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一種知母總皂苷的提取方法

文檔序號(hào):759234閱讀:473來(lái)源:國(guó)知局
一種知母總皂苷的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種知母總皂苷的提取方法。方法步驟如下:1)將知母烘干,粉碎;2)稱取一定量的知母粉末加水浸潤(rùn),然后加入知母粉末重量0.5%-3%的生物酶試劑進(jìn)行酶解處理;3)酶解完成后,加入乙醇水溶液回流提取,得到提取液;4)將提取液過(guò)濾,濾渣重復(fù)提取,合并提取液,減壓濃縮,得到知母總皂苷濃縮液;5)將濃縮液上大孔吸附樹(shù)脂柱洗脫,收集乙醇洗脫液減壓濃縮,干燥,即得知母總皂苷。采用本發(fā)明制備知母總皂苷,工藝操作簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低、所得產(chǎn)品純度高、易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說(shuō)明】一種知母總皂苷的提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】,涉及一種生物酶解技術(shù)與大孔吸附樹(shù)脂相結(jié)合的方法提取、純化知母總皂苷。

【背景技術(shù)】
[0002]知母,中藥名,屬清熱下火藥。主治:溫?zé)岵?、高熱煩渴、咳嗽氣喘、燥咳、便秘、骨蒸潮熱、虛煩不眠、消渴淋濁。知母也叫毛知母,在我?guó)各地都有栽培,它有很強(qiáng)的抗旱抗寒能力,屬多年生草本植物,在干旱少雨的荒山、荒漠、荒地中都能生長(zhǎng),是綠化山區(qū)和荒原的首選品種,它在全年各個(gè)季節(jié)都能播種,但主要以春播或夏播。知母為常用中藥材,被社會(huì)廣泛使用。家種知母主產(chǎn)河北省安國(guó)市、安徽省亳州市,形成了全國(guó)知名的兩個(gè)種植基地。野生毛知母主產(chǎn)地河北張北、易縣、赤城、來(lái)源、阜平;山西榆社、五臺(tái)、代縣、壽陽(yáng);內(nèi)蒙古扎魯特旗、西烏珠穆、東臺(tái)珠穆、林西、科爾左中旗、阿榮旗;遼寧鐵嶺、阜新等地亦有分布。
[0003]現(xiàn)代研究證明,知母根莖中含總皂甙約6%,其中有知母皂甙(Timosaponin)A- 1、A-11、A-1I1、A-1V,B-1和B-1I。其中知母阜式A-1是薩爾薩阜式兀β -D-卩比喃半乳糖式,知母阜式A-1II是薩爾薩阜式元與知母雙糖(Timob1se)結(jié)合而成的雙糖式。知母根莖中的阜式元有薩爾薩阜式元(Sarsasapogenin)、嗎爾考阜式元(Markogenin)、新菱脫阜式元(Neogitogenin)。以前從知母中分離出來(lái)的阜式知母寧(Asphonin)是嗎爾考阜式、知母阜式A-1I1、A-1V、B等的混合物.亦分離出異菝葜阜式元(Smilagenin)等阜式類成分。尚含有黃酮類的芒果式(Mangiferin, Ch1- monin),異芒果式(Isomangiferin);生物堿類的膽堿(Choline),尼克酰胺(Nicotinamide);有機(jī)酸類的鞋酸(Tannic acid),煙酸(Nicotinic acid)以及四種知母多糖(Anemarn A, B, C, D)。另外尚含鐵、鋅、猛、銅、鉻、鎳等多種金屬元素以及黏液質(zhì)、還原糖等??梢杂糜跍夭。霸跉夥?,高熱、煩渴的氣分實(shí)熱證,有瀉火除煩的作用,與石膏、竹葉配伍有協(xié)同之效;用于治療肺熱咳嗽或陰虛燥咳,有清泄肺火,滋陰潤(rùn)肺之效。常與貝母同用以增強(qiáng)清肺潤(rùn)燥之功,如《醫(yī)方集解》二母散;用于陰虛火旺,骨蒸潮熱,盜汗者,有滋陰降火的作用,常與黃柏相須為用;既能清泄肺胃之火,又能滋養(yǎng)肺腎之陰,故宜用于陰虛消渴,癥見(jiàn)口渴、飲多、尿多者,同山藥、五味子等配合使用可增強(qiáng)療效,如玉液湯。
