一種牛樟菌牛樟芝總三萜提取方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種牛樟芝總三萜的提取方法。所述的提取方法包括以下步驟：先稱取一定量牛樟芝烘干至恒重，粉碎過篩，加水制得待測樣品溶液；在將待測樣品溶液溶于溶劑中，并加入活性炭，微孔濾膜過濾，取濾液；在濾液中先后加入乙醚超聲混勻，提取，再加入正丁醇，超聲混勻，提取，得樣品粗提液；將樣品粗提液濃縮、離心、靜置將沉淀采用水淋，過濾得沉淀；最后將沉淀加量瓶中，加入溶劑定容，加入碳酸氫鈉溶液萃取3-4次，離心取沉淀，干燥得樣品總三萜類物質提取物。.本發(fā)明操作簡單、方便，適于實際大規(guī)模操作，對設備及人員要求不高，成本低，所使用的溶劑無毒副作用，保障了操作者的安全，也保障了提取物的質量及使用安全。
【專利說明】
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種真菌有效成分的提取方法，具體涉及一種牛樟芝總三萜的提取方 法。 一種牛樟菌牛樟芝總三萜提取方法

【背景技術】
[0002] 樟芝Antrodia camphorata又稱牛樟芝或牛樟燕，研究發(fā)現樟芝成分復雜，含有 很多生理活性物質，其中最主要的活性成分是多糖和三萜類化合物。其中三萜類化合物是 樟芝子實體中含有的成分，可抑制癌細胞生成用于輔助常規(guī)的癌癥療法。研究顯示，一位55 歲的大腸癌患者病理報告顯示癌細胞可能已轉移到淋巴結，在服用樟芝子實體3個月后， 腫瘤指數下降，肝功能也明顯改善。多糖也具有抗腫瘤活性，還具有抗菌、抗病毒、保肝、降 血糖、平喘、提高動物對缺氧的耐受性及降低血粘度等作用。牛樟芝在臺灣亦被稱為森林中 的紅寶石，一直盛有"靈芝之王"的美譽。
[0003] 現有技術關于三萜類化合物的提取分離方法主要包括傳統(tǒng)的提取分離方法、超臨 界流體萃取法（SFE)、半仿生提取、超聲循環(huán)技術和化學衍生法。傳統(tǒng)的三萜類成分提取分 離方法，一般根據其溶解性采用不同的有機溶劑進行提取分離，但該方法操作復雜。為此， 本發(fā)明提取一種快速從牛樟芝中獲得高含量的的總三萜類物質，且整個操作過程對環(huán)境及 操作人員均無不良影響。


【發(fā)明內容】

[0004] 針對上述現有技術的不足，本發(fā)明提供一種可對牛樟芝中總三萜類物質進行快速 提取的方法。
[0005] 本發(fā)明的技術方案如下： 牛樟芝總三萜提取方法，包括以下步驟： (1) 樣品預處理：稱取牛樟芝10-20g，烘干至恒重，粉碎過篩，加入10-20倍水溶解，制 得待測樣品溶液； (2) 在步驟（1)中的制得的待測樣品溶液溶于溶劑中，并加入活性炭，微孔濾膜過濾，取 濾液備用； (3) 在步驟（2)中制得的樣品濾液中加入乙醚1〇-2〇ml超聲混勻中，提取，提取操作重 復2次，加入正丁醇 25_40ml，超聲混勻，提取操作重復3-5次，得樣品粗提液； (4) 將步驟（3沖制得的樣品粗提液濃縮、離心、靜置10-20min，將沉淀采用水淋洗2-4 次，過濾得沉淀； (5) 將步驟（4)中制得的沉淀加入50ml量瓶中，加入溶劑定容，加入碳酸氫鈉溶液 5-10ml萃取3-4次，離心取沉淀，干燥得樣品總三萜類物質提取物。
[0006] 優(yōu)選的，步驟（1)中所述的烘干過程中操作溫度為60-70°C。
