用于周圍神經(jīng)缺損的羧甲基幾丁質(zhì)復合神經(jīng)導管的制備方法
【專利摘要】用于周圍神經(jīng)缺損的羧甲基幾丁質(zhì)復合神經(jīng)導管的制備，本發(fā)明涉及一種拉伸強度大、可以縫合固定的羥甲基幾丁質(zhì)復合神經(jīng)導管的制造方法。通過將羥甲基幾丁質(zhì)溶液和聚乙烯醇混合溶液與膠原蛋白以不同體積配比混合成復合溶液，然后將該復合溶液注入模具，經(jīng)反復凍融后，進行層層固化制得。通過周圍神經(jīng)缺損動物模型的電生理和組織學觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn)所制得的神經(jīng)導管可進行神經(jīng)缺損斷端的橋接，拉伸強度大，體內(nèi)維持時間長，并可促進神經(jīng)的再生，神經(jīng)軸突可沿導管生長。本發(fā)明工藝簡單，價格低廉，可替代傳統(tǒng)的神經(jīng)縫接方法，在周圍神經(jīng)缺損的臨床治療中有較好的應用前景。
【專利說明】用于周圍神經(jīng)缺損的羧甲基幾丁質(zhì)復合神經(jīng)導管的制備

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)用生物材料【技術(shù)領(lǐng)域】，是一種涉及新型材料組成的神經(jīng)導管制備方法，在進行周圍神經(jīng)缺損的治療時可作為神經(jīng)橋接管使用，并可以吸收及降解生物材料。

【背景技術(shù)】
[0002]周圍神經(jīng)缺損修復是一直困擾臨床的一個難題。傳統(tǒng)的修復方法如外膜縫合其療效優(yōu)良率僅為50%，在創(chuàng)傷外科領(lǐng)域，神經(jīng)損傷修復是靠神經(jīng)端端縫合，但由于周圍神經(jīng)是混合神經(jīng)，而且目前還缺乏在手術(shù)中能夠快速而準確地辨別神經(jīng)斷端感覺神經(jīng)和運動神經(jīng)纖維的科學鑒別方法，及時應用精細的顯微鏡下縫合，也難以避免在神經(jīng)端端縫合后，因感覺、運動神經(jīng)纖維的錯向?qū)樱绊懮窠?jīng)縫合的療效，影響神經(jīng)功能的恢復。近年來，有學者主張在神經(jīng)斷端間留2?3mm的間隙，由于神經(jīng)的趨化作用，有利于使近端感覺神經(jīng)纖維和運動神經(jīng)纖維分別與遠端相應神經(jīng)纖維對接，從而提高神經(jīng)修復效果。
[0003]羧甲基幾丁質(zhì)是甲殼素脫乙?；漠a(chǎn)物，大量的相關(guān)研究證明羧甲基幾丁質(zhì)是一種生物相容性好、可生物降解吸收以及無毒副作用的天然多糖，與聚乙烯醇混合溶液與膠原蛋白后形成一種新型、優(yōu)良的醫(yī)用生物材料，醫(yī)用聚乙烯醇也是經(jīng)過臨床使用證明具有良好的生物相容性和良好的止血功能，它可以起到賦形劑的作用。膠原是組成膠原纖維的蛋白質(zhì)，約占哺乳動物總蛋白質(zhì)的1/3，其在皮膚和結(jié)締組織中含量豐富，但一種成分的羧甲基幾丁質(zhì)導管彈性差，易破碎，神經(jīng)斷端無法在管中固定。
[0004]以羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液與膠原蛋白為基材神經(jīng)導管不僅可以起到支架橋接作用，而且具有神經(jīng)營養(yǎng)的作用，可以較好地促進神經(jīng)再生。
[0005]非生物降解材料主要有硅膠管、碳纖維管、聚酯纖維管等，此類導管本身具有有一定毒性，管壁壓縮神經(jīng)、需二次手術(shù)取出導管等弊端。
[0006]用此制造導管生物相容性好、具有良好生物力學、可拉伸及在體內(nèi)可降解吸收的導管在臨床上具有很重要的現(xiàn)實意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供一種拉伸程度大、在體內(nèi)可維持較長時間、可降解吸收的一種用于周圍神經(jīng)缺損的羧甲基幾丁質(zhì)復合神經(jīng)導管的制造方法。
