一種實現(xiàn)診療一體化的納米膠束及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種納米膠束，其包括AIE染料、藥物活性成分及雙親性載體，所述AIE染料、藥物活性成分及雙親性載體的質量比為1∶1∶5-10。同時還公開了其制備方法和在制備腫瘤診斷和/或治療劑中的應用。所述納米膠束可實現(xiàn)診療一體化，用于體內非侵入性熒光成像和診斷及疾病治療，可以充分地利用腫瘤的EPR效應，很好地聚集在腫瘤部位，實現(xiàn)其載帶藥物活性成分在腫瘤部位的富集，起到高效治療腫瘤的作用；而且，AIE紅光染料發(fā)光效率高，不容易淬滅，能夠很好的反映藥物活性成分在體內的輸送和生物分布情況，并且能夠用于腫瘤的診斷。
【專利說明】一種實現(xiàn)診療一體化的納米膠束及其制備方法和應用

【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物活性成分化學領域，涉及一種納米膠束及其制備方法和應用，具體涉及一種包含聚集誘導發(fā)光的紅光熒光染料、藥物活性成分和載體的實現(xiàn)診療一體化的納米膠束及其制備方法和應用

【背景技術】
[0002]腫瘤治療和診斷一直是一個很熱門的研究方向，目前已經有很多研究小組報道了對腫瘤非侵入性診療的體系?；铙w生物發(fā)光成像是最常用的診斷方法之一，它能使研究人員直接快速的測量各種腫瘤模型中腫瘤的生長、轉移以及對藥物活性成分的反應。活體生物發(fā)光成像的特點是極高的靈敏度，能夠用于微小的腫瘤病灶(少到幾百個細胞)的檢測，比傳統(tǒng)方法的靈敏度有了大大的提高；它非常適合于腫瘤體內生長的定量分析，避免由宰殺模型動物而造成的個體差異。正是基于以上優(yōu)點，活體成像技術已成為本領域應用最廣的診斷手段。
[0003]基于長波長發(fā)光的診療一體化是目前研究的熱點，因為只有長波長的熒光物質才能穿透組織，在熒光系統(tǒng)上成像形貌。但是傳統(tǒng)的熒光染料分子之間容易發(fā)生自淬滅現(xiàn)象，這是由于熒光分子之間聚集以后發(fā)生了熒光共振能量轉移，或是發(fā)生反應產生了不利于它們發(fā)光的物質。并且這種自淬滅現(xiàn)象在熒光染料與藥物活性成分聯(lián)用以后會被進一步放大，這樣非常不利于診療一體化藥物活性成分的發(fā)展。
[0004]本發(fā)明中公布的染料是一種紅色突光的聚集誘導發(fā)光(Aggregat1n-1nducedEmiss1n, AIE)染料，它的發(fā)光機理恰恰卻是聚集后能夠產生很強的熒光。這種染料的出現(xiàn)克服了聚集自淬滅的缺點，負載于納米藥物活性成分載體之后反而比在有機溶劑中發(fā)光效率高，能夠很好的反映納米藥物活性成分在體內的輸送和生物分布情況。
[0005]正常組織中的微血管內皮間隙致密、結構完整，大分子和脂質顆粒不易透過血管壁，而實體瘤組織中血管豐富、血管壁間隙較寬、結構完整性差，淋巴回流缺失，造成實體瘤對大分子類物質和脂質顆粒具有選擇性高通透性和滯留性，這種現(xiàn)象被稱作實體瘤組織的高通透性和滯留效應，簡稱EPR效應。由此可見，本領域可利用腫瘤的EPR效應，使AIE染料和/或抗藥物活性成分被動富集在腫瘤部位，實現(xiàn)診療一體化。


【發(fā)明內容】

[0006]本發(fā)明的目的之一在于提供一種診療一體化的納米膠束，它克服了傳統(tǒng)染料發(fā)光效率低、聚集容易淬滅的缺點；而且其納米粒徑尺寸可以利用腫瘤的EPR效應，在腫瘤位置有很好的富集作用。
[0007]為達此目的，本發(fā)明采用以下技術方案:
[0008]一種納米膠束，其包括AIE染料、藥物活性成分及雙親性載體，所述AIE染料、藥物活性成分及雙親性載體的質量比為1:1:5-10，例如1:1:5、1:1:6、1:1:7、1:1:8、1:1:8或1:1:10。
[0009]其中所述AIE染料為紅熒光AIE染料，AIE紅光染料發(fā)光效率高，不容易淬滅，能夠很好的反映藥物活性成分在體內的輸送和生物分布情況；所藥物活性成分為疏水性抗腫瘤藥物活性成分，可為醫(yī)藥領域人員所熟知的各種疏水性抗腫瘤藥物活性成分，優(yōu)選地，所述藥物活性成分為阿霉素、姜黃素、紫杉醇、柔紅霉素和多西他賽中的一種或至少兩種的混合物，其中，疏水性阿霉素是指將市售的鹽酸阿霉素中和后得到的阿霉素，疏水性阿霉素也可以通過商購得到；所述雙親性載體為 PLGA-PEG、PGA-PEG, PCL-PEG, DSPE-PEG, DSPE-PEG-FA或蛋黃卵磷脂中的一種或至少兩種的混合物。
[0010]本發(fā)明另一目的在于提供本發(fā)明所述納米膠束的制備方法。所述納米膠束可通過兩類方法進行制備，所述第一種方法包括以下步驟:
