氫分子固態(tài)載體在制備抑制肥胖的保健品和藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】氫分子固態(tài)載體在制備抑制肥胖的保健品和藥物中的應(yīng)用，其特征在于，氫分子固態(tài)載體對(duì)膳食結(jié)構(gòu)失衡所致的肥胖發(fā)生有抑制作用，所述的氫分子固態(tài)載體是以鈣、鎂的碳酸鹽為主占固態(tài)物質(zhì)含量的50％以上，形態(tài)為粉末狀、顆粒狀、無定形狀類型的固態(tài)形式，該物質(zhì)溶解或混懸于液體后，可在溶液中釋放出氫分子的物質(zhì)，溶液中氫的含量為0.1ppm以上且飽和濃度以下，該物質(zhì)包括但不僅僅是氫化珊瑚鈣；本發(fā)明提供了氫分子固態(tài)載體在制備抑制肥胖的保健品和藥物中的應(yīng)用，在正常飲食的情況下攝入氫分子固態(tài)載體，通過氫分子固態(tài)載體在體內(nèi)遇水釋放氫分子而靶向不同部位擴(kuò)散，清除活性氧自由基，緩解氧化損傷而達(dá)到的疾病防治目的。
【專利說明】氫分子固態(tài)載體在制備抑制肥胖的保健品和藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物學(xué)和醫(yī)藥學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及氫分子固態(tài)載體在制備抑制肥胖的保健品和藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]肥胖是體內(nèi)脂肪堆積過多并多伴有血糖，血脂，血壓異常，胰島素抵抗，慢性炎癥的慢性疾病，是動(dòng)脈粥樣硬化、原發(fā)性高血壓、2型糖尿病及脂肪肝病等高發(fā)疾病的危險(xiǎn)因素。近30年來，肥胖呈全球化流行趨勢(shì)，幾乎所有國(guó)家居民的平均體重指數(shù)都在不斷增加，2008年全球超重和肥胖成人分別高達(dá)14.6億和5億，已成為影響全人類健康的重要因素。
[0003]隨著近年人們生活水平的提高和生活習(xí)慣的改變，高脂肪高熱量的食物在飲食結(jié)構(gòu)中不斷加大，同時(shí)更多的多坐少動(dòng)，導(dǎo)致肥胖問題不斷凸顯。由于目前對(duì)于該問題的致病機(jī)理尚未完全明確，缺乏完善有效的治療方法，同時(shí)在諸多因素使高脂飲食難以避免的情況下，積極探索有效緩解膳食結(jié)構(gòu)失衡所致的肥胖、脂肪肝病等問題的防治方法具有重要意義。已有大量研究表明當(dāng)長(zhǎng)期高脂飲食導(dǎo)致肥胖，并使肝臟脂肪過載、出現(xiàn)糖脂代謝障礙時(shí)，肝臟以及其它器官處于氧化應(yīng)激、能量代謝障礙狀態(tài)而產(chǎn)生的大量活性氧是造成組織細(xì)胞的進(jìn)一步損傷的重要原因。
[0004]氫氣的生物學(xué)研究認(rèn)為氫是一種弱還原劑，可在生物體系內(nèi)選擇性抑制以羥自由基、過氧化亞硝酸陰離子為代表的破壞性較強(qiáng)的自由基。同時(shí)，氫是小分子物質(zhì)，易于在體內(nèi)自由擴(kuò)散，可越過許多藥物無法越過的人體屏障，到達(dá)病灶的優(yōu)點(diǎn)。目前已有的研究表明，以特定的氫分子攝入方式，如富氫水或富氫生理鹽水等，可顯著緩解以氧化損傷為共性的疾病模型的病程進(jìn)展。
[0005]氫分子固態(tài)載體在水中能夠緩慢、穩(wěn)定釋放氫氣，與普通的氫攝入方法如富氫水、富氫生理鹽水等相比，氫分子固態(tài)載體的氫氣緩釋效應(yīng)優(yōu)勢(shì)明顯?；诟粴湟后w的氫耗散問題，攝入氫分子固態(tài)載體更有利于氫分子到達(dá)病灶發(fā)揮生理效應(yīng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供氫分子固態(tài)載體在制備抑制肥胖的保健品和藥物中的應(yīng)用，在正常飲食的情況下攝入氫分子固態(tài)載體，通過氫分子固態(tài)載體在體內(nèi)遇水釋放氫分子而靶向不同部位擴(kuò)散，清除活性氧自由基，緩解氧化損傷而達(dá)到的疾病防治目的。
[0007]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
