多功能融合多肽及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了多功能融合多肽及其制備方法和應用，屬于生物工程制藥領域。該多功能融合多肽為六種多肽中一種或其任意多種組合，可用于實體腫瘤、類風濕性關節(jié)炎以及新生血管性眼病的預防和治療。本發(fā)明的多肽是通過人工合成方法制備，其特征在于通過抑制血管內皮細胞增殖和遷移，抑制血管新生，繼而治療與血管新生相關的疾病，包括實體腫瘤、類風濕性關節(jié)炎以及新生血管性眼病等。
【專利說明】多功能融合多肽及其制備方法和應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物領域，具體涉及一類多功能融合多肽及其制備方法和在制備治療 實體腫瘤、類風濕性關節(jié)炎以及新生血管性眼病藥物中的應用。

【背景技術】
[0002] 血管新生（angiogenesis)，指在原始血管叢或已存在血管的基礎上以發(fā)芽方式 形成新生血管的過程，從傷口治愈、胎盤形成以至胚胎發(fā)育等，血管新生在當中扮演著重要 的角色。但與此同時，血管生成在多種病理條件下也會發(fā)生，所述病理條件包括：腫瘤生長 和轉移；炎性障礙，例如類風濕性關節(jié)炎、銀屑病、骨關節(jié)炎、炎性腸病、克隆病、潰瘍性結 腸類以及其它炎性障礙；眼部新血管生成，如早產兒視網膜病變、局部缺血性視網膜病變、 視網膜靜脈或動脈閉塞、糖尿病性視網膜病變、脈絡膜新生血管形成、年齡相關性黃斑變性 (AMD)、角膜新生血管形成、新生血管性青光眼或角膜移植以及多種其它眼病中的新血管生 成。
[0003] 惡性腫瘤是人類健康的首要殺手，無限生長、侵襲和轉移是腫瘤的惡性標志，也是 導致治療失敗和死亡的主要原因。因此，控制腫瘤的生長、侵襲和轉移是改善預后、提高生 存率的主要措施。1971年Folkman首先提出腫瘤生長依賴血管新生的理論，腫瘤血管生成 是腫瘤生長和轉移的形態(tài)學基礎，它不僅向腫瘤提供營養(yǎng)和氧氣，也向宿主輸出大量的腫 瘤細胞導致腫瘤的生長和轉移。絕大多數(shù)惡性實體腫瘤如卵巢癌、肝癌、宮頸癌和乳腺癌等 都是血管依賴性腫瘤，因此，抑制腫瘤血管形成是重要的抗癌措施。
[0004] 關節(jié)炎是危害人體健康的最常見疾病之一，特別是類風濕性關節(jié)炎，國內外很多 研究者都在探討其病因，尋找有效的預防和治療方法以改變其預后不良的狀況。類風濕關 節(jié)炎（rheumatoid arthritis, RA)是一種病因至今尚未肯定的慢性進行性的關節(jié)炎，通常 認為它是一種自身免疫性疾患，是機體防御系統(tǒng)自相殘殺所造成的結果，另外遺傳、感染、 寒冷潮濕等均可能是致病的因素。RA的病理過程中，血管新生是一種標志性的組織學改變， 新生血管形成伴隨滑膜增生和炎細胞浸潤，是RA中血管翳形成及關節(jié)破壞的基礎。因此， 抑制新生血管的形成是治療這類疾病的關鍵，通過抑制血管生成不僅可阻止向滑膜輸送氧 氣和營養(yǎng)物質，并且可直接導致血管退化，從而抑制RA滑膜增生。
[0005] 眼部新生血管主要包括虹膜新生血管（NVI)、脈絡膜新生血管（CNV)和視網膜新 生血管等，許多眼部病變與新生血管的發(fā)生有著密切的關系，常見新生血管性眼病主要包 括新生血管性角膜疾病、新生血管性視網膜疾病、新生血管性脈絡膜疾病、新生血管性青光 眼等幾大類。這些新生血管性病變多與眼組織的缺血、缺氧及炎癥反應有關，由于新生血管 不具備血管的正常生理結構，通透性高，容易破裂使血液流入玻璃體腔內，致使眼底出血， 使患者視力模糊或者完全失去視覺，嚴重影響患者生活質量。因此，抑制血管新生是治療上 述血管新生性眼病的重要途徑。
