一種能夠提高穩(wěn)定性和口服療效的用于預防血栓形成和溶栓的納豆激酶組合物的制作方法【專利摘要】本發(fā)明提供一種能夠提高穩(wěn)定性和口服療效的用于預防血栓形成和溶栓的納豆激酶組合物，其特征在于，含有納豆激酶和磷脂酰絲氨酸。所述納豆激酶與磷脂酰絲氨酸的重量比為100∶1-100∶1000，優(yōu)選100∶1-100∶100.進一步優(yōu)選100∶3-100∶30。【專利說明】一種能夠提高穩(wěn)定性和口服療效的用于預防血栓形成和溶栓的納豆激酶組合物[0001]【
技術領域：
】:本發(fā)明涉及一種高效吸收的納豆激酶制品，尤其涉及一種用于預防血栓形成和溶栓的納豆激酶組合物及其制造方法?！?br>背景技術：
】:[0002]納豆激酶是一種枯草桿菌蛋白激酶，是在納豆發(fā)酵過程中由納豆枯草桿菌(BacilIussubtilislnatto)產(chǎn)生的一種絲氨酸蛋白酶,具有溶解血栓，降低血粘度,改善血液循環(huán)，軟化和增加血管彈性等作用。[0003]20世紀80年代，在美國從事血栓研究的HiroyukiSumi(須見洋行)在各種天然產(chǎn)物中尋找抗血栓新物質(zhì)時發(fā)現(xiàn)，納豆粘性物質(zhì)的提取物具有極強的溶解人工血栓能力，并從中分離出此種物質(zhì)為絲氨酸蛋白酶，即納豆激酶(Nattokinase,NK)(Sumi,H.,etal.,Anovelfibrinolyticenzyme(nattokinase)inthevegetablecheeseNatto；atypicalandpopularsoybeanfoodintheJapanesediet.CellularandMolecularLifeSciences，1987.43(10):p.1110-1111.)。1995年，F(xiàn)ujita等報道了NK對大鼠頸動脈血管內(nèi)皮細胞損傷所形成血栓的溶解作用，使動脈血流恢復率高達62.0%，而纖溶酶只有15.8%，彈性蛋白酶沒有任何恢復(Fujita，M.，etal.，Thrombolyticeffectofnattokinaseonachemicallyindueedthrombosismodelinrat.Bio1gical&pharmaceuticalbulletin，1995.18(10):p.1387.)。段智變等發(fā)現(xiàn)，頸動脈血栓模型家兔中，十二指腸內(nèi)注射NK高劑量(4500IU*kg—O、低劑量(2500IU.kg—O和生理鹽水,給藥后1-1.5h內(nèi)，相比于生理鹽水組，NK高劑量組的凝血時間、凝血酶原時間、凝血酶時間與活化的部分凝血活酶時間均顯著延長，而低劑量組只有凝血酶時間顯著延長；給藥后2h，NK高劑量組的優(yōu)球蛋白溶解時間和纖維蛋白原含量顯著降低，纖維蛋白降解產(chǎn)物含量明顯增高(段智變，江漢湖，等.納豆激酶粗制液對家兔溶血栓作用及其機制研究.營養(yǎng)學報，2003.25(001):p.46-51.)。在人體口服NK試驗中發(fā)現(xiàn)，使用者優(yōu)球蛋白的纖溶活性提高，在第4天達到最高值,并維持到第8天(Kumada,K.,T.0nga,andH.Hoshino,Theeffectofnattopossessingahighfibrinolyticactivityinhumanplasma.1gakutaSeibutsugaku,1994.128(3):p.117-119.)。最近，Kim等報道20-80歲高血壓患者口服NK膠囊(2000FU/天)8周后，舒張壓和收縮壓均較對照組(服用安慰劑)明顯降低(Kim，J.Y.,etal.,Effectsofnattokinaseonbloodpressure:arandomized,controlledtrial.Hypertensionresearch,2008.31(8):1583-1588.)