用于治療和預(yù)防癌癥的包含蒲公英植物根部提取物的藥物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明是有關(guān)于一種制備用于治療或預(yù)防癌癥的包括蒲公英屬根部提取物的藥物的改善方法。在一個方面，所述方法包括冷凍蒲公英屬根部，以獲得冷凍的根，所述冷凍步驟至少產(chǎn)生部分破壞一個或多個根部細(xì)胞的效果；干磨所述冷凍植物根，以獲得磨碎的根部粉末，其中在所述干磨步驟中，冷凍的根的研磨溫度維持在低于大約40℃；將該磨碎的根部粉末浸泡在溶劑中，獲得含有液體溶液部分和固體部分的懸浮液；將所述液體溶液部分與所述固體部分進行分離，以提供使用在所述藥劑中的分離的液體提取物。
【專利說明】用于治療和預(yù)防癌癥的包含蒲公英植物根部提取物的藥物 及其制備方法
[0001] 相關(guān)申請 本申請享有35 U.S.C. 119(e)規(guī)定的、2012年2月10日申請的美國臨時專利申請序列 號61/597453的權(quán)益。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明是有關(guān)于一種制備包含屬于蒲公英屬植物的根部提取物的藥物的改進方 法，該藥物可以用于治療、改善或預(yù)防癌癥。本發(fā)明尤其是有關(guān)于一種包括蒲公英植物根部 提取物的藥物合成物的制備，用于治療和/或預(yù)防癌癥，且優(yōu)選大腸癌、胰腺癌、例如黑色 素瘤的皮膚癌、以及血癌，例如慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、慢性單核細(xì)胞 骨髓性白血病和霍奇金氏淋巴癌。

【背景技術(shù)】
[0003] 蒲公英（Taraxacum)屬植物，通常也熟知為蒲公英（dandelion),是屬于菊科。這 些植物通常在北半球的溫帶被發(fā)現(xiàn)，并且蒲公英的種類包括西洋蒲公英（T. officinale)、紅 果蒲公英（T. erythrospermum)、朝鮮蒲公英（T. albidum)、日本蒲公英（T. japonicum)、平 滑蒲公英（T. laevigatum)、紅果蒲公英和加利福尼亞蒲公英（T. californicum)。
[0004] 蒲公英是主根性二年生植物或是多年生草本植物，平均長度在15-30cm。它的葉 子大，顏色為淺綠至深綠色，在其根部聚集叢生。它的花柄是直立的，并且具有單生、頂生花 序。開花的直徑范圍在7-15mm，由140-400個黃色舌形小花組成。它的果實是圓錐形瘦果， 棕褐色，種子上有白色冠毛結(jié)成的絨球，隨風(fēng)飄散到遠處。
[0005] 蒲公英屬植物根部通常包含多種化合物，這些化合物包括倍半萜烯、類胡蘿卜素、 香豆素、類黃酮、酚酸、多糖、桉葉內(nèi)酯、三萜烯、固醇、類固醇等。這種化合物的具體例子包 括大根香葉內(nèi)酯、桉葉內(nèi)酯、愈創(chuàng)木內(nèi)酯、蒲公英苦素、苯丙素、糖苷、蒲公英苷、萵苣苦素、 葉黃素、紫黃素、七葉苷、東莨菪亭、槲皮素、木犀草素、蕓香苷、金圣草黃素、咖啡酸、香莢蘭 酸、丁香酸、阿魏酸、綠原酸、菊苣酸、對羥基苯乙酸、對羥基苯甲酸、菊糖、葡聚糖、甘露聚 糖、野黑櫻苷、11β,13_二氫山萵苣素、苦荬菜內(nèi)酯D、ai nSli〇Side蒲公英酸、β-吡喃葡萄 糖基、蒲公英酸、葡萄糖基酯、11，13-二氫蒲公英酸、1' -葡萄糖苷、山萵苣苦素、山萵苣素、 菊苣苷、四氫日登內(nèi)酯Β、蒲公英內(nèi)酯-O-β-吡喃葡萄糖苷、野黑櫻苷、二氫松柏苷、紫丁香 苷、二氫丁香苷、蒲公英留醇、Ψ-蒲公英留醇、高-蒲公英留醇、豆留醇、環(huán)狀類固醇、傘形 酮、蒲公英蛋白酶、α-香樹脂醇、β-香樹脂醇、阿里二醇、款東二醇、羽扇豆醇、蒲公英醇、 蒲公英甾醇、 3 β -羥基_18_羽扇豆烯-21-酮、β -谷甾醇、菜油甾醇、萵苣素 Α、膽素、果膠 和蒲公英賽醇。
