用于治療涉及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的疾患的lingo-2拮抗劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了通過給予LINGO-2拮抗劑治療涉及包括肌萎縮側(cè)索硬化癥在內(nèi)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活和軸突生長(zhǎng)的疾病、病癥或損傷的方法。一種用于促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活的示例性方法，包括使所述運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與有效量的包含LINGO-2拮抗劑的組合物接觸，其中所述LINGO-2拮抗劑選自由以下所組成的組：(i)可溶的LINGO-2多肽；(ii)LINGO-2抗體或其抗原結(jié)合片段；(iii)LINGO-2拮抗劑多核苷酸；(iv)LINGO-2適體；和(v)兩種或更多種所述LINGO-2拮抗劑的組合。
【專利說明】用于治療涉及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的疾患的LING0-2拮抗劑
[0001] 發(fā)明背景
[0002] 運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元是控制肌肉功能的神經(jīng)元。它們位于中樞神經(jīng)并具有延伸到中樞神經(jīng) 系統(tǒng)外的軸突以控制肌肉。通常，位于腦中的上位運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元將信號(hào)傳遞到位于脊髓的下 位運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，以及下位運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元指揮肌肉活動(dòng)。當(dāng)然，肌肉對(duì)于包括呼吸，吞咽，講話和 走路在內(nèi)許多活動(dòng)是重要的。因此運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的損傷或運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元功能的降低具有可怕的 臨床后果，且已經(jīng)識(shí)別了若干與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元相關(guān)的疾患。
[0003] 所述疾患包括但不限定于下述疾病、障礙和損傷：肌萎縮側(cè)索硬化癥 (amyotrophic lateral sclerosis) (ALS)、原發(fā)性側(cè)索硬化（primary lateral sclerosis) (PLS)、進(jìn)行性肌萎縮（progressive muscular atrophy) (PM)、遺傳性痙攣性截癱 (hereditary spastic paraparesis) (HSP)、X-連鎖脊髓延髓性肌萎縮（X-linked spinobulbar muscular atrophy) (SBMA ;甘乃迪?。↘ennedy disease))、進(jìn)行性延髓麻痹 (progressive bulbar palsy)、假性延髓麻痹（pseudo-bulbar palsy)、脊髓性肌肉萎縮癥 (spinal muscular atrophy) (SMA)、小兒麻痹癥后期綜合癥（postpolio syndrome) (PPS)、 亨廷頓氏癥（Huntington's disease)、原發(fā)性震顫（Essential tremor) (ET)、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元 疾病、癱瘓和帕金森氏病。ALS是這些中突出的疾病之一，每年100, 000人中有1到2人發(fā) 展成ALS。ALS是快速進(jìn)行性疾病，其與上位和下位運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的破壞相關(guān)，并導(dǎo)致自主肌 肉運(yùn)動(dòng)的喪失。
[0004] 一些疾病緩解治療可用于ALS和其他運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元相關(guān)疾病，所述治療包括使用利 魯唑（Riluzole)，其能夠阻斷與受損神經(jīng)元相關(guān)的特定的鈉通道。該治療方法雖然可以減 慢病程，但目前沒有治療運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的方法。因此對(duì)于患有與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元功能不足相關(guān)疾 病的患者而言，極度需要促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突再生和/或促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活的治療。
[0005] 發(fā)明概述
[0006] LING0-2(FLJ31810,亮氨酸富集重復(fù)和免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域包含nogo受體相互 作用蛋白2，LERN3,亮氨酸富集重復(fù)神經(jīng)元蛋白3,亮氨酸富集重復(fù)神經(jīng)元蛋白6C，LRRN6C， PR031993或UNQ9234)在皮層神經(jīng)元和背根神經(jīng)節(jié)（DRG)神經(jīng)元中表達(dá)，且負(fù)向調(diào)節(jié)運(yùn)動(dòng) 神經(jīng)元存活和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突長(zhǎng)度?？墒褂肔ING0-2拮抗劑在內(nèi)和體外促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的 存活和生長(zhǎng)。例如，抗體、其抗原結(jié)合片段和其衍生物可被用作LING0-2的拮抗劑。可溶 的LING0-2多肽以及包含編碼對(duì)應(yīng)于LING0-2區(qū)域多肽的核苷酸序列的核酸還可被用作 LING0-2拮抗劑。因而，本文提供了通過將運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與LING0-2拮抗劑相接觸從而促進(jìn)運(yùn) 動(dòng)神經(jīng)元存活和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)的方法。
[0007] 本發(fā)明的某些實(shí)施方式包括以下（其中每個(gè)實(shí)施方式通過大寫字母"E"后接數(shù)字 表示）：
[0008] El) -種分離的結(jié)合分子，其能夠特異性結(jié)合與C09抗體相同的LING0-2表位。
[0009] E2)E1的分離的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子競(jìng)爭(zhēng)性抑制C09抗體與LING0-2的結(jié) 合。
[0010] E3) -種包含C09抗體的至少一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)（⑶R)的分離的結(jié)合分子。
[0011] E4)根據(jù)E1-E3中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，其包含抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0012] E5)E1_E4中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，包含C09的可變重鏈（variable heavy domain) (VH)⑶Rs 1-3,其中一個(gè)或多個(gè)VH⑶Rs具有3個(gè)或更少的單氨基酸取代。
[0013] E6)E5 的結(jié)合分子，包含 C09 的 VH CDRs 1-3。
[0014] E7)E1_E6中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，包括C09的可變輕鏈（variable light domain) (VL)⑶Rs 1-3,其中一個(gè)或多個(gè)VL⑶Rs具有3個(gè)或更少的單氨基酸取代。
[0015] E8)E7所述的結(jié)合分子，包含C09的VL CDRs 1-3。
[0016] E9)E1-E4 中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，包含 C09 的 VH CDRs 1-3 和 VL CDRs 1-3。
[0017] E10) E1-E9中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，包含VH，其中所述VH包含與C09的VH至少85 %， 90 %或95 %相同的氨基酸序列。
[0018] ElDElO的結(jié)合分子，其中所述VH包含與C09的VH相同的氨基酸序列。
[0019] E12)E1-E11中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，包含VL，其中所述VL包含與C09的VL至少 85%，90%或95%相同的氨基酸序列。
[0020] E13)E12的結(jié)合分子，其中所述VL包含與C09的VL相同的氨基酸序列。
[0021] E14)E1-E13中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，包含VH和VL，其中所述VH和VL包含與C09的 VH和VL至少85%，90%或95%相同的氨基酸序列。
[0022] E15)E14的結(jié)合分子，其中所述VH和VL包含與C09的VH和VL相同的氨基酸序 列。
[0023] E16)E1-E15中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子與LING0-2LRR結(jié)構(gòu)域結(jié)合。
[0024] E17)E16的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子與LING0-2的LRR7-LRR12中的表位結(jié)合。
[0025] E18)E16的結(jié)合分子，其中所述結(jié)分子與SEQ ID NO :2的氨基酸202-343中的表 位結(jié)合。
[0026] E19)E1-E18中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子與SEQ ID NO :2的氨基酸 28-408或SEQ ID NO :2的氨基酸410-500的LING0-2的區(qū)結(jié)合。