[0008]本發(fā)明提供一種用于周圍神經(jīng)缺損的羧甲基幾丁質(zhì)復合神經(jīng)導管的制造方法，該神經(jīng)導管的主要成分羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液和膠原蛋白溶液復合溶液，通過復合溶液在模具上進行層層固化制得的，具體包括以下步驟:
[0009]a.制備酸性條件下濃度為1.5-2.5% (w/v)的羧甲基幾丁質(zhì)溶液；
[0010]b.制備濃度為10-20% (w/v)的聚乙烯醇溶液；
[0011]c.羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合，其比例為4/l_l/4(m/m)混合溶液；
[0012]d.制備酸性條件下的濃度為1-1.5% (w/v)的膠原蛋白溶液；
[0013]e.制備羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液-膠原蛋白溶液復合溶液:將上述膠原蛋白-羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液復合溶液按照體積比為5: 5、6: 4、7: 3或8: 2的比例混合，用超聲波超聲使溶液混合均勻，然后用高速離心機離心30min，脫泡；
[0014]f.制備神經(jīng)導管:在無菌環(huán)境下，將上述羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液-膠原蛋白溶液復合溶液涂層在外徑0.5-1.6mm的模具上，涂層均勻后，在0.5%的氫氧化鈉溶液中固化，然后用酒精脫水，注射用水洗滌，在30?40°C下烘至半干燥狀態(tài)，然后重復上述涂層、固化、脫水、洗滌和烘干過程，直至導管壁厚達到150-200 μ m，然后將帶模具的多層導管在注射用水中浸泡5min，脫模，用注射用水洗滌，自然晾干，包裝后滅菌。
[0015]上述神經(jīng)導管的制造方法，更具體的操作步驟如下:
[0016]a.制備羧甲基幾丁質(zhì)溶液:取新鮮蟹殼，去除頭、腳和尾，用清水洗凈，分別用5%HCl和10%的NaOH浸泡去除鈣和蛋白，洗至中性，烘干，磨粉得到粉末幾丁質(zhì)，取粉末幾丁質(zhì)在50%的NaOH溶液中100°C以上脫乙酰反應24h以上，然后中和，用注射用水洗滌至中性，酒精脫水，最后真空干燥得脫乙酰度為85-95 %的羥甲基幾丁質(zhì)，將該羥甲基幾丁質(zhì)溶解在2% (v/v)的醋酸中，使最終羥甲基幾丁質(zhì)溶液濃度為1.5% (w/v)；
[0017]b.將羧甲基幾丁質(zhì)溶液與聚乙烯醇溶液混合2/1 (m/m)，充分攪拌，靜置除去氣泡，制得混合溶液；
[0018]c.制備膠原蛋白溶液:以牛跟腱為原料，進行脫脂處理和清洗后，冷凍，切片，用高速組織搗碎機搗碎，洗提，離心；取沉淀用2% (v/v)醋酸抽提，用胃蛋白酶消化，牛跟腱與胃蛋白酶的重量比為100: 1，提取72小時，過濾，高速離心30min ;取上清液加入氯化鈉至最終濃度為2.5mol/L，進行鹽析，去除雜蛋白，高速離心30min，取沉淀溶解在2% (v/v)醋酸，使最終膠原蛋白的濃度為1.5% (w/v)；
[0019]d.制備羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液-膠原蛋白溶液復合溶液:將上述膠原蛋白-羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液復合溶液按照體積比為5: 5、6: 4、7: 3或8: 2的比例混合，用超聲波超聲使溶液混合均勻，然后用高速離心機離心30min，脫泡；