[0006] 蒲公英提取物在過去用于例如抗氧化劑、利尿劑、止痛劑、抗凝血劑和抗癌劑。 Sigstedt 在"Evaluation of aqueous extracts of Taraxacum officinale on growth and invasion of breast and prostate cancer cells^ (International Journal of Oncology, ：32 (2008) :1085-1090)中報道了關(guān)于從蒲公英種的西洋蒲公英的葉子（"DLE")、 花（"DFE"）或根部（"DRE"）制備的粗提取物的抗癌活性。在Sigstedt的蒲公英粗提取 物由下列步驟制備：1)在室溫下將75g干的植物部分浸泡 24小時；2)過濾得到的混合物， 以除去微粒物質(zhì)；以及3)凍干混合物，得到粉末。Sigstedt發(fā)現(xiàn)，DLE會減少MCF-1/AZ乳 腺癌細(xì)胞的生長，對LNCaP C4-2B前列腺癌細(xì)胞則不會；并且DFE和DRE在影響癌細(xì)胞生長 上都失敗了。
[0007] Takasaki 在"Anti-carcinogenic Activity of Taraxacum Plant. I" (Biol· Pharm. Bull.，22. 6(1999) :602-605)報道了關(guān)于從日本蒲公英種的蒲公英中制備的根部提 取物。Takasaki描述，用禮甲醇溶液提取600g干的根部，提取3次，每次5個小時，然后蒸 發(fā)掉甲醇溶液，得到109g的甲醇提取物。Takasaki還描述了用0· 38L水提取60g的日本蒲 公英根部1個小時的水提取物，然后凍干得到的溶液。Takasaki描述到，甲醇提取物和水提 取物都能抑制兩階段的化學(xué)致癌的發(fā)生和生長。
[0008] 在 "Anti -carcinogenic Activity of Taraxacum Plant. II"（Biol.Pharm. Bull. ,22.6(1999):606-61000)報道了 Takasaki描述了另一種日本蒲公英的蒲公英根部 的制備方法，是用40L正己烷提取6. 7kg干的根部，提取3次，每次8個小時，得到120. 5g 的提取物。
[0009] 蒲公英植物的部分已被用于制備包括膠囊和藥酒的不同形式的提取物。尤其蒲公 英的根部被收獲用于制備"蒲公英咖啡"，將干的植物根部浸泡在沸水中而獲得。已經(jīng)意識 到的是，這種傳統(tǒng)形式的蒲公英提取物通常與更低的抗癌活性有關(guān)系，當(dāng)被引入到癌的或 腫瘤組織時會有10%的細(xì)胞死亡。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的一個目的是提供一種用于治療、改善和/或預(yù)防癌癥的藥劑或藥物組合 物，該藥劑或藥物組合物包括蒲公英屬植物根部提取物，優(yōu)選地結(jié)合藥學(xué)上可接受的載體、 稀釋劑、粘合劑、輔助劑和/或其它抗癌劑。
[0011] 本發(fā)明的另一目的是提供一種適合于和/或有益于作為藥物使用或人使用的蒲 公英屬植物根部提取物。
[0012] 本發(fā)明的還一目的是提供一種包含蒲公英屬植物根部提取物的藥劑或藥物組合 物的制備方法，該根部提取物包括至少一種化合物可用于治療、改善和/或預(yù)防癌癥。
[0013] 已經(jīng)意識到的是，蒲公英屬植物根部提取物可用在治療和/或預(yù)防癌癥，并且這 些癌癥不受限制地包括胰腺癌、大腸癌、血癌和皮膚癌。皮膚癌可能是黑色素癌，血癌可能 是白血病，例如但不限于此，霍奇金氏淋巴癌、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病 和慢性單核細(xì)胞骨髓性白血病。