[0027] E20) E1-E19中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子結(jié)合人、大鼠和小鼠 LING0-2。
[0028] E21)E1-E19中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子結(jié)合人和大鼠 LING0-2。
[0029] E22)E1-E19中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子結(jié)合人和小鼠 LING0-2。
[0030] E23)E1-E19中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子結(jié)合人LING0-2。
[0031] E24)E1-E23中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活。
[0032] E25)E1-E24中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)。
[0033] E26)E1_E25中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞分化。
[0034] E27)E1-E26中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子促進(jìn)髓鞘形成。
[0035] E28)E1-E27中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子促進(jìn)AKT磷酸化。
[0036] E29)E1-E28中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，其包括人抗體、嵌合抗體或人源化抗體。
[0037] E30)E1_E28中任一項(xiàng)所述的結(jié)合分子，其包含自然產(chǎn)生的抗體、scFv片段、Fab片 段、F(ab'）2片段、微型抗體（minibody)、雙抗體（diabody)、三抗體（triabody)、四抗體 (tetrabody)或單鏈抗體。
[0038] E31)E1-E28中任一項(xiàng)的結(jié)合分子，其包括單克隆抗體。
[0039] E32) -種分離的多核苷酸，包含編碼VH的核酸，其中所述VH包含C09的VH CDRs 1_3 〇
[0040] E33) -種分離的多核苷酸，包含編碼VH的核酸，其中所述VH包含與C09的VH至 少85%、90%、95%相同或相同的氨基酸序列。
[0041] E34) -種分離的多核苷酸，包含編碼VL的核酸，其中所述VL包含C09的VL CDRs 1_3 〇
[0042] E35) -種分離的多核苷酸，包含編碼VL的核酸，其中所述VL包含與C09的VL至 少85%、90%、95%相同或相同的氨基酸序列。
[0043] E36)E32-E35中任一項(xiàng)的多核苷酸，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含所述VH、所 述VL，或所述VH和所述VL能夠特異性地結(jié)合LINGO-2。
[0044] E37)E36的多核苷酸，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合與C09抗體 相同的表位。
[0045] E38)E32-E37中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含所述 VH、所述VL，或所述VH和所述VL可以結(jié)合LINGO-2LLR結(jié)構(gòu)域。
[0046] E39)E32-E37中任一項(xiàng)的多核苷酸，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含所述VH、所 述VL，或所述VH和所述VL可以結(jié)合LINGO-2中位于LLR7-LLR12中的表位。
[0047] E40)E32_E37中任一項(xiàng)的多核苷酸，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含所述VH、所 述VL，或所述VH和所述VL可與SEQ ID NO :2的第28-408位氨基酸或SEQ ID NO :2的第 410-500位氨基酸的LING0-2的區(qū)域結(jié)合。
[0048] E41)E32-E37中任一項(xiàng)的多核苷酸，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含所述VH、所 述VL，或所述VH和所述VL可與LING0-2的第202-343位氨基酸表位結(jié)合。
[0049] E42)E32_E41中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含所述 VH、所述VL，或所述VH和所述VL可與人、大鼠和小鼠 LING0-2結(jié)合。
[0050] E43)E32-E41中任一項(xiàng)的多核苷酸，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含所述VH、所 述VL，或所述VH和所述VL可與人和大鼠 LING0-2結(jié)合。
[0051] E44)E32-E41中任一項(xiàng)的多核苷酸，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含所述VH、所 述VL，或所述VH和所述VL可與人和小鼠 LING0-2結(jié)合。
[0052] E45)E32-E41中任一項(xiàng)的多核苷酸，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含所述VH、所 述VL，或所述VH和所述VL可與人LING0-2結(jié)合。
[0053] E46)E32-E45中任一項(xiàng)的多核苷酸，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含所述VH、所 述VL，或所述VH和所述VL可促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活。
[0054] E47)E32-E45中任一項(xiàng)的多核苷酸，其中抗體或其抗原結(jié)合片段包含所述VH、所 述VL，或所述VH和所述VL可促運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)。
[0055] E48)編碼E1-E31中任一項(xiàng)的結(jié)合分子的多核苷酸。
[0056] E49)包含E32-E48中任一項(xiàng)的多核苷酸的載體。
[0057] E50)含有包含編碼VH的核酸的多核苷酸和編碼VL的核酸的多核苷酸的組合物， 其中所述VH和VL包含與C09的VH和VL至少85%、90%、95%相同或相同的核酸序列。
[0058] E51)含有包含編碼VH的核酸的多核苷酸和編碼VL的核酸的多核苷酸的組合物， 其中 VH CDRs 1-3 和 VL CDRs 1-3 為 C09 的 VH CDRs 1-3 和 VL CDRs 1-3。
[0059] E52)E50或E51的組合物，其中包含編碼VH的核酸的多核苷酸和包含編碼VL的核 酸的多核苷酸在同一載體上。
[0060] E53)E50或E51的組合物，其中包含編碼VH的核酸的多核苷酸和包含編碼VL的核 酸的多核苷酸在不同的載體上。
[0061] E54)E50-E55中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可特異地性結(jié)合LINGO-2。
[0062] E55)E54的組合物，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段可特異地結(jié)合與C09抗體相 同的表位。
[0063] E56)E50-E55中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可與LINGO-2LRR結(jié)構(gòu)域結(jié)合。
[0064] E57)E50-E55中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可與LINGO-2的LRR2-LRR7中的表位結(jié)合。
[0065] E58)E50-E55中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié) 合片段可與SEQ ID NO :2的第28-408位氨基酸或SEQ ID NO :2的第410-500位氨基酸的 LING0-2的區(qū)域結(jié)合。
[0066] E59)E50-E55中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可與LING0-2的第202-343位氨基酸表位結(jié)合。
[0067] E60)E50-E59中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可與人、大鼠和小鼠 LING0-2結(jié)合。
[0068] E61)E50-E59中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可與人和大鼠 LING0-2結(jié)合。
[0069] E62)E50-E59中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可與人和小鼠 LING0-2結(jié)合。
[0070] E63)E50-E59中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可與人LING0-2結(jié)合。
[0071] E64)E50-E63中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活。
[0072] E65)E50-E63中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)。
[0073] E66)由E32-E47中任一項(xiàng)所述的多核苷酸編碼的多肽。
[0074] E67)包含VH多肽和VL多肽的組合物，其中所述VH和VL包含與C09的VH和VL 至少85%，90%，95%相同或相同的氨基酸序列。
[0075] E68)包含VH多肽和VL多肽的組合物，其中VH CDRs 1-3和VL CDRs 1-3為C09 的 VH CDRs 1-3 和 VL CDRs 1-3。
[0076] E69) E67或E68所述的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合片 段能夠特異地結(jié)合LING0-2。
[0077] E70)E69的組合物，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段可以特異地與C09抗體相同 的表位結(jié)合。