。[0004]經(jīng)過20余年的研究發(fā)現(xiàn)，NK具有多種藥理作用，可以將其作為一種預防和治療冠心病、心絞痛、腦中風、老年癡呆和關節(jié)炎等疾病，因此產(chǎn)生了許多專利，如預防老年性癡呆的專利(ΝΑΤΤ0ΚINASEFORDEGRADINGANDREDUCINGAMYLOIDFIBRILS-ASSOCIATEDWITHALZHEIMERJSDISEASE,PRIONDISEASESANDOTHERAMYL0ID0SESUS8,137，666B2)、降低病人全血粘度的專利(Nattokinaseforreducingwholebloodviscosity,W02007002572A3)、抑制血小板聚集專利(JP2003357848，US20040043015Processforinhibitingplateletaggregation)、關節(jié)炎等等(Ant1-1nflammatoryagentUS8,017,162)、US7,951,844Tranquilizer鎮(zhèn)定劑andfunctionalfood;有專利申請(納豆激酶在制備腦保護劑類藥物中的用途CN101601859B);將NK與其它酶類物質(zhì)組合治療眼病(老年性黃斑變性、缺血性增值性視網(wǎng)膜病)(眼病的治療CN101505790A；W02006025276)還有降低血糖和血液總膽固醇和甘油三酯等方面的用途(JP2004115434)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)保護劑(CN101601859B)[0005]一般而言，蛋白質(zhì)/多肽類藥物直接口服，容易被胃酸/胃腸道蛋白酶破壞而失去生物學活性。蛋白質(zhì)/多肽類藥物口服吸收需要克服三大屏障:酶/酸的降解、黏液層的擴散屏障以及粘膜的吸收屏障。納豆激酶口服給藥存在同樣問題，在pH<5的情況下，活性逐漸喪失，暴露在胃酸(PH1.23)的環(huán)境下lh，幾乎完全失活。雖有文章報道通過聚谷氨酸微膠囊技術包裹納豆激酶，但未解決胃酸失活的問題(Hsieh，Cff,LuWC,Hsieh,WC,HuangYP,LaiCH,KoWC.1mprovementofthestabilityofnattokinaseusing[gamma]-polyglutamicacidasacoatingmaterialformicroencapsulation.LffT-FoodScienceandTechnology,2009，42:144-149)。有文獻報道，通過甲基丙稀酸甲基丙烯酸甲酯聚合物包衣技術制備納豆激酶腸溶片劑，解決了納豆激酶片劑胃酸失活的問題(LawD,ZhangZ.Stabilizationandtargetdeliveryofnattokinaseusingcompressioncoating.DrugDevIndPharm,2007,33:495-503)。也有專利將NK制備成微囊(納豆激酶純化工藝及微囊制劑工藝CN1309826C;納豆激酶純化工藝及微囊制劑工藝CN100500839C)，或者加入纖維素酸酯類、丙烯酸樹脂類、聚乙烯醇酞酸酯、甲基丙烯酸共聚物、蟲膠和玉米朊等腸溶材料保護NK(—種納豆激酶組合物及其制備方法CN101862447A；一種納豆激酶腸溶膠囊及其制備方法CN103238829A);或者制備環(huán)糊精包合物(張云峰，納豆激酶羥丙基-β-環(huán)糊精包合物的制備和鑒定.廣東化工，2011.38(001):ρ.10-10.張云峰，等.專利.CN201010287914.2一種制備納豆激酶環(huán)糊精包合物的方法CN102406942A)；制備脂質(zhì)體(張霞，尹宗寧，王怡鑫，納豆激酶脂質(zhì)體的制備及其體外釋放.中國藥學雜志，2007.42(4):ρ.279-282.);制備分別選取了兩種腸溶體系(海藻酸鈣膠囊和以CAP為包衣的腸溶微丸體系)來制備納豆激酶腸溶制劑，均未達到理想效果。【
