針對(duì)微小rna-155種子序列的反義寡核苷酸及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種針對(duì)微小RNA-155種子序列的反義寡核苷酸及應(yīng)用。本發(fā)明針對(duì)miR-155種子序列設(shè)計(jì)并合成8個(gè)堿基的微小反義核酸t(yī)-antimiR-155。通過t-antimiR-155轉(zhuǎn)染細(xì)胞試驗(yàn)顯示，t-antimiR-155靶向作用于RPMI-8266細(xì)胞株的miRNA-155，細(xì)胞生長(zhǎng)顯著受到抑制，細(xì)胞凋亡明顯增加。表明t-antimiR-155通過干擾miRNA-155表達(dá)可有效抑制淋巴瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，同時(shí)表明miRNA-155可能作為淋巴瘤基因治療的潛在靶點(diǎn)。t-antimiR-155可用于制備抗腫瘤的藥物，尤其是用于制備抗多發(fā)性骨髓瘤的藥物。
【專利說明】針對(duì)微小RNA-155種子序列的反義寡核苷酸及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種針對(duì)微小RNA-155 (microRNA,miRNA)種子序列的反義寡核苷酸(tiny ant1-mR-155, t-antimiR-155)及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma，麗)是惡性漿細(xì)胞克隆性增殖疾病，其發(fā)病機(jī)制涉及多個(gè)方面，包括染色體數(shù)量異常、易位、基因突變、表觀遺傳學(xué)改變以及在骨髓微環(huán)境的改變。多發(fā)性骨髓瘤發(fā)病呈現(xiàn)多步驟的過程，早期的染色體易位涉及到14號(hào)染色體(14q32.33)和4號(hào)染色體(4pl6.3)，結(jié)果導(dǎo)致四號(hào)染色體上相鄰的MMSET (multiplemyeloma SET protein)基因和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3 (fibroblast growth factorrec印tors，F(xiàn)GFR3)基因發(fā)生分離。隨著疾病的發(fā)展，將再次發(fā)生的染色體易位、相關(guān)基因的突變(涉及到K-RAS和N-RAS的激活)、復(fù)雜核型畸變、TP53和FGFR3基因的突變和CDKN2A和CDKN2C基因的失活。這些遺傳畸變將導(dǎo)致惡性漿細(xì)胞的粘附分子表達(dá)的改變，必然引起漿細(xì)胞和骨髓基質(zhì)的異常作用，進(jìn)而引起骨髓微環(huán)境(huBMM)中的漿細(xì)胞發(fā)生多級(jí)轉(zhuǎn)變，這些轉(zhuǎn)變對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、存活和耐藥性有著重要的影響。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)MM細(xì)胞中的miRNAs呈顯著的異常表達(dá)，并認(rèn)為這些異常表達(dá)的miRNAs與漿細(xì)胞發(fā)生的遺傳學(xué)畸變，特別是與染色體異常有密切的關(guān)聯(lián)。[0003]Al Masri 等(Al Masri A, Price-Troska T, Chesi M, et al.MicroRNA expressionanalysis in multiple myeloma [abstract].Blood, 2005; 106:1554)的研究發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞系和病人的骨髓樣本中，惡性的漿細(xì)胞miRNA的表達(dá)水平出現(xiàn)明顯的差異性，其中高表達(dá)的miRNAs 包括 miR_125b、miR_133a、miR-1 和 miR_124a。Bakkus M 等(Bakkus M, DujardinS，Van Riet I,De Waele M.MicroRNA expression analysis in multiple myelomaplasma cellsand cell lines by a quantitative real-time PCR approach[abstract].Blood.2007; 110:2472)通過Q-RT-PCR的方法，也檢測(cè)出MM病人以及細(xì)胞系中一些高表達(dá)的 miRNAs (let_7a, miR-16, miR-17_5p, miR-19b)。Picchiorri 等(Pichiorri F, Suh SS,Ladetto M, et al.MicroRNAs regulate critical genes associated with multiplemyeloma pathogenesis[J].Proceedings of the National Academy of Sciences,2008,I05(35):12885-12890 )還發(fā)現(xiàn)，miRNA-17 ~92 群(miRNA-19a,-19b -92)和 miRNA-106 ~25群(miRNA-106b-93和-25)在麗樣品中也呈現(xiàn)高表達(dá)的現(xiàn)象，miRNA-17~92通過靶向負(fù)性調(diào)節(jié)凋亡前體蛋白Bim的表達(dá),有助于骨髓瘤的形成。