[0078] E71)E67-E70中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可與LING0-2LRR結(jié)構(gòu)域結(jié)合。
[0079] E72)E67-E70中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可與LINGO-2的LRR7-LRR12中的表位結(jié)合。
[0080] E73)E67-E70中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié) 合片段可與SEQ ID NO :2的第28-408位氨基酸或SEQ ID NO :2的第410-500位氨基酸的 LING0-2區(qū)域結(jié)合。
[0081] E74)E67-E70中任一項(xiàng)所述的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原 結(jié)合片段可與LING0-2的第202-343位氨基酸表位結(jié)合。。
[0082] E75)E67-E74中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可與人、大鼠和小鼠 LING0-2結(jié)合。
[0083] E76)E67-E74中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可與人和大鼠 LING0-2結(jié)合。
[0084] E77)E67-E74中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可與人和小鼠 LING0-2結(jié)合。
[0085] E78)E67-E74中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可與人LING0-2結(jié)合。
[0086] E79)E67-E78中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活。
[0087] E80)E67-E78中任一項(xiàng)的組合物，其中包含所述VH和所述VL的抗體或其抗原結(jié)合 片段可促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)。
[0088] E81)包含E32-E48任一項(xiàng)的多核苷酸、E49的載體、E50-E65或E67-E80任一項(xiàng)的 組合物或E66的多肽的宿主細(xì)胞。
[0089] E82) -種生產(chǎn)抗-LING0-2結(jié)合分子的方法，包括培養(yǎng)E81的宿主細(xì)胞，并回收所 述結(jié)合分子。
[0090] E83)抗-LING0-2結(jié)合分子，由E82的方法生產(chǎn)。
[0091] E84) -種在樣品中檢測(cè)LING0-2表達(dá)的方法，包括（a)將所述樣品與E1-E31或 E83中任一項(xiàng)的結(jié)合分子相接觸和（b)檢測(cè)所述樣品中所述結(jié)合分子的結(jié)合。
[0092] E85)藥物組合物，包含（a)El-E31或E83中任一項(xiàng)的結(jié)合分子、E32-E48中任一項(xiàng) 的多核苷酸、E49的載體、E50-E65或E67-E80中任一項(xiàng)的組合物、E66的多肽，或E81的宿 主細(xì)胞和（b)載體。
[0093] E86)分離的核酸，包含編碼SEQ ID NO :2多肽的可溶的片段或其變體的多核苷 酸，其中所述多肽能夠促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活。
[0094] E87)分離的核酸，包含編碼SEQ ID NO :2多肽的可溶的片段或其變體的多核苷 酸，其中所述多肽能夠促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的存活，減少軸突生長(zhǎng)的抑制。
[0095] E88)E86或E87所述的核酸分子，包含編碼多肽的多核苷酸，所述多肽包含與選自 由SEQ ID NO :2的第1到500位氨基酸組成的組的參考氨基酸序列至少90%相同的氨基 酸序列。
[0096] E89)E88的核酸，其中所述多肽包含與所述參考氨基酸序列至少95%相同的氨基 酸序列。
[0097] E90)E88的核酸，其中所述多肽包含與所述參考氨基酸序列相同的氨基酸序列。
[0098] E91)E86-E90中任一項(xiàng)的核酸，進(jìn)一步包含編碼融合至所述多肽的異源多肽的多 核苷酸。
[0099] E92)E91的核酸，其中所述異源多肽選自由免疫球蛋白、血清白蛋白、靶向多肽、報(bào) 告子多肽、純化易化多肽、任何所述多肽的片段，和所述多肽或片段的兩種或更多種組合所 組成的組。
[0100] E93)E92的核酸，其中所述異源多肽選自由免疫球蛋白Fc、人血清白蛋白或其片 段、組氨酸標(biāo)簽和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元糖蛋白或其片段所組成的組。
[0101] E94)包含藥學(xué)上可接受的載體和E86-E93中任一項(xiàng)的核酸的組合物。
[0102] E95)包含E86-E93中任一項(xiàng)核酸的載體。
[0103] E96)E95的載體，其中所述核酸可操作與表達(dá)控制序列連接。
[0104] E97)E96的載體，其中所述載體為病毒載體。
[0105] E98)E97的載體，其中所述病毒載體是選自由腺病毒載體、慢病毒載體、桿狀病毒 載體（baculoviral vector)、愛潑斯坦-巴爾病毒載體（Epstein Barr viral vector)、乳 多空病毒載體、牛痘（vaccinia)病毒載體和單純皰瘆病毒載體所組成的組。
[0106] E99)包含E86-E93中任一項(xiàng)的核酸或E95-E98中任一項(xiàng)的載體的宿主細(xì)胞。
[0107] E100) E99的宿主細(xì)胞，其表達(dá)所述多肽。
[0108] E101)由E86-E93中任一項(xiàng)核酸編碼的分離的多肽。
[0109] E102)E101的多肽，其中所述多肽通過合成生產(chǎn)。
[0110] E103)E101或E102的多肽，其中所述多肽結(jié)合至聚合物。
[0111] E104)E103的多肽，其中所述聚合物是選自由聚亞烷基二醇、糖類聚合物、和多肽 所組成的組。
[0112] E105)E104的多肽，其中所述聚亞烷基二醇是聚乙二醇（PEG)。
[0113] E106)E103-E105中任一項(xiàng)所述的多肽，其中所述多肽結(jié)合至1、2、3或4種聚合物。
[0114] E107)E106的多肽，其中所述聚合物的總分子量為20, OOODa到40, OOODa。
[0115] E108)抗體或其抗原結(jié)合片段，其能夠特異地結(jié)合ElOl或E102的多肽，其中所述 抗體或其抗原結(jié)合片段能夠促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的存活。
[0116] E109)抗體或其抗原結(jié)合片段，其能夠特異地結(jié)合ElOl或E102所述的多肽，其中 所述抗體或其抗原結(jié)合片段能夠減少運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)抑制。
[0117] E110)抗體或其抗原結(jié)合片段，其能夠特異地結(jié)合ElOl或E102的多肽，其中所述 抗體或抗原結(jié)合片段能夠促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞分化。
[0118] Elll)抗體或其抗原結(jié)合片段，其能夠特異地結(jié)合ElOl或E102的多肽，其中所述 抗體或抗原結(jié)合片段能夠促進(jìn)髓鞘形成。
[0119] E112)抗體或其抗原結(jié)合片段，其能夠特異地結(jié)合ElOl或E102的多肽，其中所述 抗體或抗原結(jié)合片段能夠促進(jìn)AKT磷酸化。
[0120] E113)抗體或其抗原結(jié)合片段，其能夠特異地結(jié)合ElOl或E102的多肽，其中所述 抗體或抗原結(jié)合片段結(jié)合LING0-2LRR結(jié)構(gòu)域。
[0121] E114)抗體或其抗原結(jié)合片段，其能夠特異地結(jié)合ElOl或E102的多肽，其中所述 抗體或抗原結(jié)合片段結(jié)合SEQ ID NO :2的第202-343位氨基酸表位。
[0122] E115)抗體或其抗原結(jié)合片段，其能夠特異地結(jié)合ElOl或E102的多肽，其中所述 抗體或抗原結(jié)合片段與SEQ ID NO :2的第28-408位氨基酸或SEQ ID NO :2的第410-500 位氨基酸的LING0-2區(qū)域結(jié)合。
[0123] E116)抗體或其抗原結(jié)合片段，其能夠特異地結(jié)合ElOl或E102的多肽，其中所述 抗體或抗原結(jié)合片段與LI0NG0-2LRRNT或LRRCT結(jié)構(gòu)域結(jié)合。
[0124] E117)抗體或其抗原結(jié)合片段，其能夠特異地結(jié)合ElOl或E102的多肽，其中所述 抗體或抗原結(jié)合片段與LING0-2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域結(jié)合。
[0125] E118)包含藥學(xué)上可接受的載體和E102-E107中任一項(xiàng)的多肽的組合物。
[0126] El 19)包含藥學(xué)上可接受的載體和E99或ElOO的宿主細(xì)胞的組合物。
[0127] E120)用于促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活的方法，包括使所述運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與有效量的包含 LING0-2拮抗劑的組合物接觸，其中所述LING0-2拮抗劑選自由以下所組成的組：（i)可溶 的LING0-2多肽；（ii)LING0-2抗體或其抗原結(jié)合片段；（iii)LING0-2拮抗劑多核苷酸； (iv)LING〇-2適體（aptamer);和（V)兩種或更多種所述LING0-2詰抗劑的組合。
[0128] E121)促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)的方法，包括使所述運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與包含LING0-2 拮抗劑的組合物接觸，其中所述LING0-2拮抗劑選自由以下所組成的組：（i)可溶的 LING0-2多肽；（ii)LING0-2抗體或其抗原結(jié)合片段；（iii)LING0-2拮抗劑多核苷酸；（iv) LINGO-2適體；和（V)兩種或更多種所述LINGO-2拮抗劑的組合。
[0129] E122) -種促進(jìn)哺乳動(dòng)物中運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活的方法，包括對(duì)其有需要的哺乳動(dòng)物 給予
