一種聚乙二醇修飾的免疫球蛋白k輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽治療急性炎癥藥物中應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有促進免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白，具有減輕急性炎癥反應(yīng)對機體破壞的多肽。其序列為mPEG-SC10k-AMVEPHSQARMRCGF是全新的序列，它們可以在體內(nèi)試驗中增加內(nèi)毒素休克小鼠的生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價值。
【專利說明】—種聚乙二醇修飾的免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽治療急性炎癥藥物中應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽及其應(yīng)用，具體涉及具有促進免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白、具有減輕急性炎癥反應(yīng)對機體破壞的多肽。
【背景技術(shù)】
[0002]膿毒血癥(i^psis) —直是一個嚴重的醫(yī)學(xué)問題。早期膿毒血癥不經(jīng)過及時有效治療可進展為重癥膿毒血癥和膿毒血癥性休克，兩者死亡率分別為20%~30%和40%~70%。醫(yī)學(xué)界一直在研究有效的治療手段，如早期對癥治療、激活蛋白C、皮質(zhì)激素治療等。近年來隨著醫(yī)學(xué)研究的深入，對膿毒血癥的認識和治療取得了很大進展。其中，免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白(IKB-α)在內(nèi)毒素休克中扮演著重要角色。
[0003]IKB 蛋白家族成員有 IKB a (MAD-3，pp40)、IKB β、IKB Y /pl05、IKB δ /ρΙΟΟ、IKB ε、Bcl_3以及果蠅屬的Cactus等。其家族結(jié)構(gòu)特點是均有多個約33個氨基酸的重復(fù)序列，稱為崐SWI6/錨蛋白重復(fù)序列，主要參與與Rel蛋白的RHD相互作用。IKB蛋白主要有以下三個部分構(gòu)成:1.與蛋白降解有關(guān)的N-末端區(qū)；2.能與NF-κ B相互作用的內(nèi)部區(qū)(區(qū)內(nèi)含有錨蛋白 重復(fù)序列ANK)(家族共有結(jié)構(gòu))主要參與與Rel蛋白的RHD相互作用；
3.稱為PEST的C 一端區(qū)，主要參與“囚禁"NF-κ B在細胞漿中。IKBs家族參與兩個信號通路:NF- κ B和Toll-like Receptor信號通路。NF- κ B的激活必須通過兩個步驟:①IKB從NF-K B復(fù)合體中解離并降解，暴露NF-κ B的核定位序列；②NF-κ B發(fā)生核易位，并與特異的κ B序列結(jié)合。
[0004]因此，IKB通過介導(dǎo)這兩條通路，從而調(diào)控前炎癥性細胞因子、細胞表面受體、轉(zhuǎn)錄因子、粘附分子等的生成。最終產(chǎn)生抗炎的作用。因而成為治療中性粒細胞為主的炎癥反應(yīng)的主要靶點。
[0005]AMVEPHSQARMRCGF是一個全新的序列，前期的研究表明，該多肽經(jīng)反復(fù)體內(nèi)外活性評價證實具有較好的抗炎效果，能夠顯著抑制NF- κ B活性。然而上述多肽的半衰期短，擬用臨床人的給藥是每天靜脈滴注，這給患者帶來了一定的痛苦。
[0006]文獻報道中，對分子結(jié)構(gòu)進行修飾或改造是解決半衰期較短、需連續(xù)給藥問題的常用方法，其中以化學(xué)修飾應(yīng)用最為廣泛，常用的化學(xué)修飾劑有聚乙二醇(polye thyleneglycol, PEG)、葡聚糖、聚氨基酸、聚酸酐等。PEG具有無毒、無免疫原性、水溶性好的特點，被美國食品與藥物管理局(FDA)認可作為藥品的輔助原料和修飾劑。蛋白質(zhì)類藥物經(jīng)PEG修飾后，分子量增加，腎小球的濾過率減少，PEG的屏障作用保護了蛋白質(zhì)不易被蛋白水解酶水解，同時減少了中和抗體的產(chǎn)生，這些均有助于蛋白質(zhì)類藥物生物半衰期的延長。目前已有多種PEG修飾的蛋白質(zhì)類藥物上市銷售。但PEG修飾同時也可能影響蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性，其影響大小與修飾劑、修飾條件及蛋白質(zhì)本身的性質(zhì)有關(guān)。對于具體的蛋白質(zhì)，其最佳修飾需通過制備PEG修飾的蛋白質(zhì)及生物活性研究來決定。合成小分子多肽的PEG修飾研究起步較晚，但已引起不少研究者的關(guān)注。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]發(fā)明目的