[0011]I)將所述AIE熒光染料與藥物活性成分以及雙親性的載體按配比在有機溶劑中混合均勻，得到溶液；
[0012]2)干燥去除步驟I)中所得溶液的有機溶劑，所得的干燥物料與水性溶劑接觸水化，制得所述納米膠束。
[0013]其中所述干燥除去有機溶劑的方法為溶劑揮發(fā)法、乳化法、旋轉蒸發(fā)成膜法、噴霧干燥、磁攪揮發(fā)、透析法或凍干法中的一種或至少兩種的組合；例如可以參照《藥劑學》(人民衛(wèi)生出版社，2007年出版)中公開的采用真空旋轉蒸發(fā)成膜法來除去溶劑。
[0014]所述水化可以是水浴、超聲、震蕩和振搖中的一種或至少兩種的組合。優(yōu)選60°C水浴加熱水化。
[0015]在一個本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，所述干燥除去有機溶劑的溫度為20_60°C，例如20°C、25°C、30°C、35°C、40°C，優(yōu)選 20-40 V，干燥時間為 0.05-12 小時，例如 0.005 小時、0.1小時、I小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時，優(yōu)選I小時。
[0016]第二種所述的納米膠束的制備方法包括以下步驟:
[0017]I)將所述AIE熒光染料與藥物活性成分以及雙親性的載體按配比在有機溶劑中混合均勻，得到溶液；
[0018]2)使用水性溶劑通過反溶劑法或微乳液法等方法直接除去有機溶劑，得到所需納米膠束。
[0019]對于所述的兩種納米膠束的制備方法，所述AIE染料、藥物活性成分及雙親性載體在PH值為4.5-9.0的有機溶劑中混合，進一步優(yōu)選6.5-7.5 ;所述AIE染料、藥物活性成分及雙親性載體的總質量與有機溶劑質量的比值為1:1200-1500 ;所述水性溶劑的用量也沒有特別的限制，只要可將其組分轉變?yōu)榧{米膠束即可，優(yōu)選地，相對于每12mg AIE染料、藥物活性成分及雙親性載體的干重量，所述水性溶劑加入量為l_2mL。
[0020]所述有機溶劑為極性較大的有機溶劑中的任意一種或至少兩種的混合物，優(yōu)選氯仿、乙腈、二氯甲烷、乙醇或甲醇中的一種或至少兩種的混合物；所述水性溶劑為水或緩沖液，其中所述水為經過三次蒸餾的超純水，所述緩沖液位生理鹽水、葡萄糖水溶液、磷酸鹽緩沖，具體為為本領域技術人員所熟知的能用于藥物活性成分組合物的各種緩沖液，例如，PH7.3-7.5的磷酸鹽(PBS)緩沖液，HEPES緩沖液或和生理鹽水。優(yōu)選為pH值為7.3-7.5的磷酸鹽緩沖液。其中，pH值為7.3-7.5的磷酸鹽緩沖液為含有7.5-8.5g/L的氯化鈉、
0.15-0.25g/L的氯化鉀、2.8-3.0g/L的磷酸氫二鈉和0.15-0.25g/L的磷酸二氫鉀的水溶液。所述水性溶劑的用量也沒有特別的限制，只要可將其組分轉變?yōu)榧{米膠束即可，優(yōu)選地，相對于每12mg AIE染料、藥物活性成分及雙親性載體的干重量之和，所述水性溶劑加入量為l_2mL。
[0021]任選地，為防止所得的納米膠束里面有游離藥物活性成分，該方法還包括將納米膠束中的疏水性藥物活性成分進行分離的步驟。所述分離的方法為領域技術人員所公知，例如，可以使用0.22 μ m的無菌濾膜進行過濾或者用截留分子量為3000Da的超濾管在離心機中用12000轉/分鐘離心30分鐘。
[0022]通過動態(tài)光散射法(納米材料學，哈爾濱工程大學出版社，2002年版)測定的數(shù)值，本發(fā)明的納米膠束的粒徑為100-120nm。
[0023]通過更加直觀精確的透射電子顯微鏡檢測，本發(fā)明的納米膠束粒徑為30_50nm。
[0024]本發(fā)明的目的之一還在于提供所述的納米膠束在制備腫瘤診斷和/或治療劑中的應用。本發(fā)明采用納米技術制作出了一種高分子納米膠束，它的粒徑尺寸在30-50nm之間，能夠很好地利用腫瘤的EPR效應，并富集在腫瘤部位，對于腫瘤的診斷和治療都能有非常好的效果。
[0025]本發(fā)明提供的診療一體化納米膠束由于粒徑在30_50nm之間，可以充分的利用腫瘤的EPR效應，良好地聚集在腫瘤部位，實現(xiàn)其載帶藥物活性成分在腫瘤部位的富集，起到高效治療腫瘤的作用；而且，AIE紅光染料發(fā)光效率高，不容易淬滅，能夠很好的反映藥物活性成分在體內的輸送和生物分布情況，并且能夠用于腫瘤的診斷，同時與藥物活性成分脂質體相比不降低藥效，從而實現(xiàn)診療一體化，同時利用納米之間被動靶向的特點，可以減輕所裝載藥物活性成分對人體的傷害。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0026]圖1為本發(fā)明所述納米膠束的動態(tài)光散射圖。
[0027]圖2為本發(fā)明所述納米膠束的透射電子顯微鏡圖。