[0006] 內皮抑素（ES或Endostatin)，是大分子膠原蛋白XVIII的羧基末端非膠原區(qū)片 段，由183個氨基酸殘基組成，相對分子質量為20kD。內皮抑素是通過抑制腫瘤新生血管 形成從而阻斷其營養(yǎng)供應的血管生成抑制因子，由于它能特異地作用于內皮細胞，對正常 組織內的血管不會造成明顯的影響，因此具有無毒副作用、不產生耐藥性等優(yōu)勢。動物體內 試驗表明內皮抑素具有一定的抗腫瘤效果，但在臨床試驗中其抗腫瘤效果并不顯著，最終 被FDA駁回。相關文獻報道內皮抑素的第6-49個氨基酸和第134-178個氨基酸均能夠抑 制人臍靜脈內皮細胞的增殖和遷移，且活性甚至高于內皮抑素本身。因此將內皮抑素截短， 選取其中的活性片段進行研究，不僅利于研究整個大分子的機理，同時能降低開發(fā)成本，為 該類多肽的開發(fā)提供參考。
[0007] 整合素是一類識別多種細胞外基質成分的受體家族，廣泛分布于細胞表面，能介 導細胞與細胞外基質及細胞與細胞之間的相互黏附，并能通過連接胞內細胞骨架蛋白和 細胞外基質分子的相互作用參與血管生成。該類受體由α和β兩條鏈組成，目前已發(fā)現(xiàn) 15種α鏈和9種β鏈，不同的α鏈和β鏈的組合決定配體的特異性，整合素 α?β?、 α2β1、α3β1、α6β1、α6β4、α5β1、ανβ3、ανβ5參與血管生成和細胞遷移，其中 α ν β 3可影響癌變中的幾個關鍵過程。α ν β 3可以表達于多種細胞類型，能識別配體分子 中的精-甘-天冬序列（Arg-Gly-Asp，RGD)，并參與腫瘤的血管生成、侵襲、轉移、炎癥、傷 口愈合和凝血等生理和病理過程。因此，R⑶序列可以作為一種載體，靶向運輸?shù)侥[瘤血管 新生部位，從而對新生血管性疾病達到更高效率的治療。
[0008] 基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP)家族是一類結構相似和功能 相關的蛋白內切酶，MMPs在生理狀態(tài)下參與胚胎形成、新生血管的形成及傷口的愈合，在病 理狀態(tài)下參與組織重構、風濕性關節(jié)炎、惡性腫瘤轉移、動脈粥樣硬化（AS)和急性冠脈綜 合征（ACS)的病理進程。它們不僅能切割各種細胞外基質，為炎癥細胞和腫瘤細胞的轉移 打開"通路";可以切割細胞因子或趨化因子，影響炎癥細胞的募集；還可以切割各種膜連接 分子，包括受體和細胞間連接分子，從而調節(jié)這些分子的功能。
[0009] 基質金屬蛋白酶-9 (matrix metalloproteinase-9，MMP-9)是基質金屬蛋白酶的 典型代表，研究發(fā)現(xiàn)MMP-9可以在幾個方面促進腫瘤生長：首先，MMP-9是腫瘤部位血管增 生的"開關"，它可以切割細胞外基質，釋放連接于基質上的VEGF，促進血管增生，血管增生 是腫瘤生長的前提條件；MMP-9還可以通過從細胞外基質釋放VEGF的方式促進淋巴管增 生，促進腫瘤轉移；其次，腫瘤細胞以及進入腫瘤組織的巨噬細胞和T細胞表面都表達有 TNF-α前體，幾種金屬蛋白酶（包括MMP-9)可以切割并釋放有活性的TNF-α，促進血管增 生和抑制腫瘤細胞的凋亡。另外，腫瘤部位的炎癥細胞表達的MMP-9可以通過兩個方面激 活TGF- β途徑，一是把TGF- β前體切割成有活性的TGF- β，二是切割TGF- β連接蛋白， 把TGF-β從細胞外基質上釋放出來，活化的TGF-β抑制免疫系統(tǒng)，卻不抑制腫瘤本身的生 長，從而間接的促進腫瘤生長。
