一種阿霉素納米載藥系統(tǒng)、其制備方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種阿霉素納米載藥系統(tǒng)、其制備方法及應(yīng)用。所述載藥系統(tǒng)按照質(zhì)量比例包括含阿霉素的活性成分0.02％～1.5％、固體脂質(zhì)1～20％、液體脂質(zhì)0.1～20％、乳化劑0.5％～20％以及等滲調(diào)節(jié)劑0.1％～5％；固體脂質(zhì)和液體脂質(zhì)形成納米顆粒包裹含阿霉素的活性成分。其制備方法包括：(1)將含阿霉素的活性成分、固體脂質(zhì)、液體脂質(zhì)及脂溶性乳化劑均勻分散于有機溶劑，蒸干有機溶劑獲得油相；(2)將其他乳化劑及等滲調(diào)節(jié)劑均勻分散于水中獲得水相；(3)將水相逐滴添加到油相中乳化；(4)高壓均質(zhì)；(5)冷卻除菌。所述阿霉素納米載藥系統(tǒng)，實現(xiàn)阿霉素與化療增敏劑的共輸送，增強阿霉素對肝癌細(xì)胞的殺傷力。
【專利說明】一種阿霉素納米載藥系統(tǒng)、其制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，更具體地，涉及一種納米載藥系統(tǒng)、其制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]原發(fā)性肝細(xì)胞癌是嚴(yán)重危害人類健康的重大疾病，其惡性程度極高，侵襲生長迅速，治療后易復(fù)發(fā)，5年生存率不到5%，被稱為“癌中之王”。目前，治療原發(fā)性肝癌的化療藥物包括阿霉素、5-氟尿嘧啶、順鉬、絲裂霉素、喜樹堿、吉西他濱、索拉菲尼等，其中阿霉素為治療原發(fā)性肝癌的臨床標(biāo)準(zhǔn)用藥。但是，肝癌細(xì)胞通常存在著原發(fā)性耐藥，并且多數(shù)肝癌發(fā)生在已存在的肝臟疾病的基礎(chǔ)上，影響藥物的吸收與代謝，使得單一化療藥物的治療效果有限。因此，目前抗肝癌藥物研究關(guān)注的熱點是聯(lián)合用藥制劑。
[0003]聯(lián)合用藥主要有三種方式，分別為多種化療藥物聯(lián)合使用、分子靶向藥物與化療藥物聯(lián)合使用以及化療增敏劑與化療藥物聯(lián)合使用。多種化療藥物聯(lián)合使用具有毒性小、有效率高的優(yōu)勢，但仍未解決耐藥性的問題；分子靶向藥物與化療藥物聯(lián)合使用通過抑制特定的分子靶點提 高化療藥物的治療效果，但是治療前檢測靶點表達和突變較難，不易選擇合適的分子靶向藥物；化療藥物與增敏劑聯(lián)合使用，通過增敏劑與化療藥物的協(xié)同作用，逆轉(zhuǎn)多藥耐藥，增強化療藥物對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，有可能達到良好的治療效果。
[0004]目前，臨床治療時化療藥物與化療增敏劑的聯(lián)用方法僅是簡單地將二者的普通制劑混合使用，由于存在大多數(shù)化療藥物生物利用度不高、增敏劑與化療藥物體內(nèi)藥代動力學(xué)行為不一致等問題，導(dǎo)致二者普通制劑的混合使用治療效果仍然有限。
[0005]阿霉素已在肝癌的臨床治療中得到廣泛應(yīng)用，但是，原發(fā)性肝癌細(xì)胞中存在的多藥耐藥基因MDR高表達、抗凋亡基因Bcl-2過表達、核轉(zhuǎn)錄因子NF K B高表達、p53基因突變等復(fù)雜因素，使得單一使用阿霉素的治療效果有限。為解決阿霉素治療過程中產(chǎn)生的耐藥性等副作用，有人采用聯(lián)合用藥的方式，包括阿霉素與另一種化療藥物聯(lián)合使用，以及阿霉素與化療增敏劑聯(lián)合用藥兩種方式。前者是利用不同化療藥物具有不同的抗腫瘤作用，產(chǎn)生協(xié)同治療效果。如使用膠束分別載負(fù)阿霉素與紫杉醇，研究發(fā)現(xiàn)二者聯(lián)合使用對乳腺癌、卵巢癌、肺癌等多種耐藥癌細(xì)胞具有協(xié)同的殺傷作用。后者則是將阿霉素與耐藥抑制劑(如siRNA)聯(lián)合使用，降低了腫瘤細(xì)胞對阿霉素的耐藥性，增強了阿霉素的治療作用。但是，上述聯(lián)合用藥是將二種活性成分的不同制劑混合使用，不是采用同一載體進行藥物共輸送，因此存在兩種不同的活性成分(不同化療藥物、增敏劑與化療藥物)體內(nèi)藥代動力學(xué)行為不一致、兩種活性成分無法同時輸送到腫瘤細(xì)胞以及藥物生物利用度低等問題，導(dǎo)致其治療效果仍然有限。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對現(xiàn)有技術(shù)的以上缺陷或改進需求，本發(fā)明提供了一種阿霉素納米載藥系統(tǒng)、其制備方法及應(yīng)用，其目的在于通過納米載藥系統(tǒng)共輸送化療增敏劑與化療藥物，使得化療增敏劑與化療藥物產(chǎn)生協(xié)同作用，逆轉(zhuǎn)多藥耐藥，增強化療藥物對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，由此解決目前抗癌藥物，尤其是抗肝癌藥物，藥效有限且容易產(chǎn)生耐藥性的問題的技術(shù)問題。
