶有巰基的藥物反應(yīng)，得碳點(diǎn)-藥物分子復(fù)合物。
[0010]其中，步驟(1)中，氨基化碳點(diǎn)的制備方法，具體包括以下步驟:
[0011](a)向甘油中通入氮?dú)?，除去溶液中的氧氣?br> [0012](b)在攪拌同時(shí)加入含有氨基的娃燒試劑使溶液中含氨基的娃燒試劑的體積分?jǐn)?shù)為5-30%，在密閉狀態(tài)下繼續(xù)攪拌5min以上，得氨基化碳點(diǎn)前體溶液；
[0013](c)將氨基化碳點(diǎn)前體溶液在微波反應(yīng)器中以140-180°C反應(yīng)5_15min，冷卻、離心，上清液用分子量為1000的透析袋在超純水中透析2天以上，即得。
[0014]步驟(1)中，所述含有氨基的硅烷試劑為3-[2-(2_氨基乙基氨基)乙基氨基]丙基三甲氧基硅烷(AEEA)。
[0015]步驟⑵中，所述短鏈聚乙二醇分子中，η為6-12 ;碳點(diǎn)中的硅烷試劑與短鏈聚乙二醇分子(NHS-EGn-MAL)的物質(zhì)的量比為1:1_1:10 ;反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間lh以上。
[0016]步驟(3)中，所述帶有巰基的藥物為本身帶有巰基的藥物分子，或者通過巰基化反應(yīng)(如利用Traut’s巰基化試劑將含有氨基的藥物分子巰基化)制備的帶有巰基的藥物分子。
[0017]步驟(3)中，所述帶有巰基的藥物為巰基化的阿霉素(D0X);馬來酰亞胺化的碳點(diǎn)中的硅烷試劑與帶巰基的藥物的物質(zhì)的量比為1:1-1:5 ;反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間lh以上。
[0018]有益效果:本發(fā)明方法制備得到的氨基化碳點(diǎn)熒光量子產(chǎn)率高(15% )、水溶性好、細(xì)胞毒性低、表面具有大量的可修飾基團(tuán)(氨基)、并且在進(jìn)行短鏈聚乙二醇鏈段修飾并負(fù)載抗癌藥物后不聚沉，是一種十分理想的藥物載體。最終制得的碳點(diǎn)-抗癌藥物復(fù)合物的水合動(dòng)力學(xué)粒徑小(10.5±1.7nm)。該方法克服了其他碳基載體(碳納米管和氧化石墨烯)不易修飾、水溶性差、不能長(zhǎng)期穩(wěn)定保存、副作用大、不能透過血腦屏障、無法透過腎小球血管壁進(jìn)入尿液進(jìn)而排出體外等缺點(diǎn)。同時(shí)，該碳點(diǎn)-抗癌藥物復(fù)合物具有一定的細(xì)胞內(nèi)緩釋效果。
[0019]本發(fā)明以帶氨基的硅烷試劑和甘油成功制備出了一種新型的水溶性好、易修飾、量子產(chǎn)率高、細(xì)胞毒性低的氨基化碳點(diǎn)，在此基礎(chǔ)上，通過兩端功能化的短鏈聚乙二醇分子共價(jià)地將抗癌藥物阿霉素連接在碳點(diǎn)上，成功制得了水溶性好、藥物負(fù)載率高的“碳點(diǎn)-抗癌藥物”復(fù)合物，該“碳點(diǎn)-抗癌藥物”復(fù)合物具有對(duì)癌細(xì)胞的殺死效率高、藥物可控釋放、容易滲透且易代謝排出等優(yōu)點(diǎn)。
[0020]具體而言，本發(fā)明制備了一種表面含有氨基的水溶性碳點(diǎn)，通過與一端是NHS、另一端MAL的短鏈PEG分子，將碳點(diǎn)表面MAL化，并且比較和優(yōu)化了不同長(zhǎng)度PEG鏈段的效果，最后與巰基化的藥物分子反應(yīng)，形成碳點(diǎn)-抗癌藥物復(fù)合物。相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，該發(fā)明主要具有以下優(yōu)勢(shì):
[0021](1)本發(fā)明氨基化碳點(diǎn)制備過程僅需一步，方法簡(jiǎn)單，產(chǎn)量大，成本較低；制得的碳點(diǎn)的細(xì)胞毒性很低，生物相容性好，藥物負(fù)載效率高，具備作為藥物載體的諸多優(yōu)勢(shì)。