本發(fā)明提供全新的序列，該序列為免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽，對急性炎癥具有很好的療效。
[0008]技術(shù)方案
聚乙二醇修飾的免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽，其特征在于其序列為mPEG-SC10k-AMVEPHSQARMRCGF。
[0009]聚乙二醇修飾的免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽在治療急性炎癥藥物中的應(yīng)用。
[0010]有益效果
利用固相合成法化學(xué)合成聚乙二醇修飾的免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽，該多肽具有全新的序列，該多肽可體外促進免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白活力。在內(nèi)毒素休克模型實驗中成功的增加了小鼠的生存率。單核巨噬細胞表達腫瘤壞死因子釋放酶，這種酶可切割并釋放腫瘤壞死因子，腫瘤壞死因子是炎癥反應(yīng)的核心細胞因子，有加重炎癥反應(yīng)的作用。我們發(fā)現(xiàn)的多肽抑制劑可以抑制腫瘤壞死因子釋放酶的酶活力，從而減輕了炎癥反應(yīng) ，保護機體并減輕炎癥的破壞作用。
【具體實施方式】
[0011]實施例1
多肽抑制劑體外祀點酶:腫瘤壞死因子釋放酶(均購于sigma公司)的IC50值。
[0012]腫瘤壞死因子釋放酶的活力是通過切割熒光產(chǎn)生底物Mca-Pro-Leu-Ala-Gln-Ala-Val-Dpa-Arg-Ser-Ser-Ser-Arg-NH 檢測的(激發(fā)波長=320 nm,發(fā)射波長=405 nm)。反應(yīng)在37° C下100 μL反應(yīng)體系中進行。反應(yīng)開始時向反應(yīng)體系中加4 μL基質(zhì)金屬蛋白酶-3存儲液(I ng/μL)底物的終濃度為10 μΜ。測得的IC50值為4.32 μ mol。
[0013]實施例2
用內(nèi)毒素休克模型檢測多肽的體內(nèi)活力
在建立內(nèi)毒素休克模型之前，我們首先測定了 LPS (E.coli 0111:B4)小白鼠的LD50為50 Pg每只小鼠，在實驗中我們采用了 100 Pg每只小鼠，這樣，對照組的小鼠可全部死亡。用Regasepin2做了一個陽性對照實驗。對照組小鼠注射100 Pg LPS,而Regasepin2實驗組的小鼠在注射LPS 5分鐘之后,每只小鼠再注射4 mg的多肽。通過制作Kaplan-Meier生存曲線發(fā)現(xiàn)Regas印in2可有效的保護注射了 100 Pg的小鼠，提高了生存率。成功地在小白鼠上建立內(nèi)毒素休克模型之后，用該模型檢測mPEG-SC1Qk-AMVEPHSQARMRCGF的體內(nèi)活力。對照組小鼠(12只)注射100 μg LPS，而多肽抑制劑組小鼠(12只)在注射LPS 5 min后，每只小鼠注射4 mg多肽抑制劑。用Kaplan-Meier生存曲線分析，多肽mPEG-SC10k-AMVEPHSQARMRCGF可有效地保護小白鼠，提高內(nèi)毒素休克小鼠的生存率。
[0014]
【權(quán)利要求】
1.聚乙二醇修飾的免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽，其特征在于其序列為mPEG-SC10k-AMVEPHSQARMRCGF。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種聚乙二醇修飾的免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽，其特征在于所述的mPEG-SC的分子 量為10000。
3.聚乙二醇修飾的免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽在治療急性炎癥藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P29/00GK103923186SQ201410020881
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年1月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月17日
【發(fā)明者】邢將軍, 許劉華, 彭立軍, 任世闊, 華俊國, 曹銘, 劉加根, 劉明明, 汪士金, 施新華, 劉偉峰, 嚴明 申請人:南通誠信氨基酸有限公司