發(fā)明內(nèi)容】:[0006]針對上述技術問題，本發(fā)明的發(fā)明人通過潛心研究發(fā)現(xiàn)，若將磷脂酰絲氨酸(PS)與不同來源的納豆激酶NK(不同微生物、重組蛋白)組合使用時，能夠解決納豆激酶因口服而容易被胃酸/胃腸道蛋白酶破壞而失去生物學活性的技術問題。此外，本發(fā)明針對性解決不同來源的NK(不同微生物、重組蛋白)普遍存在的問題即口服吸收、熱/pH酸/酶的穩(wěn)定性低。[0007]本申請人:驚奇地首次發(fā)現(xiàn)，雖然磷脂酰絲氨酸本身沒有抗血栓的效果，但是磷脂酰絲氨酸能夠增加納豆激酶在胃酸中的穩(wěn)定性。解決了納豆激酶因口服而容易被胃酸/胃腸道蛋白酶破壞而失去生物學活性的技術問題，從而增加了納豆激酶的抗血栓效果。[0008]另外，還令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，通過進一步與金屬離子、分散劑、抗氧化劑、多聚陽離子物質(zhì)、琥珀酸酯(TPGS)類、低聚糖等等組合后，口服吸收效果進一步提高，并且耐酸、耐熱。作為藥物劑型可以實現(xiàn)噴霧干燥、粉末包衣和超臨界包衣等。[0009]本發(fā)明的目的在于提供一種能夠增加口服藥效的用于預防血栓形成和溶栓的納豆激酶組合物，其特征在于，含有納豆激酶和磷脂酰絲氨酸。作為添加成分還可以進一步含有選自抗氧化劑、金屬離子化合物、分散劑、多聚陽離子化合物和多元醇中的至少一種。[0010]另外，本發(fā)明的目的還在于提供一種納豆激酶組合物的制備方法，其特征在于，其至少包括如下工序:[0011]使納豆激酶溶解或分散于溶劑中制備納豆激酶溶液的工序；[0012]使磷脂酰絲氨酸溶解或分散于有機溶劑中制備磷脂酰絲氨酸溶液的工序；以及使所述納豆激酶溶液與磷脂酰絲氨酸溶液混合的工序。[0013]最后，本發(fā)明的目的還在于提供一種用于預防血栓形成和溶栓的納豆激酶組合物，其特征在于，包括納豆激酶制劑和磷脂酰絲氨酸制劑，所述納豆激酶制劑和/或磷脂酰絲氨酸制劑中還可以進一步含有選自抗氧化劑、金屬離子化合物、分散劑、多聚陽離子化合物和多元醇中的至少一種。[0014]通過本發(fā)明的上述技術方案，與現(xiàn)有技術的納豆激酶制劑相比，能夠顯著提高納豆激酶的口服吸收和穩(wěn)定性，同時能夠提高納豆激酶的口服藥效。本發(fā)明涉及一種用于預防血栓形成和溶栓的納豆激酶組合物，其特征在于，含有納豆激酶和納豆激酶吸收促進劑，所述納豆激酶吸收促進劑為磷脂酰絲氨酸。[0015]本發(fā)明提供如下技術方案:[0016]1.一種用于預防血栓形成和溶栓的納豆激酶組合物，其特征在于，含有納豆激酶和納豆激酶吸收促進劑，所述納豆激酶吸收促進劑為磷脂酰絲氨酸。[0017]2.根據(jù)權利要求1所述的納豆激酶組合物，其特征在于，還進一步含有抗氧劑和/或金屬離子化合物。[0018]3.根據(jù)權利要求1或2所述的納豆激酶組合物，其特征在于，還進一步含有選自分散劑、多聚陽離子化合物和多元醇中至少一種。[0019]4.根據(jù)權利要求1中任一項所述的納豆激酶組合物，其特征在于，所述納豆激酶與磷脂酰絲氨酸的重量比為100:1-100:1000，優(yōu)選100:1-100:100.進一步優(yōu)選100:3-100:30。