[0028]圖3為本發(fā)明所述納米膠束用于小動物活體成像圖。
[0029]圖4為本發(fā)明所述納米膠束在的腫瘤抑制作用效果圖。

【具體實施方式】
[0030]以下結合附圖對本發(fā)明的【具體實施方式】進行詳細說明。應當理解，此處所描述的【具體實施方式】僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0031]實施例1
[0032]本發(fā)明所述納米膠束的制備
[0033](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取1mg包裹材料將其溶于2mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為50mL的茄型燒瓶中，用2mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取ImL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加3mL氯仿，搖勻。
[0034](2)將步驟⑴中的混合溶液參照藥劑學(人民衛(wèi)生出版社，2007年出版)中公開的方法進行真空旋轉蒸發(fā)得到12mg干燥后的物料。
[0035](3)向步驟(2)中含有干燥后的物料的茄型燒瓶中加入2mL的三蒸水，放在超聲機中超聲分散，時間為2分鐘，溫度控制在20-40°C。超聲結束后將溶液靜置I小時，最后將得到的溶液濾過0.22 μ m的無菌濾膜，除去游離的阿霉素，得到所需納米膠束。
[0036]實施例2
[0037]本發(fā)明所述納米膠束可通過以下方法制備
[0038](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取20mg包裹材料將其溶于3mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為10mL的茄型燒瓶中，用5mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取2mL的AIE溶液和4mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加6mL氯仿，搖勻。
[0039](2)將步驟⑴中的混合溶液參照藥劑學(人民衛(wèi)生出版社，2007年出版)中公開的方法進行真空旋轉蒸發(fā)得到24mg干燥后的物料。
[0040](3)向步驟(2)中含有干燥后的物料的茄型燒瓶中加入2mL的三蒸水，放在超聲機中超聲分散，時間為2分鐘，溫度控制在20-40°C。超聲結束后將溶液靜置I小時，最后將得到的溶液濾過0.22 μ m的無菌濾膜，除去游離的阿霉素，得到所需納米膠束。
[0041]實施例3
[0042]本發(fā)明所述納米膠束可通過以下方法制備
[0043](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取1mg包裹材料將其溶于2mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為50mL的茄型燒瓶中，用2mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取ImL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加3mL氯仿，搖勻。
[0044](2)將步驟(I)中的混合溶液參照藥劑學(人民衛(wèi)生出版社，2007年出版)中公開的方法進行真空旋轉蒸發(fā)得到12mg干燥后的物料。
[0045](3)向步驟(2)中含有干燥后的物料的茄型燒瓶中加入2mL的生理鹽水，放在超聲機中超聲分散，時間為2分鐘，溫度控制在20-40°C。超聲結束后將溶液靜置I小時，最后將得到的溶液濾過0.22 μ m的無菌濾膜，除去游離的阿霉素，得到所需納米膠束。
[0046]實施例4
[0047]本發(fā)明所述納米膠束可通過以下方法制備
[0048](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取20mg包裹材料將其溶于3mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為10mL的茄型燒瓶中，用5mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取2mL的AIE溶液和4mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加3mL氯仿，搖勻。
[0049](2)將步驟(I)中的混合溶液參照藥劑學(人民衛(wèi)生出版社，2007年出版)中公開的方法進行真空旋轉蒸發(fā)得到24mg干燥后的物料。