[0007] 優(yōu)選的，步驟（1)中所述的粉碎過篩為過40-80目篩。
[0008] 優(yōu)選的，步驟（1)中所述的水選純化水或去離子水中的一種。
[0009] 優(yōu)選的，步驟（2)中所述的溶劑為PH為3-6的稀鹽酸水溶液。
[0010] 優(yōu)選的，步驟（2)中所述的超聲混勻時間均為10_30min，提取時間均為30-60min。
[0011] 優(yōu)選的，步驟（4)與步驟（5)中所述的離心速度為4000-6000r/min，離心時間為 10-20min。
[0012] 優(yōu)選的，步驟（5)中所述的碳酸氫鈉溶液為飽和溶液。
[0013] 本發(fā)明與現有技術相比，有益效果體現在以下幾點： 1.本發(fā)明從牛樟芝提取總三萜類物質采用的方法為分步提取、沉淀、離心及干燥等，操 作簡單、方便，適于實際大規(guī)模操作。
[0014] 2.本發(fā)明所有的過程僅涉及干燥、濃縮及離心等基本操作，對操作設備及操作人 員要求不高，大大節(jié)省了成本。 t〇〇15] 3.本發(fā)明通過多次洗滌、離心及超聲提取，可將牛樟芝中的總三萜類物質充分提 取出，且操作中僅僅使用碳酸氫鈉溶液及稀酸水溶液，無毒副作用，保障了操作者的安全， 也保障了提取物的質量及使用安全。

【具體實施方式】
[0016] 下面結合實施例對本發(fā)明做進一步說明。
[0017] 實施例1 牛樟芝總三萜提取方法，包括以下步驟： (1) 樣品預處理：稱取牛樟芝10g，在60?下烘干至恒重，粉碎過40目篩，加入10倍純 化水溶解，制得待測樣品溶液； (2) 在步驟（1)中的制得的待測樣品溶液溶于PH為3的稀鹽酸水溶液中，并加入活性 炭，微孔濾膜過濾,取濾液備用； (3) 在步驟（2)中制得的樣品濾液中加入乙醚i〇mi超聲混勻]_〇min，提取 3〇min，提取 操作重復2次，加入正丁醇25ml，超聲混勻lOmin，提取3〇min，提取操作重復3次，得樣品粗 提液； (4) 將步驟（3)中制得的樣品粗提液濃縮、離心，離心速度為4〇〇〇r/min，離心時間為 10min、靜置lOmin，將沉淀采用水淋洗2次，過濾得沉淀； (5) 將步驟（4)中制得的沉淀加入5〇ml量瓶中，加入溶劑定容，加入飽和碳酸氫鈉溶液 5ml卒取3次，禹心取沉淀，干燥得樣品總三砲類物質提取物。
[0018] 實施例2 牛樟芝總三萜提取方法，包括以下步驟： (1)樣品預處理：稱取牛樟芝2〇g，在7〇-c下烘干至恒重，粉碎過 8〇目篩，加入2〇倍純 化水或去離子水溶解，制得待測樣品溶液； Z ⑵在步驟（1)中的制得的待測樣品溶液溶于PH為6的稀鹽酸水溶液中，并 炭，微孔濾膜過濾，取濾液備用； li ⑶在步驟⑵中制雛樣品濾液中加入乙醚10-2〇ml超聲混勾3〇min，提取 n 取操作重復2次，加入正丁醇40ml，超聲混勻30min，提取 6〇min，提取操作重復5次，得樣品 粗提液； '' ⑷將步驟⑶巾繼的樣品粗提液濃縮、離心、，離心、髓^6_r/min，離心時間為 20min、靜置20min,將沉淀采用水淋洗4次，過濾得沉淀； (5)將步驟（4)中制得的沉淀加入5〇ml量瓶中，加入溶劑定容，加入飽和碳酸氫鈉溶液 10ml萃取4次，離心取沉淀，干燥得樣品總三萜類物質提取物。