[0020]5.根據(jù)權利要求2所述的納豆激酶組合物，其特征在于，所述抗氧劑選自亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、焦亞硫酸鹽、二硫代氨基甲酸鹽、胱氨酸、半胱氨酸、谷胱甘肽、硫辛酸、抗壞血酸、抗壞血酸棕櫚酸酯、氫基香豆素、生育酚、沒食子酸丙酯、叔丁基對羥基茴香醚、二叔丁基對甲酚、去甲二氫愈創(chuàng)木酸、氮氣、氦氣；所述金屬離子化合物選自一價至六價離子化合物。[0021]6.根據(jù)權利要求6所述的納豆激酶組合物，其特征在于，所述金屬離子化合物選自一價、二價和三價的金屬陽離子，更優(yōu)選銀離子、鈣離子、鋅離子、鎂離子、硒離子、鐵離子化合物，最優(yōu)選化合物包括氯化鈣、碳酸鈣、磷酸鈣、磷酸氫鈣、檸檬酸鈣、谷氨酸鈣、氨基酸螯合鈣、葡萄糖酸鈣、果糖酸鈣、抗壞血酸鈣、氯化鋅、碳酸鋅、磷酸鋅、磷酸氫鋅、檸檬酸鋅、谷氨酸鋅、氨基酸螯合鋅、葡萄糖酸鋅、果糖酸鋅、抗壞血酸鋅、氯化鎂、硫酸鎂、有機硒鹽、無機硒鹽、氯化銅、硫酸銅、氯化鐵、硫酸亞鐵、富馬酸亞鐵、琥珀酸亞鐵、枸櫞酸鐵銨、蔗糖鐵，亞硒酸鈉。[0022]7.根據(jù)權利要求2所述的納豆激酶組合物，所述磷脂酰絲氨酸與金屬離子化合物的質(zhì)量比為100:0-100:1000。[0023]8.根據(jù)權利要求3-8中的任一項所述的納豆激酶組合物，其特征在于，所述分散劑選自維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)、泊洛沙姆類、乳清蛋白；所述多聚陽離子化合物選自聚賴氨酸、聚精氨酸，所述多元醇選自甘露醇、山梨醇、右旋糖酐、木糖醇、蔗糖、葡萄糖、低聚糖、海藻糖、寡聚糖、殼多糖。[0024]9.根據(jù)權利要求3所述的納豆激酶組合物，所述磷脂酰絲氨酸與分散劑的質(zhì)量比為100:0-100:100。[0025]10.根據(jù)權利要求2中所述的納豆激酶組合物，其特征在于，所述抗氧劑的用量占整個組合物的0.0-0.lw/w%。[0026]11.一種制劑，其含有權利要求1-11任一項所述的納豆激酶組合物，所述制劑為藥物制劑、保健品、功能食品、功能飲料或食品添加劑。[0027]12.權利要求1-11中任一項所述的納豆激酶組合物的制備方法，其特征在于，其至少包括如下工序:[0028]使納豆激酶溶解或分散于溶劑中制備納豆激酶溶液或分散液的工序；[0029]使磷脂酰絲氨酸溶解或分散于有機溶劑中制備磷脂酰絲氨酸溶液或分散液的工序；使所述納豆激酶溶液與磷脂酰絲氨酸溶液混合的工序、以及冷凍干燥的工序。[0030]13.一種用于預防血栓形成和溶栓的納豆激酶的納豆激酶組合物，其特征在于，包括納豆激酶制劑與納豆激酶吸收促進劑，所述納豆激酶吸收促進劑為磷脂酰絲氨酸制劑。[0031]14.根據(jù)權利要求14所述的納豆激酶組合物，其特征在于，所述納豆激酶制劑和/或磷脂酰絲氨酸制劑中還進一步含有選自抗氧劑、金屬離子化合物、分散劑、多聚陽離子化合物和多元醇中至少一種。[0032]15.一種納豆激酶吸收促進劑在制備納豆激酶抗血栓增效劑中的應用，所述納豆激酶吸收促進劑為磷脂酰絲氨酸。[0033]16.磷脂酰絲氨酸作為納豆激酶吸收促進劑的應用。[0034]通過本發(fā)明的上述技術方案，與現(xiàn)有技術的納豆激酶制劑相比，能夠顯著提高納豆激酶的口服吸收和穩(wěn)定性，同時能夠提高納豆激酶的口服藥效?！揪唧w實施方式】[0035]下面對本發(fā)明的【具體實施方式】進行詳細說明。[0036](I)磷脂酰絲氨酸(PS)[0037]作為本發(fā)明中使用的磷脂酰絲氨酸(PS)按照來源不同，磷脂酰絲氨酸實際上是一類化合物的總稱，包括各種不同脂肪羧酸鏈的PS。