一種治療帕金森病的中藥組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種治療帕金森病的中藥組合物，是以肉蓯蓉6-15g，石菖蒲6-12g為藥材配方，利用肉蓯蓉減輕機(jī)體氧化應(yīng)激損傷、清除自由基的作用，配合石菖蒲揮發(fā)油提高血腦屏障通透性的作用，制備成的治療帕金森病的散劑、顆粒劑、沖劑或其他中藥劑型。經(jīng)實驗證明，本發(fā)明中藥組合物可修復(fù)受損的多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞，有效提高黑質(zhì)-紋狀體中多巴胺含量，上調(diào)多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞TH的表達(dá)，降低腦組織過氧脂質(zhì)化程度，增強(qiáng)腦內(nèi)抗氧化水平，減輕MPP+誘導(dǎo)帕金森病模型MES23.5多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，且無明顯毒性。
【專利說明】一種治療帕金森病的中藥組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種治療帕金森病的中藥組合物。

【背景技術(shù)】
[0002] 帕金森?。≒arkinson Disease, PD)是一種以中腦黑質(zhì)紋狀體部多巴胺能神經(jīng)元 的變性或消失，以及細(xì)胞內(nèi)α -突觸核蛋白的異常蓄積引起路易小體的形成為病理特征， 從而產(chǎn)生靜止性震顫、肌強(qiáng)直、運(yùn)動遲緩、姿勢步態(tài)障礙等臨床表現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾 病。Η)常見于中老年人，流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國Η)患病總?cè)藬?shù)已達(dá)170多萬人，其中65 歲以上人群的患病率約為1.7%;隨著人口的老齡化，發(fā)病率顯著增加已成為當(dāng)前老年醫(yī)學(xué) 面臨的最嚴(yán)峻課題之一。迄今為止，PD的確切病因及發(fā)病機(jī)制尚不清楚，但已有足夠的證 據(jù)表明氧化應(yīng)激引起的細(xì)胞凋亡增多與多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞退行性病變是密切相關(guān)的。
[0003] 目前，帕金森病的治療仍然是針對其癥狀進(jìn)行控制，尚無有效延緩疾病進(jìn)程的手 段。臨床上以多巴胺替代治療為主，其中，以左旋多巴為代表，雖然其治療起效迅速，但隨之 帶來的諸多副作用日益引起人們的注意，諸如"開關(guān)現(xiàn)象"、"劑末現(xiàn)象"、運(yùn)動障礙、精神異 常等問題；并且左旋多巴本身不僅無法阻止或延緩多巴胺能神經(jīng)元的進(jìn)行性死亡，還可以 通過自身氧化產(chǎn)物誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡。這些都極大地影響了患者的治療效果和生活質(zhì)量。 因此，尋找一種能夠預(yù)防和延緩疾病進(jìn)程的治療方法已成為迫切需要，而保護(hù)及修復(fù)已損 傷的多巴胺神經(jīng)元是治療ro病的核心問題。
[0004] 中醫(yī)典籍對ro多有記載，明?王肯堂在《證治準(zhǔn)繩》中記載："此病壯年鮮，中 年以后乃有之"。中醫(yī)又言"腎為先天之本，……腎生髓，充腦，腦為髓海。"《靈樞?海論》 曰："髓海有余，則輕勁多力……髓海不足，則腦轉(zhuǎn)耳鳴，脛痙眩冒，目無所見，懈怠安臥。" 帕金森病主要表現(xiàn)為肢體活動失調(diào)、運(yùn)動遲緩，且發(fā)病年齡在進(jìn)入腎氣衰退的中老年時期， 故腎虛髓空是導(dǎo)致帕金森病發(fā)生的內(nèi)在條件。目前中醫(yī)藥治療ro還不能處于主導(dǎo)地位，但 無論古代醫(yī)藥典籍記載的方藥還是近年提出的以中醫(yī)本草為原料的治療ro的可能新藥， 在臨床上都有一定療效；而且現(xiàn)代藥理研究也證實中醫(yī)方藥可以不同程度地減輕機(jī)體的氧 化應(yīng)激損傷，清除自由基，提高腦內(nèi)da水平，提高機(jī)體抗氧化和抗細(xì)胞凋亡，延緩ro過程， 增效減毒，改善ro患者的生活質(zhì)量，說明中藥在ro黑質(zhì)細(xì)胞保護(hù)性治療和恢復(fù)性治療中可 以發(fā)揮其不可替代的優(yōu)勢。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種治療帕金森病的中藥組合物，以肉蓯蓉和石菖蒲進(jìn)行 藥物組方，使藥物有效成分可通過血腦屏障，從而在腦內(nèi)發(fā)揮功效。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種治療帕金森病的中藥組合物，其以肉蓯蓉和石菖蒲藥材配方，所述配方中含肉蓯 蓉6-15g，石菖蒲6-12g，或肉蓯蓉8-12g，石菖蒲6-10g，優(yōu)選肉蓯蓉10g，石菖蒲6g。