[0019] 實施例3 牛樟芝總三萜提取方法，包括以下步驟： (1) 樣品預處理：稱取牛樟芝15g，在65?下烘干至恒重，粉碎過6〇目篩，加入15倍純 化水或去離子水溶解，制得待測樣品溶液； z (2) 在步驟（1)中的制得的待測樣品溶液溶于PH為5的稀鹽酸水溶液中，并加入活性 炭，微孔濾膜過濾，取濾液備用； b (3)在步驟（2)中制得的樣品濾液中加入乙醚15ml超聲混勻2〇 min，提取45min，提取 操作重復2次，加入正丁醇3〇ml，超聲混勻Ιδπ?η，提取45min，提取操作重復 4次，得樣品粗 提液； (4) 將步驟（3)中制得的樣品粗提液濃縮、離心，離心速度為5〇〇r/min，離心時間為 15min、靜置15min，將沉淀采用水淋洗3次,過濾得沉淀； (5) 將步驟（4)中制得的沉淀加入50ml量瓶中，加入溶劑定容，加入飽和碳酸氫鈉溶液 8ml萃取3次，離心取沉淀，干燥得樣品總三萜類物質提取物。
[0020]上述實施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，并不應理解為對本發(fā)明的限定，本領域 技術人員棚本__示，不顧本發(fā)難喃做出難_修_應該在本發(fā)明的保 護范圍之內。
【權利要求】
1. 一種牛樟芝總三萜提取方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 樣品預處理：稱取牛樟芝l〇-2〇g，烘干至恒重，粉碎過篩，加入10-20倍水溶解，制 得待測樣品溶液； (2) 在步驟（1)中的制得的待測樣品溶液溶于溶劑中，并加入活性炭，微孔濾膜過濾，取 濾液備用； (3) 在步驟（2)中制得的樣品濾液中加入乙醚i〇-2〇ml超聲混勻中，提取，提取操作重 復2次，加入正丁醇 25-40ml，超聲混勻，提取操作重復3-5次，得樣品粗提液； (4) 將步驟（3)中制得的樣品粗提液濃縮、離心、靜置10-2〇mi n，將沉淀采用水淋洗2一4 次，過濾得沉淀； (5) 將步驟（4)中制得的沉淀加入50ml量瓶中，加入溶劑定容，加入碳酸氫鈉溶液 5-10ml萃取3_4次，離心取沉淀，干燥得樣品總三萜類物質提取物。
2. 根據權利要求1所述的一種牛樟芝總三萜提取方法，步驟（1)中所述的烘干過程中 操作溫度為60-70°C。
3·根據權利要求1所述的一種牛樟芝總三萜提取方法，步驟（1)中所述的粉碎過篩為 過40-80目篩。
4. 根據權利要求1所述的一種牛樟芝總三萜提取方法，步驟（丨）中所述的水選純化水 或去離子水中的一種。
5. 根據權利要求1所述的一種牛樟芝總三萜提取方法，步驟（2)中所述的溶劑為pH為 3-6的稀鹽酸水溶液。
6. 根據權利要求1所述的一種牛樟芝總三萜提取方法，步驟（2)中所述的超聲混勻時 間均為10-30min，提取時間均為30-60min。 一 7.根據權利要求1所述的一種牛樟芝總三萜提取方法，步驟（4)與步驟（5)中所述的 離心速度為4000-6000r/min,離心時間為10-20min。
8.棚權利要求1所刪-種牛樟芝總二砲提取力法，步驟（5)巾所述的碳隨鈉溶 液為飽和溶液。
【文檔編號】A61K36/07GK104189021SQ201410471598
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年9月17日 優(yōu)先權日:2014年9月17日
【發(fā)明者】劉巴寧, 鄭安喬 申請人:中山安蕎生物科技有限公司