具體可以分為天然PS、半合成PS、全合成PS。天然PS例如可以舉出大豆PS、和腦PS。半合成來源的PS是指在天然來源的PS基礎上進行“氫化”而獲得的PS。全合成PS是通過人工合成手段得到。所述合成磷脂酰絲氨酸可以為例如二油?；字＝z氨酸(DOPS)及其鹽、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、二硬脂酰磷脂酰絲氨酸等。[0038]本發(fā)明的磷脂酰絲氨酸(PS)與納豆激酶的配合量，按照重量比計，優(yōu)選納豆激酶/磷脂酰絲氨酸的重量比為100:1-100:1000，優(yōu)選100:1-100:100.進一步優(yōu)選100:3-100:30。[0039]所述的納豆激酶與磷脂酰絲氨酸的重量比是以磷脂酰絲氨酸的實際含量計算獲得的。在實際應用過程中，為了商業(yè)化使用，可以采用市售的磷脂酰絲氨酸產(chǎn)品，其可以是具有一定含量的磷脂酰絲氨酸的商業(yè)化產(chǎn)品。[0040](2)抗氧劑[0041]本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)通過在本發(fā)明的組合物中添加抗氧劑，能夠進一步提高其穩(wěn)定性，從而提高口服藥效，推斷可能是由于抗氧劑提高了該組合物的物理化學穩(wěn)定性的緣故。[0042]作為本發(fā)明中使用的抗氧劑，可以使用通常用于藥物制劑中的抗氧劑。但是從提高本發(fā)明的口服藥效及穩(wěn)定性考慮，優(yōu)選亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、焦亞硫酸鹽、二硫代氨基甲酸鹽、胱氨酸、半胱氨酸、谷胱甘肽、硫辛酸、抗壞血酸、抗壞血酸棕櫚酸酯、氫基香豆素、生育酚、沒食子酸丙酯、叔丁基對羥基茴香醚、二叔丁基對甲酚、去甲二氫愈創(chuàng)木酸、氮氣、氦氣等。[0043]所述抗氧劑的使用量，優(yōu)選占整個組合物的0.0-0.lw/w%,進一步優(yōu)選0.01-0.08w/w%,進一步優(yōu)選0.03-0.06w/w%,最優(yōu)選0.04-0.06w/w%。[0044](3)金屬離子化合物[0045]本發(fā)明的發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)若在本發(fā)明的納豆激酶組合物中進一步添加金屬離子化合物，能夠進一步提高口服藥物的穩(wěn)定性和藥物療效。[0046]作為用于本發(fā)明的金屬離子化合物，可以舉出一價、二價和三價的金屬陽離子，從提高穩(wěn)定性和藥物療效出發(fā)，優(yōu)選銀離子、鈣離子、鋅離子、鎂離子、硒離子、鐵離子化合物，最優(yōu)選化合物包括氯化鈣、碳酸鈣、磷酸鈣、磷酸氫鈣、檸檬酸鈣、谷氨酸鈣、氨基酸螯合鈣、葡萄糖酸鈣、果糖酸鈣、抗壞血酸鈣、氯化鋅、碳酸鋅、磷酸鋅、磷酸氫鋅、檸檬酸鋅、谷氨酸鋅、氨基酸螯合鋅、葡萄糖酸鋅、果糖酸鋅、抗壞血酸鋅、氯化鎂、硫酸鎂、有機硒鹽、無機硒鹽、氯化銅、硫酸銅、氯化鐵、硫酸亞鐵、富馬酸亞鐵、琥珀酸亞鐵、枸櫞酸鐵銨、蔗糖鐵，亞硒酸納等。[0047]磷脂酰絲氨酸與金屬離子化合物的質(zhì)量比范圍為100:0-100:1000，優(yōu)選100:0.1-100:100，更有選100:0.5-100:50，更有選100:0.5-100:10。[0048](4)分散劑[0049]若在本發(fā)明的納豆激酶組合物中添加分散劑，能夠進一步提高口服藥物的穩(wěn)定性和藥物療效。