[0014] 在一個可能的方法中，治療或預(yù)防癌癥的藥物通過下述步驟制備：冷凍蒲公英屬 植物根部，獲得冷凍的根，選擇所述冷凍步驟是用于實現(xiàn)至少部分破壞一個或多個根部細(xì) 胞；干磨上述冷凍的根，得到磨碎的根部粉末，其中在所述干磨步驟中，冷凍的根維持在低 于大約40°C的研磨溫度；將磨碎的根部粉末浸泡在溶劑中，得到具有液體提取部分和固體 顆粒部分的懸浮液；將液體提取物部分與固體顆粒部分分離，以提供用于藥物的分離的液 體提取物。
[0015]然而無意于受理論約束，實驗表明，包含在蒲公英屬植物根部中的抗癌化合物如 果在干燥環(huán)境中提高溫度的情況下可能會減少它們的活性，雖然這種影響在潮濕環(huán)境下是 不明顯的或不存在的。 申請人:已經(jīng)意識到，在提取制備過程中，蒲公英屬植物根部不可以暴 露在干熱環(huán)境中，以免導(dǎo)致減少甚至可能消除抗癌活性。蒲公英屬植物根部和它的抗癌活 性最容易受到在研磨步驟中的影響以使其活性消除，在所述研磨步驟中，植物根部、根部細(xì) 胞和細(xì)胞內(nèi)容物可能在與例如研磨刀片的研磨機的轉(zhuǎn)動元件接觸時被加熱。許多實驗顯 示，在高于40°C時會發(fā)生活性損失，暴露在高于70°c時可能會帶來抗癌活性的完全喪失。 [0016] 在一較佳實施例中，研磨溫度保持在低于大約〇°C，更優(yōu)選地在低于大約-25Γ， 最優(yōu)選地在低于大約-40 °C。
[0017] 更進一步地，已經(jīng)意識到的是，含有蒲公英屬植物根部提取物的藥物，如果所述由 干磨而非濕磨得到的植物根制備，其抗癌活性可能獲得改善。干磨是被認(rèn)為是能夠提供改 善的和/或可控的對根部細(xì)胞的破壞，這樣更多含量的細(xì)胞內(nèi)抗癌內(nèi)容物或化合物提供給 接下來的提取步驟。更佳地，所述冷凍的根干磨至平均粒徑在小于大約100 μ m,更優(yōu)選地， 小于大約50 μ m，最優(yōu)選地，在大約1 μ m至大約30 μ m。
[0018] 在一個較佳的方面，蒲公英屬植物根部提取物尤其用于包含在治療、改善或預(yù)防 癌癥的藥物中，如果蒲公英根部從植物在春季開花或發(fā)芽前、或較佳地前90天、更佳地前 30天內(nèi)采摘處于暫?；顒拥钠压僦参锸斋@，或在冬季蓓蕾停止生長進入冬眠期之前收 獲。
[0019] 然而無意于受理論約束，相信蒲公英屬植物根部在開花期或休眠期制備會有物理 變化。特別地，從在三個不同時間點（春天、夏天和初秋）獲得的蒲公英根（"DRE"）制備 的提取物得到的實驗數(shù)據(jù)表明，從在早春和初秋時期收獲的根制備的提取物對誘導(dǎo)癌細(xì)胞 的細(xì)胞死亡更有效。尤其，在加拿大安大略省在三月、九月和十月收獲的蒲公英根對誘導(dǎo)癌 細(xì)胞的細(xì)胞死亡非常有效。相信根部提取物的抗癌化合物是被合成用于準(zhǔn)備休眠期（在寒 冷的氣候），其可能會誘導(dǎo)準(zhǔn)備過冬的植物中的細(xì)胞死亡并消除老化細(xì)胞。
[0020] 在一個較佳實施例中，蒲公英屬植物根部在冷凍步驟前，干燥至相對濕度在大約 5 %至10 %。較佳地，將植物根部切成片狀根部切片，平均尺寸在大約0. 2cm至1. 0cm。
[0021] 蒲公英屬植物根部最好從下列蒲公英種類、但不限于這些種的植物中獲得：西洋 蒲公英、紅果蒲公英、朝鮮蒲公英、日本蒲公英、平滑蒲公英、紅果蒲公英和加利福尼亞蒲公 英。較佳地，植物根部從開放的草地采摘的西洋蒲公英或平滑蒲公英中獲得。
[0022] 在冷凍步驟中，較佳地，植物根部接觸或沉浸在液氮中，或者可選地，在低于0°C的 冷凍溫度中、或者更佳地在大約-210°C至大約-30°C之間實施，持續(xù)大約5分鐘至24小時， 或直到完全冰凍。