[0022](2)本發(fā)明制得的氨基化碳點(diǎn)的熒光量子產(chǎn)率高(15% )，并且在細(xì)胞內(nèi)熒光不淬滅，可以成功地實(shí)現(xiàn)藥物分子與碳點(diǎn)的細(xì)胞內(nèi)分布監(jiān)測(cè)，評(píng)價(jià)藥物分子的釋放動(dòng)力學(xué)過程。
[0023](3)本發(fā)明將較小尺寸的碳點(diǎn)作為藥物載體，不僅可以通過血腦屏障，而且透過腎小球血管壁進(jìn)入尿液進(jìn)而排出體外，將藥物的副作用降低到最小。
[0024](4)由于正常組織中的微血管內(nèi)皮間隙致密、結(jié)構(gòu)完整，大分子和納米顆粒不易透過血管壁；而實(shí)體瘤組織中血管豐富、血管壁間隙較寬、結(jié)構(gòu)完整性差，淋巴回流缺失，造成大分子類物質(zhì)和納米顆粒具有高通透性和滯留性，這種現(xiàn)象被稱作實(shí)體瘤組織的高通透性和滯留效應(yīng)(enhanced permeability and retent1n effect，EPR)。利用該效應(yīng)，該新型的碳點(diǎn)-抗癌藥物復(fù)合物可以有效地在腫瘤組織選擇性富集，而較少的進(jìn)入正常組織，從而實(shí)現(xiàn)復(fù)合物的被動(dòng)靶向目的。
[0025](5)本發(fā)明引入了短鏈聚乙二醇分子，不僅增加了“碳點(diǎn)-抗癌藥物”復(fù)合物的水溶性，而且可以防止體內(nèi)蛋白質(zhì)(如調(diào)理素分子)在復(fù)合物表面的吸附，減少了被免疫細(xì)胞消除的幾率，增加了復(fù)合物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間。
[0026](6)本發(fā)明以共價(jià)鍵的方式將藥物連接在碳點(diǎn)，藥物的負(fù)載穩(wěn)定性大大提高，相比于靜電吸附負(fù)載阿霉素，副作用降低，并且在一定程度上具有藥物緩釋的效果。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0027]圖1為本發(fā)明氨基化碳點(diǎn)的制備過程；
[0028]圖2為碳點(diǎn)-阿霉素復(fù)合物制備過程示意圖；
[0029]圖3為AEEA碳點(diǎn)及“AEEA碳點(diǎn)-阿霉素”復(fù)合物的紫外-可見吸收光譜圖；
[0030]圖4為AEEA碳點(diǎn)及“AEEA碳點(diǎn)-阿霉素”復(fù)合物用350nm光激發(fā)的熒光發(fā)射光譜圖；
[0031]圖5為“AEEA碳點(diǎn)-阿霉素”復(fù)合物用485nm光激發(fā)的熒光發(fā)射光譜圖；
[0032]圖6為“AEEA碳點(diǎn)-阿霉素”復(fù)合物動(dòng)態(tài)光散射圖；
[0033]圖7為AEEA碳點(diǎn)對(duì)MCF-7細(xì)胞的MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
[0034]圖8為游離的阿霉素和“AEEA碳點(diǎn)-阿霉素”復(fù)合物對(duì)MCF-7細(xì)胞的MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果;
[0035]圖9為MCF-7細(xì)胞在加入“AEEA碳點(diǎn)-阿霉素”復(fù)合物6h后的激光共聚焦顯微成像圖。其中圖A為405nm激發(fā)，檢測(cè)區(qū)間410-510nm(藍(lán)光通道，檢測(cè)碳點(diǎn)的熒光發(fā)光情況)；圖B為488nm激發(fā)，檢測(cè)區(qū)間520_700nm(紅光通道，檢測(cè)阿霉素分子的熒光發(fā)光情況)。

【具體實(shí)施方式】
[0036]實(shí)施例1
[0037]巰基化阿霉素的制備，包括以下步驟:
[0038](1)將阿霉素溶解在二甲基亞砜(DMS0)和磷酸緩沖液(PBS)的溶液中(pH =8.0)，向其中加入阿霉素3倍物質(zhì)的量的Traut’ s試劑；
[0039](2)室溫反應(yīng)1個(gè)小時(shí)，即得巰基化阿霉素。
