一種從蘋果皮渣中提取具有抗齲齒功能性蘋果多酚的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及農(nóng)產(chǎn)品深加工【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種從蘋果皮渣中提取具有抗齲齒功能性蘋果多酚的方法。本發(fā)明的目的在于提供一種從蘋果皮渣中提取具有抗齲齒功能性蘋果多酚的方法，獲得具有純度高、功能活性高、高附加值的抗齲齒活性的蘋果多酚。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了蘋果皮渣的資源化再利用，以多酚提取的方式對(duì)蘋果皮渣資源進(jìn)行再利用，變廢為寶，達(dá)到了降低環(huán)境污染、促進(jìn)蘋果資源的精深加工、提高產(chǎn)品附加值的效果。
【專利說(shuō)明】一種從蘋果皮渣中提取具有抗齲齒功能性蘋果多酚的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)產(chǎn)品深加工【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種從蘋果皮渣中提取具有抗齲齒功能性蘋果多酚的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蘋果是我國(guó)產(chǎn)量最大的水果。蘋果含有多酚、果糖、有機(jī)酸、維生素和礦物質(zhì)等多種對(duì)人體有益的物質(zhì)，具有很好的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健作用。
[0003]蘋果多酚是蘋果中一類重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生理功能性成分。蘋果多酚具有抗氧化、抗過(guò)敏、抗齲齒、消臭、抗腫瘤、抗突變、抑制毒素、改善體內(nèi)脂質(zhì)代謝、美白等生理功能。由于蘋果多酚的功能性和安全性，廣泛用于食品、保健品、醫(yī)藥、化妝品等領(lǐng)域。蘋果多酚功能性產(chǎn)品具有廣闊的發(fā)展前景。
[0004]蘋果多酚比茶多酚具有更好的抗氧化能力和抗齲齒活性，蘋果縮合單寧的抗齲齒作用是茶葉中沒(méi)食子酸兒茶素沒(méi)食子酸酯的100倍。
[0005]蘋果不同的部位的多酚含量和種類不同。多數(shù)情況下，果皮中的總酚含量最高，果皮中的多酚(除綠原酸和表兒茶素外)遠(yuǎn)高于果肉中的含量。蘋果皮渣作為蘋果汁生產(chǎn)的副產(chǎn)物，除一部分作為飼料、肥料用之外，大部分都以生產(chǎn)廢料處理，利用率很低，造成資源浪費(fèi)的同時(shí)也導(dǎo)致嚴(yán)重 的環(huán)境污染。
[0006]目前，國(guó)內(nèi)對(duì)蘋果功能性的研究主要集中于抗氧化活性，國(guó)內(nèi)外關(guān)于其抗齲齒功能性的研究卻較少。關(guān)于蘋果多酚抗齲齒功能性的研究，僅有幾位日本學(xué)者做過(guò)相關(guān)的研究報(bào)道。有研究表明，蘋果縮合丹寧具有較強(qiáng)的GTFS抑制活性，遠(yuǎn)高于茶多酚。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種從蘋果皮渣中提取具有抗齲齒功能性蘋果多酚的方法，獲得具有純度高、功能活性高、高附加值的抗齲齒活性的蘋果多酚。
[0008]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案:
[0009]一種從蘋果皮渣中提取蘋果多酚的方法，包括如下步驟:
[0010]a.取除去果籽的干燥的蘋果皮渣為原料，將其破碎，電磨制粉至40~100目；
[0011]b.將磨制成的蘋果皮渣粉末與20%~80%的丙酮-水溶液按照1:4~1:12(w/V)的比例混合，在溫度為20~80°C的條件下，超聲萃取30~90min，離心之后，收集上清液，獲得蘋果多酚提取液；
[0012]c.采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫除蘋果多酚提取液中的丙酮，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的水浴溫度為35~55°C，脫除丙酮和部分水后得到蘋果多酚濃縮液；
[0013]d.將蘋果多酚濃縮液用水以1:3~1:7 (w/v)比例進(jìn)行稀釋后以0.2_2mL/min的流速在大孔樹(shù)脂上樣進(jìn)行分離，上樣后用去離子水水洗，再用40 % -80 %的乙醇-水溶液洗脫，收集流出液，對(duì)流出液旋蒸濃縮，獲得蘋果多酚粗分離濃縮液；
[0014]e.將蘋果多酚粗分離濃縮液用水以1:3~1:7 (w/v)比例進(jìn)行稀釋后在葡聚糖凝膠上樣進(jìn)行二次純化，上樣后先進(jìn)行水洗，再用20 %~80 %乙醇-水溶液洗脫，最后用30%~90%丙酮-水溶液洗脫，分別得到蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧的洗脫液；
[0015] f.將收集到的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧洗脫液分別進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(水浴35~55°C進(jìn)行，分別去除乙醇和丙酮)和冷凍干燥，分別得到純凈的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧粉末，獲得所述蘋果多酚。