Lane SW等(Lane S W，ScaddenD T, Gilliland D G.The leukemic stem cell niche:current concepts and therapeuticopportunities [J], Blood, 2009，114(6): 1150-1157)對(duì) MM 樣品中異常表達(dá)的 miRNA 進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miRNA-21，miR-19a, miR-19b表達(dá)水平升高，并揭示這些miRNAs參與STAT3和IL-6的抗凋亡途徑。根據(jù)染色體易位和周期蛋白D(translocation/cyclin)TC分類,MartaLionetti 等(Lionetti M, Biasiolo M, Agnelli L, et al.1dentification of microRNAexpression patterns and definition of a microRNA/mRNA regulatory network indistinct molecular groups of multiple myeloma[J].Blood, 2009，114(25):e20_e26)通過多重分析發(fā)現(xiàn)MM在5個(gè)TC組中有26個(gè)miRNAs具有顯著性表達(dá)差異現(xiàn)象，其中值得注意的是在TC5組中有10中miRNAs相比于其它四個(gè)TC組有明顯的過表達(dá)的趨勢(shì)。在這10種過表達(dá)的miRNAs中，miR-155在麗中高水平表達(dá)首次被發(fā)現(xiàn)。目前已知miR-155在B細(xì)胞淋巴瘤中是一個(gè)重要的生物標(biāo)志物，有關(guān)miR-155在惡性漿細(xì)胞病中的功能還沒有文獻(xiàn)報(bào)道。由于漿細(xì)胞也是來源于B細(xì)胞，因此，miR-155在MM中是否具有類似B細(xì)胞淋巴瘤中癌基因功能，這引起我們極大的關(guān)注。
[0004]多發(fā)性骨髓瘤是起源于漿細(xì)胞的惡性克隆增殖性疾病，以血清或尿液中出現(xiàn)單克隆免疫球蛋白(M)以及多器官功能損害為特征，約占血液系統(tǒng)惡性腫瘤的10%。常規(guī)化療緩解率低，迄今難以治愈，因此，急需要尋找新的治療手段。
[0005]microRNA (miRNA)是一類內(nèi)源性，約22個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的非編碼小RNA，通過轉(zhuǎn)錄后負(fù)性調(diào)控機(jī)制在細(xì)胞過程中起著重要的作用。成熟的miRNA與靶mRNA3’非翻譯區(qū)(3’ untranslated region, 3’ UTR)配對(duì),從而抑制翻譯過程或降解革E mRNA。這些小分子RNA也可能在腫瘤形成過程中起重要作用，類似癌基因(oncomiRs)功能，因此oncomiRs被當(dāng)作為癌癥治療新的靶點(diǎn)。另一方面，在miRNA的5’端具有7~8個(gè)高度保守序列，被稱為種子序列。種子序列通過與其靶基因mRNA的3’ UTR進(jìn)行堿基完全互補(bǔ)配對(duì)，促進(jìn)靶基因mRNA降解或抑制mRNA翻譯，從而對(duì)靶基因的表達(dá)水平進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后的負(fù)性調(diào)控。針對(duì)miRNA種子序列反義核酸可以干擾miRNA與靶基因的配對(duì)，從而阻止miRNA發(fā)揮功能。相對(duì)于成熟miRNA而言，針對(duì)種子序列的反義核酸具有較分子量小，特異性強(qiáng)，轉(zhuǎn)染效率高等優(yōu)點(diǎn)，因而開始受到關(guān)注。
[0006]在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中，針對(duì)于mRNA的反義核苷酸已經(jīng)被廣泛用于評(píng)價(jià)靶基因的功能，同時(shí)有些反義核酸治療方法已經(jīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)，反義核苷酸藥物具有安全性高、易合成、直接抑制靶基因表達(dá)等優(yōu)點(diǎn)。miRNA反義核苷酸也是根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原理，化學(xué)或生物合成與特定的miRNA初級(jí)轉(zhuǎn)錄物、miRNA前體或成熟的miRNA互補(bǔ)的DNA或RNA序列。在細(xì)胞中miRNA反義DNA與靶miRNA形成miRNA-DNA雜化鏈，激活RNA酶H，引起miRNA的降解，從而達(dá)到基因控制和治療的目的。由于`成熟miRNA只有19~24個(gè)核苷酸，目前認(rèn)為用反義核苷酸抑制它們的功能是最好、也可能是唯一的方法。
[0007]miR-155位于21號(hào)染色體上，參與人體造血、炎癥和免疫等功能。作為一個(gè)oncomir, miR-155在多個(gè)腫瘤中高水平表達(dá)的，與白血病、乳腺癌、肺癌、胃癌的形成過程都有密切的關(guān)系。在華氏巨球蛋白血病(Waldenstrom macroglobulinemia, WM)中，失調(diào)的miR-155通過調(diào)節(jié)MAPK/ERK，PI3/AKT和核因子-kB信號(hào)通路，影響麗細(xì)胞生存和生長(zhǎng)；通過敲除miR-155，導(dǎo)致位于Gl期的WM細(xì)胞明顯降低，同時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞周期依賴激酶和細(xì)胞周期蛋白D下調(diào)并刺激P-53蛋白過表達(dá)。這意味著miR-155在WM細(xì)胞中通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白導(dǎo)致Gl期阻滯。到目前為止，miR-155在多發(fā)性骨髓瘤中的作用還沒有報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種針對(duì)微小RNA-155種子序列的反義寡核苷酸。