[0010] ΜΜΡ抑制劑不但可抑制腫瘤的生長和轉移，還具有靶向功能，不但可早期檢測到腫 瘤組織，還可以把目的物帶到腫瘤部位。ΜΜΡ-9多肽抑制劑的優(yōu)勢在于，其序列可以連接 到其它有抗腫瘤活性的多肽或蛋白質上，新的分子不但可以抑制ΜΜΡ-9活力，還可以通過 ΜΜΡ-9多肽抑制劑部分把有抗腫瘤活性的成分富集于腫瘤部位，提高其抗腫瘤效果。
[0011] 多功能融合多肽是近年在治療新生血管性疾病中引起極大重視的一類藥物， 針對腫瘤血管形成分子機制所設計的抗血管生成類藥物主要包括內源性多功能融合多 肽、VEGF通路抑制劑、C0X-2抑制劑、基質金屬蛋白酶抑制劑等。在這些多功能融合多 肽中，尤其以血管抑素和內皮抑素最引人注目，但其缺陷也非常明顯：作用靶點不明確， 對血管的專一性和選擇性不強，治療效果有限，導致用藥量較大，產生不同程度的耐藥 性。因此，一個好的抗血管生成藥物應該對新生血管的標記分子具有選擇性，以達到對新 生血管的靶向性作用，從整體上提高藥物對血管生成的抑制效果。CN102746380所報道 Pro-Pyr-Cys-Bip-Arg-Gly-Glu (其中 Pyr 為 3- (3-批陡基）-L-丙氨酸，Bip 為 L-4, 4' -聯(lián) 苯丙氨酸）多肽片段具有抑制基質金屬蛋白酶-8、基質金屬蛋白酶_9和腫瘤壞死因子釋放 酶的活力，因此該多肽具有抗腫瘤的作用。但并未有進一步的文獻公開在其他領域的效果 和應用。


【發(fā)明內容】

[0012] 1、發(fā)明目的
[0013] 針對現(xiàn)有的多功能融合多肽作用靶點不明確，對血管的專一性和選擇性不強等問 題，本發(fā)明提供了一種多功能融合多肽及其制備方法和應用，其對多種實體腫瘤、類風濕性 關節(jié)炎以及新生血管性眼部疾病有很好的預防和治療效果，增加其適應癥范圍。
[0014] 2、技術方案
[0015] 多功能融合多肽，其結構為下述的一種：
[0016] 多膚 I :Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly-Pr〇-(D_Pyr)-(D_Cys)_Bi p-Arg-Gly-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp (其中 Pyr 為 3-(3-批陡基）_L_ 丙氨酸， Bip為L-4, 4' -聯(lián)苯丙氨酸）；
[0017] 多膚 II :Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala_Gly-Gly-G ly-Gly-Pr〇- (D_Pyr) - (D_Cys) -Bip-Arg-Gly-Glu (其中 Pyr 為 3- (3-批陡基）-L-丙氨酸， Bip為L-4, 4' -聯(lián)苯丙氨酸）；
[0018] 多膚III :Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly-Pr〇- (D_Pyr) - (D_Cys) _Bi p-Arg-Gly-Glu (其中Pyr為3-(3-吡啶基）-L-丙氨酸，Bip為L-4, 4' -聯(lián)苯丙氨酸）；
[0019] 多膚IV :Pr〇- (D_Pyr) - (D_Cys) -Bip-Arg-Gly-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Al a-Asp-Arg-Ala (其中Pyr為3-(3-批陡基）-L-丙氨酸，Bip為L-4, 4' -聯(lián)苯丙氨酸）；
[0020] 多膚 V :Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Ala_Asp-Arg-Ala ;
