一種用于制備抗角膜真菌滴眼劑的組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于制備抗角膜真菌滴眼劑的組合物，其包括下述重量份的組分：桂皮醛1~10重量份，尼泊金乙酯0.2~20重量份，其中桂皮醛與尼泊金乙酯的重量比為1∶（0.2~5）。本發(fā)明提供的用于制備抗角膜真菌滴眼劑的組合物，可用于治療鐮刀菌屬、曲霉菌屬、青霉菌屬、酵母屬等所致的角膜炎及角膜潰瘍，適用性強(qiáng)。本發(fā)明提供的用于制備抗角膜真菌滴眼劑的組合物，通過配伍實(shí)驗(yàn)，篩選出桂皮醛與尼泊金乙酯配伍使用，相較于二者分別使用可顯著增強(qiáng)單體的抑菌活性，優(yōu)于已有的尼泊金油劑，具有明顯的協(xié)同增效的作用。
【專利說明】一種用于制備抗角膜真菌滴眼劑的組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種藥物的組合物，其可用于制備治療角膜真菌感染的滴眼劑。

【背景技術(shù)】
[0002] 真菌性角膜炎是一種病情嚴(yán)重、治療棘手、致盲率高的眼科感染性疾病。多數(shù)患者 因未能得到早期診治或治療不及時(shí)而導(dǎo)致角膜穿孔、失明，嚴(yán)重者要行眼球摘除。自20世 紀(jì)以來，隨著發(fā)病率的逐年增高，危險(xiǎn)性也越來越受重視。國外報(bào)道，44%中央角膜潰瘍是由 真菌引起的，在我國，發(fā)病率近十多年來有明顯的增高，植物外傷是導(dǎo)致真菌角膜炎的主要 原因，有一定的季節(jié)性和地區(qū)性，感染者多為農(nóng)民。
[0003] 目前，已知真菌性角膜炎的病原菌有70多種，對我國部分地區(qū)如在我國廣東、河 南、河北、等地進(jìn)行的流行病學(xué)調(diào)查顯示，致病菌以鐮刀菌屬、曲霉菌屬為主，大部分地區(qū)鐮 刀菌是首位致病菌，以串珠鐮刀菌和茄病鐮刀菌占強(qiáng)勢地位，其次是曲霉、青霉、念珠菌、彎 孢霉等。
[0004] 由于目前對此病基礎(chǔ)研究較少，臨床早期診斷及藥物治療缺乏有效的手段，導(dǎo)致 此病預(yù)后差，而且治療棘手。早期準(zhǔn)確的診斷和有效的藥物治療是提高治愈率降低致盲率 的關(guān)鍵。
[0005] 尼泊金乙酯(化學(xué)名稱：對羥基苯甲酸乙酯）：用于食品、化妝品的防腐，具有廣譜 的抗菌作用，對G'G+、酵母菌、霉菌均有較好的抑菌作用。1999年發(fā)表于中國全科醫(yī)學(xué)的 《尼泊金滴眼劑治療真菌性角膜潰瘍94例臨床觀察》一文公開了用1%尼泊金乙酯制備的尼 泊金滴眼劑，治療真菌性角膜炎、潰瘍臨床取得較好的療效。
[0006] 桂皮的主要化學(xué)成分是揮發(fā)油，即桂皮油，它是一種成份復(fù)雜的芳香精油。桂皮油 的成份比較復(fù)雜，以桂皮醛為主，含量在80%以上，其他還有桂皮酯、丁香酚、桂皮酸等。其 主要活性部分是桂皮醛。桂皮醛臨床應(yīng)用可鎮(zhèn)痛解痙、解熱，增強(qiáng)血液循環(huán)，降低血糖、抗 菌、抗腫瘤等作用。其活性對多種細(xì)菌、真菌有抑菌作用，但尚無其作用于角膜真菌的研究 報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種配方簡單，具有協(xié)同增效作用，可有效預(yù)防和治療角 膜真菌(鐮刀菌屬、曲霉屬、青霉屬、酵母屬以及各種霉菌）感染所引起的真菌性角膜炎及角 膜潰瘍，且安全性好，無毒副作用的用于制備抗角膜真菌滴眼劑的藥物組合物。