[0004]皂苷(saponin)別稱:堿皂體、皂素、皂甙、皂角苷或皂草苷?!霸碥铡币辉~由英文名Saponin意譯而來(lái),英文名則源于拉丁語(yǔ)的Sapo,意為肥阜。阜苷(Saponin)是苷元為三萜或螺旋留烷類化合物的一類糖苷,主要分布于陸地高等植物中,也少量存在于海星和海參等海洋生物中。許多中草藥如人參、遠(yuǎn)志、桔梗、甘草、知母和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷。有些皂苷還具有抗菌的活性或解熱、鎮(zhèn)靜、抗癌等有價(jià)值的生物活性。
[0005]目前,在我國(guó)有關(guān)提取知母總皂苷的工藝文獻(xiàn)和專利都很少見(jiàn)到。本發(fā)明采用生物酶解技術(shù)與大孔吸附樹(shù)脂相結(jié)合的方法提取、純化知母總皂苷。該發(fā)明操作過(guò)程簡(jiǎn)單,提取率高,對(duì)環(huán)境污染小,成本消耗低,易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是為了填補(bǔ)從知母中提取總皂苷工藝的空白,提供一種操作簡(jiǎn)單、提取效率高、污染小的知母總皂苷的提取方法。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
1)將知母烘干,粉碎;
2)稱取一定量的知母粉末加水浸潤(rùn),然后加入知母粉末重量0.5%-3%的生物酶試劑進(jìn)行酶解處理,收集酶解原料;
3)然后加入乙醇水溶液回流提取,得到提取液;
4)將提取液過(guò)濾,濾渣重復(fù)提取2-3次,合并提取液,減壓濃縮至原體積的1/4-1/2,得到知母總皂苷濃縮液;
5)將濃縮液上大孔吸附樹(shù)脂柱洗脫,收集乙醇洗脫液減壓濃縮,干燥,即得知母總皂苷。
[0008]步驟2)中所述的粉末大小為40-60目,粉末與水的質(zhì)量體積比為1:0.5-1倍,浸泡時(shí)間為30-60分鐘。
[0009]步驟2)中所述的生物酶為纖維素酶、淀粉酶、半纖維素酶和果膠酶中的一種,酶解時(shí)的溫度設(shè)定在30-45°C,酶解時(shí)間為2-4小時(shí)。
[0010]步驟3)中所述的乙醇水溶液濃度為50%_70%,體積為粉末重量的3-6倍。
[0011]步驟5)中所述的大孔吸附樹(shù)脂為 X-5、AB-8、NK-2、NKA-2、NK-9、D3520、D101、WLD中的一種。
[0012]步驟5)中所述洗脫過(guò)程為先用2?4倍柱體積水洗去糖分,然后用2飛倍柱體積、10°/Γ20%乙醇洗去部分雜質(zhì),最后用2飛倍柱體積乙醇洗脫,收集乙醇洗脫液。
采用本方法生產(chǎn)知母總皂苷,利用生物酶解技術(shù)與大孔吸附樹(shù)脂相結(jié)合的方法,充分破壞細(xì)胞壁,增加和加快了活性成分的流出,通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱純化過(guò)程,不僅大大提高了知母總皂苷的純度,而且大孔吸附樹(shù)脂可以回收再利用,從而降低了生產(chǎn)成本。該工藝簡(jiǎn)便易操作、提取效率高、污染小、所得產(chǎn)品純度高、易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
[0013]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明,但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
[0014]【具體實(shí)施方式】:
實(shí)施例1:
取新鮮的知母烘干、粉碎,過(guò)40目篩。稱取知母粉末50克放入提取器中,加入25毫升的水浸泡30分鐘,然后加入0.25克的果膠酶試劑,在溫度為30°C的條件下酶解2分鐘,收集酶解原料,然后加入250毫升60%的乙醇水溶液回流提取,濾渣提取2次,合并3次濾液,減壓濃縮至原體積的1/4,得到知母總皂苷濃縮液。將知母總皂苷的濃縮液倒入X-5大孔吸附樹(shù)脂柱中,先用2倍柱體積水洗去糖分,然后用2倍柱體積、10%乙醇洗去部分雜質(zhì),最后用2倍柱體積乙醇洗脫,收集乙醇洗脫液減壓濃縮,干燥,即得總皂苷。經(jīng)檢測(cè)總皂苷的含量為89.53%,總皂苷的提取率為59.5%。