[0050](3)向步驟⑵中含有干燥后的物料的茄型燒瓶中加入2mL的生理鹽水，放在超聲機中超聲分散，時間為2分鐘，溫度控制在20-40°C。超聲結束后將溶液靜置I小時，最后將得到的溶液濾過0.22 μ m的無菌濾膜，除去游離的阿霉素，得到所需納米膠束。
[0051]實施例5
[0052]本發(fā)明所述納米膠束可通過以下方法制備本
[0053](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取1mg包裹材料將其溶于2mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為50mL的茄型燒瓶中，用2mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取ImL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加3mL氯仿，搖勻。
[0054](2)將步驟⑴中的混合溶液參照藥劑學(人民衛(wèi)生出版社，2007年出版)中公開的方法進行真空旋轉蒸發(fā)得到12mg干燥后的物料。
[0055](3)向步驟(2)中含有干燥后的物料的茄型燒瓶中加入2mL的三蒸水，放在60°C熱水中水浴加熱30min,期間每隔1min需振搖lmin。水浴結束后將溶液靜置I小時，最后將得到的溶液濾過0.22 μ m的無菌濾膜，除去游離的阿霉素，得到所需納米膠束。
[0056]實施例6
[0057]本發(fā)明所述納米膠束可通過以下方法制備
[0058](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取1mg包裹材料將其溶于2mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為50mL的茄型燒瓶中，用2mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取ImL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加3mL氯仿，搖勻。
[0059](2)將步驟⑴中的混合溶液參照藥劑學(人民衛(wèi)生出版社，2007年出版)中公開的方法進行真空旋轉蒸發(fā)得到12mg干燥后的物料。
[0060](3)向步驟(2)中含有干燥后的物料的茄型燒瓶中加入2mL的生理鹽水，放在60°C熱水中水浴加熱30min，期間每隔1min需振搖lmin。水浴結束后將溶液靜置I小時，最后將得到的溶液濾過0.22 μ m的無菌濾膜，除去游離的阿霉素，得到所需納米膠束。
[0061]實施例7
[0062]本發(fā)明所述納米膠束可通過以下方法制備
[0063](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取20mg包裹材料將其溶于3mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為10mL的茄型燒瓶中，用5mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取2mL的AIE溶液和4mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加3mL氯仿，搖勻。
[0064](2)將步驟⑴中的混合溶液參照藥劑學(人民衛(wèi)生出版社，2007年出版)中公開的方法進行真空旋轉蒸發(fā)得到24mg干燥后的物料。
[0065](3)向步驟⑵中含有干燥后的物料的茄型燒瓶中加入2mL的生理鹽水，放在60°C熱水中水浴加熱30min，期間每隔1min需振搖lmin。水浴結束后將溶液靜置I小時，最后將得到的溶液濾過0.22 μ m的無菌濾膜，除去游離的阿霉素，得到所需納米膠束。
[0066]實施例8
[0067]本發(fā)明所述納米膠束可通過以下方法制備
[0068](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取1mg包裹材料將其溶于2mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為50mL的茄型燒瓶中，用2mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取ImL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加3mL氯仿，搖勻。
[0069](2)向步驟(I)中的混合溶液中加入2mL的三蒸水，然后超聲直至混合溶液成為均一的乳狀液體為止。
