6-巰基嘌呤在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開6-巰基嘌呤在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應用。本發(fā)明利用6-巰基嘌呤制備的藥物對腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力進行抑制，6-巰基嘌呤為低毒藥物，可在腫瘤擴散過程中起到較大的阻斷作用，與此同時再采用其他相關腫瘤藥物進行治療，可以大量減少正常細胞的死亡量；而現(xiàn)有的腫瘤藥物多為細胞毒藥物，在殺死腫瘤細胞的同時大量正常細胞也一起死亡。
【專利說明】6-巰基嘌昤在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的 應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及6-巰基嘌呤在制藥領域新的用途，具體涉及6-巰基嘌呤在制備抑制 腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應用。

【背景技術】
[0002] 6-巰基嘌呤是一種抗腫瘤藥，用于急性白血病效果較好，對慢性粒細胞白血病也 有效；用于絨毛膜上皮癌和惡性葡萄胎。另外對惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤也有一定療效。
[0003] 6-MP的化學結構與次黃嘌呤相似，唯一不同的是分子中6位C上由巰基取代了羥 基。6-MP通過競爭性抑制次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，使PRPP分子中的磷酸核糖不 能向鳥嘌呤及次黃嘌呤轉(zhuǎn)移，阻斷嘌呤核苷酸的補救合成途徑。6-MP可在體內(nèi)經(jīng)磷酸核糖 化而生成6-MP核苷酸，并以這種形式抑制MP轉(zhuǎn)變?yōu)锳MP及GMP的反應。由于6-MP核苷 酸結構與頂P相似，還可以反饋抑制PRPP酰胺轉(zhuǎn)移酶而干擾磷酸核糖胺的形成，從而阻斷 嘌呤核苷酸的從頭合成。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：本發(fā)明目的在于提供一種6-巰基嘌呤在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴 散的藥物中的應用。
[0005] 技術方案：6_巰基嘌呤在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應用。
[0006] 優(yōu)選地，所述腫瘤細胞為結腸癌細胞。
[0007] 優(yōu)選地，其中6-巰基嘌呤的濃度為5?10uM。
[0008] 發(fā)明人通過細胞層面的實驗研宄發(fā)現(xiàn)，6-巰基嘌呤對腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力有一定 的抑制作用。目前針對現(xiàn)有的適應癥一般給藥途徑為口服，白血?。嚎诜好咳彰壳Э梭w重 1. 5?3mg，分2?3次服，絨毛膜上皮癌：口服：每日每千克體重6mg。
[0009] 本發(fā)明需要在現(xiàn)有的細胞層面實驗基礎上根據(jù)新的適應癥療效以及后續(xù)相關實 驗設計確定新的臨床給藥方法及劑量。
[0010] 本發(fā)明通過將腫瘤細胞采集培養(yǎng)后，再利用藥物刺激細胞，觀察細胞形態(tài)、并定量 分析細胞層的面積，即細胞能夠與其他細胞接觸的面積，從而判斷腫瘤細胞的擴散能力。細 胞層面積越大越有利于與其他細胞形成連接。細胞迀移需要內(nèi)外因素的配合。外部的因素 指的是細胞外的信號分子。內(nèi)部因素則指細胞的信號傳導系統(tǒng)和執(zhí)行運動的細胞骨架和分 子馬達，還有參與粘著斑形成的各種分子。細胞外信號結合胞膜受體完成其使命后，需要 細胞內(nèi)信號分子接力，將運動信息進一步傳給細胞迀移的執(zhí)行單位一一細胞骨架和分子馬 達。種類繁多的細胞內(nèi)信號分子會相互作用，影響后述這兩種分子的分布，結構和活性，達 到精細調(diào)整細胞運動的目的。由此可見，腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移，與細胞本身以及細胞之間的關系 緊密。
[0011] 癌細胞與其同源正常組織相比，細胞間的粘著性降低，故癌細胞在體內(nèi)容易分散 和轉(zhuǎn)移。在正常細胞外被中的纖粘連蛋白是一種細胞外粘著糖蛋白，它增強了細胞與細胞 外基質(zhì)間的粘著。癌細胞的纖粘連蛋白顯著減少或缺失，鈣粘蛋白合成發(fā)生障礙，從而破 壞了細胞與基質(zhì)之間和細胞與細胞之間的粘著，因此癌細胞具有易于侵潤組織和轉(zhuǎn)移的屬 性。癌細胞的面積的增大增強了各個細胞之間的接觸面積更利于相互之間的粘連和附著。
[0012] 雖然腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移是由多種因素共同形成導致的，但是以細胞層的面積，即細 胞能夠與其他細胞接觸的面積作為細胞轉(zhuǎn)移能力大小的依據(jù)，以此作為細胞間連接強度的 測定的方法，具有成本低廉、操作簡便、結果易判的優(yōu)點，其表現(xiàn)出來的細胞面積增大是最 容易直接觀察辨別的，主要就是通過加藥刺激后對細胞間連接分子Ε-cadherin蛋白質(zhì)進 行免疫染色，繼而進行定量測定。細胞層面積越大越有利于與其他細胞形成連接。
[0013] 本發(fā)明以為6-巰基嘌呤為實驗對象，評估考量其在抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的能力評 價。具體以藥物刺激前后細胞面積的變化為主要依據(jù)。
[0014] 有益效果：1、本發(fā)明利用6-巰基嘌呤制備的藥物對腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力進行抑 制，6-巰基嘌呤為低毒藥物，可在腫瘤擴散過程中起到較大的阻斷作用，與此同時再采用其 他相關腫瘤藥物進行治療，可以大量減少正常細胞的死亡量；而現(xiàn)有的腫瘤藥物多為細胞 毒藥物，在殺死腫瘤細胞的同時大量正常細胞也一起死亡；2、本發(fā)明所使用的6-巰基嘌呤 為成藥庫的現(xiàn)有藥物化合物，研發(fā)周期與新藥研發(fā)的周期相比可明顯減少。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0015] 圖1為0. 5uM濃度6-巰基嘌呤處理后的結腸癌細胞圖；
[0016] 圖2為IuM濃度6-巰基嘌呤處理后的結腸癌細胞圖；
[0017] 圖3為5uM濃度6-巰基嘌呤處理后的結腸癌細胞圖；
[0018] 圖4為IOuM濃度6-巰基嘌呤處理后的結腸癌細胞圖；
[0019] 圖5為50uM濃度6-巰基嘌呤處理后的結腸癌細胞圖；
[0020] 圖6為陽性對照組，由IOuM濃度nocodazole處理后的結腸癌細胞圖；
[0021] 圖7為陰性對照組。