[0130] 有效量的包含LING0-2拮抗劑的組合物，其中所述LING0-2拮抗劑選自由以下所 組成的組：（i)可溶的LING0-2多肽；（ii)LING0-2抗體或其抗原結(jié)合片段；（iii)LING0-2 拮抗劑多核苷酸；（iv) LINGO-2適體；和（V)兩種或更多種所述LINGO-2拮抗劑的組合。
[0131] E123) -種促進(jìn)哺乳動(dòng)物中運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)的方法，包括對(duì)其有需要的哺乳 動(dòng)物給予有效量的包含LING0-2拮抗劑的組合物，其中所述LING0-2拮抗劑選自由以下所 組成的組：（i)可溶的LING0-2多肽；（ii)LING0-2抗體或其抗原結(jié)合片段；（iii)LING0-2 拮抗劑多核苷酸；（iv) LINGO-2適體；和（V)兩種或更多種所述LINGO-2拮抗劑的組合。
[0132] E124) -種治療哺乳動(dòng)物中與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活相關(guān)的疾病、病癥或損傷的方法， 包括對(duì)其有需要的哺乳動(dòng)物給予治療有效量的包含LING0-2拮抗劑的組合物，其中所述 LING0-2拮抗劑選自由以下所組成的組：（i)可溶的LING0-2多肽；（ii)LING0-2抗體或其 抗原結(jié)合片段；（iii)LING0-2拮抗劑多核苷酸；（iv)LING0-2適體；和（V)兩種或更多種所 述LING0-2拮抗劑的組合。
[0133] E125) -種治療哺乳動(dòng)物中與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)相關(guān)的疾病、病癥或損傷的方 法，包括對(duì)其有需要的哺乳動(dòng)物給予治療有效量的包含LING0-2拮抗劑的組合物，其中所 述LING0-2拮抗劑選自由以下所組成的組：（i)可溶的LING0-2多肽；（ii)LING0-2抗體或 其抗原結(jié)合片段；（iii)LING0-2拮抗劑多核苷酸；（iv)LING0-2適體；和（V)兩種或更多種 所述LING0-2拮抗劑的組合。
[0134] E126) -種治療哺乳動(dòng)物中與少突膠質(zhì)細(xì)胞死亡或缺少分化相關(guān)的疾病、病癥 或損傷的方法，包括對(duì)其有需要的哺乳動(dòng)物給予治療有效量的包含LING0-2拮抗劑的組 合物，其中所述LING0-2拮抗劑選自由以下所組成的組：（i)可溶的LING0-2多肽；（ii) LINGO-2抗體或其抗原結(jié)合片段；（iii)LING0-2拮抗劑多核苷酸；（iv)LINGO-2適體；和 (V)兩種或更多種所述LING0-2拮抗劑的組合。
[0135] E127) -種治療哺乳動(dòng)物中與脫髓鞘相關(guān)的疾病、病癥或損傷的方法，包括對(duì)其有 需要的哺乳動(dòng)物給予治療有效量的包含LINGO-2拮抗劑的組合物，其中所述LINGO-2拮抗 劑選自由以下所組成的組：（i)可溶的LINGO-2多肽；（ii)LING0-2抗體或其抗原結(jié)合片 段；（iii) LINGO-2拮抗劑多核苷酸；（iv) LINGO-2適體；和（V)兩種或更多種所述LINGO-2 拮抗劑的組合。
[0136] E128) -種治療哺乳動(dòng)物中與髓鞘形成障礙相關(guān)的疾病、病癥或損傷的方法， 包括對(duì)其有需要的哺乳動(dòng)物給予治療有效量的包含LINGO-2拮抗劑的組合物，其中所述 LINGO-2拮抗劑選自由以下所組成的組：（i)可溶的LINGO-2多肽；（ii) LINGO-2抗體或其 抗原結(jié)合片段；（iii) LINGO-2拮抗劑多核苷酸；（iv) LINGO-2適體；和（V)兩種或更多種所 述LINGO-2拮抗劑的組合。
[0137] E129)E120-E128中任一項(xiàng)的方法，其中LINGO-2拮抗劑是可溶的LINGO-2多肽。
[0138] E130)E129的方法，其中所述LINGO-2拮抗劑包含E102-E107中任一項(xiàng)的多肽。
[0139] E131)E129的方法，其中可溶的LINGO-2多肽包含選自由以下所組成的組的 LINGO-2區(qū)域：（i)LING0-2Ig結(jié)構(gòu)域或片段、變體或其衍生物，（ii)LING0-2LRR結(jié)構(gòu)域或片 段、變體，或其衍生物，和（iii)所述LINGO-2結(jié)構(gòu)域或片段、變體，或其衍生物的組合。
[0140] E132)E130或E131的方法，其中所述可溶的LINGO-2多肽缺乏選自由以下所組成 的組的LINGO-2區(qū)域：（i) LINGO-2跨膜區(qū)或片段、變體、或其衍生物，（ii) LINGO-2胞內(nèi)結(jié)構(gòu) 域或片段、變體、或其衍生物，（iii)所述LINGO-2結(jié)構(gòu)域或片段、變體、或其衍生物的組合。
[0141] E133)E120-E128中任一項(xiàng)的方法，其中所述LINGO-2拮抗劑是LINGO-2抗體或其 抗原結(jié)合片段。
[0142] E134)E133的方法，其中所述LINGO-2抗體或其抗原結(jié)合片段是E1-E28和E80中 任一項(xiàng)的結(jié)合分子。
[0143] E135)E120-E128中任一項(xiàng)的方法，其中所述LINGO-2拮抗劑包含LINGO-2拮抗劑 多核苷酸。
[0144] E136)E135的方法，其中所述LINGO-2拮抗劑多核苷酸選自由以下所組成的組： ⑴反義多核苷酸；（ii)核酶；（iii)小干擾RNA(siRNA);和（iv)小發(fā)夾RNA(shRNA)。
[0145] E137)E120-E128中任一項(xiàng)的方法，其中所述LINGO-2拮抗劑包含LINGO-2適體。
[0146] E138)E122-E127中任一項(xiàng)的方法，其中所述哺乳動(dòng)物已被診斷為患有涉及運(yùn)動(dòng)神 經(jīng)元的疾病、病癥或損傷。
[0147] E139)E124、E125或E138中任一項(xiàng)的方法，其中所述疾病、病癥或損傷選自肌萎縮 側(cè)索硬化癥（ALS)、原發(fā)性側(cè)索硬化（PLS)、進(jìn)行性肌萎縮（PM)、遺傳性痙攣性截癱（HSP)、 X-連鎖脊髓延髓性肌萎縮（SBMA ;甘乃迪病（Kennedy disease))、進(jìn)行性延髓麻痹、假性延 髓麻痹、脊髓性肌肉萎縮癥（SM)、小兒麻痹癥后期綜合癥（PPS)、亨廷頓氏癥、原發(fā)性震顫 (ET)、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病、癱瘓和帕金森氏病所組成的組。
[0148] E140)E139的方法，其中所述疾病、病癥或損傷為肌萎縮側(cè)索硬化癥（ALS)。
[0149] E141)E120-E140中任一項(xiàng)的方法，其中所述LINGO-2拮抗劑通過推注注射（bolus injection)或慢性輸注給予。
[0150] E142)E120-E140中任一項(xiàng)的方法，其中所述LINGO-2拮抗劑被直接給予到中樞神 經(jīng)系統(tǒng)中。
[0151] E143)E120-E140中任一項(xiàng)的方法，其中所述LINGO-2拮抗劑被全身性 (systemically)給予。
[0152] E144)E120或E121中的方法，包括（a)用經(jīng)由可操作地連接于表達(dá)控制序列的編 碼所述LINGO-2拮抗劑的多核苷酸轉(zhuǎn)染所述運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，以及（b)允許所述LINGO-2拮抗 劑的表達(dá)。
[0153] E145)E122-E143中任一項(xiàng)所述的方法，包括（a)給予哺乳動(dòng)物經(jīng)由可操作地連接 于表達(dá)控制序列的編碼所述LINGO-2拮抗劑的多核苷酸，以及（b)允許所述LINGO-2拮抗 劑的表達(dá)。
[0154] E146)E145的方法，其中所述多核苷酸作為表達(dá)載體而被給予。
[0155] E146)E145的方法，其中所述表達(dá)載體為病毒載體。
[0156] E147)E146的方法，其中所述病毒載體選自由腺病毒載體、甲病毒載體、腸道病毒 載體、瘟疫病毒載體、慢病毒載體、桿狀病毒載體、皰瘆病毒載體、乳多空病毒載體痘病毒載 體所組成的組。
[0157] E148)E145_E147中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的給予包括（a)提供包含所述多 核苷酸的培養(yǎng)的宿主細(xì)胞，其中所述培養(yǎng)的宿主細(xì)胞表達(dá)所述LINGO-2拮抗劑；和（b)將所 述培養(yǎng)的宿主細(xì)胞導(dǎo)入到所述哺乳動(dòng)物以使得所述LINGO-2拮抗劑在所述哺乳動(dòng)物中表 達(dá)。
[0158] E149)E148中的方法，其中所述培養(yǎng)的宿主細(xì)胞是衍生自要接受治療的哺乳動(dòng)物。
[0159] E150)E146-E149中任一項(xiàng)的方法，其中所述載體經(jīng)選自由局部給予、眼內(nèi)給予、腸 胃外給予、鞘內(nèi)給予、硬膜下給予和皮下給予所組成的組的途徑給予。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0160] 圖1-大鼠組織的Q-PCR。LINGO-2在成年大鼠腦組織中高表達(dá)。通過Q-PCR進(jìn)行 LING0-2mRNA表達(dá)的定量。
[0161] 圖2 - P6小鼠組織的Q-PCR。LINGO-2在出生后6天（P6)的小鼠腦和脊髓組織中 高表達(dá)。LINGO-2的mRNA表達(dá)的定量由Q-PCR進(jìn)行。
[0162] 圖3 -大鼠神經(jīng)元細(xì)胞群的Q-PCR。LINGO-2在皮層神經(jīng)元和背根神經(jīng)節(jié)（DRG) 中高表達(dá)。通過Q-PCR進(jìn)行LING0-2mRNA表達(dá)的定量。
[0163] 圖4 - LINGO-2-Fc和抗-LINGO-2抗體促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活。用亞砷酸鈉處理人運(yùn) 動(dòng)神經(jīng)元30分鐘并允許在人IgG (對(duì)照）、可溶的LINGO-2-Fc或抗-LINGO-2抗體C09Fab 存在下回收。孵育后，用抗-MII微管蛋白和抗-神經(jīng)絲蛋白通過免疫細(xì)胞化學(xué)對(duì)運(yùn)動(dòng)神 經(jīng)元染色。
[0164] 圖5 - LINGO-2-Fc促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)。通過Nycodenz梯度離心分離源自 胚胎第16天（E16)大鼠脊髓的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元。用亞砷酸鈉處理分離的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元30分鐘并 允許在人IgG或可溶的LINGO-2-Fc存在下回收。孵育后，用抗-神經(jīng)絲蛋白通過免疫細(xì)胞 化學(xué)對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元染色。