[0020]e.制備神經(jīng)導管:在無菌環(huán)境下，將上述羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液-膠原蛋白溶液復合溶液涂層在外徑0.5-1.6mm的模具上，涂層均勻后，在0.5%的氫氧化鈉溶液中固化，然后用酒精脫水，注射用水洗滌，在30?40°C下烘至半干燥狀態(tài)，然后重復上述涂層、固化、脫水、洗滌和烘干過程，直至導管壁厚達到150-200 μ m，然后將帶模具的多層導管在注射用水中浸泡5min，脫模，用注射用水洗滌，自然晾干，包裝后滅菌，采用雙層無菌包裝后，進行6°Co輻照滅菌。
[0021]上述導管的長度可以根據(jù)臨床應用要求剪裁成各種規(guī)格。
[0022]在制備羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液-膠原蛋白溶液復合溶液中，膠原蛋白溶液和羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液按照體積比7: 3的比例混合，效果最佳。
[0023]本發(fā)明在羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液與膠原蛋白的溶液復合溶液為基質(zhì)神經(jīng)導管的制造過程中，通過調(diào)節(jié)膠原和羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液的適合體積配t匕，將三者優(yōu)勢結(jié)合起來。相關(guān)文獻已證明羧甲基幾丁質(zhì)與雪旺氏細胞有著良好組織相容性，此外羧甲基幾丁質(zhì)有抑成纖維細胞生長并可以減少神經(jīng)斷端間疤痕的形成利于神經(jīng)軸索的生長，膠原蛋白對神經(jīng)有營養(yǎng)作用，可以很好地促進神經(jīng)的再生。醫(yī)用聚乙烯醇也是經(jīng)過臨床使用證明具有良好的生物相容性和良好的止血功能，它可以起到賦形劑的作用。
[0024]本發(fā)明的優(yōu)點:
[0025]1.本發(fā)明制造工藝簡單。
[0026]2.本發(fā)明成本較低。
[0027]3.本發(fā)明制得的神經(jīng)導管代替?zhèn)鹘y(tǒng)的神經(jīng)縫接方法，并可用于小距離神經(jīng)缺損的套接，在周圍神經(jīng)缺損的臨床治療中有較好的應用前景。
[0028]具體實施辦法
[0029]現(xiàn)結(jié)合實施例，對本發(fā)明作詳細描述:
[0030]實施例1:本發(fā)明是一種用于周圍神經(jīng)缺損的羧甲基幾丁質(zhì)復合神經(jīng)導管的制備。
[0031]第一步:羧甲基幾丁質(zhì)溶液的制備
[0032]取新鮮蟹殼，去除頭、腳和尾，用清水洗凈，分別用5% HCl和10%的NaOH浸泡去除鈣和蛋白，洗至中性，烘干，磨粉得到粉末幾丁質(zhì)，取粉末幾丁質(zhì)在50%的NaOH溶液中100°C以上脫乙酰反應24h以上，然后中和，用注射用水洗滌至中性，酒精脫水，最后真空干燥得脫乙酰度為85-95%的羥甲基幾丁質(zhì)，將該幾丁質(zhì)溶解在2% (v/v)的醋酸中，使最終羧甲基幾丁質(zhì)溶液濃度為1.5% (w/v)。
[0033]第二步:醫(yī)用聚乙烯醇溶液制備
[0034]將醫(yī)用聚乙烯醇溶于熱的注射用水中，充分攪拌，靜置除去氣泡，最終聚乙烯醇溶液濃度為10% (w/v)。
[0035]第三步:羧甲基幾丁質(zhì)與聚乙烯醇混合溶液比例制備
[0036]將羥甲基幾丁質(zhì)與聚乙烯醇溶液混合2/1 (m/m)，充分攪拌，靜置除去氣泡，制得混合溶液。
[0037]第四步:膠原蛋白溶液的制備
[0038]以牛跟腱為原料，進行脫脂處理和清洗后，冷凍，切片，用高速組織搗碎機搗碎，洗提，離心。取沉淀用2% (v/v)醋酸抽提，用胃蛋白酶(牛跟腱與胃蛋白酶的重量比為100: I)消化，提取72小時，過濾，高速離心30min;取上清液加入氯化鈉至最終濃度為