[0007]為實現(xiàn)上述目的，按照本發(fā)明的一個方面，提供了一種阿霉素納米載藥系統(tǒng)，其特征在于,按照質(zhì)量比例包括含阿霉素的活性成分0.02%~1.5%、固體脂質(zhì)I~20%、液體脂質(zhì)0.1~20%、乳化劑0.5%~20%以及等滲調(diào)節(jié)劑0.1%~5%，余量為注射用水；
[0008]所述含阿霉素的活性成分為阿霉素與增敏劑1:10~10:1的混合物；
[0009]所述固體脂質(zhì)和液體脂質(zhì)在乳化劑和等滲調(diào)節(jié)劑的作用下形成納米顆粒，將所述含阿霉素的活性成分包裹在內(nèi)。
[0010]優(yōu)選地，所述納米載藥系統(tǒng)，其按照質(zhì)量比例包括所述含阿霉素的活性成分0.1 %~0.7%、固體脂質(zhì)2% ~6%、液體脂質(zhì)0.2%~5%、乳化劑1%~10%以及等滲調(diào)節(jié)劑0.5%~3%，余量為注射用水。
[0011]優(yōu)選地,所述納米載藥系統(tǒng),其納米顆粒粒徑在IOnm至1000nm之間，多分散指數(shù)PDI ≤0.50，含阿霉素的活性成分包封率≥60%。
[0012]優(yōu)選地,所述納米載藥系統(tǒng)，其納米顆粒粒徑在50nm至400nm之間，多分散指數(shù)PDI≤0.30，含阿霉素的活性成分包封率≥90%。
[0013]優(yōu)選地，所述納米載藥系統(tǒng)，其增敏劑為姜黃素。
[0014]優(yōu)選地，所述納米載藥系統(tǒng)，其含阿霉素的活性成分為阿霉素與姜黃素1:2~2:1的混合物。
[0015]優(yōu)選地，所述納米載藥系統(tǒng)，其所述乳化劑中含有不超過乳化劑總質(zhì)量25%的聚乙二醇維生素E琥珀酸酯(TPGS)，其中聚乙二醇分子量為100~10000，優(yōu)選500~2000。
[0016]優(yōu)選地，所述納米載藥系統(tǒng)，其所述乳化劑還含有聚山梨醇酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯一聚氧丙烯嵌段共聚物、磷脂、短鏈醇中的一種或二種。優(yōu)選為聚氧乙烯氫化蓖麻油、大豆磷脂、聚氧乙烯一聚氧丙烯嵌段共聚物或聚山梨醇酯。
[0017]優(yōu)選地，所述納米載藥系統(tǒng)，其所述固體脂質(zhì)為飽和脂肪酸、飽和脂肪酸的單、雙、三甘油酯、膽固醇、鯨蠟醇十六酸酯、鯨蠟醇棕櫚酸酯和/或微晶石蠟。優(yōu)選為單硬脂酸甘油酯、棕櫚酸硬脂酸甘油酯或山崳酸甘油酯。
[0018]優(yōu)選地，所述納米載藥系統(tǒng)，其所述飽和脂肪酸為月桂酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸、硬脂酸或山崳酸中的一種或兩種。
[0019]優(yōu)選地，所述納米載藥系統(tǒng)，其所述液體脂質(zhì)為肉豆蘧酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、辛酸/癸酸三甘油酯、亞油酸甘油酯、丙二醇單辛酸酯、油酸、大豆油或液體石蠟。優(yōu)選為辛酸/癸酸三甘油酯、亞油酸甘油酯或丙二醇單辛酸酯。
[0020]優(yōu)選地，所述納米載藥系統(tǒng)，其所述等滲調(diào)節(jié)劑為氯化鈉、葡萄糖、甘油、果糖或木糖醇；優(yōu)選為甘油。
[0021]按照本發(fā)明的另一方面，提供了一種所述的阿霉素納米載藥系統(tǒng)的制備方法，包括以下步驟:
[0022](I)將配方比例的含阿霉素的活性成分、固體脂質(zhì)、液體脂質(zhì)及脂溶性乳化劑均勻分散于有機溶劑，65°C至80°C蒸干有機溶劑，獲得油相，維持溫度；
[0023](2)將配方比例的其他乳化劑及等滲調(diào)節(jié)劑均勻分散于超純水中，65°C至80°C保溫，獲得水相；
[0024](3)65°C至80°C下，將水相逐滴添加到油相中，均勻混合后乳化，獲得初乳；
[0025](4)65°C至80°C下，將初乳高壓均質(zhì)，獲得納米乳；
[0026](5)將納米乳冷卻，除菌后獲得所述納米載藥系統(tǒng)。
[0027]按照本發(fā)明的另一方面，提供了所述的阿霉素納米載藥系統(tǒng)，應(yīng)用于制備抗原發(fā)性肝癌藥物。
[0028]以人肝癌細(xì)胞HepG2為體外模型對所述阿霉素納米載藥系統(tǒng)物的抗肝癌活性進行評價。結(jié)果顯示，與阿霉素溶液和單一阿霉素納米脂質(zhì)組合物相比，所述阿霉素納米載藥系統(tǒng)能夠顯著增強抗腫瘤細(xì)胞增殖的作用。