[0016]在所述步驟b中，將磨制成的蘋果皮渣粉末與60%~80%的丙酮-水溶液按照1:8~1:11 (w/v)的比例混合,在溫度為55~70°C的條件下,超聲萃取60~70min,離心之后，收集上清液，獲得蘋果多酚提取液；
[0017]在所述步驟c中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的水浴溫度為35~45°C ；
[0018]在所述步驟d中，將蘋果多酚濃縮液用水以1:3~l:7(w/v)比例進(jìn)行稀釋后以
0.2-2mL/min的流速在大孔樹(shù)脂上樣進(jìn)行分離，上樣后用去離子水水洗，再用60%~70%的乙醇-水溶液洗脫，收集流出液，對(duì)流出液旋蒸濃縮，獲得蘋果多酚粗分離濃縮液；
[0019]在所述步驟e中，將蘋果多酚粗分離濃縮液用水以1:3~1:7 (w/v)比例進(jìn)行稀釋后在葡聚糖凝膠上樣進(jìn)行二次純化，上樣后先進(jìn)行水洗，再用55%~65%乙醇-水溶液洗脫，最后用65%~75%丙酮-水溶液洗脫，分別得到蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧的洗脫液；
[0020]在所述步驟f中，將收集到的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧洗脫液分別進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(水浴35~45°C進(jìn)行，分別去除乙醇和丙酮)和冷凍干燥，分別得到純凈的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧粉末，獲得所述蘋果多酚。
[0021]一種從蘋果皮渣中提取蘋果多酚的方法所制得的具有抗齲齒功能性的蘋果多酚。
[0022]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于:
[0023]本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了蘋果皮渣的資源化再利用，以多酚提取的方式對(duì)蘋果皮渣資源進(jìn)行再利用，變廢為寶，達(dá)到了降低環(huán)境污染、促進(jìn)蘋果資源的精深加工、提高產(chǎn)品附加值的效
果O
【具體實(shí)施方式】
[0024]下面，結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步地詳細(xì)地解釋本發(fā)明。
[0025]本發(fā)明的一種從蘋果皮渣中提取具有抗齲齒功能性蘋果多酚的方法，包括以下步驟:
[0026]a.以除去果籽的干燥的蘋果皮渣為原料，將其破碎，電磨制粉至40~100目，低溫保存?zhèn)溆谩?br> [0027]b.蘋果多酚的提取:將磨制成的蘋果皮渣粉末與20%~80%的丙酮-水溶液按照1:4~1:12 (w/v)的比例混合,在溫度為20~80°C的條件下,超聲萃取30~90min,離心之后，收集上清液，獲得蘋果多酚提取液。
[0028]c.蘋果多酚的濃縮:采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的方法脫除蘋果多酚提取液中的丙酮，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的水浴溫度為35~55°C，脫除丙酮和部分水后得到蘋果多酚濃縮液。
[0029]d.蘋果多酚的分離:將蘋果多酚濃縮液用水以1:3~l:7(w/v)比例進(jìn)行稀釋后，以0.2-2ml/min的流速在大孔樹(shù)脂上樣進(jìn)行分離，上樣后用去離子水水洗，再用40% -80%的乙醇-水溶液洗脫，收集流出液，對(duì)流出液旋蒸濃縮(去除乙醇)，獲得蘋果多酚粗分離濃縮液。
[0030]e.蘋果多酚的二次純化:蘋果多酚粗分離濃縮液用水以1:3~1:7 (w/v)比例進(jìn)行稀釋后，在葡聚糖凝膠上樣進(jìn)行二次純化，上樣后進(jìn)行水洗后，再用20 %~80 %乙醇-水溶液洗脫，最后用30%~90%丙酮-水溶液洗脫，分別得到蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧的洗脫液。
[0031]f.將收集到的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧洗脫液分別進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(水浴35~55°C進(jìn)行，分別去除乙醇和丙酮)和冷凍干燥，分別得到純凈的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧粉末，獲得所述蘋果多酚。
[0032]本發(fā)明的一種從蘋果皮渣中提取具有抗齲齒功能性蘋果多酚的進(jìn)一步的方法，包括以下步驟:
[0033]a.以除去果籽的干燥的蘋果皮渣為原料，將其破碎，電磨制粉至40~100目，低溫保存?zhèn)溆谩?br> [0034]b.蘋果多酚的提取:將磨制成的蘋果皮渣粉末與60%~80%的丙酮-水溶液按照1:8~1:11 (w/v)的比例混合,在溫度為55~70°C的條件下,超聲萃取60~70min,離心之后，收集上清液，獲得蘋果多酚提取液。
[0035]c.蘋果多酚的濃縮:采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的方法脫除蘋果多酚提取液中的丙酮，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的水浴溫度為35~45°C，脫除丙酮和部分水后得到蘋果多酚濃縮液。