2.5mol/L,進行鹽析,去除雜蛋白，高速離心30min,取沉淀溶解在2% (v/v)醋酸,使最終膠原蛋白的濃度為1.5% (w/v)。
[0039]第五步:羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合-膠原蛋白復合溶液的制備
[0040]將上述膠原蛋白溶液與羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液按照體積比為5: 5的比例混合，用超聲波超聲使溶液混合均勻，然后用高速離心機離心30min，脫泡。
[0041]第六步:模制多層復合神經(jīng)導管的制備
[0042]在無菌環(huán)境下，將上述羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇-膠原蛋白復合溶液涂層在外徑為1.2mm的不銹鋼模具上，涂層均勻后，在0.5%的氫氧化鈉溶液中固化，然后用酒精脫水，注射用水洗滌，在30?40°C下烘干至半干燥狀態(tài)，然后重復上述涂層、固化、脫水、洗滌和烘干過程，得到長2-3cm，內(nèi)徑1.2m，壁厚200 μ m的導管。然后，將帶模具的多層導管在注射用水中浸泡5min，脫模，用注射用水洗滌，自然晾干。采用雙層無菌包裝后，進行6tlCo輻照滅菌。
[0043]實施例2:本發(fā)明是一種用于周圍神經(jīng)缺損的羧甲基幾丁質(zhì)復合神經(jīng)導管的制備
[0044]第一步:羧甲基幾丁質(zhì)溶液制備和第二步醫(yī)用聚乙烯醇制備按第三步比例混合制備和第四步膠原蛋白溶液制備同實例I。
[0045]第五步:羥甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合-膠原蛋白復合溶液的制備
[0046]將上述膠原蛋白溶液與羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液按照體積比為6: 4的比例混合，用超聲波超聲使溶液混合均勻，然后用高速離心機離心30min，脫泡。
[0047]第六步:模制多層復合神經(jīng)導管的制備同實例I。
[0048]實施例3:本發(fā)明是一種用于周圍神經(jīng)缺損的羧甲基幾丁質(zhì)復合神經(jīng)導管的制備。
[0049]第一步:羧甲基幾丁質(zhì)溶液制備和第二步醫(yī)用聚乙烯醇制備按第三步混合制備和第四膠原蛋白溶液制備同實例I。
[0050]第五步:羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液-膠原蛋白溶液的制備
[0051]將上述膠原蛋白溶液與羥甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液按照體積比為7: 3的比例混合，用超聲波超聲使溶液混合均勻，然后用高速離心機離心30min，脫泡。
[0052]第六步:模制多層復合神經(jīng)導管的制備同實例I。
[0053]實施例4:本發(fā)明是一種用于周圍神經(jīng)缺損的羥甲基幾丁質(zhì)復合神經(jīng)導管的制備。
[0054]第一步:羧甲基幾丁質(zhì)溶液制備和第二步醫(yī)用聚乙烯醇制備按第三步混合制備和第四膠原蛋白溶液制備同實例I。
[0055]第五步:羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液-膠原蛋白溶液的制備
[0056]將上述膠原蛋白溶液與羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液按照體積比為8: 2的比例混合，用超聲波超聲使溶液混合均勻，然后用高速離心機離心30min，脫泡。
[0057]第六步:模制多層復合神經(jīng)導管的制備同實例I。
[0058]實施例5:復合神經(jīng)導管的力學強度檢測