[0050]所述分散劑可以使用藥物制劑中通常使用的分散劑，但是從提高本發(fā)明的穩(wěn)定性和療效來看，優(yōu)選維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)、泊洛沙姆類；所述多聚陽離子化合物選自聚賴氨酸、聚精氨酸，所述多元醇選自甘露醇、山梨醇、右旋糖酐、木糖醇、蔗糖、葡萄糖、低聚糖、海藻糖、寡聚糖、殼多糖、乳清蛋白等。[0051]磷脂酰絲氨酸與分散劑的質(zhì)量比范圍為100:0-100:100，優(yōu)選100:1-100:50。[0052](5)其他添加劑[0053]作為能夠用于本發(fā)明的納豆激酶組合物中的添加劑，除了上述所述的添加劑之外，在不影響本發(fā)明的藥物活性及穩(wěn)定性的前提下，還可以使用本領域常規(guī)的其它添加劑。[0054]從提高本發(fā)明納豆激酶組合物的口服藥效及穩(wěn)定性的觀點考慮，可以舉出多聚陽離子化合物、多元醇、GABA、紅曲等。[0055]作為多聚陽離子化合物，優(yōu)選聚賴氨酸、聚精氨酸，其使用量為納豆激酶與多聚陽離子化合物的質(zhì)量比范圍為100:0-100:1000[0056]作為多元醇，優(yōu)選為甘露醇、山梨醇、右旋糖酐、木糖醇、蔗糖、葡萄糖、低聚糖、海藻糖、寡聚糖、殼多糖、乳清蛋白、其使用量納豆激酶與多元醇的質(zhì)量比范圍為100:0-100:10000。[0057]為了提高NK的生物利用度，特別是減少NK在胃腸道中所受影響的因素，減少個體差異，確保療效。[0058](6)本發(fā)明所述的納豆激酶組合物的制備方法[0059]將PS和脂溶性抗氧化劑用有機溶媒溶液/或者分散在水中，加入NK水溶液(水溶性抗氧化劑)，攪拌混合，加入金屬鹽、分散劑(必要時含有甘露糖醇、木糖醇、山梨醇、蔗糖)，混合均勻，均質(zhì)機分散，冷凍干燥/噴霧干燥。[0060]然后，將所得到物料可以直接制成制劑(裝入膠囊、壓制片劑、腸溶包衣片劑等)，也可以通過粉末包衣，制備各種pH響應性包衣顆粒(如胃溶型、小腸溶解型、結(jié)腸溶解型)，再制備成顆粒劑、膠囊劑、片劑等。[0061]所述有機溶媒可以為叔丁醇、乙醇、氯仿、乙醚和異丙醚等。[0062]另外，如上所述，本發(fā)明目的還在于提供一種用于預防血栓形成和溶栓的納豆激酶組合物，其中所述的納豆激酶制劑和磷脂酰絲氨酸制劑，可以根據(jù)上述的制備方法分別制備，然后再服用時進行混合即可。[0063]需要說明的是，本發(fā)明所述的比例或含量除特殊說明外均以質(zhì)量為基準。[0064]與現(xiàn)有技術相比，按照本發(fā)明所述的處方和工藝將納豆激酶與磷脂酰絲氨酸、金屬鹽、抗氧化劑與分散劑組合在一起(按照本發(fā)明所述的處方和工藝將納豆激酶與磷脂酰絲氨酸組合在一起，或者將納豆激酶與磷脂酰絲氨酸、金屬鹽、抗氧化劑、分散劑及多聚陽離子等組合在一起)，可明顯提高NK的口服吸收和穩(wěn)定性，同時提高了納豆激酶的口服藥效。[0065]實施例[0066]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但這些實施例不能被理解為限制了本發(fā)明的范圍。[0067]實施例中所用各成分的簡稱如下:[0068]納豆激酶NK[0069]市售磷脂酰絲氨酸PS[0070]市售二油酰磷脂酰絲氨酸DOPS[0071]市售二油酰磷脂酰膽堿DOPC[0072]聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯TPGS[0073]在本發(fā)明中，所有的設備或原料等均可從市場獲得或是本行業(yè)常用的，實施例中采用的用量為按照市售產(chǎn)品的實際標示含量折算獲得的。[0074]實施例1NK與D0PS/D0PC組合物的比較[0075]按照比例(NK-PS；NK-PC比例100:10，w/w)將NK水溶液加入至PS或者PC叔丁醇水分散體系中，攪拌混勻，冷凍干燥。