[0021] 多膚VI :Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala_Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp。
[0022] 上述多功能融合多肽中的任意兩種或兩種以上的組合。
[0023] 上述多功能融合多肽多肽在制備治療實體腫瘤、類風濕性關節(jié)炎以及新生血管性 眼病藥物中的應用。
[0024] 所述的腫瘤為起源于人的頭頸部、腦部、甲狀腺、食管、胰腺、肺臟、肝臟、胃、乳腺、 腎臟、膽囊、結腸或直腸、卵巢、子宮頸、子宮、前列腺、膀胱或睪丸的原發(fā)或繼發(fā)的癌、黑色 素瘤、血管瘤以及肉瘤。
[0025] 所述的多功能融合多肽在制備治療在制備治療或預防類風濕性關節(jié)炎藥物中的 應用。
[0026] 所述新生血管性眼病包括虹膜新生血管性眼病、脈絡膜新生血管性眼病、視網膜 新生血管性眼病或角膜新生血管性眼病。
[0027] 所述的多功能融合多肽的制備方法，以Fmoc-wang-resin或Fmoc-CTC-resin為起 始原料，然后用保護氨基酸依次接二肽至二十四肽，接肽工作完成后充分洗滌，然后切肽、 后處理即得多功能融合多肽粗品。將粗品溶解，用制備型高效液相經過兩次純化，濃縮凍干 得到純品，最后經過第三次純化得到多肽。
[0028] 3、有益效果
[0029] 本發(fā)明公開的多肽具有抑制新生血管生成和抑制包括MMP9在內的幾種基質金屬 蛋白酶活力兩種作用，在多肽I、II、V和VI中加入RGD序列（Arg-Gly-Asp)，使該多肽序列 對整合素具有靶向結合作用和親和性，并通過抑制胞內細胞骨架蛋白和細胞外基質分子的 相互作用，來抑制細胞與細胞外介質及細胞與細胞間的信號傳導，從而抑制血管生成。前期 研究發(fā)現(xiàn)多肽能夠抑制內皮細胞的增殖、遷移，并發(fā)現(xiàn)其能抑制多種腫瘤細胞的生長；進一 步研究證實其對類風濕性關節(jié)炎有一定的治療作用，此外對眼科疾病也就有很好的治療效 果。說明本發(fā)明涉及的多肽設計科學合理，可行有效，能作為治療或預防血管及炎癥相關疾 病，并極大地拓展了該多肽的治療譜，為將來藥物開發(fā)提供新的思路和前景。
[0030] 多肽I -VI是新的氨基酸序列，本申請在前人的基礎上構建新的多肽序列，新序 列拓展了原來多肽的應用范圍，將其應用于治療類風濕性關節(jié)炎和新生血管性眼病領域。
[0031] 研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明中的多肽序列Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala具有抑制血管生成的 作用。精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD)序列是整合素的一個重要配體，含有RGD序列的多 肽X-Arg-Gly-Asp(X可以是1個或多個非極性氨基酸）能夠特異性的識別整合素。本發(fā)明 的多功能融合多肽多肽是在具有抑制血管生成作用的序列Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala的C 端或N端連接上與整合素家族具有特異結合能力的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD)序列 和（或）基質金屬蛋白酶抑制劑多肽序列Pr〇-Pyr-Cys-Bip-Arg-Gly-Glu(為增加整個分 子的柔性在多肽I -VI中加入4個Gly為linker)，構建出了一系列具有靶向性的抑制新生 血管生成的多肽，且保證所獲得序列的不同功能片段相互不受影響，各自發(fā)揮作用。