[0165] 圖6 - S0DG93A小鼠中LING0-2的表達(dá)量有所上調(diào)。使用原位雜交測(cè)量了 65天野 生型和S0DG93A小鼠中LING0-2RNA水平。計(jì)數(shù)了每種類型的小鼠的腹側(cè)角區(qū)中的LINGO-2 陽性細(xì)胞的數(shù)量。圖表顯示LINGO-2陽性細(xì)胞的數(shù)量（左）和LINGO-2陽性細(xì)胞的百分率 (右）。
[0166] 圖7 -抗-LINGO-2抗體上調(diào)AKT磷酸化。通過Western印跡測(cè)量對(duì)照樣品中和 用抗-LINGO-2抗體C09或?qū)φ湛贵w處理的樣品中AKT的磷酸化水平。
[0167] 圖8 -抗-LINGO-2抗體促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞分化。在對(duì)照樣品中和用抗-LINGO-2 抗體C09在1、3或10 μ g/ml下處理的樣品中測(cè)量髓磷脂相關(guān)糖蛋白（MAG)和髓鞘堿性蛋 白（MBP)的水平。
[0168] 發(fā)明詳述
[0169] I.定義
[0170] 除非另外定義，否則本發(fā)明使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的 普通技術(shù)人員所通常理解的相同的含義。如有沖突，以包括該定義在內(nèi)的本申請(qǐng)為準(zhǔn)。除 非上下文另外要求，否則單數(shù)術(shù)語將包括復(fù)數(shù)而復(fù)數(shù)術(shù)語將包括單數(shù)。為了所有的目的，將 本發(fā)明中提及的所有出版物、專利以及其它參考文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容通過引用并入本發(fā)明，其 如同每個(gè)單獨(dú)出版物或?qū)＠暾?qǐng)被特定地或單獨(dú)地指明通過引用被并入本發(fā)明一樣。
[0171] 盡管類似或等同于本發(fā)明中所描述的那些的方法和材料可被用于本發(fā)明的實(shí)施 和檢測(cè)，但下文描述了合適的方法和物質(zhì)。這些物質(zhì)、方法和實(shí)例僅是用于說明的目的而不 意為限制。根據(jù)詳述的說明書和權(quán)利要求書，本發(fā)明的其它特征和優(yōu)勢(shì)將變得明顯。
[0172] 為了進(jìn)一步限定本發(fā)明，提供了以下術(shù)語以及定義。
[0173] 應(yīng)該注意，術(shù)語"一個(gè)（a)"或"一個(gè)（an)"實(shí)體指的是一個(gè)或多個(gè)該實(shí)體。例如， "一個(gè)免疫球蛋白分子"被理解為表示一個(gè)或多個(gè)免疫球蛋白分子。同樣地，術(shù)語"一個(gè)"、
[0174] "一個(gè)或多個(gè)"以及"至少一個(gè)"在本發(fā)明中可互換使用。
[0175] 術(shù)語"多核苷酸"是指包含單個(gè)核酸和多個(gè)核酸，也指分離的核酸分子或構(gòu)建體， 例如，信使RNA(mRNA)或質(zhì)粒DNA(pDNA)。多核苷酸可包含常規(guī)的磷酸二酯鍵或非常規(guī)的 鍵（例如，諸如在肽核酸（PM)中發(fā)現(xiàn)的酰胺鍵）。術(shù)語"核酸"指出現(xiàn)在多核苷酸中的任 何一個(gè)或多個(gè)核酸片段，如DNA或RNA片段。"分離的"核酸或多核苷酸是指從天然環(huán)境中 移出的核酸分子（DNA或RNA)。例如，包含在載體內(nèi)的編碼抗-LINGO-2結(jié)合分子（如抗體 或其抗原結(jié)合片段）的重組多核苷酸被認(rèn)為是分離的。分離的多核苷酸的進(jìn)一步的例子包 括存在于異源宿主細(xì)胞中的重組多核苷酸或溶液中純化（部分或完全）的多核苷酸。分離 的RNA分子包括體外或體內(nèi)的多核苷酸的RNA轉(zhuǎn)錄本。分離的多核苷酸或核酸進(jìn)一步包括 如合成生產(chǎn)的分子。另外，多核苷酸或核酸可以是或可包含如啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)或轉(zhuǎn) 錄終止子的調(diào)控元件。所述多核苷酸可以由任何多聚核糖核苷酸或多聚脫氧核糖核苷酸 構(gòu)成，其中所述多聚核糖核苷酸或多聚脫氧核糖核苷酸可以是未修飾的RNA或DNA或者修 飾的RNA或DNA。例如，多核苷酸可以由單鏈和雙鏈DNA、作為單鏈區(qū)和雙鏈區(qū)的混合物的 DNA、單鏈和雙鏈RNA以及作為單鏈區(qū)和雙鏈區(qū)的混合物的RNA、包括DNA和RNA在內(nèi)的雜交 分子（其中所述DNA和RNA可以是單鏈的或更典型地是雙鏈的，或者單鏈區(qū)和雙鏈區(qū)的混 合物）所構(gòu)成。另外，多核苷酸可以由包括RNA或DNA或者RNA和DNA兩者在內(nèi)的三鏈區(qū) 所構(gòu)成。多核苷酸還可以包括一個(gè)或多個(gè)修飾的堿基或者為了穩(wěn)定性或其它原因而被修飾 的DNA或RNA骨架。"修飾的"堿基包括例如三苯甲基化的堿基以及不常參見的堿基例如肌 背。對(duì)DNA和RNA可以作各種各樣的修飾；因此"多核苷酸"涵蓋化學(xué)、酶促或代謝地修飾 的形式。
[0176] 如本發(fā)明所使用的，"編碼區(qū)"是由翻譯成氨基酸的密碼子所構(gòu)成的核酸的一部 分。雖然"終止密碼子"（TAG、TGA或TAA)并不翻譯成氨基酸，但其可被認(rèn)為是編碼區(qū)的一 部分，而任何側(cè)翼序列，例如，啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄終止子、內(nèi)含子等并不是編碼 區(qū)的部分。兩個(gè)或更多個(gè)編碼區(qū)可以存在于單個(gè)多核苷酸構(gòu)建體中，例如，在單個(gè)載體上或 在分離的多核苷酸構(gòu)建體中，例如，在獨(dú)立的（不同的）質(zhì)粒上。并且，任何載體可包含單 個(gè)編碼區(qū)或包含兩個(gè)或多個(gè)的編碼區(qū)，例如單個(gè)載體可分別編碼免疫球蛋白重鏈可變區(qū)和 免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)。另外，載體、多核苷酸或核酸可編碼異源編碼區(qū)，所述異源編碼區(qū) 與編碼抗-LINGO-2拮抗劑（如抗體或其片段、變體或衍生物）的核酸融合或不融合。異源 編碼區(qū)域包括但并不限于特定的元件或基序，如分泌信號(hào)肽或異源功能結(jié)構(gòu)域。
[0177] 在一些實(shí)施方式中，所述多核苷酸或核酸是DNA。就DNA而言，包含編碼多肽的核 酸的多核苷酸通?？砂刹僮鞯嘏c一個(gè)或多個(gè)編碼區(qū)域相結(jié)合的啟動(dòng)子和/或其他與 一個(gè)多個(gè)編碼區(qū)可操作結(jié)合的轉(zhuǎn)錄或翻譯控制元件?？刹僮鞯亟Y(jié)合是基因產(chǎn)物，如多肽的 編碼區(qū)與一個(gè)或多個(gè)調(diào)控序列以該方式結(jié)合，以使基因產(chǎn)物的表達(dá)在調(diào)控序列的影響或控 制之下。如果啟動(dòng)子功能的誘導(dǎo)導(dǎo)致編碼預(yù)期基因產(chǎn)物的mRNA轉(zhuǎn)錄，并且兩個(gè)DNA片段之 間的連接性質(zhì)沒有干擾指導(dǎo)基因產(chǎn)物表達(dá)的表達(dá)調(diào)控序列的能力或者沒有干擾待轉(zhuǎn)錄的 DNA模板的能力，則兩個(gè)DNA片段（例如多肽編碼區(qū)和與之相關(guān)的啟動(dòng)子）是"可操作地結(jié) 合"的。因此，如果啟動(dòng)子能夠影響所述核酸轉(zhuǎn)錄，那么啟動(dòng)子區(qū)將與編碼多肽的核酸可操 作地結(jié)合。啟動(dòng)子可以是僅在預(yù)先決定的細(xì)胞中指導(dǎo)基本的DNA轉(zhuǎn)錄的細(xì)胞特異性啟動(dòng) 子。除啟動(dòng)子外，其他轉(zhuǎn)錄控制元件，例如增強(qiáng)子、操縱子、阻遏子和轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)可與多核 苷酸可操作地結(jié)合，從而指導(dǎo)細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄。本發(fā)明公開了合適的啟動(dòng)子和其他轉(zhuǎn)錄控 制區(qū)。
[0178] 本領(lǐng)域技術(shù)人員已知各種轉(zhuǎn)錄控制區(qū)。這些包括但不限于，在脊椎動(dòng)物細(xì)胞中起 作用的轉(zhuǎn)錄控制區(qū)域，例如但不限于，來自巨細(xì)胞病毒（與內(nèi)含子-A結(jié)合的立即早期啟動(dòng) 子）、猿猴病毒40 (早期啟動(dòng)子）和逆轉(zhuǎn)錄病毒（如勞斯肉瘤病毒）的啟動(dòng)子和增強(qiáng)區(qū)段。 其他轉(zhuǎn)錄控制區(qū)域包括來自脊椎動(dòng)物基因的轉(zhuǎn)錄控制區(qū)，如肌動(dòng)蛋白、熱擊蛋白、牛生長(zhǎng)激 素和兔β-球蛋白，以及能夠控制真核細(xì)胞中基因表達(dá)的其他序列。其他合適的轉(zhuǎn)錄控制 區(qū)域包括組織特異性的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子，以及淋巴因子可誘導(dǎo)的啟動(dòng)子（如通過干擾素或 白介素誘導(dǎo)的啟動(dòng)子）。
[0179] 相似地，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知多種翻譯控制元件。這些翻譯控制元件包括，但 不限于核糖體結(jié)合位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄起始和終止密碼子和源自小核糖核酸病毒的元件（尤其是內(nèi) 部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)，或IRES，也稱作CITE序列）。
[0180] 在其他實(shí)施方式中，多核苷酸是RNA，例如，以信使RNA(mRNA)形式。
[0181] 多核苷酸和核酸編碼區(qū)可以與編碼分泌肽或信號(hào)肽的其他編碼區(qū)結(jié)合，所述分泌 肽和信號(hào)肽指導(dǎo)由多核苷酸編碼的多肽的分泌。根據(jù)信號(hào)假說，哺乳動(dòng)物細(xì)胞分泌的蛋白 質(zhì)具有信號(hào)肽或分泌前導(dǎo)序列，一旦生長(zhǎng)的蛋白鏈輸出穿過粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)已經(jīng)開始，所述信 號(hào)肽或分泌前導(dǎo)序列就從成熟蛋白中切除。本領(lǐng)域技術(shù)人員意識(shí)到，脊椎動(dòng)物細(xì)胞分泌的 多肽通常具有融合于多肽N-末端的信號(hào)肽，其從完整或"全長(zhǎng)"的多肽中切除以產(chǎn)生該多 肽分泌的或"成熟的"形式。在一些實(shí)施方式中，使用天然的信號(hào)肽（例如，免疫球蛋白重 鏈或輕鏈信號(hào)肽），或所述序列的功能性衍生物，所述功能性衍生物保留了指導(dǎo)與其可操作 地結(jié)合的多肽分泌的能力?；蛘撸墒褂卯愒床溉閯?dòng)物信號(hào)肽或其功能性衍生物。例如，野 生型前導(dǎo)序列可由人類組織型纖溶酶原激活物（TPA)或小鼠 β-葡萄糖苷酸酶的前導(dǎo)序列 代替。