[0008] 為了達(dá)到上述發(fā)明的目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為： 本發(fā)明的組合物包括下述重量份的組分：桂皮醛1~1〇重量份，尼泊金乙酯〇. 2~20重 量份，其中桂皮醛與尼泊金乙酯的重量比為1 : (0.2飛）。
[0009] 進(jìn)一步的，本發(fā)明的組合物還包括0. f 10重量份的吐溫80。
[0010] 進(jìn)一步的，本發(fā)明的組合物通過下述方法制備：將〇. 1~1〇重量份的吐溫80加入到 6(T80°C的90(Tl000重量份的生理鹽水中，待完全溶解后再加入0. 2?20重量份的尼泊金乙 酯，然后再加入1~1〇重量份的桂皮醛，混合均勻后，靜置至室溫既得。
[0011] 進(jìn)一步的，本發(fā)明所述的真菌包括鐮刀菌屬、曲霉屬、青霉屬或酵母屬的真菌。
[0012] 本發(fā)明的有益效果為： 本發(fā)明提供的用于制備抗角膜真菌滴眼劑的組合物，可用于治療鐮刀菌屬、曲霉菌屬、 青霉菌屬、酵母屬等所致的角膜炎及角膜潰瘍，適用性強(qiáng)。
[0013] 本發(fā)明提供的用于制備抗角膜真菌滴眼劑的組合物，通過配伍實(shí)驗(yàn)，篩選出桂皮 醛與尼泊金乙酯配伍使用，相較于二者分別使用可顯著增強(qiáng)單體的抑菌活性，優(yōu)于已有的 尼泊金油劑，具有明顯的協(xié)同增效的作用。
[0014] 本發(fā)明提供的抗曲霉菌藥物的中藥組合物，其中的吐溫80作為增溶劑使用，但是 吐溫80的用量僅有0.019Γ1% (重量體積比)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于中國藥典中的1~10%的用量，輔料 用量的減少可以降低藥物制備成本，增加藥效并降低輔料引起的不適。組方中吐溫80的用 量為0.01% ~1%，其藥效學(xué)、安全性均優(yōu)于1~10%的用量。

【具體實(shí)施方式】
[0015] 實(shí)施例1 : 桂皮醛： 1克， 尼泊金乙醋：1克。
[0016] 實(shí)施例2: 桂皮醛： 1克， 尼泊金乙醋：1克， 吐溫80 : 1克。
[0017] 實(shí)驗(yàn)例1 檢測桂皮醛、尼泊金乙酯及吐溫80組合物抗角膜真菌的活性，分別對單體桂皮醛、尼 泊金乙酯的抗角膜真菌活性及組合體桂皮醛、尼泊金乙酯及吐溫80抗角膜真菌協(xié)同作用 的測定，以氟康唑做對照。
[0018] 試驗(yàn)樣品：桂皮醛> 98%，由湖北武漢遠(yuǎn)程科技有限公司提供，尼泊金乙酯由天津 天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司提供，吐溫80由天津紅巖化學(xué)試劑廠提供，氟康唑由法國輝瑞公 司提供。
[0019] 藥物單體：桂皮醛溶于95%乙醇內(nèi)，配制成10% (重量體積比）藥物母液，經(jīng)0. 2um 過濾器過濾后，分別溶于培養(yǎng)基中制成含桂皮醒lmg/ml、0. 5mg/ml、0. 25mg/ml、0. 125mg/ ml、0. 0625mg/ml、0. 3125mg/ml、0. 0156mg/ml、0. 0078mg/ml、0. 0039mg/ml 的藥物培養(yǎng)基，每 個(gè)試管分裝5ml放置斜面，凝固后冷藏備用。其中培養(yǎng)基為高壓滅菌后的葡萄糖蛋白胨瓊 脂基（4%葡萄糖、1%蛋白胨、2%瓊脂)。