[0070](3)向裝有步驟⑵中的乳狀液體的茄型燒瓶中放入一枚磁攪拌子，然后攪拌直至乳狀液變成澄清透亮的溶液為止。然后靜置I小時，最后將得到的溶液濾過0.22 μ m的無菌濾膜，除去游離的阿霉素，得到所需納米膠束。
[0071]實施例9
[0072]本發(fā)明所述納米膠束可通過以下方法制備
[0073](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取1mg包裹材料將其溶于2mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為50mL的茄型燒瓶中，用2mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取ImL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加3mL氯仿，搖勻。
[0074](2)向步驟(I)中的混合溶液中加入2mL的生理鹽水，然后超聲直至混合溶液成為均一的乳狀液體為止。
[0075](3)向裝有步驟(2)中的乳狀液體的茄型燒瓶中放入一枚磁攪拌子，然后攪拌直至乳狀液變成澄清透亮的溶液為止。然后靜置I小時，最后將得到的溶液濾過0.22 μ m的無菌濾膜，除去游離的阿霉素，得到所需納米膠束。
[0076]實施例10
[0077]本發(fā)明所述納米膠束可通過以下方法制備
[0078](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取1mg包裹材料將其溶于2mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為50mL的茄型燒瓶中，用2mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取ImL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加3mL氯仿，搖勻。
[0079](2)將步驟(I)中的混合溶液參照藥劑學(人民衛(wèi)生出版社，2007年出版)中公開的方法進行真空旋轉蒸發(fā)得到12mg干燥后的物料。
[0080](3)向步驟(2)中含有干燥后的物料的茄型燒瓶中加入2mL的生理鹽水，放在60°C熱水中水浴加熱30min，期間每隔1min需振搖lmin。水浴結束后將溶液靜置I小時。然后將靜置后的納米膠束轉移到3000Da的超濾管中，設定12000rpm/min，離心30min后取超濾管上部的溶液即為所需納米膠束。
[0081]實施例11
[0082]本發(fā)明所述納米膠束可通過以下方法制備
[0083](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取5mg包裹材料將其溶于2mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為50mL的茄型燒瓶中，用2mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取ImL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加3mL氯仿，搖勻。
[0084](2)將步驟⑴中的混合溶液參照藥劑學(人民衛(wèi)生出版社，2007年出版)中公開的方法進行真空旋轉蒸發(fā)得到7mg干燥后的物料。
[0085](3)向步驟(2)中含有干燥后的物料的茄型燒瓶中加入2mL的三蒸水，放在超聲機中超聲分散，時間為2分鐘，溫度控制在20-40°C。超聲結束后將溶液靜置I小時，最后將得到的溶液濾過0.22 μ m的無菌濾膜，除去游離的阿霉素，得到所需納米膠束。
[0086]實施例12
[0087]本發(fā)明所述納米膠束可通過以下方法制備
[0088](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取1mg包裹材料將其溶于3mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為10mL的茄型燒瓶中，用5mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取2mL的AIE溶液和4mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加6mL氯仿，搖勻。
[0089](2)將步驟⑴中的混合溶液參照藥劑學(人民衛(wèi)生出版社，2007年出版)中公開的方法進行真空旋轉蒸發(fā)得到14mg干燥后的物料。
[0090](3)向步驟⑵中含有干燥后的物料的茄型燒瓶中加入2mL的三蒸水，放在超聲機中超聲分散，時間為2分鐘，溫度控制在20-40°C。超聲結束后將溶液靜置I小時，最后將得到的溶液濾過0.22 μ m的無菌濾膜，除去游離的阿霉素，得到所需納米膠束。