[0015]實(shí)施例2:
取新鮮的知母烘干、粉碎,過(guò)60目篩。稱取知母粉末50克放入提取器中,加入30毫升的水浸泡40分鐘,然后加入I克的果膠酶,在溫度為40°C的條件下酶解3分鐘,收集酶解原料,然后加入250毫升60%的乙醇水溶液回流提取,濾渣提取2次,合并3次濾液,減壓濃縮至原體積的1/3,得到知母總皂苷濃縮液。將知母總皂苷的濃縮液倒入D3520大孔吸附樹(shù)脂柱中,先用3倍柱體積水洗去糖分,然后用4倍柱體積、15%乙醇洗去部分雜質(zhì),最后用4倍柱體積乙醇洗脫,收集乙醇洗脫液減壓濃縮,干燥,即得總皂苷。經(jīng)檢測(cè)總皂苷的含量為90.13%,總皂苷的提取率為60.52%。
[0016] 實(shí)施例3:
取新鮮的知母烘干、粉碎,過(guò)60目篩。稱取知母粉末50克放入提取器中,加入50毫升的水浸泡60分鐘,然后加入1.5g克的生物酶試劑,在溫度為45°C的條件下酶解4分鐘,收集酶解原料,然后加入250毫升60%的乙醇水溶液回流提取,濾渣提取3次,合并4次濾液,減壓濃縮至原體積的1/2,得到知母總皂苷濃縮液。將知母總皂苷的濃縮液倒入AB-8大孔吸附樹(shù)脂柱中,先用4倍柱體積水洗去糖分,然后用5倍柱體積、20%乙醇洗去部分雜質(zhì),最后用5倍柱體積乙醇洗脫,收集乙醇洗脫液減壓濃縮,干燥,即得總皂苷。經(jīng)檢測(cè)總皂苷的含量為91.55%,總皂苷的提取率為61.45%。
【權(quán)利要求】
1.一種知母總皂苷的提取方法,其特征在于以下步驟: 1)將知母烘干,粉碎; 2)稱取一定量的知母粉末加水浸潤(rùn),然后加入知母粉末重量0.5%-3%的生物酶試劑進(jìn)行酶解處理,收集酶解原料; 3)然后加入乙醇水溶液回流提取,得到提取液; 4)將提取液過(guò)濾,濾渣重復(fù)提取2-3次,合并提取液,減壓濃縮至原體積的1/4-1/2,得到知母總皂苷濃縮液; 5)將濃縮液上大孔吸附樹(shù)脂柱洗脫,收集乙醇洗脫液減壓濃縮,干燥,即得知母總皂苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的知母總皂苷的提取方法,其特征在于:步驟2)中所述的粉末大小為40-60目,粉末與水的質(zhì)量體積比為1:0.5-1倍,浸泡時(shí)間為30-60分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的知母總皂苷的提取方法,其特征在于:步驟2)中所述的生物酶為纖維素酶、淀粉酶、半纖維素酶和果膠酶中的一種,酶解時(shí)的溫度設(shè)定在30-45°C,酶解時(shí)間為2-4小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的知母總皂苷的提取方法,其特征在于:步驟3)中所述的乙醇水溶液濃度為50%-70%,體積為粉末重量的3-6倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的知母總皂苷的提取方法,其特征在于:步驟5)中所述的大孔吸附樹(shù)脂為 X-5、AB-8、NK-2、NKA-2、NK-9、D3520、D101、WLD 中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的知母總皂苷的提取方法,其特征在于:步驟5)中所述洗脫過(guò)程為先用2?4倍柱體積水洗去糖分,然后用2飛倍柱體積、109Γ20%乙醇洗去部分雜質(zhì),最后用2飛倍柱體積乙醇洗脫,收集乙醇洗脫液。
【文檔編號(hào)】A61K36/8964GK104173700SQ201410450515
【公開(kāi)日】2014年12月3日 申請(qǐng)日期:2014年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月5日
【發(fā)明者】蘇劉花, 楊存 申請(qǐng)人:南京澤朗生物科技有限公司
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