[0008]氫分子固態(tài)載體在制備抑制肥胖的保健品和藥物中的應(yīng)用，其特征在于，氫分子固態(tài)載體對(duì)膳食結(jié)構(gòu)失衡所致的肥胖發(fā)生有抑制作用，所述的氫分子固態(tài)載體是以鈣、鎂的碳酸鹽為主占固態(tài)物質(zhì)含量的50%以上，形態(tài)為粉末狀、顆粒狀、無定形狀類型的固態(tài)形式，該物質(zhì)溶解或混懸于液體后，可在溶液中釋放出氫分子的物質(zhì)，溶液中氫的含量為
0.1ppm以上且飽和濃度以下，該物質(zhì)包括但不僅僅是氫化珊瑚鈣。
[0009] 氫分子固態(tài)載體對(duì)肥胖發(fā)生的抑制作用的有效攝入濃度范圍為每天每公斤體重10-50毫克。
[0010]氫分子固態(tài)載體能夠有效改善肥胖發(fā)生過程中的體重增加。
[0011 ] 氫分子固態(tài)載體能夠有效改善肥胖發(fā)生過程中的脂肪積累。
[0012]氫分子固態(tài)載體能夠有效改善肥胖發(fā)生過程中的脂代謝紊亂的產(chǎn)生。
[0013]氫分子固態(tài)載體能夠有效改善肥胖發(fā)生過程中的肝臟脂肪變的產(chǎn)生。
[0014]氫分子固態(tài)載體能夠有效改善肥胖發(fā)生過程中的脂肪性肝炎的產(chǎn)生。
[0015]氫分子固態(tài)載體能夠有效降低血液中甘油三酯含量。
[0016]氫分子固態(tài)載體能夠有效降低肝臟中的甘油三酯和自由脂肪酸的含量。
[0017]氫分子固態(tài)載體能夠有效降低肝臟中的炎性因子，如腫瘤壞死因子，白介素-6和單核細(xì)胞趨化蛋白-1的含量。
[0018]本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于:1、首次研究出氫分子固態(tài)載體在防治肥胖發(fā)生的保健食品和藥物中應(yīng)用。2、氫為小分子物質(zhì)，相比其它抗氧化物質(zhì)或藥物，更易于透過細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、清除自由基而緩解病理進(jìn)展。
【專利附圖】

【附圖說明】 [0019]圖1是氫化珊瑚鈣對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的體重增加的抑制作用。其中:橫坐標(biāo)為氫化珊瑚鈣的攝入濃度，縱坐標(biāo)為大鼠的體重。
[0020]圖2是氫化珊瑚鈣對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的附睪脂肪和腎周脂肪組織增加的抑制作用，圖2A是對(duì)附睪脂肪的抑制作用，圖2B是對(duì)腎周脂肪的抑制作用。其中:橫坐標(biāo)為氫化珊瑚鈣的攝入濃度，縱坐標(biāo)為大鼠脂肪組織的重量。
[0021]圖3是氫化珊瑚鈣對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的血清中甘油三酯含量上升的抑制作用。其中:橫坐標(biāo)為氫化珊瑚鈣的攝入濃度，縱坐標(biāo)為血清中甘油三酯的含量。
[0022]圖4是氫化珊瑚鈣對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肝臟中甘油三酯含量上升的抑制作用。其中:橫坐標(biāo)為氫化珊瑚鈣的攝入濃度，縱坐標(biāo)為肝臟中甘油三酯的含量。
[0023]圖5是氫化珊瑚鈣對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肝臟中自由脂肪酸含量上升的抑制作用。其中:橫坐標(biāo)為氫化珊瑚鈣的攝入濃度，縱坐標(biāo)為肝臟中自由脂肪酸的含量。
[0024]圖6是氫化珊瑚鈣對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肝臟中炎癥因子的抑制作用。圖6A是對(duì)腫瘤壞死因子的抑制作用，圖6B是對(duì)白介素-6的抑制作用，圖6C是對(duì)單核細(xì)胞趨化蛋白-1的抑制作用。其中:橫坐標(biāo)為氫化珊瑚鈣的攝入濃度，縱坐標(biāo)為肝臟中炎癥因子的含量。
【具體實(shí)施方式】