[0029]總體而言，通過本發(fā)明所構(gòu)思的以上技術(shù)方案與現(xiàn)有技術(shù)相比，由于采用阿霉素和增敏劑的共輸送納米載藥系統(tǒng)，與現(xiàn)有的聯(lián)合使用阿霉素與姜黃素的普通制劑或單一載阿霉素的納米載藥系統(tǒng)比較，顯示出以下技術(shù)進步:
[0030]1.本發(fā)明提供的阿霉素-姜黃素納米脂質(zhì)組合物，由于化療藥物和化療增敏劑被共載于同一納米載藥系統(tǒng)中，包封率高，粒徑均一，納米脂質(zhì)組合物粒徑適宜，易于通過增強滲透滯留(EPR)效應(yīng)靶向輸送至腫瘤病灶部位。
[0031]2.本發(fā)明提供的阿霉素-姜黃素納米脂質(zhì)組合物，相較于單獨使用阿霉素納米脂質(zhì)組合物，對人 肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用更明顯，增強了抗癌效果。
[0032]3.聚乙二醇維生素E琥珀酸酯(TPGS)通過影響ATP酶的構(gòu)象和活性來抑制P-糖蛋白對藥物的外排作用，可有效地逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性。本發(fā)明采用TPGS修飾納米脂質(zhì)組合物，實驗結(jié)果表明有效逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對阿霉素的耐藥，抗腫瘤效果明顯增強。同時，TPGS中PEG鏈段可避免血漿中蛋白的調(diào)理作用，延長阿霉素-姜黃素納米脂質(zhì)組合物體內(nèi)循環(huán)時間，增強其在腫瘤部位的EPR效應(yīng)。
[0033]4.本發(fā)明提供的納米脂質(zhì)組合物采用具有良好生物相容性的藥用輔料制備，對人正常肝細(xì)胞安全、無明顯毒副作用；同時，制備工藝穩(wěn)定，易于工業(yè)化，具有很好的市場開發(fā)前景。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0034]圖1是實施例4激光粒度儀測得的阿霉素載藥系統(tǒng)的粒徑分布；
[0035]圖2是實施例4制得的阿霉素載藥系統(tǒng)的TEM表征結(jié)果；
[0036]圖3是阿霉素納米載藥系統(tǒng)的X射線粉末衍射結(jié)果；
[0037]圖4是實施例16阿霉素體外釋放曲線；
[0038]圖5是實施例19實驗動物生存曲線；
[0039]圖6是實施例19谷丙轉(zhuǎn)氨酶檢測結(jié)果(*#p〈0.001，與正常組比較；##p〈0.01，#ρ〈0.05，與模型組比較)；
[0040]圖7是實施例19 二乙基亞硝胺誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生原發(fā)性肝癌組織病理觀察結(jié)果；
[0041]其中圖7 (A)為正常組肝組織，圖7 (B)為生理鹽水組出現(xiàn)腫瘤肝組織，圖7 (C)為正常肝組織HE染色結(jié)果，圖7 (D)為生理鹽水組腫瘤肝組織HE染色結(jié)果
[0042]圖8是實施例19藥效學(xué)研究的組織病理觀察結(jié)果(第30周時各組HE染色結(jié)果);
[0043]其中圖8(A)為空白脂質(zhì)納米粒組組織病理HE染色結(jié)果圖，圖8(B)為阿霉素溶液組組織病理HE染色結(jié)果圖，圖8 (C)為阿霉素納米脂質(zhì)組合物組組織病理HE染色結(jié)果圖，圖8 (D)為阿霉素-姜黃素混合溶液組組織病理HE染色結(jié)果圖，圖8 (E)為實施例3的阿霉素納米載藥系統(tǒng)組組織病理HE染色結(jié)果圖，圖8 (F)為實施例4的阿霉素納米載藥系統(tǒng)組組織病理HE染色結(jié)果圖。
【具體實施方式】
[0044]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。此外，下面所描述的本發(fā)明各個實施方式中所涉及到的技術(shù)特征只要彼此之間未構(gòu)成沖突就可以相互組合。
[0045]本發(fā)明提供的阿霉素納米載藥系統(tǒng)，按照質(zhì)量比例包括含阿霉素的活性成分0.02%~1.5%、固體脂質(zhì)I~20%、液體脂質(zhì)0.1~20%、乳化劑0.5%~20%以及等滲調(diào)節(jié)劑0.1%~5%，余量為注射用水。優(yōu)選地，所述阿霉素納米載藥系統(tǒng)，按照質(zhì)量比例包括所述含阿霉素的活性成分0.1%~0.7%、固體脂質(zhì)2%~6%、液體脂質(zhì)0.2%~5%、乳化劑1%~10%以及等滲調(diào)節(jié)劑0.5%~3%，余量為注射用水。
[0046]所述含阿霉素的活性成分為阿霉素與增敏劑1:10~10:1的混合物，所述增敏劑優(yōu)選為姜黃素。當(dāng)增敏劑為姜黃素時，所述含阿霉素的活性成分，優(yōu)選為阿霉素與姜黃素1:2~2:1的混合物。
