阿霉素腎病動物模型的構(gòu)建方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種阿霉素腎病動物模型的構(gòu)建方法，旨在解決現(xiàn)有的阿霉素腎病動物模型操作復(fù)雜、成功率低的技術(shù)問題。包括下列步驟：選取符合實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的大鼠作為造模組；給造模組的大鼠第1次按4mg/kg的用量尾靜脈注射阿霉素，相隔1周，第2次按3.5mg/kg的用量注射阿霉素；從第1次給造模組大鼠注射阿霉素起，給以兩周高蛋白飼料喂養(yǎng)后再改為6天正常飼料喂養(yǎng)；從第1次注射阿霉素起，至第20天時，將24h尿蛋白總量大于30mg的大鼠計(jì)入阿霉素腎病動物模型。本發(fā)明簡便易行，成功率高、一致性和穩(wěn)定性好，能有效降低動物死亡率，是一種進(jìn)一步研究足細(xì)胞病變的較為理想的動物模型。
【專利說明】阿霉素腎病動物模型的構(gòu)建方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及動物模型構(gòu)建【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種阿霉素腎病動物模型的構(gòu)建方法。
【背景技術(shù)】
[0002]阿霉素(ADR)是含醌的蒽環(huán)抗生素，可在腎臟內(nèi)代謝還原為半醌型自由基，后者與氧反應(yīng)產(chǎn)生活性氧，誘發(fā)腎小球上皮細(xì)胞脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，影響糖蛋白代謝，破壞濾過膜的結(jié)構(gòu)和功能，最終導(dǎo)致膜濾過屏障的選擇性變化而引起蛋白尿。阿霉素的腎毒性作用及大量蛋白尿的刺激，進(jìn)一步誘發(fā)腎小球內(nèi)固有細(xì)胞及其他炎性細(xì)胞產(chǎn)生并釋放各種細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)，刺激腎小球系膜細(xì)胞增殖和系膜基質(zhì)增多，緩慢發(fā)展形成腎小球硬化。急性阿霉素腎病模型，即單次經(jīng)鼠尾靜脈注射5~7.5mg/kg阿霉素而誘發(fā)的，與人類微小病變性腎病相似，為國內(nèi)外公認(rèn)的微小病變性腎病模型，慢性阿霉素腎病模型是指通過多次注射阿霉素，或合并應(yīng)用一側(cè)腎切除的方法而誘導(dǎo)的局灶節(jié)段性腎小球硬化。
[0003]阿霉素腎病動物模型是當(dāng)今腎病科研領(lǐng)域較多應(yīng)用的經(jīng)典模型，有大量文獻(xiàn)探討了此模型的建立方法，但其中也存在著諸多的問題。該模型的建立與阿霉素的劑量、給藥途徑、次數(shù)、間隔時間、單側(cè)腎切除或一側(cè)腎動脈鉗夾等因素密切相關(guān)。由于阿霉素對心臟、肝臟、骨髓、胃腸等系統(tǒng)具有較強(qiáng)的毒副作用，單次大劑量注射使得該模型死亡率偏高，雖然采用縮短建模時間和減少阿霉素用量的措施能提高模型存活率，但會影響建模效果。也有人采用右腎切除加重復(fù)注射ADR的方法造模，但實(shí)驗(yàn)中會因手術(shù)意外或感染造成大鼠死亡，而且在注射ADR后會增加大鼠的死亡率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種成功率高、一致性好、簡便易行的阿霉素腎病動物模型的構(gòu)建方法。
[0005]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明阿霉素腎病動物模型的構(gòu)建方法包括下列步驟:
(1)選取體重為130~150g的SPF級雄性SD大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，進(jìn)行尿常規(guī)檢測，將檢測結(jié)果正常、體重在180~200g的大鼠作為造模組；
(2)用生理鹽水將阿霉素配制為0.2g/ml的濃度,給造模組的大鼠第1次按4mg/kg的用量尾靜脈注射阿霉素；相隔I周，第2次按3.5mg/kg的用量注射阿霉素；
(3)從第一次給造模組大鼠注射阿霉素起，給以兩周高蛋白飼料喂養(yǎng)后再改為6天正常飼料喂養(yǎng)；
(4)從第一次給造模組大鼠注射阿霉素起，分別收集每只大鼠24h尿液，并測定記錄每只大鼠的24h尿蛋白總量，至第20天時，將24h尿蛋白總量大于30mg的大鼠計(jì)入阿霉素腎病動物模型。