[0040]實(shí)施例2
[0041]AEEA碳點(diǎn)的制備，見圖1，包括以下步驟:
[0042](1)向甘油中通入氮?dú)?min，除去甘油中的氧氣；
[0043](2)在甘油中加入3-[2-(2-氨基乙基氨基)乙基氨基]丙基三甲氧基硅烷(AEEA)使其體積分?jǐn)?shù)為9.1% (5-30% )，在密閉狀態(tài)下攪拌5min以上，形成碳點(diǎn)前體溶液；
[0044](3)在微波反應(yīng)器中以160°C反應(yīng)15min ；
[0045](4)離心除去生成的沉淀物，留取上清液；
[0046](5)用分子量為1000的透析袋在超純水中透析上清液48小時(shí)以上(每隔6小時(shí)換水一次)，即得純凈的碳點(diǎn)溶液。
[0047]實(shí)施例3
[0048]氨基化碳點(diǎn)的制備，與實(shí)施例2類似，只是步驟(3)中在微波反應(yīng)器中以180°C反應(yīng)5min，所述3-[2-(2_氨基乙基氨基)乙基氨基]丙基三甲氧基硅烷(AEEA)的體積分?jǐn)?shù)為5% ο
[0049]實(shí)施例4
[0050]氨基化碳點(diǎn)的制備，與實(shí)施例2類似，只是步驟(3)中在微波反應(yīng)器中以140°C反應(yīng)15min，所述3-[2-(2-氨基乙基氨基)乙基氨基]丙基三甲氧基硅烷(AEEA)的體積分?jǐn)?shù)為 30%。
[0051]實(shí)施例5
[0052]馬來酰亞胺化碳點(diǎn)的制備，包括以下步驟:
[0053]將實(shí)施例1制得的AEEA碳點(diǎn)與NHS-EG1(1-MAL按照1:1的摩爾比在pH = 7.4的磷酸緩沖液中室溫反應(yīng)4小時(shí)，即得馬來酰亞胺化的AEEA碳點(diǎn)。
[0054]實(shí)施例6
[0055]馬來酰亞胺化碳點(diǎn)的制備，包括以下步驟:
[0056]將實(shí)施例2制得的AEEA碳點(diǎn)與NHS_EG6_MAL按照1:5的摩爾比在pH = 7.4的磷酸緩沖液中室溫反應(yīng)3小時(shí)，即得馬來酰亞胺化的AEEA碳點(diǎn)。
[0057]實(shí)施例7
[0058]馬來酰亞胺化碳點(diǎn)的制備，包括以下步驟:
[0059]將實(shí)施例3制得的AEEA碳點(diǎn)與NHS_EG12_MAL按照1:10的摩爾比在pH = 7.4的磷酸緩沖液中室溫反應(yīng)1小時(shí)，即得馬來酰亞胺化的AEEA碳點(diǎn)。
[0060]實(shí)施例8
[0061]碳點(diǎn)-阿霉素復(fù)合物的制備，見圖2，包括以下步驟:
[0062](1)將實(shí)施例5的馬來酰亞胺化的AEEA碳點(diǎn)與巰基阿霉素按照1:2的摩爾比例在pH = 6.8的磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉緩沖液中，室溫反應(yīng)12小時(shí)；
[0063](2)用分子量為1000的透析袋在DMS0溶液中透析3天，然后再在純水中透析2天，即得AEEA碳點(diǎn)-阿霉素復(fù)合物的水溶液。該水溶液也可以經(jīng)過冷凍干燥以固體形成保存。
[0064]合成的AEEA碳點(diǎn)水溶液及“AEEA碳點(diǎn)-阿霉素”復(fù)合物水溶液的紫外-可見吸收光譜參見圖3 (485nm處的吸收峰為阿霉素的吸收峰)；350nm光激發(fā)下的熒光發(fā)射光譜參見圖4 (443nm處的發(fā)射峰為AEEA碳點(diǎn)的發(fā)射峰，552、590nm處的發(fā)射峰為阿霉素的發(fā)射峰)；485nm光激發(fā)下的熒光發(fā)射光譜參見圖5(552、590nm處的吸收峰為阿霉素的發(fā)射峰)。紫外-可見吸收光譜與熒光光譜都表明了阿霉素已經(jīng)成功地共價(jià)連接到了碳點(diǎn)上。