[0182] 如本發(fā)明所使用的術(shù)語〃多肽〃意為包含單個(gè)〃多肽〃和多個(gè)〃多肽"，并指由酰 胺鍵（也稱為肽鍵）線性連接的單體（氨基酸）組成的分子。術(shù)語"多肽"指兩個(gè)或兩個(gè)以 上氨基酸的任何單鏈或多鏈，且不指明產(chǎn)物的具體長(zhǎng)度。因此，用于指兩個(gè)或多個(gè)以上氨基 酸的單鏈或多鏈的肽、二肽、三肽、寡肽、"蛋白質(zhì)〃、"氨基酸鏈〃或任何其他術(shù)語都包含在 "多肽"的定義內(nèi)，且可用術(shù)語"多肽"替代任何上述肽、二肽、三肽、寡肽、"蛋白質(zhì)"、"氨基酸 鏈"或任何其他術(shù)語或與任何上述肽、二肽、三肽、寡肽、"蛋白質(zhì)"、"氨基酸鏈"或任何其他 術(shù)語互換使用。術(shù)語"多肽"還意指多肽表達(dá)后修飾的產(chǎn)物，包括而不限于糖基化、乙?；?、 磷酸化、酰胺化、由己知的保護(hù)/保護(hù)基團(tuán)衍生化，以及蛋白水解切割或被非自然產(chǎn)生的氨 基酸修飾。多肽可來源于天然的生物來源或由重組技術(shù)產(chǎn)生，但并不必須由設(shè)計(jì)的核酸序 列翻譯而來。它可以任何方式生成，包括化學(xué)合成。
[0183] 多肽可以是長(zhǎng)度約為3個(gè)或更多、5個(gè)或更多、10個(gè)或更多、20個(gè)或更多、25個(gè)或 更多、50個(gè)或更多、100個(gè)或更多、200個(gè)或更多、500個(gè)或更多、1000個(gè)或更多或2000個(gè)或 更多的氨基酸。盡管它們并不必需具有該結(jié)構(gòu)，多肽可以具有定義的三維結(jié)構(gòu)。具有定義 的三維結(jié)構(gòu)的多肽被稱為折疊的多肽，而不具有定義的三維結(jié)構(gòu)但能夠采用（adopt)大量 不同的構(gòu)象的多肽被稱為未折疊的多肽。如本發(fā)明所使用的術(shù)語"糖蛋白"指蛋白與至少 一個(gè)糖部分（moiety)偶聯(lián)，其中所述糖部分通過氨基酸殘基（如絲氨酸殘基或天冬氨酸殘 基）的含氧或含氮側(cè)鏈連接（attach)到蛋白上。
[0184] "分離的"多肽或片段、變體或其衍生物指不在其自然環(huán)境中的多肽。不需要特殊 水平的純化。例如，分離的多肽可從天然或自然的環(huán)境中分離出。宿主細(xì)胞中表達(dá)的重組 產(chǎn)生的多肽和蛋白被認(rèn)為是分離的，正如己用任何適當(dāng)?shù)募夹g(shù)分離、分餾、部分或充分純化 的天然或重組多肽。
[0185] 多肽可由互相以肽鍵或修飾的肽鍵（即肽的電子等排體）連接的氨基酸組成，并 可包含20個(gè)基因編碼氨基酸以外的氨基酸（如，非自然產(chǎn)生的氨基酸）。多肽可由天然過 程修飾，例如翻譯后加工，或由本領(lǐng)域熟知的化學(xué)修飾技術(shù)來修飾。
[0186] 當(dāng)術(shù)語〃片段〃、〃變體〃、〃衍生物〃和〃類似物〃是指LING0-2拮抗劑時(shí)，其包 括促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活的任何詰抗劑分子。這些術(shù)語還包括促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)的任 何拮抗劑分子?？扇艿腖ING0-2多肽可包括LING0-2蛋白水解片段、缺失片段以及特別是當(dāng) 遞送至動(dòng)物時(shí)更易到達(dá)作用位點(diǎn)的片段。多肽片段進(jìn)一步包括包含天然多肽抗原性或免疫 原性表位的任何多肽部分，其中所述表位包括線性以及三維表位?？扇艿腖ING0-2多肽可 包括含有上述片段的變體LING0-2區(qū)域以及具有因氨基酸取代、缺失或插入而改變的氨基 酸序列的多肽。變體可以自然產(chǎn)生，例如等位變體。"等位變體"指占據(jù)生物體染色體上特 定基因座的基因的替代形式。Genes II，Lewin，B.，ed，John Wiley&Sons，New York(1985)〇 可使用本領(lǐng)域公知的突變技術(shù)來生產(chǎn)非自然產(chǎn)生的變體?？扇艿腖INGO-2多肽可包括保守 的或非保守的氨基酸取代、缺失或添加。LING0-2拮抗劑還可包括衍生分子。例如，可溶的 LINGO-2多肽可包括這樣的LINGO-2區(qū)，其己被改變以展現(xiàn)天然多肽中未發(fā)現(xiàn)的額外特征。 實(shí)例包括融合蛋白和蛋白復(fù)合物。
[0187] 保守的取代包括下組中的取代：纈氨酸、丙氨酸和甘氨酸；亮氨酸、纈氨酸和異亮 氨酸；天冬氨酸和谷氨酸；天冬酰胺和谷氨酰胺；絲氨酸、半胱氨酸和蘇氨酸；賴氨酸和精 氨酸；以及苯丙氨酸和酪氨酸。非極性疏水氨基酸包括丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、 脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和甲硫氨酸。極性中性氨基酸包括甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱 氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。帶正電的（堿性）氨基酸包括精氨酸、賴氨酸和組氨 酸。帶負(fù)電（酸性）氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。上述提及的極性、堿性或酸性組中一 個(gè)成員被相同組中另一成員的任何取代可被認(rèn)為是保守的取代。
[0188] 非保守取代包括這些的取代，在其中⑴具有正電性側(cè)鏈的殘基（如Arg、His或 Lys)取代負(fù)電性殘基（如Glu或Asp)或被后者取代，（ii)親水殘基（如Ser或Thr)取代 疏水殘基（如41&、1^11、116、?116或\^11)或被后者取代，（1^)半胱氨酸或脯氨酸取代任何 其它殘基或被任何其它殘基取代，或（iv)具有大體積疏水或芳香側(cè)鏈的殘基（如Val、Ile、 Phe或Trp)取代具有較小側(cè)鏈（如Ala、Ser)或無側(cè)鏈（如Gly)的殘基或被后者取代。
[0189] 兩多核苷酸或多肽序列間的術(shù)語"百分率序列同一性"是指通過比較窗，考慮必需 引入添加或缺失（如缺口）以優(yōu)化兩序列間比對(duì)的序列間共享的完全匹配位置的數(shù)量。匹 配的位置是任何位置，該位置中相同的核苷酸或氨基酸位于目標(biāo)序列和參考序列兩者中。 同樣，因?yàn)閷?duì)目標(biāo)序列核酸或氨基酸計(jì)數(shù)而不是對(duì)來自參考序列的核酸或氨基酸計(jì)數(shù)，因 此不記入存在于參考序列的缺口。
[0190] 通過如下方式計(jì)算序列同一性百分比：確定位置的數(shù)量（在該位置上，兩序列中 的氨基酸殘基或核酸堿基相同）以產(chǎn)生匹配位置的數(shù)量，將匹配位置的數(shù)量除以比較框中 位置的總數(shù)再將結(jié)果乘以100得到序列同一性百分比。通過使用現(xiàn)有的在線或下載的可提 供的軟件對(duì)兩序列間的序列進(jìn)行比對(duì)并確定序列同一性百分比?？蓮母鞣N渠道獲得適合用 于蛋白和核酸序列比對(duì)的軟件程序。確定序列同一性百分比的一個(gè)合適的軟件為bl2seq， 其是BLAST程序套件一部分，該BLSAT套件可從美國(guó)政府的國(guó)家生物信息中心BLSAT網(wǎng)址 (blast.ncbi.nlm.nih.gov)處獲得。B12seq使用BLASTN或BLASTP算法進(jìn)行兩序列間的 比對(duì)。BLASTN用于比對(duì)核酸序列，而BLASTP用于比對(duì)氨基酸序列。其他合適的程序?yàn)?，?如Needle、Stretcher、Water或Matcher，生物信息程序EMBOSS套件的一部分，并且也能夠 從歐洲生物信息學(xué)研宄所（EBI)于www. ebi.ac. uklTools/psa處獲得。
[0191] 與多核苷酸或多肽參考序列比對(duì)的單個(gè)多核苷酸或多肽目標(biāo)序列中的不同區(qū)域 均可具有它們自己的序列同一性百分比。應(yīng)當(dāng)注意的是序列同一性百分比數(shù)值四舍五入至 最接近的十分之一。例如80. 11、80. 12、80. 13和80. 14向下四舍五入至80. 1，而80. 15、 80. 16、80. 17、80. 18,和80. 19向上四舍五入至80. 2。還應(yīng)當(dāng)注意所述數(shù)值的長(zhǎng)度將永遠(yuǎn) 是整數(shù)。
[0192] 本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解（appreciate)，為了計(jì)算序列同一1性百分比而產(chǎn)生序列比 對(duì)并不限定于僅由一級(jí)序列數(shù)據(jù)驅(qū)動(dòng)的二進(jìn)制序列-序列比對(duì)。序列比對(duì)可由多重序列比 對(duì)驅(qū)動(dòng)?？梢援a(chǎn)生多重序列比對(duì)的合適的軟件為ClustalW2,該軟件可從www. clustal. org 處獲得。另一個(gè)合適的軟件是MUSCLE，其可從www. driveS. com! muscle/處獲得?；蛘?， ClustalW2和MUSCLE也可從例如EBI得到。
[0193] 同樣應(yīng)當(dāng)理解可通過將序列數(shù)據(jù)與異源數(shù)據(jù)，例如結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)（如晶體蛋白結(jié)構(gòu)）、 功能數(shù)據(jù)（如突變的位置）或進(jìn)化數(shù)據(jù)相整合來產(chǎn)生序列比對(duì)。整合異源數(shù)據(jù)以產(chǎn)生多重 序列比對(duì)的合適的軟件為T-Coffee，其可獲得自www. tcoffee. org，或從EBI處獲得。還應(yīng) 當(dāng)理解可自動(dòng)或手動(dòng)進(jìn)行（curate)用于計(jì)算序列同一性百分率的最終比對(duì)。