[0009]本發(fā)明的另一個(gè)目的在提供所述的針對(duì)微小RNA-155種子序列的反義寡核苷酸的應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):一種針對(duì)微小RNA-155種子序列的反義寡核苷酸(t-antimiR-155)，包含如下核苷酸序列:5' -AGCATTAA-3' (8bp)；
[0011]所述的反義寡核苷酸經(jīng)過全硫代修飾；
[0012]所述的針對(duì)微小RNA-155種子序列的反義寡核苷酸在制備治療多發(fā)性骨髓瘤藥物中的應(yīng)用。
[0013]本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果:
[0014](I)本發(fā)明為了闡述miR-155在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中的作用，針對(duì)miR-155的種子序列合成了 t-antimiR-155反義核酸，靶向作用于多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞RPM1-8266中的miR-155，探究t-antimiR-155對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的抑制效應(yīng)，為腫瘤基因治療尋找新的方法，同時(shí)也為針對(duì)miRNA種子序列的反義核酸藥物開發(fā)創(chuàng)造有利條件。
[0015](2)本發(fā)明針對(duì)miR-155的種子序列設(shè)計(jì)合成反義寡核苷酸t(yī)-antimiR-155,研究其對(duì)多發(fā)性骨髓瘤中的抑制作用。數(shù)據(jù)顯示t-antimiR-155經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，顯著抑制RPM1-8266細(xì)胞的增殖，其最佳作用濃度為0.4μ mol/L (圖2)。其他的研究揭示乳腺癌中miR-155的靶基因是F0X03a，涉及細(xì)胞的存活。同時(shí)，Linnstaedt S D等也證實(shí)在大細(xì)胞淋巴瘤和彌散性大B細(xì)胞淋巴性淋巴瘤中，抑制miR-155的水平也可以抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)，與我們的結(jié)果一致。
[0016](3)本研究首次采用了克隆形成實(shí)驗(yàn)來研究t-antimiR-155對(duì)RPM1-8266細(xì)胞惡性程度的影響，取得了顯著的結(jié)果，數(shù)據(jù)顯示t-antimiR-155可以降低RPM1-8266細(xì)胞集落形成的能力(圖3)，有效抑制RPM1-8266細(xì)胞的惡性進(jìn)展。細(xì)胞流式檢測(cè)結(jié)果顯示t-antimiR-155可以明顯的促進(jìn)RPM1-8266細(xì)胞的凋亡(圖4)。
[0017](4)反義核苷酸技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中也存在一些不容忽視的問題，比如高濃度藥物也有一定的毒副作用，與靶序列的親和力低，特別是藥物在體內(nèi)的易被降解以及向靶器官傳遞效果不佳制約了反義藥物開發(fā)的進(jìn)程等。針對(duì)miRNA種子序列的反義核酸只有7~8個(gè)核酸，由于分子量小，因而具有毒副作用低、易轉(zhuǎn)染、有利于藥物向靶器官傳遞。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，針對(duì)于成熟miRNA序列的反義核苷酸技術(shù)將會(huì)逐步完善，展示良好應(yīng)用前景。
[0018]本發(fā)明顯示miR-155在多發(fā)性骨髓瘤中具有重要的作用，t-antimiR-155顯著抑制多發(fā)性骨髓瘤的進(jìn)展，可用于多發(fā)性骨髓瘤的實(shí)驗(yàn)治療，有一定的藥物開發(fā)前景。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1 是 miR-155 及 t-antimiR-155 的序列對(duì)照?qǐng)D。
[0020]圖2是t-antimiR-155對(duì)RPM1-8266細(xì)胞增殖抑制作用的結(jié)果圖。
[0021]圖3是細(xì)胞集落形成法檢測(cè)RPM1-8266的增殖能力的結(jié)果圖；
[0022]其中，A為細(xì)胞集落形成的結(jié)果圖出為RPM1-8266細(xì)胞相對(duì)集落形成率的結(jié)果圖，*Ρ〈0.05。
[0023]圖4是Annexin V/PI雙染法檢測(cè)RPM1-8266細(xì)胞凋亡率的結(jié)果圖；
[0024]其中，A為流式細(xì)胞儀檢測(cè)PI和Annexin V雙染色結(jié)果圖；Β為Annexin V/PI雙染法檢測(cè)的RPM1-8266細(xì)胞各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞早期凋亡率比較圖，*P〈0.05?！揪唧w實(shí)施方式】