[0065]“AEEA碳點(diǎn)-阿霉素”復(fù)合物水溶液的動(dòng)態(tài)光散射數(shù)據(jù)見圖6。如圖所示，AEEA碳點(diǎn)在連接短鏈PEG并負(fù)載阿霉素之后，其復(fù)合物的水合動(dòng)力學(xué)直徑為10.5±1.7nm，這說明碳點(diǎn)-阿霉素復(fù)合藥物可以順利通過血腦屏障以增加藥物的滲透能力。此外，較小的粒徑能保證顆粒可以透過腎小球血管壁進(jìn)入尿液(要求小于20nm)，從而不至于在體內(nèi)大量滯留而引發(fā)長(zhǎng)期毒性。
[0066]實(shí)施例9
[0067]碳點(diǎn)-阿霉素復(fù)合物的制備，包括以下步驟:
[0068](1)將實(shí)施例6的馬來酰亞胺化的AEEA碳點(diǎn)與巰基阿霉素按照1:5的摩爾比例在pH = 6.8的磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉緩沖液中，室溫反應(yīng)1小時(shí)；
[0069](2)用分子量為1000的透析袋在DMSO溶液中透析3天，然后再在純水中透析2天，即得AEEA碳點(diǎn)-阿霉素復(fù)合物的水溶液。該水溶液也可以經(jīng)過冷凍干燥以固體形成保存。
[0070]實(shí)施例10
[0071]碳點(diǎn)-阿霉素復(fù)合物的制備，包括以下步驟:
[0072](1)將實(shí)施例7的馬來酰亞胺化的AEEA碳點(diǎn)與巰基阿霉素按照1:1的摩爾比例在pH = 6.8的磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉緩沖液中，室溫反應(yīng)6小時(shí)；
[0073](2)用分子量為1000的透析袋在DMSO溶液中透析3天，然后再在純水中透析2天，即得AEEA碳點(diǎn)-阿霉素復(fù)合物的水溶液。該水溶液也可以經(jīng)過冷凍干燥以固體形成保存。
[0074]實(shí)施例11
[0075]氨基化碳點(diǎn)的細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)，方法如下:
[0076]選擇乳腺癌細(xì)胞MCF-7，利用酶標(biāo)儀采用MTT檢測(cè)法測(cè)定不同濃度的碳點(diǎn)溶液(碳點(diǎn)濃度分別為0，0.001, 0.01, 0.1，0.5，lmg/mL)對(duì)細(xì)胞的毒性(碳點(diǎn)加入細(xì)胞24小時(shí)之后測(cè)定)，結(jié)果見圖7。
[0077]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明AEEA碳點(diǎn)對(duì)細(xì)胞幾乎沒有毒性。
[0078]實(shí)施例12
[0079]比較“AEEA碳點(diǎn)-阿霉素”復(fù)合物與游離阿霉素的細(xì)胞毒性，方法如下:
[0080]選擇乳腺癌細(xì)胞MCF-7，利用酶標(biāo)儀采用MTT檢測(cè)法分別測(cè)定含有阿霉素濃度為0，0.01，0.1，1，5，10 μ g/mL的“AEEA碳點(diǎn)-阿霉素復(fù)合物”與游離阿霉素對(duì)細(xì)胞的毒性(碳點(diǎn)加入細(xì)胞24小時(shí)之后測(cè)定)，結(jié)果見圖8。
[0081]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明“AEEA碳點(diǎn)-阿霉素復(fù)合物”與游離阿霉素有相似的殺死癌細(xì)胞的效果。
[0082]實(shí)施例13
[0083]“AEEA碳點(diǎn)-阿霉素”復(fù)合藥物的激光共聚焦顯微成像(如圖9)，方法如下:
[0084]選擇乳腺癌細(xì)胞MCF-7，加入2 μ g/mL“AEEA碳點(diǎn)-阿霉素復(fù)合物”，利用激光共聚焦顯微鏡觀察6h后細(xì)胞內(nèi)焚光信號(hào)分布情況。