[0025]下面結(jié)合附圖及【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明做詳細(xì)闡述。
[0026]1.實(shí)驗(yàn)材料
[0027]氫化珊瑚鈣(coral calcium hydride, CCH)從上海全人生物科技有限公司購(gòu)買；腫瘤壞死因子，白介素-6酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，甘油三酯，自由脂肪酸測(cè)定試劑盒從南京建成生物工程研究所購(gòu)買；TRIzol試劑從Invitrogen公司購(gòu)買；RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，SYBR熒光染料從大連寶生物公司購(gòu)買。RNA引物序列從北京奧科鼎盛生物科技有限公司訂購(gòu)合成。
[0028]2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)及模型建立[0029]SD雄性大鼠是從上海斯萊克動(dòng)物有限責(zé)任公司購(gòu)買。大鼠飼養(yǎng)在可控溫度(22度到28度)和濕度(60%)的房間內(nèi)，房間的燈光維持在12小時(shí)白天、12小時(shí)黑夜的循環(huán)中，在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行中大鼠能夠自由進(jìn)食和進(jìn)水。實(shí)驗(yàn)大鼠一共分為四組，每組12只。四組分別為:(1)正常飲食組；(2)高脂飲食組(3)高脂飲食組同時(shí)每天灌胃10mg/kg的氫化珊瑚鈣；(4)高脂飲食組同時(shí)每天灌胃50mg/kg的氫化珊瑚鈣。實(shí)驗(yàn)周期為3個(gè)月。
[0030]3.實(shí)驗(yàn)方法
[0031]甘油三酯檢測(cè)
[0032]血清和肝臟的甘油三酯水平均采用商業(yè)甘油三酯檢測(cè)試劑盒并按檢測(cè)說明書進(jìn)行測(cè)定。
[0033]自由脂肪酸檢測(cè)
[0034]采用商業(yè)自由脂肪酸檢測(cè)試劑盒并按檢測(cè)說明書進(jìn)行測(cè)定。
[0035]炎癥因子檢測(cè)
[0036]采用逆轉(zhuǎn)錄RNA-實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法進(jìn)行檢測(cè)。具體方法如下:
[0037]RNA 提取
[0038]取50mg組織加入ImL of TRIzol試劑，用組織采用超聲破碎，將破碎好的物質(zhì)放入離心管中，12，OOOg, 40C，離心10分鐘。留上清，棄去沉淀。加入200ul氯仿(1/5總體積)抽提蛋白，劇烈混勻15秒，室溫放置15分鐘后，12，000g，4°C，離心10分鐘。將上層水相轉(zhuǎn)移至另一 Ep管中，加入等體積異丙醇，混勻后_20°C放置Ih后，12，OOOg, 4°C，離心10分鐘,棄上清。加入ImL預(yù)冷的75%乙醇,顛倒混勻，7500rpm, 4°C,離心5分鐘。棄上清，超凈工作臺(tái)放置30min，使乙醇揮發(fā)完全揮發(fā)掉，溶于50ul DEPC水中。用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)測(cè)定其濃度，用于反轉(zhuǎn)錄。
[0039]RNA反轉(zhuǎn)錄
[0040]轉(zhuǎn)錄體積為25ul，取出2ug RNA，加入隨機(jī)引物0.5ug，置于70°C，5分鐘，破壞其二級(jí)結(jié)構(gòu)。之后立即置于冰上，避免二級(jí)結(jié)構(gòu)恢復(fù)。加入3ul dNTPlOmM，5ul反轉(zhuǎn)錄緩沖液(M-MLV5X React1n Buffer)，200 單位反轉(zhuǎn)錄酶(M-MLVRT)，用 DEPC 水補(bǔ)充至 25ul 體積，37°C孵育60分鐘。置于_20°C備用。
[0041 ]實(shí)時(shí)熒光定量 PCR (Real-time PCR)
[0042]用SYBR Green法進(jìn)行，反應(yīng)體系包括Iul cDNA，
5ul 2X SYBR_? Premix ExTaqra 11,0.5ul上下游引物混合液(1uM),加滅菌水至