[0091]實施例13
[0092]本發(fā)明所述納米膠束可通過以下方法制備
[0093](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取5mg包裹材料將其溶于2mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為50mL的茄型燒瓶中，用2mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取ImL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加3mL氯仿，搖勻。
[0094](2)將步驟⑴中的混合溶液參照藥劑學(人民衛(wèi)生出版社，2007年出版)中公開的方法進行真空旋轉蒸發(fā)得到7mg干燥后的物料。
[0095](3)向步驟(2)中含有干燥后的物料的茄型燒瓶中加入2mL的生理鹽水，放在超聲機中超聲分散，時間為2分鐘，溫度控制在20-40°C。超聲結束后將溶液靜置I小時，最后將得到的溶液濾過0.22 μ m的無菌濾膜，除去游離的阿霉素，得到所需納米膠束。
[0096]實施例14
[0097]本發(fā)明所述納米膠束可通過以下方法制備
[0098](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取1mg包裹材料將其溶于3mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為10mL的茄型燒瓶中，用5mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取2mL的AIE溶液和4mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加3mL氯仿，搖勻。
[0099](2)將步驟⑴中的混合溶液參照藥劑學(人民衛(wèi)生出版社，2007年出版)中公開的方法進行真空旋轉蒸發(fā)得到14mg干燥后的物料。
[0100](3)向步驟(2)中含有干燥后的物料的茄型燒瓶中加入2mL的生理鹽水，放在超聲機中超聲分散，時間為2分鐘，溫度控制在20-40°C。超聲結束后將溶液靜置I小時，最后將得到的溶液濾過0.22 μ m的無菌濾膜，除去游離的阿霉素，得到所需納米膠束。
[0101]實施例15
[0102]本發(fā)明所述納米膠束可通過以下方法制備
[0103](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取5mg包裹材料將其溶于2mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為50mL的茄型燒瓶中，用2mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取ImL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加3mL氯仿，搖勻。
[0104](2)將步驟(I)中的混合溶液參照藥劑學(人民衛(wèi)生出版社，2007年出版)中公開的方法進行真空旋轉蒸發(fā)得到7mg干燥后的物料。
[0105](3)向步驟(2)中含有干燥后的物料的茄型燒瓶中加入2mL的三蒸水，放在60°C熱水中水浴加熱30min,期間每隔1min需振搖lmin。水浴結束后將溶液靜置I小時，最后將得到的溶液濾過0.22 μ m的無菌濾膜，除去游離的阿霉素，得到所需納米膠束。
[0106]實施例16
[0107]本發(fā)明所述納米膠束可通過以下方法制備
[0108](I)分別把AIE染料(lmg/mL)和阿霉素(0.5mg/mL)溶于氯仿中，做成溶液待用。用容量體積為5mL的離心管稱取5mg包裹材料將其溶于2mL的氯仿中，將包裹材料溶液轉移到容量體積為50mL的茄型燒瓶中，用2mL的氯仿涮洗離心管兩遍，將涮洗液轉移到茄型燒瓶中，然后分別取ImL的AIE溶液和2mL的阿霉素溶液加入茄型燒瓶中，最后再向茄型燒瓶中補加3mL氯仿，搖勻。
[0109](2)將步驟(I)中的混合溶液參照藥劑學(人民衛(wèi)生出版社，2007年出版)中公開的方法進行真空旋轉蒸發(fā)得到7mg干燥后的物料。
[0110](3)向步驟⑵中含有干燥后的物料的茄型燒瓶中加入2mL的生理鹽水，放在60°C熱水中水浴加熱30min，期間每隔1min需振搖lmin。水浴結束后將溶液靜置I小時，最后將得到的溶液濾過0.22 μ m的無菌濾膜，除去游離的阿霉素，得到所需納米膠束。
[0111]實施例17