[0036]d.蘋果多酚的分離:將蘋果多酚濃縮液用水以1:3~l:7(w/v)比例進(jìn)行稀釋后，以0.2-2mL/min的流速在大孔樹(shù)脂上樣進(jìn)行分離，上樣后用去離子水水洗，再用60%~70%的乙醇-水溶液洗脫，收集流出液，對(duì)流出液旋蒸濃縮，獲得蘋果多酚粗分離濃縮液。
[0037]e.蘋果多酚的二次純化:蘋果多酚粗分離濃縮液用水以1:3~1:7 (w/v)比例進(jìn)行稀釋后，在葡聚糖凝膠上樣進(jìn)行二次純化，上樣后進(jìn)行水洗后，再用55 %~65 %乙醇-水溶液洗脫，最后用65%~75%丙酮-水溶液洗脫，分別得到蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧的洗脫液。
[0038]f.將收集到的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧洗脫液分別進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(水浴35~45°C進(jìn)行，分別去除乙醇和丙酮)和冷凍干燥，分別得到純凈的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧粉末，獲得所述蘋果多酚。
[0039]實(shí)施例1
[0040]取干燥的蘋果皮渣除去果籽，將其破碎，電磨制粉至100目，_20°C低溫保存?zhèn)溆谩?br> [0041]按照1:6 (w/v)的料液比分別加入蘋果皮渣粉末和濃度為80%的丙酮-水溶液，在60°C超聲波萃取90min，得到含有蘋果多酚的提取液，離心(5000r/min、20min)，收集上清液。
[0042]采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的方式脫除上清液中的丙酮，進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，水浴溫度為55°C，得到蘋果多酚濃縮液。
[0043]將蘋果多酚濃縮液用水以1:6 (w/v)比例進(jìn)行稀釋，采用SepabeadsSP-850大孔樹(shù)脂以0.2mL/min的流速上樣，后用去離子水水洗，再用60%的乙醇-水溶液洗脫，收集流出液，對(duì)流出液旋蒸濃縮(40°C )，獲得蘋果多酚粗分離濃縮液。
[0044]將獲得的粗分離濃縮液用水以1:6 (w/v)稀釋，以Sephadex LH-20葡聚糖凝膠上樣進(jìn)行二次純化，上樣后進(jìn)行水洗，再用80%乙醇-水溶液和90%丙酮-水溶液洗脫，分別得到蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧的洗脫液。
[0045]將收集到的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(水浴溫度35°C，分別去除乙醇和丙酮)和冷凍干燥，分別得到純凈的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧粉末，獲得所述蘋果多酚。
[0046]實(shí)施例2
[0047]取干燥的蘋果皮渣除去果籽，將其破碎，電磨制粉至60目，_20°C低溫保存?zhèn)溆谩?br> [0048]按照1:12 (w/v)的料液比分別加入蘋果皮渣粉末和濃度為40%的丙酮-水溶液，在70°C超聲波萃取60min，得到含有蘋果多酚的提取液，離心(5000r/min、20min)，收集上清液。
[0049]采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的方式脫除上清液中的丙酮，進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，水浴溫度為45°C，得到蘋果多酚濃縮液。
[0050]將蘋果 多酚濃縮液用水以l:5(w/v)比例進(jìn)行稀釋，采用ADS-17大孔樹(shù)脂以
1.5mL/min的流速上樣，后用去離子水水洗，再用80%的乙醇-水溶液洗脫，收集流出液，對(duì)流出液旋蒸濃縮(40°C )，獲得蘋果多酚粗分離濃縮液。
[0051]將獲得的粗分離濃縮液用水以1:5 (w/v)稀釋，以Sephadex LH-20葡聚糖凝膠上樣進(jìn)行二次純化，上樣后進(jìn)行水洗，再用60%乙醇-水溶液和65%丙酮-水溶液洗脫分別得到蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧的洗脫液。
[0052]將收集到的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(水浴溫度55°C，分別去除乙醇和丙酮)和冷凍干燥，分別得到純凈的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧粉末，獲得所述蘋果多酚。
[0053]實(shí)施例3
[0054]取干燥的蘋果皮渣除去果籽，將其破碎，電磨制粉至40目，_20°C低溫保存?zhèn)溆谩?br> [0055]按照1:10 (w/v)的料液比分別加入蘋果皮渣粉末和濃度為75%的丙酮-水溶液，在70°C超聲波萃取30min，得到含有蘋果多酚的提取液，離心(5000r/min、20min)，收集上清液。