[0194] 當(dāng)指抗-LING0-2抗體或抗體多肽時(shí)，術(shù)語"片段"、"變體"、"衍生物"和"類似物" 包括任何保留相應(yīng)抗體或抗體多肽的至少一些抗原結(jié)合特性的多肽。除本發(fā)明中其他地方 論述的特異性抗體片段外，多肽片段包括蛋白水解片段和缺失的片段。除非特別指出，本發(fā) 明中所使用的參照抗體的"其片段"指免疫特異性片段，即抗原特異性片段?？?LING0-2抗 體的變體和抗體多肽的變體包括如上所述的片段，且還包括由于氨基酸替換、缺失或插入 而改變的氨基酸序列的多肽。變體可以是自然發(fā)生的或非自然發(fā)生的。變體多肽可包括保 守或非保守氨基酸替換、缺失或添加。變體多肽同樣在本發(fā)明可指"多肽類似物"。本發(fā)明 中所使用的抗-LING0-2抗體或抗體多肽的"衍生物"指通過功能側(cè)鏈基團(tuán)的反應(yīng)衍生的具 有一個(gè)或多個(gè)化學(xué)殘基的主題多肽（subject polypeptide)。"衍生物"還包括那些包含一 個(gè)或多個(gè)20種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的自然產(chǎn)生的氨基酸衍生物的多肽。例如，4-羥基脯氨酸可取代 脯氨酸；5-羥基賴氨酸可以取代賴氨酸；3-甲基組氨酸可以取代組氨酸；均聚絲氨酸可以 取代絲氨酸；和鳥氨酸可取代賴氨酸。抗-LING0-2抗體和抗體多肽的衍生物可包括已改變 的以展現(xiàn)出在參考抗體或抗體多肽中未發(fā)現(xiàn)的額外特征的多肽。
[0195] "多肽片段"指多肽的短氨基酸序列。蛋白片段可以是"獨(dú)立的（free-standing) "， 或被包含在更大的多肽中，其中所述片段形成區(qū)域的一部分。多肽片段的代表性實(shí)例包括， 例如，含有約5個(gè)氨基酸、約10個(gè)氨基酸、約15個(gè)氨基酸、約20個(gè)氨基酸、約30個(gè)氨基酸、 約40個(gè)氨基酸、約50個(gè)氨基酸、約60個(gè)氨基酸、約70個(gè)氨基酸、約80個(gè)氨基酸、約90個(gè) 氨基酸、約100個(gè)氨基酸、約200個(gè)氨基酸、約300個(gè)氨基酸、約400個(gè)氨基酸、約500個(gè)氨 基酸、約600個(gè)氨基酸以及約1，000個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的片段。
[0196] "結(jié)合分子"或"抗原結(jié)合分子"其最寬泛的含義是指特異地結(jié)合抗原決定簇的分 子。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述結(jié)合分子特異性地結(jié)合LING0-2 (如全長(zhǎng)的LING0-2或成熟的 LING0-2)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，抗原結(jié)合分子是抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0197] 本發(fā)明中描述了抗-LING0-2抗體或其抗原結(jié)合片段、變體和其衍生物。除非特指 全長(zhǎng)抗體（如自然產(chǎn)生的抗體），術(shù)語"抗-LING0-2抗體"包含全長(zhǎng)抗體以及該抗體的抗原 結(jié)合片段、變體、類似物或衍生物，如自然產(chǎn)生的抗體或免疫球蛋白分子或工程抗體分子或 與抗體分子以相似的方式與抗原相結(jié)合的片段。
[0198] 在一些實(shí)施方式中，氨基酸替換是保守氨基酸替換?；蛘?，通過例如飽和誘變，可 隨機(jī)地沿全部或部分編碼序列引入突變，并且可篩選所得的突變體的生物活性以鑒定保留 活性的突變體（如結(jié)合LING0-2多肽（如人類、靈長(zhǎng)類、鼠，或人類、靈長(zhǎng)類、鼠 LING0-2的 任意組合）的能力）。"人類"或"完全人類"抗體的這種變體（或其衍生物）還可指"優(yōu)化 的"或"為抗原結(jié)合而優(yōu)化的"且包括具有提高的抗原親和力的人類或完全人類抗體。
[0199] 在一個(gè)實(shí)施方式中，所述LING0-2拮抗劑是"抗體"或"免疫球蛋白"分子或其抗 原結(jié)合片段，如自然產(chǎn)生的抗體或免疫球蛋白分子或工程化的抗體分子或與抗體分子以相 似的方式與抗原相結(jié)合的片段。本發(fā)明中術(shù)語"抗體"和"免疫球蛋白"可互換使用?？?體或免疫球蛋白至少包括重鏈的可變結(jié)構(gòu)域，并且通常至少包括重鏈和輕鏈的可變結(jié)構(gòu) 域。脊椎動(dòng)物系統(tǒng)中的基本免疫球蛋白結(jié)構(gòu)相對(duì)的被很好地理解。參見例如Harlow等人， Antibodies:A Laboratory Manual， (Cold Spring Harbor Laboratory Press,2nd ed.， 1988)〇
[0200] 在自然產(chǎn)生的抗體中，存在于每個(gè)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域中的6個(gè)〃互補(bǔ)決定區(qū)〃或 "CDR"是短的、非連續(xù)的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列當(dāng)抗體在水性環(huán)境中采取其三 維構(gòu)型時(shí)被特別地放置以形成抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。被稱為"框架"區(qū)的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域中 氨基酸的剩余部分顯示出較少的分子間可變性?？蚣軈^(qū)在很大程度上采用β-片構(gòu)型，而 且⑶R形成環(huán)，其中所述環(huán)連接β-片結(jié)構(gòu)并且在一些情況下形成β-片結(jié)構(gòu)的一部分。 因此，框架區(qū)用來形成支架結(jié)構(gòu)（scaffold)，其為了通過鏈間非共價(jià)相互作用以正確方向 走位CDR而做準(zhǔn)備。由定位的CDR所形成的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域界定與免疫反應(yīng)性抗原上的 表位互補(bǔ)的表面。這種互補(bǔ)性表面促進(jìn)抗體對(duì)其同源表位的非共價(jià)結(jié)合。對(duì)于任何給定 的重鏈或輕鏈可變區(qū)，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以容易地鑒定分別包括CDR和框架區(qū)在內(nèi)的 氨基酸，因?yàn)樗鼈兗航?jīng)被精確地定義（參見"Sequences of Protein of Immunological Interest"Kabat, E.等，U. S. Department of Health and Human Services, (1983);和 Chothia 和 Lesk，J. Mo I. Biol.，196:901-917 (1987)，其通過引用全文并入本）。
[0201] 如果本領(lǐng)域使用和/或接受的術(shù)語有兩個(gè)或多個(gè)的定義，本發(fā)明使用的定義意 在包含所有這些定義，除非明確指出相反意義。一個(gè)具體的例子是使用術(shù)語"互補(bǔ)決定 區(qū)"（"CDR"）描述在重鏈和輕鏈多肽可變區(qū)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的非連續(xù)抗原結(jié)合位點(diǎn)。這個(gè)特殊 的區(qū)域己在Kabat等在美國(guó)健康與人類服務(wù)部發(fā)表的文章 "Sequences of Proteins of Immunological Interest"（1983)和 Chothia 等在 J. Mol. Biol. 196:901-917(1987)中發(fā) 表的文章中描述，上述文獻(xiàn)通過引用全部并入本發(fā)明。當(dāng)將Kabat和Chothia的⑶R定義 相互比較時(shí)，根據(jù)Kabat和Chothia的⑶R定義包括氨基酸殘基的重疊或氨基酸殘基的子 集。然而，適用于抗體或其變體CDR的任一定義的應(yīng)用意在本發(fā)明定義及使用的術(shù)語的范 圍之內(nèi)。包括由以上引用的每一參考文獻(xiàn)所定義的CDR的適當(dāng)?shù)陌被釟埢谙卤?中列 出以作比較。包含特定CDR的確切的殘基數(shù)目取決于CDR的序列和大小而變化。已知抗體 的可變區(qū)氨基酸序列，本領(lǐng)域的技術(shù)人員通?？纱_定哪些殘基包含特定的CDR。
[0202] 表 I. CDR 定義1
[0203]

【權(quán)利要求】
1. 一種能夠特異性結(jié)合LINGO-2的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其 抗原結(jié)合片段能夠促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的存活。
2. 分離的核酸，其包含編碼SEQ ID NO ;2多膚的可溶片段或其變體的多核巧酸，其中 所述多膚能夠促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的存活。
3. 分離的核酸，其包含編碼SEQ ID NO ;2多膚的可溶性片段或其變體的多核巧酸，其 中所述多膚能夠促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的存活減少軸突生長(zhǎng)的抑制。
4. 權(quán)利要求2或3的核酸，包含編碼多膚的多核巧酸，所述多膚包含與選自由SEQ ID NO ;2的氨基酸1到500組成的組的參考氨基酸序列至少90%相同的氨基酸序列。
5. 權(quán)利要求3的核酸，其中所述多膚包含與所述參考氨基酸序列至少95%相同的氨基 酸序列。
6. 權(quán)利要求4的核酸，其中所述多膚包含與所述參考氨基酸序列相同的氨基酸序列。
7. 權(quán)利要求2-6中任一項(xiàng)的核酸，進(jìn)一步包含編碼融合至所述多膚的異源多膚的多核 巧酸。
8. 權(quán)利要求7的核酸，其中所述異源多膚選自由免疫球蛋白、血清白蛋白、祀向性多 膚、報(bào)告多膚、純化易化多膚、任何所述多膚的片段，和兩種或更多種所述多膚或片段的組 合所組成的組。
9. 權(quán)利要求8的核酸，其中所述異源多膚選自由免疫球蛋白Fc、人血清白蛋白或其片 段、組氨酸標(biāo)簽，和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元糖蛋白或其片段所組成的組。
10. 包含藥學(xué)上可接受的載體和權(quán)利要求2-9中任一項(xiàng)的核酸的組合物。
11. 包含權(quán)利要求2-9中任一項(xiàng)的核酸的載體。
12. 權(quán)利要求11的載體，其中所述核酸可操作地連接于表達(dá)控制序列。
13. 權(quán)利要求12的載體，其中所述載體是病毒載體。
14. 權(quán)利要求13的載體，其中所述病毒載體選自由腺病毒載體、慢病毒載體、桿狀病毒 載體、愛潑斯坦-己爾病毒載體、乳多空病毒載體、牛痘病毒載體和單純瘤疹病毒載體所組 成的組。
15. 包含權(quán)利要求2-9中任一項(xiàng)的核酸或權(quán)利要求11-14中任一項(xiàng)的載體的宿主細(xì)胞。
