新型載難溶性藥物果膠鈣納米粒及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種新型載難溶性藥物果膠鈣納米粒及其制備方法。該載藥果膠鈣納米粒包括環(huán)糊精包合物和果膠鈣納米粒兩部分，所述包合物部分包括難溶性藥物和包合材料。該新型載難溶性藥物果膠鈣納米粒不涉及任何有機(jī)溶劑和表面活性劑，制備工藝快捷簡便，生產(chǎn)成本低，易于工業(yè)化生產(chǎn)，可以用于疾病的治療，實(shí)現(xiàn)主動靶向性，具有廣泛的應(yīng)用前景。
【專利說明】新型載難溶性藥物果膠鈣納米粒及其制備方法
【【技術(shù)領(lǐng)域】】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥制劑領(lǐng)域，涉及一種新型載難溶性藥物果膠鈣納米粒及其制備方法。
【【背景技術(shù)】】
[0002]目前的癌癥治療方法雖然在一定程度上對癌癥有療效,但是仍然存在一些無法避免的缺陷，因此，需要尋求具有較好靶向性并具有較高釋放效率的藥物體系。
[0003]納米粒是目前藥物制劑研究中的熱點(diǎn)。其具有的小尺寸效應(yīng)和高比表面可以改善藥物的吸收和控制藥物的釋放，同時(shí)利用載體的屏蔽作用實(shí)現(xiàn)對藥物的保護(hù)。由于尺寸的原因?qū)е缕湓趯?shí)體瘤的ERP效應(yīng)下具有被動靶向性，另外可以通過在納米載體材料上接配體，利用腫瘤細(xì)胞中某些酶和受體的高水平表達(dá)來實(shí)現(xiàn)主動靶向性。
[0004]去唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)是一種跨膜蛋白，主要存在于哺乳動物肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞表面，能專一識別分子末端帶有半乳糖殘基的糖蛋白，并與之結(jié)合，定向轉(zhuǎn)運(yùn)到肝細(xì)胞內(nèi)的溶酶體進(jìn)行代謝，從而增加抗癌藥物的局部濃度。一些研究人員將半乳糖修飾于聚合物納米粒的表面，實(shí)現(xiàn)了肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的靶向給藥。但是，聚合物納米粒的制備過程通常要使用對人體有害的有機(jī)溶劑，即使是殘留的微量有機(jī)溶劑也可能導(dǎo)致持續(xù)的毒副作用。且將半乳糖分子修飾于納米粒表面通常工藝復(fù)雜，成本較高，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0005]近年來，研究人員致力于天然高分子材料納米粒的研究，因其具有良好的生物相容性，無毒，生物可降解性和可調(diào)節(jié)的控制釋放特性。其中，果膠是應(yīng)用最廣泛的天然多糖之一，其帶有大量的半乳糖殘基，而半乳糖可以與ASGPR結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)主動靶向肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的作用。喻翠云等制備了水溶性藥物5-氟尿嘧啶的果膠鈣納米粒。
[0006]果膠作為親水性高分子材料，包裹親水性藥物較易實(shí)現(xiàn)。當(dāng)使用果膠包裹難溶性藥物時(shí)，難溶性藥物由于溶解度限制，不能完全溶解，只能以藥物微粒的形式被包裹。這可能導(dǎo)致所包裹的難溶性藥物不能完全釋放，生物利用度低，且釋藥行為重現(xiàn)性差。
[0007]因此，本發(fā)明采用將難溶性藥物制成環(huán)糊精包合物的方法提高其溶解度，并進(jìn)一步包裹入果膠鈣納米粒，利用果膠分子上的半乳糖殘基實(shí)現(xiàn)對肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的靶向性，為肝癌等疾病的治療提供新的治療方法。
【
【發(fā)明內(nèi)容】