[0059]第一步:從實施制得的神經(jīng)導管樣品上截取一小段測試樣，其長度不小于自然狀態(tài)下樣品的內(nèi)徑。將樣品的兩端固定在萬能拉力機上，小心確保實驗樣品沒有被拉伸、扭曲或被夾具損壞，以50mm/min穩(wěn)定的速度拉伸，直到斷裂。測量斷裂或屈服時的負載力。
[0060]第二步:將試樣平放在萬能拉力機的下壓縮板中央，調(diào)整上壓縮板。當上壓縮板接觸軟管時，開始記錄數(shù)據(jù)，拉力機以5mm/min的速度壓縮軟管，當位移為樣品直徑的50%時停機，然后反向運轉(zhuǎn)至負荷為零時停機，記錄整個過程中負荷變化。
[0061]實施例6:復合神經(jīng)導管橋接周圍神經(jīng)缺損的電生理研究
[0062]第一步:選用20只雄性SD大鼠(180_220g)采用I %戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔注射麻醉，大鼠左股后外側(cè)行縱行切口，自肌間隙進入顯露坐骨神經(jīng)約2.5cm。于坐骨神經(jīng)中段切取12mm,任其回縮到15mm,采用實施制得神經(jīng)導管,長17mm,內(nèi)徑1.5mm,復合神經(jīng)導管橋接神經(jīng)缺損羥甲基幾丁質(zhì)復合神經(jīng)導管，二端分別套入1_，10-0尼龍線3針固定。手術(shù)均在顯微鏡下完成，術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)，分別于術(shù)后4、8、12、16周取材料檢測。
[0063]第二步:實驗發(fā)現(xiàn)，在術(shù)后8周，缺損部位已經(jīng)有新生神經(jīng)，將遠、近端相連。術(shù)后16周，有較明顯的電生理反應。證明羥甲基幾丁質(zhì)復合神經(jīng)導管有較好的修復神經(jīng)作用。
[0064]實施例7:復合神經(jīng)導管橋接周圍神經(jīng)缺損的組織學研究
[0065]第一步:雄性Wistan大鼠12只，體重200_250g，將右側(cè)坐骨神經(jīng)切除6mm，采用實施得到神經(jīng)導管，左側(cè)坐骨神經(jīng)為正常對照組，術(shù)后I周處死動物。
[0066]第二步:實驗發(fā)現(xiàn)，組織學檢查低倍鏡下可見再生神經(jīng)纖維排列整齊通過神經(jīng)導管。導管變薄，但仍可見，且神經(jīng)與周圍組織間粘連輕。高倍鏡見再生神經(jīng)纖維密集，形態(tài)正常。8周末辣根過氧化物酶(HRP)檢查，至脊髓腰膨大灰質(zhì)前角中可見HRP標記陽性的運動神經(jīng)元，細胞集中在L5、L6及骶神經(jīng)段。本發(fā)明可降解神經(jīng)導管拉伸強度大，在體內(nèi)維持時間長，神經(jīng)軸突可沿導管生長。
【權(quán)利要求】
1.一種用于周圍神經(jīng)缺損的羧甲基幾丁質(zhì)復合神經(jīng)導管的制備方法，其主要特征為以羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液，再與膠原蛋白溶液共混成復合溶液，經(jīng)凍融固化而成，可替代傳統(tǒng)的神經(jīng)縫接方法，在周圍神經(jīng)損傷的治療時用于小距離神經(jīng)缺損的套接。 a.制備酸性條件下的濃度為1.5-2.5%(w/v)的羧甲基幾丁質(zhì)溶液； b.將聚乙烯醇溶于熱的注射用水中，充分攪拌，靜置除去氣泡，最終制備聚乙烯醇溶液濃度為 10-20% (m/v)。 c.羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇，其比例為4/l-l/4(m/m);混合溶液。 d.制備酸性條件下的濃度為1-1.5%(w/v)的膠原蛋白溶液； e.制備羧甲基幾丁質(zhì)與聚乙烯醇混合溶液-膠原蛋白溶液復合溶液:將上述膠原蛋白溶液與羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液按照體積比為5: 5、6: 4、7: 3或8: 2的比例混合成復合溶液，用超聲波超聲使溶液混合均勻，然后用高速離心機離心30min，脫泡； f.