[0047]所述乳化劑中含有不超過乳化劑總質(zhì)量25 %的聚乙二醇維生素E琥珀酸酯(TPGS)，其中聚乙二醇分子量為100~10000，優(yōu)選500~2000。所述乳化劑還含有聚山梨醇酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚氧乙烯一聚氧丙烯嵌段共聚物、磷脂、短鏈 醇中的一種或二種，優(yōu)選為聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚氧乙烯一聚氧丙烯嵌段共聚物或聚山梨醇酯。
[0048]所述固體脂質(zhì)為飽和脂肪酸、飽和脂肪酸的單、雙、三甘油酯、膽固醇、鯨蠟醇十六酸酯、鯨蠟醇棕櫚酸酯和/或微晶石蠟。飽和脂肪酸如月桂酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸、硬脂酸或山崳酸或其兩種的混合物。優(yōu)選的固體脂質(zhì)為單硬脂酸甘油酯、棕櫚酸硬脂酸甘油酯或山崳酸甘油酯。
[0049]所述液體脂質(zhì)為肉豆蘧酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、辛酸/癸酸三甘油酯、亞油酸甘油酯、丙二醇單辛酸酯、油酸、大豆油或液體石蠟。優(yōu)選的液體脂質(zhì)為辛酸/癸酸三甘油酯、亞油酸甘油酯或丙二醇單辛酸酯。
[0050]所述等滲調(diào)節(jié)劑為氯化鈉、葡萄糖、甘油、果糖或木糖醇。優(yōu)選的等滲調(diào)節(jié)劑為甘油
[0051]所述固體脂質(zhì)和液體脂質(zhì)在乳化劑和等滲調(diào)節(jié)劑的作用下形成納米顆粒，將所述含阿霉素的活性成分包裹在內(nèi)。所述納米顆粒粒徑在IOnm至1000nm之間,優(yōu)選粒徑在50nm至400nm之間；多分散指數(shù)PDI ( 0.50，優(yōu)選多分散指數(shù)PDI ( 0.30 ;含阿霉素的活性成分包封率> 60%，優(yōu)選包封率> 90%。
[0052]本發(fā)明提供的阿霉素納米載藥系統(tǒng)，其制備方法包括以下步驟:
[0053](I)將配方比例的含阿霉素的活性成分、固體脂質(zhì)、液體脂質(zhì)及脂溶性乳化劑均勻分散于有機溶劑，65°C至80°C蒸干有機溶劑，獲得油相，維持溫度。[0054]所述脂溶性乳化劑，如磷脂等。
[0055]所述阿霉素為脂溶性的阿霉素，可按照如下方法獲取:將水溶性鹽酸阿霉素溶解于有機溶劑中，加入鹽酸阿霉素2~5倍摩爾質(zhì)量的三乙胺進行中和，避光攪拌過夜，旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得到脂溶性的阿霉素。
[0056]所述有機溶劑為二氯甲烷、氯仿或乙醇，優(yōu)選為無水乙醇。
[0057](2)將配方比例的其他乳化劑及等滲調(diào)節(jié)劑均勻分散于超純水中，65°C至80°C保溫，獲得水相。
[0058](3) 65°C至80°C下，將水相逐滴添加到油相中，均勻混合后乳化，獲得初乳。
[0059]優(yōu)選的,使用磁力攪拌使得水相和油相均勻混合,磁力攪拌時間為5~15min ;采用高剪切的方法使得混合物乳化，高剪切速率為8000~13000rpm，剪切時間為I~3min。
[0060](4)65 °C至80°C下，將初乳高壓均質(zhì)，獲得納米乳。高壓均質(zhì)壓力為600~1200bar，循環(huán)次數(shù)為2~10次。
[0061](5)將納米 冷卻，除菌后獲得所述納米載藥系統(tǒng)。
[0062]一般，可將納米乳迅速置放于冰箱中冷卻，采用微孔濾膜過濾除菌，常用規(guī)格為0.45 μ m的微孔過濾膜。
[0063]本發(fā)明提供的阿霉素納米載藥系統(tǒng)，能應(yīng)用于制備抗原發(fā)性肝癌的藥物。
[0064]以人肝癌細(xì)胞H印G2為體外模型對阿霉素納米載藥系統(tǒng)的抗肝癌活性進行評價。結(jié)果顯示，與阿霉素溶液和單一阿霉素納米脂質(zhì)組合物相比，本發(fā)明提供的阿霉素納米載藥系統(tǒng)能夠顯著增強抗腫瘤細(xì)胞增殖的作用。
[0065]以小鼠原發(fā)性肝癌模型對阿霉素納米載藥系統(tǒng)抗原發(fā)性肝癌活性進行藥效學(xué)評價。結(jié)果顯示，阿霉素納米載藥系統(tǒng)對原發(fā)性肝癌具有明顯的協(xié)同治療效果，優(yōu)于聯(lián)合使用阿霉素與姜黃素的普通制劑以及單一阿霉素納米脂質(zhì)組合物。
[0066]以下為實施例:
[0067]實施例1
[0068]阿霉素納米載藥系統(tǒng)，按照質(zhì)量比例包括含阿霉素的活性成分1.5%、固體脂質(zhì)20%、液體脂質(zhì)20%、乳化劑5%以及等滲調(diào)節(jié)劑5%，余量為注射用水。