[0025]下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0026]實(shí)施例1
[0027]一、實(shí)驗(yàn)材料和方法
[0028]1.反義寡核苷酸的設(shè)計(jì)與合成
[0029]從microRNA Families數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取人microRNA_155的種子序列，根據(jù)序列互補(bǔ)原理設(shè)計(jì)針對(duì)種子序列的反義寡核苷酸序列(t-antimiR-155),并采用BLAST軟件分析確定其反義寡核苷酸序列及隨機(jī)對(duì)照序列(如圖1所示)。
[0030]2.主要試劑
[0031]MTT (四甲基偶氮唑藍(lán))和DMSO (二甲基亞砜)購(gòu)自Sigma公司；胎牛血清及 RPM1-1640 培養(yǎng)基購(gòu)自 GIBCO 公司；Lipofectamine?2000 購(gòu)自 Invitrogen 公司。RPM1-8266細(xì)胞株購(gòu)自上海拜力生物科技有限公司。反義寡核苷酸序列(t-antimiR-155):5' -AGCATTAA-3';隨機(jī)序列(scramble, SCR):
[0032]5' -TCATACTA-3'，均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，全硫代修飾，HPLC純化。
[0033]3.主要方法
[0034]3.1細(xì)胞培養(yǎng):將RPM1-8266細(xì)胞接種于含體積分?jǐn)?shù)為10%的胎牛血清，無(wú)抗生素的RPM1-1640培養(yǎng)基中，置于37°C、體積分?jǐn)?shù)為5%C02培養(yǎng)箱，飽和濕度下培養(yǎng)。每2~3天換液傳代。實(shí)驗(yàn)選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%臺(tái)盼藍(lán)拒染率>95%的細(xì)胞。
[0035]3.2MTT法篩選反義寡核苷酸的最佳作用濃度:本實(shí)驗(yàn)分3個(gè)組:
[0036]t-antimiR-155組、隨機(jī)對(duì)照組(SCR)和空白對(duì)照組(Blank)，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔。t-antimiR-155 組中 t-antimiR-155 的核酸終濃度為 0.2,0.3,0.4 和 0.5 μ mol/L,隨機(jī)對(duì)照組中隨機(jī)序列的核酸終濃度為0.2,0.3,0.4和0.5 μ mol/L。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的RPM1-8266細(xì)胞，各組細(xì)胞以I X IO5個(gè)/mL的密度接種于96孔板，每孔50 μ L，轉(zhuǎn)染終體積100 μ L(轉(zhuǎn)染方法參照Invitrogen公司Lipofectamine?2000說明書)，空白對(duì)照組加入50 μ L的無(wú)胎牛血清的Opt1-MEM培養(yǎng)基(購(gòu)于Gibco公司)。轉(zhuǎn)染6h后，每孔加入100 μ L含體積分?jǐn)?shù)為20%胎牛血清RPM1-1640培養(yǎng)基，使每孔終體積為200 μ L。48小時(shí)后每孔加入MTT液20 μ L，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)后，1000rpm離心I Omin，棄上清，每孔加入150yL 二甲基亞砜(DMSO )，震蕩10分鐘，使結(jié)晶充分溶解。在多功能酶標(biāo)儀上測(cè)定吸光度A57tol,以A57tl間接反映存活細(xì)胞量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，計(jì)算增殖抑制率。增殖抑制率=[1_ (A^Ma/A^j^UXlOOQ/o。
[0037]3.3甲基纖維素細(xì)胞集落培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞集落形成情況:實(shí)驗(yàn)分組同3.2，根據(jù)文獻(xiàn)(Pichiorri F，Suh S S，Ladetto M, et al.MicroRNAs regulate critical genesassociated with multiple myeloma pathogenesis[J].Proceedings of the NationalAcademy of Sciences, 2008，105(35):12885-12890)改進(jìn)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的 RPM1-8266 細(xì)胞，按IX IO5個(gè)/mL接種于含體積分?jǐn)?shù)為20%胎牛血清、2mmol/L L-谷氨酰胺、5 μ mol/Li3 -疏基乙醇和體積分?jǐn)?shù)為0.9%甲基纖維素的半固體培養(yǎng)基中，置37°C、5% (v/v)C02和飽和濕度條件下培養(yǎng)7d。倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)集落數(shù)和觀察集落形態(tài)，以大于40個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán)為I個(gè)集落。