制備神經(jīng)導管:在無菌環(huán)境下，將上述羧甲基幾丁質(zhì)與聚乙烯醇混合溶液-膠原蛋白溶液復合溶液涂層在外徑0.5-1.6mm的模具上，涂層均勻后，在0.5%的氫氧化鈉溶液中固化，然后用酒精脫水，注射用水洗滌，在30?40°C下烘至半干燥狀態(tài)，然后重復上述涂層、固化、脫水、洗滌和烘干過程，直至導管壁厚達到150-200 μ m，然后將帶模具的多層導管在注射用水中浸泡5min，脫模，用注射用水洗滌，自然晾干，包裝后滅菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羧甲基幾丁質(zhì)復合神經(jīng)導管制備方法，其特征在該方法包括以下步驟: a.制備羧甲基幾丁質(zhì)溶液:取新鮮蟹殼，去除頭、腳和尾，用清水洗凈，分別用5%HCl和10%的NaOH浸泡去除鈣和蛋白，洗至中性，烘干，磨粉得到粉末幾丁質(zhì)，取粉末幾丁質(zhì)在50%的NaOH溶液中100°C以上脫乙酰反應24h以上，然后中和，用注射用水洗滌至中性，酒精脫水，最后真空干燥得脫乙酰度為85-95 %的羧甲基幾丁質(zhì)，將該羧甲基幾丁質(zhì)溶解在2% (v/v)的醋酸中，使最終羧甲基幾丁質(zhì)溶液濃度為1.5% (w/v)； b.制備聚乙烯醇溶于熱的注射用水中，充分攪拌，靜置除去氣泡，最終聚乙烯醇溶液濃度為 10% (w/v)； c.羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇，其比例為4/l-l/4(m/m)配比混合溶液； d.制備膠原蛋白溶液:以牛跟腱為原料，進行脫脂處理和清洗后，冷凍，切片，用高速組織搗碎機搗碎，洗提，離心；取沉淀用2% (v/v)醋酸抽提，用胃蛋白酶消化，牛跟腱與胃蛋白酶的重量比為100: 1，提取72小時，過濾，高速離心30min ;取上清液加入氯化鈉至最終濃度為2.5mol/L,進行鹽析,去除雜蛋白，高速離心30min,取沉淀溶解在2% (v/v)醋酸，使最終膠原蛋白的濃度為1.5% (w/v)； d.制備羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液-膠原蛋白溶液復合溶液:將上述膠原蛋白溶液與羧甲基幾丁質(zhì)與聚乙烯醇混合溶液的復合溶液按照體積比為5: 5、6: 4、7: 3或8: 2的比例混合，用超聲波超聲使溶液混合均勻，然后用高速離心機離心30min，脫泡； e.制備神經(jīng)導管:在無菌環(huán)境下，將上述羧甲基幾丁質(zhì)與聚乙烯醇混合溶液-膠原蛋白溶液復合溶液涂層在外徑0.5-1.6mm的模具上，涂層均勻后，在0.5%的氫氧化鈉溶液中固化，然后用酒精脫水，注射用水洗滌，在30-40°C下烘至半干燥狀態(tài)，然后重復上述涂層、固化、脫水、洗滌和烘干過程，直至導管壁厚達到150-200 μ m ;然后將帶模具的多層導管在注射用水中浸泡5min，脫模，用注射用水洗滌，自然晾干；采用雙層無菌包裝后，進行6tlCo輻照滅菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用于周圍神經(jīng)缺損的羧甲基幾丁質(zhì)復合神經(jīng)導管的制備方法，其特征在于其中e，制備羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液-膠原蛋白溶液復合溶液:將上述膠原蛋白溶液與羧甲基幾丁質(zhì)和聚乙烯醇混合溶液按照體積比為7: 3的比例混合。
【文檔編號】A61L27/20GK104383595SQ201410670227
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月21日
【發(fā)明者】楊子中 申請人:楊子中