【具體實施方式】
[0022] 下面通過附圖對本發(fā)明技術方案進行詳細說明，但是本發(fā)明的保護范圍不局限于 所述實施例。
[0023] 實施例1 :6_巰基嘌呤在制備抑制結腸癌細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應用。具體 實驗方案如下：
[0024] 1、實驗材料
[0025] 本發(fā)明實驗階段采用的是結腸癌細胞（HT29)，陽性對照采用的藥物是 nocodazole (實驗濃度為IOuM)。陰性對照組沒有經(jīng)過任何處理。
[0026] 其中實驗采用6-巰基嘌呤化合物C5H4N4S, CAS NO.為 6112-76-1，50-44-2 [anhydrous]，濃度分別為 50uM，10uM，5uM，luM，0. 5uM。
[0027] 2、實驗方法
[0028] 對培養(yǎng)24小時的結腸癌細胞（細胞密度：105)進行藥物刺激2小時處理：
[0029] (1)將培養(yǎng)皿中狀態(tài)較好的結腸癌細胞離心，加入適量培養(yǎng)液制成細胞懸浮液；
[0030] (2)取細胞懸液計數(shù)，按照IO5的密度加入24孔盤中，放入37°C的CO 2培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)；
[0031] (3) 24小時后，換液，培養(yǎng)液中加入相應量的6-巰基嘌呤化合物配置到實驗所需 濃度，以及陽性對照藥物，然后繼續(xù)培養(yǎng)2小時；
[0032] (4)培養(yǎng)2小時后將細胞于2%的PFA溶液下37°C固定10分鐘，再進行熒光染色。
[0033] 3、實驗結果處理
[0034] 對熒光染色后的結腸癌細胞觀察，將觀察的圖片用Image J處理并計算其細胞面 積在加藥前后的數(shù)據(jù)，Ratio是實驗組與陰性對照組的比值。結果見表1。
[0035] 表1 6-巰基嘌呤對HT29細胞刺激2小時后的面積大小
[0036]

【權利要求】
1. 6-巰基嘌呤在制備抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散的藥物中的應用。
2. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其中腫瘤細胞為結腸癌細胞。
3. 根據(jù)權利要求1所述的應用，其中6-巰基嘌呤的濃度為5~10uM。
【文檔編號】A61K31/52GK104490890SQ201410660486
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年11月18日 優(yōu)先權日:2014年11月18日
【發(fā)明者】高煒煒, 湯繼玉 申請人:高煒煒