[0069]所述含阿霉素的活性成分為阿霉素與增敏劑1:10的混合物，所述增敏劑為姜黃素。
[0070]所述乳化劑中含有乳化劑總質(zhì)量10 %的聚乙二醇5000維生素E琥珀酸酯，所述乳化劑還含有乳化劑總質(zhì)量90%的聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物
[0071]所述固體脂質(zhì)包括固體脂質(zhì)總質(zhì)量100%的單硬脂酸甘油酯。
[0072]所述液體脂質(zhì)包括液體脂質(zhì)總質(zhì)量50%的亞油酸甘油酯和50%的肉豆蘧酸異丙酯。
[0073]所述等滲調(diào)節(jié)劑包括等滲調(diào)節(jié)劑總質(zhì)量100%的葡萄糖。
[0074]所述固體脂質(zhì)和液體脂質(zhì)在乳化劑和等滲調(diào)節(jié)劑的作用下形成納米顆粒，將所述含阿霉素的活性成分包裹在內(nèi)。所述納米顆粒粒徑在921.2nm，多分散指數(shù)ΗΠ0.48，含阿霉素的活性成分包封率65.3%。
[0075]實施例2
[0076]阿霉素納米載藥系統(tǒng)，按照質(zhì)量比例包括含阿霉素的活性成分0.02%、固體脂質(zhì)I %、液體脂質(zhì)0.2 %、乳化劑10%以及等滲調(diào)節(jié)劑0.5%，余量為注射用水。
[0077]所述含阿霉素的活性成分為阿霉素與增敏劑1:1的混合物，所述增敏劑為姜黃素。
[0078]所述乳化劑中含有乳化劑總質(zhì)量5%的聚乙二醇2000維生素E琥珀酸酯，所述乳化劑還含有乳化劑總質(zhì)量95%的聚山梨醇酯。
[0079]所述固體脂質(zhì)包括固體脂質(zhì)總質(zhì)量100%的硬脂酸。
[0080]所述液體脂質(zhì)包括液體脂質(zhì)總質(zhì)量100%的丙二醇單辛酸酯。
[0081 ] 所述等滲調(diào)節(jié)劑包括等滲調(diào)節(jié)劑總質(zhì)量100 %的甘油。
[0082]所述固體脂質(zhì)和液體脂質(zhì)在乳化劑和等滲調(diào)節(jié)劑的作用下形成納米顆粒，將所述含阿霉素的活性成分包裹在內(nèi)。所述納米顆粒粒徑在245.6nm，多分散指數(shù)ΗΠ0.164，含阿霉素的活性成分包封率90.1 %。
[0083]實施例3
[0084]阿霉素納米載藥系統(tǒng)，按照質(zhì)量比例包括含阿霉素的活性成分0.1 %、固體脂質(zhì)4%、液體脂質(zhì)0.8%、 乳化劑4%以及等滲調(diào)節(jié)劑2%，余量為注射用水。
[0085]所述含阿霉素的活性成分為阿霉素與增敏劑2:1的混合物，所述增敏劑為姜黃素。
[0086]所述乳化劑中含有乳化劑總質(zhì)量25 %的聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯，所述乳化劑還含有乳化劑總質(zhì)量75 %的聚氧乙烯氫化蓖麻油。
[0087]所述固體脂質(zhì)包括固體脂質(zhì)總質(zhì)量100%的棕櫚酸硬脂酸甘油酯。
[0088]所述液體脂質(zhì)包括液體脂質(zhì)總質(zhì)量100%的辛酸/癸酸甘油三酯。
[0089]所述等滲調(diào)節(jié)劑包括等滲調(diào)節(jié)劑總質(zhì)量100 %的甘油。
[0090]所述固體脂質(zhì)和液體脂質(zhì)在乳化劑和等滲調(diào)節(jié)劑的作用下形成納米顆粒，將所述含阿霉素的活性成分包裹在內(nèi)。所述納米顆粒粒徑在110.5nm，多分散指數(shù)roi0.231，含阿霉素的活性成分包封率93.6%。
[0091]實施例4
[0092]阿霉素納米載藥系統(tǒng)，按照質(zhì)量比例包括含阿霉素的活性成分0.1 %、固體脂質(zhì)
3%、液體脂質(zhì)I %、乳化劑3.5%以及等滲調(diào)節(jié)劑2.5%，余量為注射用水。
[0093]所述含阿霉素的活性成分為阿霉素與增敏劑1:1的混合物，所述增敏劑為姜黃素。
[0094]所述乳化劑中含有乳化劑總質(zhì)量0%的聚乙二醇維生素E琥珀酸酯，所述乳化劑還含有乳化劑總質(zhì)量75%的聚氧乙烯氫化蓖麻油和25%的大豆磷脂。
[0095]所述固體脂質(zhì)包括固體脂質(zhì)總質(zhì)量100%的山崳酸甘油脂。
[0096]所述液體脂質(zhì)包括液體脂質(zhì)總質(zhì)量100%的亞油酸甘油酯。
[0097]所述等滲調(diào)節(jié)劑包括等滲調(diào)節(jié)劑總質(zhì)量100 %的甘油。
[0098]所述固體脂質(zhì)和液體脂質(zhì)在乳化劑和等滲調(diào)節(jié)劑的作用下形成納米顆粒，將所述含阿霉素的活性成分包裹在內(nèi)。所述納米顆粒粒徑在90.4nm，多分散指數(shù)ΗΠΟ.223，含阿霉素的活性成分包封率96.5%。
[0099]實施例5