[0032] 經過大量實驗獲知該類多功能融合多肽在體外能夠明顯抑制人臍靜脈內皮細胞 (HUVEC)的增殖、遷移，對人宮頸癌HeLa細胞、人結腸癌HCT116細胞、人腦膠質瘤U87細胞、 人乳腺癌MDA-MB-231等腫瘤細胞的增殖有顯著的抑制作用。
[0033] 本發(fā)明的多肽I -VI可以靶向到RA中血管翳形成過程中的新生血管內皮，抑制新 生血管形成，進而達到預防或治療類風濕性關節(jié)炎的效果。發(fā)明人經過大量實驗獲知多肽 I -VI能夠抑制佐劑型大鼠類風濕關節(jié)炎和DBA/1小鼠膠原型類風濕性關節(jié)炎的發(fā)展，體 內實驗證明具有顯著的治療類風濕型關節(jié)炎的效果，并且副作用少，用量小成本降低。
[0034] 經過大量實驗獲知該類多功能融合多肽多肽均能夠抑制人視網膜血管內皮細胞 (HRCEC)的增殖，在一定范圍內呈劑量依賴關系。通過多功能融合多肽多肽對小鼠角膜新生 血管和兔虹膜新生血管的作用，表明多肽I、多肽II、多肽III、多肽IV、多肽V和多肽VI六種 多功能融合多肽均能夠抑制角膜和虹膜新生血管的生長，有潛力開發(fā)為治療角膜新生血管 性眼病和虹膜新生血管性眼病的藥物，具有潛在的治療新生血管性疾病的作用。
[0035] 脈絡膜位于眼球后部，實驗證明多功能融合多肽多肽能夠改善脈絡膜血流，說明 用藥后，通過全身循環(huán)或鞏膜-葡萄膜-視神經途徑，能盡快到達脈絡膜，對年齡相關性黃 斑變性（AMD)的脈絡膜新生血管形成有抑制作用，可望用于早期AMD以及其它脈絡膜新生 血管性疾病的預防或治療。同時通過多功能融合多肽多肽對大鼠脈絡膜新生血管的作用， 表明六種多功能融合多肽多肽能夠抑制大鼠脈絡膜新生血管的生成，說明六種多功能融合 多肽對包括年齡相關性黃斑變性在內的脈絡膜新生血管性眼病具有一定的治療作用。
[0036] 對0IR小鼠模型施用多肽I、多肽II、多肽III、多肽IV、多肽V和多肽VI后，六種多 肽均能夠改善視網膜病理性新生血管的形成，減少視網膜中新生血管叢。說明本發(fā)明的多 功能融合多肽能夠抑制小鼠眼部視網膜的新生血管形成，在一定程度上能夠預防或治療視 網膜新生血管性眼病。
[0037] 本申請多肽I - VI科學合理、可行有效，能作為制備治療人類實體腫瘤、類風濕性 關節(jié)炎以及新生血管性眼病的治療藥物，極大拓展了該多功能融合多肽的治療譜，為將來 藥物開發(fā)提供新的思路和前景。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0038] 附圖1多功能融合多肽多肽I對人視網膜血管內皮細胞（HRCEC)的增殖抑制作 用；
[0039] 附圖2多功能融合多肽多肽II對人視網膜血管內皮細胞（HRCEC)的增殖抑制作 用；
[0040] 附圖3多功能融合多肽多肽III對人視網膜血管內皮細胞（HRCEC)的增殖抑制作 用；
[0041] 附圖4多功能融合多肽多肽IV對人視網膜血管內皮細胞（HRCEC)的增殖抑制作 用；
[0042] 附圖5多功能融合多肽多肽V對人視網膜血管內皮細胞（HRCEC)的增殖抑制作 用；
[0043] 附圖6多功能融合多肽多肽VI對人視網膜血管內皮細胞（HRCEC)的增殖抑制作 用；
[0044] 附圖7多功能融合多肽多肽對BALB/c小鼠角膜新生血管的作用；
[0045] 附圖8多功能融合多肽多肽對大鼠脈絡膜新生血管的作用；
[0046] 附圖9多功能融合多肽多肽在0IR小鼠中對視網膜血管的作用；