16. 權(quán)利要求15的宿主細(xì)胞，其表達(dá)所述多膚。
17. 由權(quán)利要求2-9中任一項(xiàng)的核酸編碼的分離的多膚。
18. 權(quán)利要求17的多膚，其中所述多膚通過合成生產(chǎn)。
19. 權(quán)利要求17或18的多膚，其中所述多膚綴合于聚合物。
20. 權(quán)利要求19的多膚，其中所述聚合物選自由聚亞燒基二醇、糖類聚合物、多膚所組 成的組。
21. 權(quán)利要求20的多膚，其中所述聚亞燒基二醇是聚己二醇（PEG)。
22. 權(quán)利要求19-21中任一項(xiàng)的多膚，其中所述多膚綴合于1、2、3或4種聚合物。
23. 權(quán)利要求22的多膚，其中所述聚合物的總分子量為20, 000化到40, 000化。
24. -種抗體或其抗原結(jié)合片段，其能夠特異地結(jié)合權(quán)利要求17或18的多膚，其中所 述抗體或其抗原結(jié)合片段能夠促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的存活。
25. -種抗體或其抗原結(jié)合片段，其能夠特異結(jié)合權(quán)利要求17或18的多膚，其中所述 抗體或其抗原結(jié)合片段能夠促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的存活減少軸突生長(zhǎng)的抑制。
26. 包含藥學(xué)上可接受的載體權(quán)利要求17-23中任一項(xiàng)多膚的組合物。
27. 包含藥學(xué)上可接受的載體權(quán)利要求15或16的宿主細(xì)胞的組合物。
28. -種用于促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活的方法，包括使所述運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與有效量的包含 LING0-2括抗劑的組合物接觸，其中所述LING0-2括抗劑選自由W下所組成的組； a)可溶的LING0-2多膚； (ii) LING0-2抗體或其抗原結(jié)合片段； (iii) LING0-2括抗劑多核巧酸； (iv) LING0-2 適體；和 (V)兩種或更多種所述LING0-2括抗劑的組合。
29. -種促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)的方法，包括使所述運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與包含LING0-2括 抗劑的組合物接觸，其中所述LING0-2括抗劑選自由W下所組成的組： a)可溶的LING0-2多膚； (ii) LING0-2抗體或其抗原結(jié)合片段； (iii) LING0-2括抗劑多核巧酸； (iv) LING0-2 適體；和 (V)兩種或更多種所述LING0-2括抗劑的組合。
30. -種促進(jìn)哺乳動(dòng)物中運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活的方法，包括對(duì)其有需要的哺乳動(dòng)物給予有 效量的包含LINGO-2括抗劑的組合物，其中所述LINGO-2括抗劑選自由W下所組成的組； a)可溶的LINGO-2多膚； (ii) LING0-2抗體或其抗原結(jié)合片段； (iii) LING0-2括抗劑多核巧酸； (iv) LING0-2 適體；和 (V)兩種或更多種所述LINGO-2括抗劑的組合。
31. -種促進(jìn)哺乳動(dòng)物中運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)的方法，包括對(duì)其有需要的哺乳動(dòng)物給 予有效量的包含LINGO-2括抗劑的組合物，其中所述LINGO-2括抗劑選自由W下所組成的 組： a)可溶的LINGO-2多膚； (ii) LINGO-2抗體或其抗原結(jié)合片段； (iii) LINGO-2括抗劑多核巧酸； (iv) LINGO-2 適體；和 (V)兩種或更多種所述LINGO-2括抗劑的組合。
32. -種治療哺乳動(dòng)物中與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活相關(guān)的疾病、病癥或損傷的方法，包括對(duì)其 有需要的哺乳動(dòng)物給予有效量的包含LINGO-2括抗劑的組合物，其中所述LINGO-2括抗劑 選自由W下所組成的組： a)可溶的LINGO-2多膚； (ii) LINGO-2抗體或其抗原結(jié)合片段； (iii) LINGO-2括抗劑多核巧酸； (iv) LINGO-2 適體；和 (V)兩種或更多種所述LINGO-2括抗劑的組合。
33. -種治療哺乳動(dòng)物中與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)相關(guān)的疾病、病癥或損傷的方法，包括 對(duì)其有需要的哺乳動(dòng)物給予有效量的包含LING0-2括抗劑的組合物，其中所述LING0-2括 抗劑選自由W下所組成的組： a)可溶的LING0-2多膚； (ii) LING0-2抗體或其抗原結(jié)合片段； (iii) LING0-2括抗劑多核巧酸； (iv) LING0-2 適體；和 (V)兩種或更多種所述LING0-2括抗劑的組合。
34. 權(quán)利要求28-33中任一項(xiàng)的方法，其中所述LING0-2括抗劑是可溶的LING0-2多 膚。
35. 權(quán)利要求34的方法，其中所述LING0-2括抗劑包含權(quán)利要求17-23中任一項(xiàng)的多 膚。
36. 權(quán)利要求35的方法，其中所述可溶的LING0-2多膚包含選自由W下所組成的組的 LING0-2 區(qū)域； (i) LING0-2Ig結(jié)構(gòu)域或其片段、變體或衍生物， (ii) LINGO-化RR結(jié)構(gòu)域或其片段、變體或衍生物， (iii) 所述LING0-2結(jié)構(gòu)域或其片段、變體或衍生物的組合。
37. 權(quán)利要求35或36的方法，其中所述可溶LING0-2多膚缺乏選自由W下所組成的組 的LING0-2區(qū)域； (i) LING0-2跨膜結(jié)構(gòu)域或其片段、變體或衍生物， (ii) LING0-2胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域或其片段、變體或衍生物，和 (iii) 所述LING0-2結(jié)構(gòu)域或其片段、變體或衍生物的組合。
38. 權(quán)利要求28至33中任一項(xiàng)的方法，其中所述LING0-2括抗劑是LING0-2抗體或其 抗原結(jié)合片段。
39. 權(quán)利要求119的方法，其中所述LING0-2抗體或其抗原結(jié)合片段是權(quán)利要求1的抗 體或其抗原結(jié)合片段。
40. 權(quán)利要求28至33中任一項(xiàng)的方法，其中所述LING0-2括抗劑包含LING0-2括抗劑 多核巧酸。
41. 權(quán)利要求40的方法，其中所述LING0-2括抗劑多核巧酸選自由W下所組成的組： (i) 反義多核巧酸； (ii) 核酶； (iii) 小干擾 RNA(siRNA);和 (iv) 小發(fā)夾 RNA(shRNA)。
42. 權(quán)利要求28至33中任一項(xiàng)的方法，其中所述LINGO-2括抗劑包含LINGO-2適體。
43. 權(quán)利要求30至33中任一項(xiàng)的方法，其中所述哺乳動(dòng)物已被診斷為患有設(shè)及運(yùn)動(dòng)神 經(jīng)元的疾病、病癥或損傷。
44. 權(quán)利要求32,33和34中任一項(xiàng)的方法，其中所述疾病、病癥或損傷選自肌萎縮側(cè) 索硬化癥（ALS)、原發(fā)性側(cè)索硬化（PLS)、進(jìn)行性肌萎縮（PM)、遺傳性疫李性截?fù)砘疭P)、 X-連鎖脊髓延髓性肌萎縮（SBMA;甘乃迪病化ennedy disease))、進(jìn)行性延髓麻搏、假性延 髓麻搏、脊髓性肌肉萎縮癥（SMA)、小兒麻搏癥后期綜合癥（PPS)、亨廷頓氏癥、原發(fā)性震顫 (ET)、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病、擁痕和帕金森氏病所組成的組。
45. 權(quán)利要求44的方法，其中所述疾病、病癥或損傷為肌萎縮側(cè)索硬化癥（ALS)。
46. 權(quán)利要求28至45中任一項(xiàng)的方法，其中所述LING0-2括抗劑通過推注注射或慢性 輸注給予。
47. 權(quán)利要求28至45中任一項(xiàng)的方法，其中所述LING0-2括抗劑被直接給予到中樞神 經(jīng)系統(tǒng)中。
48. 權(quán)利要求28至45中任一項(xiàng)的方法，其中所述LING0-2括抗劑被全身性給予。
49. 權(quán)利要求28或29的方法，包括（a)用經(jīng)可操作地連接于表達(dá)控制序列的編碼所 述LING0-2括抗劑的多核巧酸轉(zhuǎn)染所述運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，W及化）允許所述LING0-2括抗劑的 表達(dá)。
50. 權(quán)利要求30至48中任一項(xiàng)的方法，包括（a)給予哺乳動(dòng)物經(jīng)可操作地連接于表達(dá) 控制序列的編碼所述LINGO-2括抗劑的多核巧酸，W及化）允許所述LINGO-2括抗劑的表 達(dá)。
51. 權(quán)利要求50的方法，其中所述多核巧酸作為表達(dá)載體而被給予。
52. 權(quán)利要求51的方法，其中所述表達(dá)載體是病毒載體。
53. 權(quán)利要求52所述的方法，其中病毒載體選自由腺病毒載體、甲病毒載體、腸道病毒 載體、癌疫病毒載體、慢病毒載體、桿狀病毒載體、瘤疹病毒載體、乳多空病毒載體、和痘病 毒載體所組成的組。
54. 權(quán)利要求50至53中任一項(xiàng)的方法，其中所述給予包括（a)提供包含所述多核巧酸 的培養(yǎng)的宿主細(xì)胞，其中所述培養(yǎng)的宿主細(xì)胞表達(dá)所述LINGO-2括抗劑；和化）將所述培養(yǎng) 的宿主細(xì)胞導(dǎo)入到所述哺乳動(dòng)物中W使所述LINGO-2括抗劑在所述哺乳動(dòng)物中表達(dá)。
55. 權(quán)利要求54的方法，其中所述培養(yǎng)的宿主細(xì)胞源于要進(jìn)行治療的哺乳動(dòng)物。
56. 權(quán)利要求51至55中任一項(xiàng)的方法，其中所述載體由選自由局部給予、眼內(nèi)給予、腸 胃外給予、銷內(nèi)給予、硬膜下給予和皮下給予所組成的組的途徑給予。
【文檔編號(hào)】A61K39/395GK104470541SQ201380036873
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2013年5月14日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月14日
【發(fā)明者】S.米, R.B.佩平斯基 申請(qǐng)人:比奧根艾迪克Ma公司