[0100]阿霉素納米載藥系統(tǒng)，按照質(zhì)量比例包括含阿霉素的活性成分0.1 %、固體脂質(zhì)2%、液體脂質(zhì)0.1 %、乳化劑I %以及等滲調(diào)節(jié)劑1.5%，余量為注射用水。
[0101]所述含阿霉素的活性成分為阿霉素與增敏劑1:2的混合物，所述增敏劑為姜黃素。
[0102]所述乳化劑中含有乳化劑總質(zhì)量0%的聚乙二醇維生素E琥珀酸酯，所述乳化劑還含有乳化劑總質(zhì)量100%的聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。
[0103]所述固體脂質(zhì)包括固體脂質(zhì)總質(zhì)量60%的棕櫚酸硬脂酸甘油酯和40%的單硬脂酸甘油酯所述液體脂質(zhì)包括液體脂質(zhì)總質(zhì)量100%的辛酸/癸酸三甘油脂。
[0104]所述等滲調(diào)節(jié)劑包括等滲調(diào)節(jié)劑總質(zhì)量100%的氯化鈉。
[0105]所述固體脂質(zhì)和液體脂質(zhì)在乳化劑和等滲調(diào)節(jié)劑的作用下形成納米顆粒，將所述含阿霉素的活性成分包裹在內(nèi)。所述納米顆粒粒徑在98.8nm，多分散指數(shù)ΗΠ0.216，含阿霉素的活性成分包封率92.1 %。
[0106]實施例6
[0107]阿霉素納米載藥系統(tǒng)，按照質(zhì)量比例包括含阿霉素的活性成分0.5%、固體脂質(zhì)6%、液體脂質(zhì)5%、乳化劑20%以及等滲調(diào)節(jié)劑3%，余量為注射用水。
[0108]所述含阿霉素的活性成分為阿霉素與增敏劑2:1的混合物，所述增敏劑為姜黃
素。
[0109]所述乳化劑中含有乳化劑總質(zhì)量25 %的聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯，所述乳化劑還含有乳化劑總質(zhì)量75 %的聚氧乙烯氫化蓖麻油。
[0110]所述固體脂質(zhì)包括固體脂質(zhì)總質(zhì)量100%的山崳酸甘油酯。
[0111]所述液體脂質(zhì)包括液體脂質(zhì)總質(zhì)量100%的棕櫚酸異丙酯。
[0112]所述等滲調(diào)節(jié)劑包括等滲調(diào)節(jié)劑總質(zhì)量100 %的氯化鈉。
[0113]所述固體脂質(zhì)和液體脂質(zhì)在乳化劑和等滲調(diào)節(jié)劑的作用下形成納米顆粒，將所述含阿霉素的活性成分包裹在內(nèi)。所述納米顆粒粒徑在56.4nm，多分散指數(shù)ΗΠΟ.243，含阿霉素的活性成分包封率92.5%。
[0114]實施例7
[0115]阿霉素納米載藥系統(tǒng)，按照質(zhì)量比例包括含阿霉素的活性成分0.7%、固體脂質(zhì)
4%、液體脂質(zhì)I %、乳化劑0.5%以及等滲調(diào)節(jié)劑0.1 %，余量為注射用水。
[0116]所述含阿霉素的活性成分為阿霉素與增敏劑10:1的混合物，所述增敏劑為姜黃素。
[0117]所述乳化劑中含有乳化劑總質(zhì)量0%的聚乙二醇維生素E琥珀酸酯，所述乳化劑還含有乳化劑總質(zhì)量80 %的聚山梨醇和20 %的大豆磷脂
[0118]所述固體脂質(zhì)包括固體脂質(zhì)總質(zhì)量40%的單硬脂酸甘油酯和60%的棕櫚酸硬脂酸甘油酯
[0119]所述液體脂質(zhì)包括液體脂質(zhì)總質(zhì)量100%的油酸。
[0120]所述等滲調(diào)節(jié)劑包括等滲調(diào)節(jié)劑總質(zhì)量100%的果糖。
[0121]所述固體脂質(zhì)和液體脂質(zhì)在乳化劑和等滲調(diào)節(jié)劑的作用下形成納米顆粒，將所述含阿霉素的活性成分包裹在內(nèi)。所述納米顆粒粒徑在415.7nm，多分散指數(shù)ΗΠΟ.346，含阿霉素的活性成分包封率75.3%。
[0122]實施例8[0123]實施例1中的阿霉素載藥系統(tǒng)，其制備方法包括以下步驟:
[0124](I)將配方比例的含阿霉素的活性成分、固體脂質(zhì)、液體脂質(zhì)及脂溶性乳化劑均勻分散于乙醇中，65°C蒸干有機溶劑，獲得油相，維持溫度。
[0125]所述阿霉素為脂溶性的阿霉素，可按照如下方法獲取:將水溶性鹽酸阿霉素溶解于二氯甲烷中，加入鹽酸阿霉素三倍摩爾量的三乙胺進行中和，避光攪拌過夜，旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得到脂溶性的阿霉素。
[0126](2)將配方比例的其他乳化劑及等滲調(diào)節(jié)劑均勻分散于超純水中，65°C保溫，獲得水相。
[0127](3) 65°C下，將水相逐滴添加到油相中，均勻混合后乳化，獲得初乳。
[0128]使用磁力攪拌使得水相和油相均勻混合，磁力攪拌時間為IOmin ;采用高剪切的方法使得混合物乳化，高剪切速率為lOOOOrpm，剪切時間為2min。