[0047] 附圖10多功能融合多肽多肽I對人臍靜脈內皮細胞（HUVEC)的遷移抑制作用；
[0048] 附圖11多功能融合多肽多肽II對人臍靜脈內皮細胞（HUVEC)遷移抑制作用；
[0049] 附圖12多功能融合多肽多肽III對人臍靜脈內皮細胞（HUVEC)遷移抑制作用；
[0050] 附圖13多功能融合多肽多肽IV對人臍靜脈內皮細胞（HUVEC)遷移抑制作用；
[0051] 附圖14多功能融合多肽多肽V對人臍靜脈內皮細胞（HUVEC)遷移抑制作用；
[0052] 附圖15多功能融合多肽多肽VI對人臍靜脈內皮細胞（HUVEC)遷移抑制作用；
[0053] 附圖16多功能融合多肽多肽對人宮頸癌HeLa細胞的增殖抑制作用；
[0054] 附圖17多功能融合多肽多肽對人結腸癌HCT116細胞的增殖抑制作用；
[0055] 附圖18多功能融合多肽多肽對人腦膠質瘤U87細胞的增殖抑制作用；
[0056] 附圖19多功能融合多肽多肽對人乳腺癌MDA-MB-231細胞的增殖抑制作用。

【具體實施方式】
[0057] 實施例1多功能融合多肽多肽的制備及檢驗
[0058] 多肽采用固相合成法合成，采用制備型HPLC進行分離純化，分析型RP-HPLC測定 多肽的純度。
[0059] 多肽I - VI固相合成法是以Fmoc-wang-resin或Fmoc-CTC-resin (吉爾生化有限 公司）為起始原料，然后用保護氨基酸依次接二肽至二十四肽，接肽工作完成后充分洗滌， 然后切肽、后處理即得多功能融合多肽粗品。將粗品溶解，用制備型高效液相經過兩次純 化，濃縮凍干得到純品，最后經過第三次純化得到多肽精制品。該方法不僅能保證合成的效 率，還可提高產物純度。
[0060] 1.接肽（包括接二肽至二十四/十七/十三肽）的步驟如下：
[0061] 稱取Fmoc-wang-resin或Fmoc-CTC-resin適量，倒入玻璃砂芯反應柱中，加入 CH2C12適量使樹脂充分膨脹。
[0062] a.脫帽：加入六氫吡啶/DMF的脫帽液適量，反應一段時間后將脫帽液抽干，中間 用DMF洗滌一次，然后再加入一次脫帽液適量反應，脫去Fmoc保護基。
[0063] b.洗滌：將脫帽液抽干，用DMF洗滌樹脂幾次，充分洗凈副產物。
[0064] c.縮合：將用于接肽的保護氨基酸和激活劑溶于DMF和縮合劑中，搖勻，溫度控制 在34°C左右，在反應釜中充分反應。
[0065] d.洗滌：將反應液抽干，用DMF充分洗滌樹脂，洗凈副產物。
[0066] 所述切肽的步驟如下：
[0067] 將抽干的樹脂裝入圓底燒瓶中，加入裂解液充分裂解合好的二十四肽中間體，用 砂芯漏斗將樹脂與多肽分離，所述的裂解液的體積組成為：三氟乙酸：苯酚：水：苯甲硫醚：EDT = 90 :3 :3 :2 :2。
[0068] 2.后處理步驟如下：先加無水乙醚到切割液中將多肽析出，然后離心，把清液倒 掉，然后再用無水乙醚洗滌多肽，抽干得多肽粗品。
[0069] 3.純化的步驟如下：
[0070] a.溶解：稱取粗品配制成5-20g/L的溶液，用0. 45 μ m的混合濾膜過濾。
[0071] 制備：通過半制備型高效液相色譜進行一次純化、二次純化和三次純化得到多肽 精制合格品，流動相：A相乙腈，B相0. 1 % TFA水溶液。
[0072] ①一次純化：用30% -40%的乙腈和60% -70%的緩沖溶液，流速為50mL/ min-100mL/min，沖洗10min平衡制備柱。溶解過濾后的粗品用輸液泵上樣。
[0073] 表1 一次純化洗脫梯度
[0074]

【權利要求】