[0007] 所述治療帕金森病中藥組合物的應(yīng)用，是用于制成治療帕金森病的散劑、顆粒劑、 沖劑或其他中藥劑型。
[0008] 所述顆粒劑的制備是將肉蓯蓉和石菖蒲加藥材重量2-3倍的水煎煮兩次，第一次 2小時，第二次1小時，合并煎液，過濾，濾液濃縮至50°C時相對密度為1. 20 ;加乙醇使溶液 中含醇量為60%，靜置沉淀，取上清液，回收乙醇并濃縮至稠膏狀；取稠膏，加入輔料制成 含糖型顆?；驘o糖型顆粒。
[0009] 所述含糖型顆粒的輔料為蔗糖、糊精；所述無糖型顆粒的輔料為糊精、甜味劑；輔 料的加入量為藥材重量的3-4倍。
[0010] 所述顆粒劑的用法是按每次9g，每日2-3次，以100-200mL沸水沖泡15-20分鐘后 溫服，或直接口服，以溫開水送下。
[0011]肉蓯蓉味甘、咸，性溫；歸腎、大腸經(jīng)；具有補(bǔ)腎陽、益精血、潤腸道的功效，主治腎 陽虛衰。石菖蒲味辛、苦，性溫；歸心、胃經(jīng)；具有化濕開胃、開竅豁痰、醒神益智的功效，用 于神昏癲癇、健忘耳聾。
[0012] 本發(fā)明的顯著優(yōu)點在于：本發(fā)明組方中肉蓯蓉的有效成分具有減輕機(jī)體氧化應(yīng)激 損傷，清除自由基的作用。石菖蒲所含揮發(fā)油可提高血腦屏障的通透性，有利于組方中有效 成分通過血腦屏障，進(jìn)入腦內(nèi)發(fā)揮作用。
[0013] 經(jīng)實驗證明，本發(fā)明中藥組合物可修復(fù)受損的多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞，有效提高黑 質(zhì)-紋狀體中多巴胺含量，上調(diào)多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞TH的表達(dá)，降低腦組織過氧脂質(zhì)化程度， 增強(qiáng)腦內(nèi)抗氧化水平，減輕MPP +誘導(dǎo)帕金森病模型MES23. 5多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，且 無明顯毒性。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0014] 圖1為實施例1中各實驗組小鼠神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)的電鏡圖。
[0015] 圖2為實施例3中不同處理對小鼠腦黑質(zhì)中酪氨酸羥化酶表達(dá)的影響，其中，圖A 為TH免疫染色陽性細(xì)胞的顯微圖像；圖B為各組TH免疫染色陽性細(xì)胞平均積分光密度值 的對比。
[0016] 圖3為實施例4中不同處理對小鼠中腦/多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞中抗氧化蛋白GPx-U CAT、HO-I表達(dá)的影響。
[0017] 圖4為實施例4中不同處理對小鼠中腦/多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞抗氧化蛋白GPx-U CAT、HO-I mRNA表達(dá)的影響。
[0018] 圖5為實施例5中本發(fā)明中藥組合物對ro模型小鼠多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影 響，其中，圖A為不同濃度MPP +和不同干預(yù)時間對多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞存活率的影響；圖B為 不同濃度藥液分別干預(yù)24h和48h對正常多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞存活率的影響；圖C為不同濃 度藥液分別干預(yù)24h和48h對模型多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞存活率的影響；圖D為低、中、高劑 量處理后倒置顯微鏡觀察的各組多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)；圖E為低、中、高劑量處理后各 組多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞飛凋亡情況；圖F為各組多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞中Bcl-2和Bax凋亡調(diào)控 蛋白表達(dá)的對比。

【具體實施方式】
[0019] 為了使本發(fā)明所述的內(nèi)容更加便于理解，下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明所述的 技術(shù)方案做進(jìn)一步的說明，但是本發(fā)明不僅限于此。
[0020] 實施例1本發(fā)明中藥組合物對帕金森病（PD)模型小鼠中腦黑質(zhì)-紋狀體神經(jīng)細(xì) 胞形態(tài)的影響 1.藥液制備：將肉蓯蓉Ikg和石菖蒲0. 6kg加3. 2kg水煎煮兩次，第一次2小時，第二 次1小時，合并煎液，過濾，濾液濃縮至50°C時相對密度為1. 20 ;加乙醇使溶液中含醇量為 60 %，靜置沉淀，取上清液，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，取稠膏加水配制成不同濃度的藥液。