1ul0反應(yīng)條件依照說明書，95°C解鏈lOmin，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)PCR(每個(gè)循環(huán)包括95°C 30s，55°C 30s, 72°C 20s)，最后觀測(cè)融解曲線(95°C 15s，60°C 15s，95°C 15s)。a-tubulin 作為內(nèi)參，實(shí)驗(yàn)所用的引物序列為:腫瘤壞死因子，forward:5’ -TCGTAGCAAACCACCAAGCA-3’
[0043]reverse:5’ -CCCTTGAAGAGAACCTGGGAGTA-3，；白介素 _6，forward:5’ -TCCTACCCCAACTTCCAATGCTC-3’ reverse:5’ -TTGGATGGTCTTGGTCCTTAGCC-3’ ；單核細(xì)胞趨化蛋白-1，forward:5’ -ATGCAGGTCTCTGTCACGCT-3’ reverse:5’ -GGTGCTGAAGTCCTTAGGGT-3’ ；
[0044]a -tubulin, forward:5' - TGCTGCCATTGCCACCATCA-3’ reverse:5’ -CTCACCCTCACCCTCCACCG-3，。
[0045]統(tǒng)計(jì)分析
[0046]結(jié)果以Mean土S.E.M形式表示，統(tǒng)計(jì)結(jié)果代表9只大鼠的統(tǒng)計(jì)結(jié)果；數(shù)據(jù)分析使用One Way-ANOVA 分析方法，顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義為 *ρ〈0.05, **ρ〈0.01, ***ρ〈0.001。
[0047]實(shí)施例一
[0048]氫化珊瑚鈣對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的體重增加的抑制作用。
[0049]分別在實(shí)驗(yàn)開始前和結(jié)束后測(cè)量大鼠的體重，使用實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的大鼠體重減掉實(shí)驗(yàn)開始時(shí)的體重，得出三個(gè)月大鼠增加的體重。圖1顯示高脂飲食誘導(dǎo)了體重的顯著增加，攝入氫化珊瑚鈣能夠有效抑制大鼠體重的增加。
[0050]實(shí)施例二
[0051]氫化珊瑚鈣對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的附睪脂肪和腎周脂肪組織增加的抑制作用。
[0052]實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死大鼠，取出附睪脂肪及腎周脂肪并稱重，圖2Α和圖2Β分別顯示附睪脂肪和腎周脂肪大量的積累，而氫化珊瑚鈣的攝入能夠有效降低脂肪的積累。
[0053]實(shí)施例三
[0054]氫化珊瑚鈣對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的脂代謝紊亂的抑制作用。
[0055]圖3顯示高脂飲食誘導(dǎo)血液中甘油三酯含量明顯上升，而氫化珊瑚鈣的攝入能夠有效降低甘油三酯的含量。
[0056]實(shí)施例四
[0057]氫化珊瑚鈣對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肝臟脂肪變的抑制作用。
[0058]圖4顯示高脂飲食誘導(dǎo)肝臟中甘油三酯含量明顯上升，而氫化珊瑚鈣的攝入能夠有效降低甘油三酯的含量。圖5顯示高脂飲食誘導(dǎo)肝臟中自由脂肪酸含量明顯上升，而氫化珊瑚鈣的攝入能夠有效降低自由脂肪酸的含量。
[0059]實(shí)施例六
[0060]氫化珊瑚鈣對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的脂肪性肝炎的抑制作用。
[0061]脂肪性肝炎是非酒精性脂肪肝病理發(fā)生過程中的顯著特征，同時(shí)也是病理診斷的良好依據(jù)。圖6Α，圖6Β和圖6C分別顯示高脂飲食誘導(dǎo)肝臟中腫瘤壞死因子，白介素-6及單核細(xì)胞趨化蛋白-1水平明顯上升，這些指標(biāo)都揭示了高脂飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝病病理發(fā)展過程中伴隨炎癥反應(yīng)，而氫化珊瑚鈣的攝入能夠有效降低炎癥因子的水平，揭示氫化珊瑚鈣的抗炎癥反應(yīng)作用。