1. 多功能融合多肽，其特征在于結構為下列中的一種： 多膚 I :Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly-Pr〇-(D_Pyr)-(D_Cys)-Bip-Ar 區(qū)-617-6111--617-617-617-617-六找-617-六8口，其中？71'為3-(3-批陡基）-1^-丙氨酸，81口為 L-4, 4' -聯(lián)苯丙氨酸； 多膚 II :Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala_Gly-Gly-Gly-Gl y-Pr〇- (D-Pyr) - (D_Cys) -Bip-Arg-Gly-Glu，其中 Pyr 為 3- (3-批陡基）-L-丙氨酸，Bip 為 L-4, 4' -聯(lián)苯丙氨酸； 多膚III :Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala-Gly-Gly-Gly-Gly-Pr〇- (D_Pyr) - (D_Cys) -Bip-Ar g-Gly-Glu，其中Pyr為3-(3-吡啶基）-L-丙氨酸，Bip為L-4, 4' -聯(lián)苯丙氨酸； 多膚IV :Pr〇- (D_Pyr) - (D_Cys) -Bip-Arg-Gly-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Ala-As p-Arg-Ala，其中Pyr為3-(3-批陡基）-L-丙氨酸，Bip為L-4, 4' -聯(lián)苯丙氨酸； 多膚 V :Arg-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Ala_Asp-Arg-Ala ; 多膚VI :Arg-Gly-Ala-Asp-Arg-Ala_Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp。
2. 根據(jù)權利要求1所述的多功能融合多肽，其特征在于為多肽中的其中任意兩種或兩 種以上的組合。
3. 根據(jù)權利要求1所述的多功能融合多肽在制備治療實體腫瘤、類風濕性關節(jié)炎以及 新生血管性眼病藥物中的應用。
4. 根據(jù)權利要求3中所述的多功能融合多肽在制備治療腫瘤藥物中的應用，其特征在 于所述的腫瘤為起源于人的頭頸部、腦部、甲狀腺、食管、胰腺、肺臟、肝臟、胃、乳腺、腎臟、 膽囊、結腸或直腸、卵巢、子宮頸、子宮、前列腺、膀胱或睪丸的原發(fā)或繼發(fā)癌、黑色素瘤、血 管瘤以及肉瘤。
5. 根據(jù)權利要求3中所述的多功能融合多肽在制備治療或預防類風濕性關節(jié)炎藥物 中的應用。
6. 根據(jù)權利要求3中所述的多功能融合多肽在制備治療新生血管性眼病藥物中的應 用，其特征在于所述新生血管性眼病包括虹膜新生血管性眼病、脈絡膜新生血管性眼病、視 網膜新生血管性眼病或角膜新生血管性眼病。
7. 根據(jù)權利要求1中所述的多功能融合多肽的制備方法，其特征在于以 Fmoc-wang-resin或Fmoc-CTC-resin為起始原料，然后用保護氨基酸依次接二肽至二十四 肽，接肽工作完成后充分洗滌，然后切肽、后處理即得多功能融合多肽粗品，將粗品溶解，用 制備型高效液相經過兩次純化，濃縮凍干得到純品，最后經過第三次純化得到多肽。
【文檔編號】A61P29/00GK104045718SQ201410324568
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年7月8日 優(yōu)先權日:2014年7月8日
【發(fā)明者】康夢實, 李夢瑋 申請人:南京安吉生物科技有限公司