[0112]將所得的納米膠束依照《納米材料學》(哈爾濱工程大學出版社，2002年版)測量動態(tài)光散射圖，結果如圖1所示。可見本發(fā)明納米膠束的粒徑為100-120nm。
[0113]實施例18
[0114]將所得的納米膠束進行透射電子顯微鏡檢測，其能更直觀的觀測膠束粒子的粒徑。所得透射電子顯微鏡圖如圖2所示，可見本發(fā)明納米膠束粒徑為30-50nm。
[0115]實施例19
[0116]將發(fā)明所述納米膠束用于小動物活體成像圖，如圖3所示，其中I號為對照荷瘤小鼠，2號為生理鹽水對照組，3號為注射過本發(fā)明公布的納米膠束的小鼠，可見本發(fā)明的納米膠束可良好地應用于活體成像。
[0117]實施例20
[0118]將本發(fā)明所述納米膠束進行抑瘤試驗。圖4為本發(fā)明所述納米膠束的腫瘤抑制作用效果圖，結果表明該膠束具有與自由藥物活性成分相當?shù)哪[瘤抑制效果，在活體成像的同時并不降低藥效。
[0119] 申請人:聲明，本發(fā)明通過上述實施例來說明本發(fā)明的詳細方法，但本發(fā)明并不局限于上述詳細方法，即不意味著本發(fā)明必須依賴上述詳細方法才能實施。所屬【技術領域】的技術人員應該明了，對本發(fā)明的任何改進，對本發(fā)明產品各原料的等效替換及輔助成分的添加、具體方式的選擇等，均落在本發(fā)明的保護范圍和公開范圍之內。
【權利要求】
1.一種納米膠束，其特征在于，包括AIE染料、藥物活性成分及雙親性載體，所述AIE染料、藥物活性成分及雙親性載體的質量比為1:1:5-10。
2.根據(jù)權利要求1所述的納米膠束，其特征在于，所述AIE染料為紅熒光AIE染料。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的納米膠束，其特征在于，所述藥物活性成分為疏水性抗腫瘤藥物活性成分； 優(yōu)選地，所述藥物活性成分為阿霉素、姜黃素、紫杉醇、柔紅霉素和多西他賽中的一種或至少兩種的混合物。
4.根據(jù)權利要求1-3任一項所述的納米膠束，其特征在于，所述雙親性載體為PLGA-PEG、PGA-PEG、PCL-PEG、DSPE-PEG、DSPE-PEG-FA 或蛋黃卵磷脂中的一種或至少兩種的混合物。
5.根據(jù)權利要求1-4任一項所述的納米膠束的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟: 1)將所述AIE熒光染料與藥物活性成分以及雙親性的載體按配比在有機溶劑中混合均勻，得到溶液； 2)干燥去除步驟I)中所得溶液的有機溶劑，所得的干燥物料與水性溶劑接觸水化，制得所述納米膠束。
6.根據(jù)權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述干燥除去有機溶劑的方法為溶劑揮發(fā)法、乳化法、旋轉蒸發(fā)成膜法、噴霧干燥、磁攪揮發(fā)、透析法或凍干法中的一種或至少兩種的組合； 優(yōu)選地，所述水化是水浴、超聲、震蕩和振搖中的一種或至少兩種的組合。
7.根據(jù)權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述干燥去除溶劑的溫度為20-60°C，干燥時間為0.05-12小時。
8.根據(jù)權利要求1-4任一項所述的納米膠束的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)將所述AIE熒光染料與藥物活性成分以及雙親性的載體按配比在有機溶劑中混合均勻，得到溶液； 2)使用水性溶劑通過反溶劑法或微乳液法直接除去有機溶劑，得到所需納米膠束。
9.根據(jù)權利要求5-8所述的制備方法，其特征在于，步驟I)中，所述AIE染料、藥物活性成分及雙親性載體在PH值為4.5-9.0的有機溶劑中混合，所述pH值進一步優(yōu)選為6.5-7.5 ； 優(yōu)選地，所述AIE染料、藥物活性成分及雙親性載體的總質量與有機溶劑質量的比值為 1:1200-1500 ； 優(yōu)選地，相對于每12mg AIE染料、藥物活性成分及雙親性載體的干重量之和，所述水性溶劑的量為l_2mL ； 優(yōu)選地，所述有機溶劑為氯仿、乙腈、二氯甲烷、乙醇或甲醇中的一種或至少兩種的混合物； 優(yōu)選地，所述水性溶劑為水、生理鹽水、葡萄糖水溶液或磷酸鹽緩沖液。
10.根據(jù)權利要求1-4任一項所述的納米膠束在制備腫瘤診斷和/或治療的藥劑中的應用。
【文檔編號】A61K47/24GK104174036SQ201410437740
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年8月29日 優(yōu)先權日:2014年8月29日
【發(fā)明者】梁興杰, 李鴻基, 安菲菲, 李嬋, 張吉梅 申請人:國家納米科學中心