[0085]圖9中:圖A的激發(fā)波長(zhǎng)為405nm，檢測(cè)區(qū)間為410-510nm，此波段檢測(cè)的是碳點(diǎn)的熒光發(fā)光信號(hào)。由圖可見，細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)大量由碳點(diǎn)發(fā)出的藍(lán)色熒光亮點(diǎn)，這表明碳點(diǎn)都分布在細(xì)胞質(zhì)中，未進(jìn)入細(xì)胞核。圖B的激發(fā)波長(zhǎng)為488nm，檢測(cè)區(qū)間為520_700nm，此波段檢測(cè)的是阿霉素的熒光發(fā)光信號(hào)。
[0086]由圖可見，阿霉素發(fā)出的紅色熒光主要分布在細(xì)胞核中，而碳點(diǎn)仍然存在于細(xì)胞質(zhì)中。這表明在細(xì)胞質(zhì)中的溶酶體作用下，阿霉素分子已經(jīng)從碳點(diǎn)上解離并進(jìn)入細(xì)胞核，從而發(fā)揮殺死癌細(xì)胞的作用。
【權(quán)利要求】
1.碳點(diǎn)作為抗腫瘤藥物載體的應(yīng)用，其特征在于:包括以下步驟: (1)氨基化碳點(diǎn)的制備:采用微波合成法，以含氨基的硅烷試劑和甘油為原料，制得氨基化碳點(diǎn)； (2)碳點(diǎn)表面馬來酰亞胺化:氨基化碳點(diǎn)與一端帶有N-羥基琥珀酰亞胺酯(N-hydroxysuccinimide ester，簡(jiǎn)稱 NHS)、另一端帶有馬來酰亞胺(maleimide，簡(jiǎn)稱 MAL)的短鏈聚乙二醇分子NHS-EGn-MAL反應(yīng)，得馬來酰亞胺化的碳點(diǎn)； (3)碳點(diǎn)-藥物分子復(fù)合物的制備:馬來酰亞胺化的碳點(diǎn)與帶有巰基的藥物反應(yīng)，得碳點(diǎn)-藥物分子復(fù)合物。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:步驟(I)中，氨基化碳點(diǎn)的制備方法，具體包括以下步驟: (a)向甘油中通入氮?dú)猓ト芤褐械难鯕猓? (b)在攪拌同時(shí)加入含有氨基的硅烷試劑使溶液中含氨基的硅烷試劑的體積分?jǐn)?shù)為5-30%，在密閉狀態(tài)下繼續(xù)攪拌5min以上，得氨基化碳點(diǎn)前體溶液； (c)將氨基化碳點(diǎn)前體溶液在微波反應(yīng)器中以140-180°C反應(yīng)5-15min，冷卻、離心，上清液用分子量為1000的透析袋在超純水中透析2天以上，即得。
3.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于:步驟(I)中，所述含有氨基的硅烷試劑為3-[2-(2-氨基乙基氨基)乙基氨基]丙基三甲氧基硅烷(AEEA)。
4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:步驟(2)中，所述短鏈聚乙二醇分子中，η為6-12;碳點(diǎn)中的硅烷試劑與短鏈聚乙二醇分子(NHS-EGn-MAL)的物質(zhì)的量比為1:1-1:10 ;反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間Ih以上。
5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:步驟(3)中，所述帶有巰基的藥物為本身帶有巰基的藥物分子，或者通過巰基化反應(yīng)(如利用Traut’ s巰基化試劑將含有氨基的藥物分子巰基化)制備的帶有巰基的藥物分子。
6.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:步驟(3)中，所述帶有巰基的藥物為巰基化的阿霉素(DOX);馬來酰亞胺化的碳點(diǎn)中的硅烷試劑與帶巰基的藥物的物質(zhì)的量比為1:1-1:5 ;反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間Ih以上。
【文檔編號(hào)】A61K47/48GK104474556SQ201410677248
【公開日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月21日
【發(fā)明者】吳富根, 楊婧婧, 張曉東, 王志飛, 陳戰(zhàn) 申請(qǐng)人:東南大學(xué)