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[0008]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是:提供一種制備條件溫和、簡便易行、不涉及任何有機(jī)溶劑和表面活性劑、可以控制藥物釋放、具有主動靶向作用的載難溶性藥物果膠鈣納米粒體系。
[0009]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
[0010]步驟1，精密稱取一定量的藥物和羥丙基-β-環(huán)糊精置于適量蒸餾水中，于恒溫水浴鍋中攪拌，即得載藥羥丙基_β -環(huán)糊精包合物。
[0011]步驟2，首先，將一定量果膠加入上述包合物溶液中，攪拌；然后，將一定體積Ca (OH) 2溶液緩慢滴入上述溶液中，攪拌；再將一定體積NaHCO3溶液緩慢滴入上述溶液中，攪拌；最后，將溶液迅速放入20°C水中冷卻，即得載和厚樸酚果膠鈣納米粒。
[0012]本發(fā)明先將難溶性藥物制成包合物，再將包合物制成果膠鈣納米粒。在整個制備過程中，避免了使用有機(jī)溶劑和表面活性劑來提高難溶性藥物的溶解度；果膠在含有Ca2+和CO/—的水溶液中，能夠自組裝形成形狀規(guī)整且分散較好的納米粒。該制備方法簡單快速，易于生產(chǎn)，具有廣泛的應(yīng)用前景和巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

【專利附圖】

【附圖說明】
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[0013]圖1為本發(fā)明實(shí)例所制備的載和厚樸酚果膠鈣納米粒的光學(xué)顯微鏡圖(200倍)。
[0014]圖2為本發(fā)明實(shí)例所制備的載和厚樸酚果膠鈣納米粒的粒徑分布圖。
[0015]圖3為本發(fā)明實(shí)例所制備的載和厚樸酚果膠鈣納米粒的差示掃描量熱分析圖。
[0016]圖4為本發(fā)明實(shí)例所制備的載和厚樸酚果膠鈣納米粒的體外釋放圖。
[0017]圖5為本發(fā)明實(shí)例所制備的載和厚樸酚果膠鈣納米粒對不同腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用圖。

【具體實(shí)施方式】
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[0018]以下通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述，但本發(fā)明并不僅限于下述實(shí)施例。
[0019]實(shí)施例:
[0020]1.和厚樸酚羥丙基環(huán)糊精包合物的制備
[0021]精密稱取和厚樸酚和羥丙基-β -環(huán)糊精置于1.67mL蒸餾水中，于50°C恒溫水浴鍋中攪拌0.5h，轉(zhuǎn)速為300r/min。
[0022]2.載和厚樸酚果膠鈣納米粒的制備
[0023]精密稱取0.0330g果膠，將其加入上述包合物溶液中，攪拌0.5h ;取0.33mLCa (OH)2 (0.0ImoI/L)溶液，將其緩慢滴入上述溶液中，攪拌Ih ;取ImL NaHCO3 (0.0ImoI/L)溶液，將其緩慢滴入上述溶液中，攪拌3h ;然后，將溶液迅速放入20°C水中冷卻0.5h，即得載和厚樸酚果膠鈣納米粒。將所得納米粒于光學(xué)顯微鏡下觀察，結(jié)果見圖1。所得納米粒的粒徑分布，見圖2。
[0024]3.差示掃描量熱分析(DSC)
[0025]分別取和厚樸酚原料藥、羥丙基-β -環(huán)糊精、和厚樸酚羥丙基-β -環(huán)糊精包合物、果膠、空白納米粒、和厚樸酚果膠鈣納米粒及物理混合物進(jìn)行DSC分析(見圖3)。結(jié)果顯示:和厚樸酚原料藥、羥丙基環(huán)糊精、和厚樸酚羥丙基環(huán)糊精包合物、果膠及物理混合物分別出現(xiàn)了明顯的峰，但空白納米粒及和厚樸酚果膠鈣納米粒都沒有明顯的峰，這說明和厚樸酚是以另一種形態(tài)包封于果膠鈣納米粒中。
[0026]4.體外釋放