將所得冷凍干燥產(chǎn)物裝入大鼠專用腸溶小膠囊，得到試驗制劑。[0076]將30只wistar大鼠隨機分成5組，每組6只，各組分別為:[0077]1、空白組(Control)，灌服與給藥組數(shù)目相同的空膠囊。[0078]2、NK-PS膠囊低劑量組(NK-PS-L)，給藥劑量為IOkIU.kg—1。[0079]3、NK-PS膠囊高劑量組(NK-PS-H)，給藥劑量為20kIU.kg—1。[0080]4、NK-PC膠囊低劑量組(NK-PC-L)，給藥劑量為IOkIU.kg—1。[0081]5、NK-PC高劑量組(NK-PC-H)，給藥劑量為20kIU.kg—1。[0082]6、單獨PS組，劑量相當于NK-PS組中的PS量。[0083]7、單獨NK組，劑量相當于NK-PS高劑量組中的NK量。[0084]每日給藥I次，連續(xù)7日。給藥后第8天，將大鼠以3.5%水合氯醛進行腹腔麻醉(lml/100g),手術分離雙側(cè)頸總動脈。在雙側(cè)頸總動脈下各墊一條1.2cmX3.0cm的塑料薄片，用浸潰有50μIFeC13溶液(10%,w/w)的濾紙條(1.0cmX1.5cm)覆蓋雙側(cè)頸總動脈。20min后取下濾紙條，剪下變色區(qū)域并用生理鹽水洗凈，濾紙吸干水分后測量其長度，并用分析天平精密稱重。[0085]單位長度血栓的重量記為相對栓重(mg/cm)，并以下述公式計算抗栓率(％)。[0086]抗栓率％=(W對照-W給藥)/W對照X100%[0087]Ww-對照組平均相對栓重給藥-給藥組平均相對栓重。[0088]按上式計算抗栓率，并對結(jié)果進行統(tǒng)計學分析，結(jié)果見表1。[0089]表1不同給藥組抗栓率結(jié)果[0090]【權利要求】1.一種用于預防血栓形成和溶栓的納豆激酶組合物，其特征在于，含有納豆激酶和納豆激酶吸收促進劑，所述納豆激酶吸收促進劑為磷脂酰絲氨酸。2.根據(jù)權利要求1所述的納豆激酶組合物，其特征在于，還進一步含有抗氧劑和/或金屬離子化合物。3.根據(jù)權利要求1或2所述的納豆激酶組合物，其特征在于，還進一步含有選自分散劑、多聚陽離子化合物和多元醇中至少一種。4.根據(jù)權利要求1中任一項所述的納豆激酶組合物，其特征在于，所述磷脂酰絲氨酸選自天然磷脂酰絲氨酸、半合成磷脂酰絲氨酸、全合成磷脂酰絲氨酸。5.一種制劑，其含有權利要求1-4任一項所述的納豆激酶組合物，所述制劑為藥物制劑、保健品、功能食品、功能飲料或食品添加劑。6.權利要求1-4中任一項所述的納豆激酶組合物的制備方法，其特征在于，其至少包括如下工序:使納豆激酶溶解或分散于溶劑中制備納豆激酶溶液或分散液的工序；使磷脂酰絲氨酸溶解或分散于有機溶劑中制備磷脂酰絲氨酸溶液或分散液的工序；使所述納豆激酶溶液與磷脂酰絲氨酸溶液混合的工序、以及冷凍干燥的工序。7.一種用于預防血栓形成和溶栓的納豆激酶的納豆激酶組合物，其特征在于，包括納豆激酶制劑與納豆激酶吸收促進劑，所述納豆激酶吸收促進劑為磷脂酰絲氨酸制劑。8.根據(jù)權利要求7所述的納豆激酶組合物，其特征在于，所述納豆激酶制劑和/或磷脂酰絲氨酸制劑中還進一步含有選自抗氧劑、金屬離子化合物、分散劑、多聚陽離子化合物和多元醇中至少一種。9.一種納豆激酶吸收促進劑在制備納豆激酶抗血栓增效劑中的應用，所述納豆激酶吸收促進劑為磷脂酰絲氨酸。10.磷脂酰絲氨酸作為納豆激酶吸收促進劑的應用。【文檔編號】A61K47/24GK103948915SQ201410186878【公開日】2014年7月30日申請日期:2014年5月5日優(yōu)先權日:2014年5月5日【發(fā)明者】鄧吉林,吳瑩,吳寶珍,鄧紅玲申請人:德立唯（北京）生物科技有限公司