[0021] 2.造模：取6周齡SPF級C57BL/6J品系雄性小鼠，用1-甲基-4-苯基-1，2, 3, 6-四 氫吡啶（MPTP)腹腔注射法（40 mg · kg4 · cf1，1次/d，連續(xù)7天）建立PD小鼠模型。每次 注射至少4 h后檢測小鼠的自主活動次數(shù)和轉(zhuǎn)棒時間，選自主活動次數(shù)和轉(zhuǎn)棒時間均下降 小鼠為造模成功小鼠。
[0022] 3.給藥：將造模成功小鼠隨機(jī)分為模型組、低劑量組（lmg/kg)、高劑量組（4mg/ kg)，每組10只，另取同周齡同品系小鼠10只作為正常對照組。正常組、模型組給予蒸餾水 灌胃，各劑量組給予相應(yīng)濃度的藥液灌胃，連續(xù)給藥7天。
[0023] 4.取材：給藥結(jié)束后，將小鼠快速斷頭取腦，冰浴下切取中腦黑質(zhì)-紋狀體 I X I X 1mm3,經(jīng)3%戊二醛-1. 5%多聚甲醛-0. IM PBS (7. 2)前固定8h，換液后4°C靜置固定 7天；用0. IM PBS漂洗并保存過夜；2%鋨酸-3%亞鐵氰化鉀水溶液后固定2h ;0. IM PBS漂 洗并保存過午；酒精-丙酮梯度脫水；環(huán)氧樹脂618包埋劑包埋；超薄切片80nm，醋酸雙氧 鈾/檸檬酸鉛雙染色。采用日立H7650型透射電鏡80KV觀察，SIS400萬像素電鏡C⑶相 機(jī)進(jìn)行拍攝，結(jié)果見圖1。
[0024] 圖1可見，電鏡下觀察到正常組小鼠中腦黑質(zhì)-紋狀體神經(jīng)元的胞膜和細(xì)胞器完 整，線粒體、高爾基復(fù)合體豐富，有少量溶酶體，染色質(zhì)散在于核的中部，著色淺；模型組小 鼠中腦黑質(zhì)-紋狀體神經(jīng)元的胞體縮小，核漿比例縮小，胞核固縮，染色質(zhì)邊集，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò) 張呈空泡狀等凋亡表現(xiàn)；低劑量組和高劑量組小鼠中腦黑質(zhì)-紋狀體神經(jīng)元核內(nèi)胞核固縮 及染色質(zhì)邊聚表現(xiàn)較模型組有減輕，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張狀態(tài)不明顯，以高劑量組減輕更為明顯。
[0025] 實施例2本發(fā)明中藥組合物對模型小鼠黑質(zhì)-紋狀體多巴胺（DA)及其代謝產(chǎn) 物的含量的影響 藥液制備、造模和給藥方法同實施例1。
[0026] 取材：給藥結(jié)束后，快速斷頭取腦，冰浴下分離黑質(zhì)-紋狀體，立即于_80°C冰箱內(nèi) 保存待測。采用高效液相色譜法檢測多巴胺（DA)及其代謝產(chǎn)物高香草酸（HVA)的含量。結(jié) 果見表1。
[0027] 表1各組模型大鼠用藥后DA及其代謝產(chǎn)物的含量（X土s，n=10)

【權(quán)利要求】
1. 一種治療帕金森病的中藥組合物，其特征在于：配方中所含藥材為肉蓯蓉和石菖 蒲。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述治療帕金森病的中藥組合物，其特征在于：所述配方中含肉蓯 蓉6-15g，石菖蒲6-12g。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述治療帕金森病的中藥組合物，其特征在于：所述配方中含肉蓯 蓉8-12g，石菖蒲6-10g。
4. 一種如權(quán)利要求1所述治療帕金森病中藥組合物的應(yīng)用，其特征在于：用于制成治 療帕金森病的散劑、顆粒劑、沖劑或其他中藥劑型。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述治療帕金森病中藥組合物的應(yīng)用，其特征在于：所述顆粒劑的 制備是將肉蓯蓉和石菖蒲加藥材重量2-3倍的水煎煮兩次，第一次2小時，第二次1小時， 合并煎液，過濾，濾液濃縮至50°C時相對密度為1. 20 ;加乙醇使溶液中含醇量為60%，靜置 沉淀，取上清液，回收乙醇并濃縮至稠膏狀；取稠膏，加入輔料制成含糖型顆粒或無糖型顆 粒。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述治療帕金森病中藥組合物的應(yīng)用，其特征在于：所述含糖型顆 粒的輔料為蔗糖、糊精；所述無糖型顆粒的輔料為糊精、甜味劑；輔料的加入量為藥材重量 的3-4倍。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述治療帕金森病中藥組合物的應(yīng)用，其特征在于：所述顆粒劑的 用法是按每次9g，每日2-3次，以100-200mL沸水沖泡15-20分鐘后溫服，或直接口服，以溫 開水送下。
【文檔編號】A61K36/888GK104435465SQ201410658358
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月19日
【發(fā)明者】蔡晶, 葉水芬, 田允, 許藝惠 申請人:福建中醫(yī)藥大學(xué)