[0006]優(yōu)選的，所述高蛋白飼料含大豆分離蛋白18%_25%。
[0007]優(yōu)選的，所述大鼠24h尿蛋白總量的檢測方法為:將大鼠放于干燥的代謝籠中，收集24h尿液,測定尿液體積后,搖勻取ImL尿液,在4°C條件下用4000r/min的速度進(jìn)行離心處理5min ;棄去沉淀后采用磺基水楊酸-硫酸鈉法測定24h尿蛋白總量。
[0008]本發(fā)明阿霉素腎病動物模型的構(gòu)建方法的有益效果在于，建模過程中不需采用單側(cè)腎切除或腎動脈鉗夾術(shù)等方法，避免了因此而產(chǎn)生的足細(xì)胞損傷、手術(shù)意外、合并感染導(dǎo)致的動物死亡率高等問題，操作更加簡便易行，建模時間短、成功率高；該模型內(nèi)大鼠間病變差異小，一致性和穩(wěn)定性好；且該模型能夠動態(tài)觀察從MCD (微小病變腎病)到FSGS (早期局灶節(jié)段腎小球硬化)的漸進(jìn)發(fā)展過程，是一種進(jìn)一步研究足細(xì)胞病變的較為理想的動物模型。
[0009]對于本發(fā)明的具體操作步驟及流程，將在下面結(jié)合實(shí)施例作出進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
【具體實(shí)施方式】
[0010]實(shí)施例1:按照下面的步驟構(gòu)建阿霉素腎病動物模型:
(I)選取體重為130~150g的6周齡SPF級雄性SD大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，進(jìn)行尿常規(guī)檢測，將檢測結(jié)果正常(尿蛋白為陰性)、體重在180~200g的70只大鼠隨機(jī)分為對照組A組和造模組；其中，對照組A組7只，其余63只為造模組；再將所述造模組內(nèi)的大鼠隨機(jī)分為正常飼料組B組和高蛋白飼料組C組；其中，B組31只，C組32只。
[0011]在分組前，檢測大鼠體內(nèi)的葡萄糖(GLU)、尿膽原(UR0)、膽紅素(BIL)、酮體(KET)、比重(SG)、潛血(BLD)、酸堿度(pH)、蛋白質(zhì)(PRO)、亞硝酸鹽(NIT)、白細(xì)胞(LEU)和抗壞血酸(VC)。各項(xiàng)結(jié)果均正常，方可用于建模。建`模前大鼠尿常規(guī)檢測結(jié)果如下表1所
【權(quán)利要求】
1.一種阿霉素腎病動物模型的構(gòu)建方法，其特征在于，包括下列步驟: (1)選取體重為130~150g的SPF級雄性SD大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，進(jìn)行尿常規(guī)檢測，將檢測結(jié)果正常、體重在180~200g的大鼠作為造模組； (2)用生理鹽水將阿霉素配制為0.2g/ml的濃度,給造模組的大鼠第1次按4mg/kg的用量尾靜脈注射阿霉素；相隔I周，第2次按3.5mg/kg的用量注射阿霉素； (3)從第一次給造模組大鼠注射阿霉素起，給以兩周高蛋白飼料喂養(yǎng)后再改為6天正常飼料喂養(yǎng)； (4)從第一次給造模組大鼠注射阿霉素起，分別收集每只大鼠24h尿液，并測定記錄每只大鼠的24h尿蛋白總量，至第20天時，將24h尿蛋白總量大于30mg的大鼠計(jì)入阿霉素腎病動物模型。
2.如權(quán)利要求1所述的阿霉素腎病動物模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述高蛋白飼料含大豆分離蛋白18%-25%。
3.如權(quán)利要求1所述的阿霉素腎病動物模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述大鼠24h尿蛋白總量的檢測方法為:將大鼠放于干燥的代謝籠中，收集24h尿液，測定尿液體積后，搖勻取ImL尿液,在4°C條件下用4000r/min的速度進(jìn)行離心處理5min ;棄去沉淀后采用磺基水楊酸-硫酸鈉法測定2 4h尿蛋白總量。
【文檔編號】A61K31/704GK103860570SQ201410062154
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年2月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月25日
【發(fā)明者】何美霞, 賀石林, 趙瑛瑛, 王巨才, 張勇, 朱建立, 李楊, 李志剛, 何葉, 張翰明, 杜斌, 華海嬰, 張衛(wèi)茹, 張莉蓉 申請人:河南省醫(yī)藥科學(xué)研究院