[0129](4) 65°C下，將初乳高壓均質(zhì)，獲得納米乳。高壓均質(zhì)壓力為1200bar，循環(huán)次數(shù)為2次。
[0130](5)將納米冷卻，除菌后獲得所述納米載藥系統(tǒng)。
[0131]將納米乳迅 速置放如冰箱中冷卻，冰箱溫度4°C，采用微孔濾膜過濾除菌，常用規(guī)格為0.45 μ m的微孔過濾膜。
[0132]激光粒度儀測得的阿霉素載藥系統(tǒng)的粒徑分布如圖1所示，電鏡照片如圖2所示。
[0133]實施例9
[0134]實施例6中的阿霉素載藥系統(tǒng)，其制備方法包括以下步驟:
[0135](I)將配方比例的含阿霉素的活性成分、固體脂質(zhì)、液體脂質(zhì)及脂溶性乳化劑均勻分散于二氯甲烷中，80°C蒸干有機溶劑，獲得油相，維持溫度。
[0136]所述阿霉素為脂溶性的阿霉素，可按照如下方法獲取:將水溶性鹽酸阿霉素溶解于二氯甲烷中，加入鹽酸阿霉素兩倍摩爾量的三乙胺進行中和，避光攪拌過夜，旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得到脂溶性的阿霉素。
[0137](2)將配方比例的其他乳化劑及等滲調(diào)節(jié)劑均勻分散于超純水中，80°C保溫，獲得水相。
[0138](3) 80°C下，將水相逐滴添加到油相中，均勻混合后乳化，獲得初乳。
[0139]使用磁力攪拌使得水相和油相均勻混合，磁力攪拌時間為5min ;采用高剪切的方法使得混合物乳化，高剪切速率為8000rpm，剪切時間為3min。
[0140](4)80°C下，將初乳高壓均質(zhì)，獲得納米乳。高壓均質(zhì)壓力為600bar，循環(huán)次數(shù)為10次。
[0141](5)將納米冷卻，除菌后獲得所述納米載藥系統(tǒng)。
[0142]將納米乳迅速置放如冰箱中冷卻，冰箱溫度4°C，采用微孔濾膜過濾除菌，常用規(guī)格為0.45 μ m的微孔過濾膜。
[0143]實施例10
[0144]實施例7中的阿霉素載藥系統(tǒng)，其制備方法包括以下步驟:
[0145](I)將配方比例的含阿霉素的活性成分、固體脂質(zhì)、液體脂質(zhì)及脂溶性乳化劑均勻分散于氯仿中，75°C蒸干有機溶劑，獲得油相，維持溫度。
[0146]所述阿霉素為脂溶性的阿霉素，可按照如下方法獲取:將水溶性鹽酸阿霉素溶解于二氯甲烷中，加入鹽酸阿霉素五倍摩爾質(zhì)量的三乙胺進行中和，避光攪拌過夜，旋轉(zhuǎn)蒸干溶劑，得到脂溶性的阿霉素。
[0147](2)將配方比例的其他乳化劑及等滲調(diào)節(jié)劑均勻分散于超純水中，75°C保溫，獲得水相。
[0148](3) 75°C下，將水相逐滴添加到油相中，均勻混合后乳化，獲得初乳。
[0149]使用磁力攪拌使得水相和油相均勻混合，磁力攪拌時間為15min ;采用高剪切的方法使得混合物乳化，高剪切速率為13000rpm，剪切時間為lmin。
[0150](4) 75°C下，將初乳高壓均質(zhì)，獲得納米乳。高壓均質(zhì)壓力為900bar，循環(huán)次數(shù)為6次。
[0151](5)將納米冷卻，除菌后獲得所述納米載藥系統(tǒng)。
[0152]將納米乳迅速置放如冰箱中冷卻，冰箱溫度4°C，采用微孔濾膜過濾除菌，常用規(guī)格為0.45 μ m的微孔過濾膜。
[0153]實施例11
[0154]空白脂質(zhì)納米粒的制備
[0155]根據(jù)實施例4的 處方組成及制備工藝，不加藥物，制備空白脂質(zhì)納米粒，粒徑為93.lnm, PDI 為 0.221。
[0156]實施例12
[0157]阿霉素納米脂質(zhì)組合物的制備
[0158]根據(jù)實施例4的處方組成及制備工藝，不加姜黃素，制備阿霉素納米脂質(zhì)組合物，粒徑為 92.5nm, PDI 為 0.218。
[0159]實施例13
[0160]阿霉素納米載藥系統(tǒng)包封率測定
[0161]取阿霉素納米載藥系統(tǒng)，采用超濾離心法測定阿霉素與姜黃素的包封率。測定方法為:取阿霉素納米載藥系統(tǒng)，加入超濾離心管(Millipore，MWC010000)中，離心，測定超濾液中阿霉素與姜黃素的含量，記為Wl ;另取阿霉素納米載藥系統(tǒng)，加甲醇破乳，離心，測定上清液中阿霉素與姜黃素的濃度，計算阿霉素、姜黃素的含量，記為W。按照以下公式計算包封率(Entrapment Efficacy, EE):
W-Wl
[0162]EE=-X IQQ0 0
\v
[0163]其中，阿霉素含量采用熒光分光光度法測定，激發(fā)波長EX = 500nm,發(fā)射波長EM =556nm,阿霉素濃度在0.05~0.8 μ g/mL范圍內(nèi)時熒光強度與濃度線性關(guān)系良好；姜黃素含量采用高效液相色譜法測定，色譜條件為:流動相為乙腈:1%冰醋酸=50:50，流速ImL/min,檢測波長420nm，柱溫30°C，進樣體積20 μ L，姜黃素濃度在0.1~8 μ g/mL范圍內(nèi)時峰面積與濃度線性關(guān)系良好，方法的專屬性、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率等均符合中國藥典的相關(guān)規(guī)定。包封率測定結(jié)果如表1所示。