[0020] 尼泊金乙酯溶于95%乙醇內(nèi)，配制成10% (重量體積比)藥物母液，經(jīng)0. 2um過濾器 過濾后，分別溶于培養(yǎng)基中制成含尼泊金乙酯lmg/ml、0. 5mg/ml、0. 25mg/ml、0. 125mg/ml、 0· 0625mg/ml、0. 3125mg/ml、0. 0156mg/ml、0. 0078mg/ml、0. 0039mg/ml 的藥物培養(yǎng)基，每個(gè) 試管分裝5ml放置斜面，凝固后冷藏備用。其中培養(yǎng)基為高壓滅菌后的葡萄糖蛋白胨瓊脂 基（4%葡萄糖、1%蛋白胨、2%瓊脂)。
[0021] 吐溫80溶于95%乙醇內(nèi)，配制成10% (重量體積比）藥物母液，經(jīng)0· 2um過濾 器過濾后，分別溶于培養(yǎng)基中制成含吐溫80 lmg/ml、0. 5mg/ml、0. 25mg/ml、0. 125mg/ml、 0· 0625mg/ml、0. 3125mg/ml、0. 0156mg/ml、0. 0078mg/ml、0. 0039mg/ml 的藥物培養(yǎng)基，每個(gè) 試管分裝5ml放置斜面，凝固后冷藏備用。其中培養(yǎng)基為高壓滅菌后的葡萄糖蛋白胨瓊脂 基（4%葡萄糖、1%蛋白胨、2%瓊脂)。
[0022] 藥物組合物：實(shí)施例1的藥物組合物，分別溶于95%乙醇內(nèi)，配制成10%藥物母液， 經(jīng)0. 2um過濾器過濾后，分別溶于培養(yǎng)基中制成A (桂皮醛lmg/ml、尼泊金乙酯lmg/ml)、B (桂皮醒〇· 5mg/ml、尼泊金乙酯0· 5mg/ml) 、C (桂皮醒0· 25mg/ml、尼泊金乙酯0· 25mg/ ml)、D(桂皮醒0. 125mg/ml、尼泊金乙酯0. 125mg/ml)、E(桂皮醒0. 0625mg/ml、尼泊金乙酯 0· 0625mg/ml)、F(桂皮醒 0· 03125mg/ml、尼泊金乙酯 0· 03125mg/ml)、G(桂皮醒 0· 0156mg/ ml、尼泊金乙酯 0.0156mg/ml)、Η (桂皮醒 0.0781mg/ml、尼泊金乙酯 0.0781mg/ml)、I (桂 皮醒0. 0039mg/ml、尼泊金乙酯0. 0039mg/ml)的藥物培養(yǎng)基，每個(gè)試管分裝5ml放置斜面， 凝固后冷藏備用。其中培養(yǎng)基為高壓滅菌后的葡萄糖蛋白胨瓊脂基（4%葡萄糖、1%蛋白胨、 2%瓊脂）。
[0023] 實(shí)施例2的藥物組合物，分別溶于95%乙醇內(nèi)，配制成10%藥物母液，經(jīng)0. 2um過濾 器過濾后，分別溶于培養(yǎng)基中制成A(桂皮醒lmg/ml、尼泊金乙酯lmg/ml、吐溫801mg/ml)、B (桂皮醒〇· 5mg/ml、尼泊金乙酯0· 5mg/ml、吐溫80 0· 5mg/ml)、C(桂皮醒0· 25mg/ml、尼泊金 乙酯 0.25mg/ml、吐溫 80 0.25mg/ml)、D (桂皮醒 0.125mg/ml、尼泊金乙酯 0.125mg/ml 吐 溫 80 0· 125mg/ml)、E (桂皮醛 0· 0625mg/ml、尼泊金乙酯 0· 0625mg/ml、吐溫 80 0· 0625mg/ ml)、F (桂皮醛 0.03125mg/ml、尼泊金乙酯 0.03125mg/ml、吐溫 80 0.03125mg/ml)、G (桂 皮醒 0· 0156mg/ml、尼泊金乙酯 0· 0156mg/ml、吐溫 80 0· 0156mg/ml)、H(桂皮醒 0· 00781mg/ ml、尼泊金乙酯 0.00781mg/ml、吐溫 80 0.0078mg/ml)、I (桂皮醒 0.0039mg/ml、尼泊金乙 酯0. 0039mg/ml、吐溫80 0. 0039mg/ml)的藥物培養(yǎng)基，每個(gè)試管分裝5ml放置斜面，凝固 后冷藏備用。其中培養(yǎng)基為高壓滅菌后的葡萄糖蛋白胨瓊脂基（4%葡萄糖、1%蛋白胨、2%瓊 脂)。