[0056]采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的方式脫除上清液中的丙酮，進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，水浴溫度為35°C，得到蘋果多酚濃縮液。
[0057]將蘋果多酚濃縮液用水以1:4(w/v)比例進(jìn)行稀釋采用AB-8大孔樹(shù)脂以2mL/min的流速上樣，后用去離子水水洗，再用65%的乙醇-水溶液洗脫，收集流出液，對(duì)流出液旋蒸濃縮(40°C )，獲得蘋果多酚粗分離濃縮液。
[0058]將獲得的粗分離濃縮液用水以1:4(w/v)稀釋，以Sephadex LH-20葡聚糖凝膠上樣進(jìn)行二次純化，上樣后進(jìn)行水洗，再用50%乙醇-水溶液和50%丙酮-水溶液洗脫分別得到蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧的洗脫液。
[0059]將收集到的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(水浴溫度40°C，分別去除乙醇和丙酮)和冷凍干燥，分別得到純凈的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧粉末，獲得所述蘋果多酚。
【權(quán)利要求】
1.一種從蘋果皮渣中提取蘋果多酚的方法，其特征在于:包括如下步驟: a.取除去果籽的干燥的蘋果皮渣為原料，將其破碎，電磨制粉至40~100目； b.將磨制成的蘋果皮渣粉末與20%~80%的丙酮-水溶液按照1:4~1:12(w/v)的比例混合，在溫度為20~80°C的條件下，超聲萃取30~90min，離心之后，收集上清液，獲得蘋果多酚提取液； c.采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫除蘋果多酚提取液中的丙酮，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的水浴溫度為35~55°C，脫除丙酮和部分水后得到蘋果多酚濃縮液； d.將蘋果多酚濃縮液用水以1:3~l:7(w/v)比例進(jìn)行稀釋后以0.2-2mL/min的流速在大孔樹(shù)脂上樣進(jìn)行分離，上樣后用去離子水水洗，再用40% -80%的乙醇-水溶液洗脫，收集流出液，對(duì)流出液旋蒸濃縮，獲得蘋果多酚粗分離濃縮液； e.將蘋果多酚粗分離濃縮液用水以1:3~1:7(w/v)比例進(jìn)行稀釋后在葡聚糖凝膠上樣進(jìn)行二次純化，上樣后先進(jìn)行水洗，再用20 %~80 %乙醇-水溶液洗脫，最后用30 %~90%丙酮-水溶液洗脫，分別得到蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧的洗脫液； f.將收集到的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧洗脫液分別進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(水浴35~55°C進(jìn)行，分別去除乙醇和丙酮)和冷凍干燥，分別得到純凈的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧粉末，獲得所述蘋果多酚。
2.如權(quán)利要求1所述的一種從蘋果皮渣中提取蘋果多酚的方法，其特征在于: 在所述步驟b中，將磨制成的蘋果皮渣粉末與60 %~80 %的丙酮-水溶液按照1:8~1: 11 (w/v)的比例混合,在溫度為55~70 °C的條件下,超聲萃取60~70min,離心之后，收集上清液，獲得蘋果多酚提取液； 在所述步驟c中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的水浴溫度為35~45°C ； 在所述步驟d中，將蘋果多酚濃縮液用水以1:3~l:7(w/v)比例進(jìn)行稀釋后以0.2-2mL/min的流速在大孔樹(shù)脂上樣進(jìn)行分離，上樣后用去離子水水洗，再用60%~70%的乙醇-水溶液洗脫，收集流出液，對(duì)流出液旋蒸濃縮，獲得蘋果多酚粗分離濃縮液； 在所述步驟e中，將蘋果多酚粗分離濃縮液用水以1:3~1:7 (w/v)比例進(jìn)行稀釋后在葡聚糖凝膠上樣進(jìn)行二次純化，上樣后先進(jìn)行水洗，再用55 %~65 %乙醇-水溶液洗脫，最后用65%~75%丙酮-水溶液洗脫，分別得到蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧的洗脫液； 在所述步驟f中，將收集到的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧洗脫液分別進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(水浴35~45°C進(jìn)行，分別去除乙醇和丙酮)和冷凍干燥，分別得到純凈的蘋果水解單寧和蘋果縮合單寧粉末，獲得所述蘋果多酚。
3.—種如權(quán)利要求1或2所述的從蘋果皮渣中提取蘋果多酚的方法所制得的具有抗齲齒功能性的蘋果多酚。
【文檔編號(hào)】A61K36/73GK103948706SQ201410206893
【公開(kāi)日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2014年5月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月16日
【發(fā)明者】李景明, 倪元穎, 滿媛, 楊薇, 白變霞 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)