[0027]采用透析袋法，考察所制制劑和厚樸酚果膠鈣納米粒的釋藥特性(見圖4)。結(jié)果顯示，和厚樸酚果膠鈣納米粒與和厚樸酚原料藥及和厚樸酚羥丙基_β -環(huán)糊精包合物的釋藥曲線有明顯的不同。
[0028]5.MTT法檢測載和厚樸酚果膠鈣納米粒對不同腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用
[0029]取對數(shù)生長期的!fepG2肝癌細(xì)胞和A549肺癌細(xì)胞，吸棄培養(yǎng)液，用0.25%胰酶消化5min,再用含血清的培養(yǎng)液終止消化,100rpm離心5min,吸棄上清液,加培養(yǎng)液，制成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度至6X 104/mL,輕輕吹勻后接種于96孔板,每孔100 μ L,置于37°C,5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，分別加入不同濃度的和厚樸酚原料藥、和厚樸酚羥丙基-β -環(huán)糊精包合物及和厚樸酚果膠鈣納米粒的培養(yǎng)液，每孔100 μ L，使藥物終濃度分別為O (對照組)、5、10、20、40、80、160 μ mol/L(給藥組)，每組5個復(fù)孔。繼續(xù)置于37°C>5%CO2的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h后，每孔加入5mg/mL MTT液20 μ L，培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)4h，吸棄上清液，每孔加入150 μ L DMSO,震蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解混勻，用酶標(biāo)儀檢測每孔于波長為570nm處的OD值。按下列公式計(jì)算每組濃度抑制率(見圖5)。
[0030]
抑制率％ =(對照組給藥f如值)

對照組OD值
[0031]結(jié)果顯示，和厚樸酚果膠鈣納米粒對!fepG2細(xì)胞的增殖具有明顯抑制作用，且呈劑量依賴性，作用較和厚樸酚原料藥、和厚樸酚羥丙基-β -環(huán)糊精包合物明顯增強(qiáng)。
【權(quán)利要求】
1.一種新型載難溶性藥物果膠鈣納米粒，其特征在于:該納米粒包括包合物和果膠鈣納米粒兩部分，所述包合物部分包含難溶性藥物和包合材料。
2.如權(quán)利要求1所述的新型載難溶性藥物果膠鈣納米粒，其特征在于:所述的難溶性藥物包括但不限于和厚樸酚及其它難溶性藥物。
3.如權(quán)利要求1所述的新型載難溶性藥物果膠鈣納米粒，其特征在于:所述的包合材料包括但不限于羥丙基-β -環(huán)糊精，β -環(huán)糊精，磺丁基醚-β -環(huán)糊精。
4.如權(quán)利要求1所述的新型載難溶性藥物果膠鈣納米粒，其特征在于:所述的果膠鈣納米粒是由果膠、Ca(OH)2溶液和NaHCO3溶液形成的。
5.一種新型載難溶性藥物果膠鈣納米粒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: 步驟(a):采用溶液攪拌法制備載藥環(huán)糊精包合物； 步驟(b):將果膠加入步驟(a)中，攪拌； 步驟(C):將Ca(OH)2溶液緩慢滴入步驟(b)所得溶液中，攪拌； 步驟(d):將NaHCO3溶液緩慢滴入步驟(C)所得溶液中，攪拌； 步驟(e):將步驟(d)所得溶液迅速放入20°C水中冷卻，即得載藥果膠鈣納米粒。
6.如權(quán)利要求1所述的新型載難溶性藥物果膠鈣納米粒，其特征在于:所述的難溶性藥物被制成包合物，再將包合物包裹于果膠鈣納米粒中。
【文檔編號】A61P35/00GK104173292SQ201410453899
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年9月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月9日
【發(fā)明者】張良珂, 張玉霞, 賈運(yùn)濤 申請人:重慶醫(yī)科大學(xué)