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，計(jì)算相對(duì)集落形成率=(實(shí)驗(yàn)組/空白對(duì)照組)X 100%。[0038]3.4流式細(xì)胞儀計(jì)量分析RPM1-8266細(xì)胞凋亡情況:實(shí)驗(yàn)分組同3.2，各組細(xì)胞以5X IO4個(gè)/mL的密度接種于24孔板，每孔400 μ L，轉(zhuǎn)染終體積500 μ L，空白對(duì)照組加入與實(shí)驗(yàn)組同體積的RPM1-1640培養(yǎng)基。6小時(shí)后加入500 μ L體積分?jǐn)?shù)為20%胎牛血清的RPM1-1640培養(yǎng)基置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。反義寡核苷酸組和隨機(jī)對(duì)照組的核酸終濃度為
0.4 μ mol/L。48小時(shí)后離心收集細(xì)胞，采用Annexin V/PI 二重染色，并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。
[0039]4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
[0040]數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示，使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用單因素方差分析法(one-way AV0NA)分析各組數(shù)據(jù)差異的顯著性。以P〈0.05為有顯著性差異。
[0041]二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0042]1.MTT法篩選反義寡核苷酸最佳作用濃度
[0043]t-antimiR-155在終濃度為0.2 μ mol/L和0.4 μ mol/L之間表現(xiàn)出有效抑制RPM1-8266增殖活力的效應(yīng)，其最佳作用濃度為0.4 μ mol/L,與隨機(jī)對(duì)照組(SCR)相比有顯著差異(P〈0.05)。t-antimiR-155在0.5 μ mol/L的終濃度顯示出非特異性作用(圖2)。
[0044]2.反義寡核苷酸對(duì)細(xì)胞集落形成的影響
[0045]采用甲基纖維素為支持物的集落形成法(colony forming method)檢測(cè)RPM1-8266細(xì)胞的自我更新和增殖能力。7天后，與隨機(jī)對(duì)照組(SCR)細(xì)胞相比，終濃度
0.4 μ mol/L的反義寡核苷酸作用于RPM1-8266細(xì)胞后，細(xì)胞集落形成能力較弱，集落形成抑制率較高，有顯著性差異，P〈0.05 (如圖3所示，*P〈0.05，與隨機(jī)對(duì)照組(SCR)相比)。
`[0046]3.反義寡核苷酸對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
[0047]終濃度0.4 μ mol/L的反義寡核苷酸作用于RPM1-8266細(xì)胞48小時(shí)后，經(jīng)AnnexinV/PI 二重染色，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，細(xì)胞調(diào)亡率為7.52%。與對(duì)照組相比，其凋亡率明顯增加，P〈0.05 (如圖4所示，*P〈0.05，與隨機(jī)對(duì)照組(SCR)相比)。
[0048]以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明t-antimiR-155作用于RPM1-8266細(xì)胞后，細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制，細(xì)胞凋亡明顯增加。表明t-antimiR-155通過干擾miRNA-155表達(dá)可有效抑制多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的進(jìn)展。同時(shí)表明miRNA-155可能作為淋巴瘤基因治療的潛在靶點(diǎn)。為t-antimiR-155應(yīng)用于制備抗腫瘤藥物，應(yīng)用于多發(fā)性骨髓瘤疾病治療提供試驗(yàn)依據(jù)。
[0049]上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種針對(duì)微小RNA-155種子序列的反義寡核苷酸，其特征在于核苷酸序列如SEQ IDN0.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的針對(duì)微小RNA-155種子序列的反義寡核苷酸，其特征在于:所述的反義寡核苷酸經(jīng)過全硫代修飾。
3.權(quán)利要求1或2所述的針對(duì)微小RNA-155種子序列的反義寡核苷酸在制備治療多發(fā)性骨髓瘤藥物中 的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K48/00GK103882020SQ201410103470
【公開日】2014年6月25日 申請(qǐng)日期:2014年3月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月19日
【發(fā)明者】費(fèi)嘉, 駱小闖, 豐茂曉, 古春明 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)