[0164]表1阿霉素與姜黃素的包封率
[0165]
【權(quán)利要求】
1.一種阿霉素納米載藥系統(tǒng)，其特征在于，按照質(zhì)量比例包括含阿霉素的活性成分0.02%~1.5%、固體脂質(zhì)I~20%、液體脂質(zhì)0.1~20%、乳化劑0.5%~20%以及等滲調(diào)節(jié)劑0.1%~5%，余量為注射用水；優(yōu)選地，按照質(zhì)量比例包括所述含阿霉素的活性成分0.1 %~0.7%、固體脂質(zhì)2%~6%、液體脂質(zhì)0.2%~5%、乳化劑1%~10%以及等滲調(diào)節(jié)劑0.5%~3%，余量為注射用水； 所述含阿霉素的活性成分為阿霉素與增敏劑1:10~10:1的混合物； 所述固體脂質(zhì)和液體脂質(zhì)在乳化劑的作用下形成納米顆粒，將所述含阿霉素的活性成分包裹在內(nèi)。
2.如權(quán)利要求1所述的納米載藥系統(tǒng)，其特征在于，所述納米顆粒粒徑在IOnm至1000nm之間，多分散指數(shù)PDI ≤ 0.50，含阿霉素的活性成分包封率≥60% ;優(yōu)選地，所述納米顆粒粒徑在50nm至400nm之間，多分散指數(shù)PDI ≤ 0.30，含阿霉素的活性成分包封率≥ 90%。
3.如權(quán)利要求1所述的納米載藥系統(tǒng)，其特征在于，所述增敏劑為姜黃素。
4.如權(quán)利要求3所述的納米載藥系統(tǒng)，其特征在于，所述含阿霉素的活性成分為阿霉素與姜黃素1:2~2:1的混合物。
5.如權(quán)利要求1至4任意一項所述的納米載藥系統(tǒng)，其特征在于，所述乳化劑中含有不超過乳化劑總質(zhì)量25%的聚乙二醇維生素E琥珀酸酯；優(yōu)選地，所述乳化劑還含有聚山梨醇酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯一聚氧丙烯嵌段共聚物、聚氧乙烯氫化蓖麻油、磷脂、短鏈醇中的一種或二種；更優(yōu)選為聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚氧乙烯一聚氧丙烯嵌段共聚物或聚山梨醇酯。
6.如權(quán)利要求1所述的納米載藥系統(tǒng)，其特征在于，所述固體脂質(zhì)為飽和脂肪酸、飽和脂肪酸的單、雙、三甘油酯、膽固醇、鯨蠟醇十六酸酯、鯨蠟醇棕櫚酸酯和/或微晶石蠟；優(yōu)選為單硬脂酸甘油酯、棕櫚酸硬脂酸甘油酯或山崳酸甘油酯；所述飽和脂肪酸優(yōu)選為月桂酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸、硬脂酸或山崳酸中的一種或兩種。
7.如權(quán)利要求1所述的納米載藥系統(tǒng)，其特征在于，所述液體脂質(zhì)為肉豆蘧酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、辛酸/癸酸三甘油酯、亞油酸甘油酯、丙二醇單辛酸酯、油酸、大豆油或液體石蠟；優(yōu)選為辛酸/癸酸三甘油酯、亞油酸甘油酯或丙二醇單辛酸酯。
8.如權(quán)利要求1所述的納米載藥系統(tǒng)，其特征在于，所述等滲調(diào)節(jié)劑為氯化鈉、葡萄糖、甘油、果糖或木糖醇；優(yōu)選為甘油。
9.如權(quán)利要求1至8所述的阿霉素納米載藥系統(tǒng)的制備方法，包括以下步驟: (1)將配方比例的含阿霉素的活性成分、固體脂質(zhì)、液體脂質(zhì)及脂溶性乳化劑均勻分散于有機溶劑，65°C至80°C蒸干有機溶劑，獲得油相，維持溫度； (2)將配方比例的其他乳化劑及等滲調(diào)節(jié)劑均勻分散于超純水中，65°C至80°C保溫，獲得水相； (3)65°C至80°C下，將水相逐滴添加到油相中，均勻混合后乳化，獲得初乳； (4)65°C至80°C下，將初乳高壓均質(zhì)，獲得納米乳； (5)將納米乳冷卻，除菌后獲得所述納米載藥系統(tǒng)。
10.如權(quán)利要求1至8任意一項所述的阿霉素納米載藥系統(tǒng)，應(yīng)用于制備抗原發(fā)性肝癌藥物。
【文檔編號】A61P35/00GK103976950SQ201410219295
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年5月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月21日
【發(fā)明者】劉衛(wèi), 趙小靜, 唐和斌, 楊祥良, 李玉桑, 萬江陵 申請人:華中科技大學(xué), 武漢百思凱瑞納米科技有限公司