[0024] 對照組：氟康唑溶于95%乙醇內(nèi)，配制成10% (重量體積比)藥物母液，經(jīng)0. 2um過 濾器過濾后，分別溶于培養(yǎng)基中制成含桂皮醒lmg/ml、0. 5mg/ml、0. 25mg/ml、0. 125mg/ml、 0· 0625mg/ml、0. 3125mg/ml、0. 0156mg/ml、0. 0078mg/ml、0. 0039mg/ml 的藥物培養(yǎng)基，每個(gè) 試管分裝5ml放置斜面，凝固后冷藏備用。其中培養(yǎng)基為高壓滅菌后的葡萄糖蛋白胨瓊脂 基（4%葡萄糖、1%蛋白胨、2%瓊脂)。
[0025] 受試菌種： 均來自河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院真菌室保存菌株，均為致病菌株(直接是從患者角膜潰 瘍表面刮取分泌物，直接鏡檢可見分枝狀菌絲，再經(jīng)培養(yǎng)鑒定獲取受試菌種)。
[0026] 菌種接種： 挑取已轉(zhuǎn)接活化的菌株，加入〇. 85%氯化鈉溶液中，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板將菌懸液濃度調(diào) 節(jié)為lX105~6CFU/ml。每個(gè)試管藥基內(nèi)接種100ul菌懸液，每個(gè)濃度接種2管，同時(shí)用葡萄 糖蛋白胨瓊脂基作對照，置36°C恒溫箱內(nèi)，每日觀察生長情況，并記錄，7天判讀結(jié)果。
[0027] MIC值的判讀：將每管生長的情況與陽性及陰性對照管相比較，以最低藥物濃度 無培養(yǎng)物生長的藥基管為MIC終點(diǎn)。
[0028] MFC測定：取葡萄糖蛋白胨液基2ml，分別加入抑菌試驗(yàn)無菌生長的試管中2h，震 蕩后取出lOOul接種于沙氏培養(yǎng)基內(nèi)36°C孵育7天，以最低濃度無生長為MFC終點(diǎn)。
[0029] FIC(分?jǐn)?shù)抑菌濃度)的確定：為聯(lián)合用藥時(shí)各藥的MIC值分別除以單獨(dú)用藥時(shí)MIC 值的商的和。即：

【權(quán)利要求】
1. 一種用于制備抗角膜真菌滴眼劑的組合物，其特征在于其包括下述重量份的組分： 桂皮醛： 1~10重量份 尼泊金乙酯：0.2?20重量份 其中桂皮醛與尼泊金乙酯的重量比為1 : (0.2飛）。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于制備抗角膜真菌滴眼劑的組合物，其特征在于其還 包括〇.廣10重量份的吐溫80。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于制備抗角膜真菌滴眼劑的組合物，其特征在于其通 過下述方法制備：將〇. 1~1〇重量份的吐溫80加入到6(T80°C的90(Tl000重量份的生理鹽 水中，待完全溶解后再加入〇. 2~20重量份的尼泊金乙酯，然后再加入1~10重量份的桂皮 醛，混合均勻后，靜置至室溫既得。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用于制備抗角膜真菌滴眼劑的組合物，其特征在于所述 的真菌包括鐮刀菌屬、曲霉屬、青霉屬或酵母屬的真菌。
【文檔編號】A61P31/10GK104083355SQ201410318881
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年7月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月7日
【發(fā)明者】王剛生 申請人:王剛生