[0062]通過以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明氫化珊瑚鈣能夠有效的抑制高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖發(fā)生，同時(shí)可有效控制伴隨肥胖產(chǎn)生的代謝紊亂，肝臟脂肪變及脂肪性肝炎。同理可證，與氫化珊瑚鈣具有同類特性的氫分子固態(tài)載體具有同樣的疾病防治作用。另外，氫分子結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，中和自由基反應(yīng)生成水，潛在副作用較小，體內(nèi)耗散的氫由肺部呼出，對(duì)生理穩(wěn)態(tài)影響較小，機(jī)體耐受性好，具有廣泛應(yīng)用的市場(chǎng)前景，為防治膳食結(jié)構(gòu)失衡所致的肥胖等系列問題開辟新的醫(yī)藥途徑。
【權(quán)利要求】
1.氫分子固態(tài)載體在制備抑制肥胖的保健品和藥物中的應(yīng)用，其特征在于，氫分子固態(tài)載體對(duì)膳食結(jié)構(gòu)失衡所致的肥胖發(fā)生有抑制作用，所述的氫分子固態(tài)載體是以鈣、鎂的碳酸鹽為主占固態(tài)物質(zhì)含量的50%以上，形態(tài)為粉末狀、顆粒狀、無定形狀類型的固態(tài)形式，該物質(zhì)溶解或混懸于液體后，可在溶液中釋放出氫分子的物質(zhì)，溶液中氫的含量為0.1ppm以上且飽和濃度以下，該物質(zhì)包括但不僅僅是氫化珊瑚鈣。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述氫分子固態(tài)載體對(duì)肥胖發(fā)生的抑制作用的有效攝入濃度范圍為每天每公斤體重10-50毫克。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述氫分子固態(tài)載體能夠有效改善肥胖發(fā)生過程中的體重增加。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述氫分子固態(tài)載體能夠有效改善肥胖發(fā)生過程中的脂肪積累。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述氫分子固態(tài)載體能夠有效改善肥胖發(fā)生過程中的脂代謝紊亂的產(chǎn)生。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述氫分子固態(tài)載體能夠有效改善肥胖發(fā)生過程中的肝臟脂肪變的產(chǎn)生。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述氫分子固態(tài)載體能夠有效改善肥胖發(fā)生過程中的脂肪性肝炎的產(chǎn)生。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述氫分子固態(tài)載體能夠有效降低血液中甘油三酯含量。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述氫分子固態(tài)載體能夠有效抑制肝臟中的甘油三酯和自由脂肪酸的含量。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述氫分子固態(tài)載體能夠有效抑制肝臟中的炎性因子，如腫瘤壞死因子，白介素-6和單核細(xì)胞趨化蛋白-1的含量。
【文檔編號(hào)】A61K33/00GK104027350SQ201410239813
【公開日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2014年5月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月30日
【發(fā)明者】劉健康, 龍建綱, 侯晨, 唐穎, 趙琳 申請(qǐng)人:西安交通大學(xué)