[0023]干磨步驟可以通過研磨機來實現(xiàn)，包括但不限于研缽及研杵、粉粹機、沖擊式研磨 機、微粉磨粉機，以對根部細(xì)胞產(chǎn)生實質(zhì)性破壞。為了減少暴露在干燥環(huán)境中超過40°C升高 的溫度中，最好冷卻研磨機，利用例如液氮，以阻止熱量接觸到冰凍的根或得到的磨碎的根 部粉末。最好將研磨機冷卻到低于-25°C，更佳地，低于-5(TC。
[0024]為了更好實現(xiàn)位于根部細(xì)胞的有治療活性的化合物的釋放，所述研磨步驟較佳地 破壞或破開細(xì)胞，以釋放它們的內(nèi)部物質(zhì)。
[0025] 將磨碎的根部粉末浸泡在液體或溶劑中，較佳地在極性溶劑中，例如在浸泡溫度 在大約5°C至大約l〇〇°C的水中，或者更佳地在大約25°C的水中。其它合適的溶劑包括但 不限于正戊烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷、苯、甲苯、1，4-二氧己環(huán)、三氯甲烷、乙醚、二氯甲烷、四氫呋 喃、乙酸乙酯、丙酮、二甲基甲酰胺、乙腈、二甲基亞砜、碳酸丙烯酯、甲酸、正丁醇、異丙醇、 正丙醇、乙醇、甲醇和醋酸。磨碎的根部粉末在液體中較佳地浸泡大約5分鐘至大約24小 時，或者更佳地在大約10分鐘至大約30分鐘，有或沒有攪拌。最佳地，磨碎的根部粉末以 l〇g研磨的根部/50ml水的濃度浸泡在水中，并煮沸10分鐘至30分鐘。
[0026] 所述懸浮液中的液體提取物部分，優(yōu)選地通過過濾和/或離心分離，與固體顆粒 部分進行分離。如果離心分離被操作施，較佳地，在5000Xg至8000Xg范圍內(nèi)實施，以除 去任何多余的纖維。過濾優(yōu)選為使用吸濾和濾紙張過濾器來操作，所述濾紙過濾器優(yōu)選為 具有的孔尺寸為小于或等于大約0. 45 μ m，并最優(yōu)選為小于或等于大約0. 22 μ m。在一個最 優(yōu)選實施例中，所述過濾步驟使用降低的孔尺寸的濾紙過濾器逐步過濾。用于所述過濾步 驟的一個或多個過濾器或濾紙可以是設(shè)置為可以除菌的。
[0027] 較佳地，從懸浮液中獲得的分離的液體提取物冷凍干燥至提取物粉末。更佳地，該 冷凍干燥步驟的操作溫度在大約-80?至-40°C。
[0028] 所述提取物粉末可以和藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、粘結(jié)劑、輔助劑和/或額外 的抗癌劑一起包括在所述藥物中。所述抗癌劑包括二甲雙胍、羥基脲、環(huán)磷酰胺和/或依托 泊苷。
[0029] 所述藥物較佳地包括包含大約5mg/kg體重/天至大約1000mg/kg體重/天的范 圍內(nèi)的所述提取物粉末的劑量，更佳地在大約10mg/kg體重/天至大約70mg/kg體重/天。 或者，較佳地在大約0. 5g至大約70g，更佳地在大約1至4g的所述提取物粉末包括在所述 藥物中制成每日劑量。
[0030] 在另一方面，本發(fā)明還提供一種用于治療或預(yù)防癌癥的、包括蒲公英屬植物根部 提取物的藥物的制備方法，該方法包括下列步驟：（1)冷凍蒲公英屬植物根部，以獲得冷凍 的植物根，所述冷凍步驟至少產(chǎn)生部分破壞一個或多個根部細(xì)胞的效果，其中所述蒲公英 植物根部包括在植物發(fā)芽或開花之前或在芽生長停止后收獲的處于休眠狀態(tài)的蒲公英屬 植物根部；(2)千磨所述冷凍的植物根，以獲得平均粒徑小于大約100 μ m、較佳地小于大約 5〇 μ m的磨碎的植物根部粉末，其中在所述干磨步驟中，冷凍的根的研磨溫度維持在低于大 約40°C; (3)將該磨碎的植物根部粉末浸泡在包括乙醇和水的其中一種或兩種的溶劑中，生 成含有液體溶液部分和固體部分的混合物；(4)將所述液體溶液部分與所述固體部分進行 分離；以及（ 5)冷凍干燥所述液體溶液部分，獲得作為干燥的提取物粉末的蒲公英屬植物 根部提取物，并可選地，將該干燥的提取物部分與藥學(xué)可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、輔助 劑和抗癌劑中的一種或多種混合。
[0031] 處于休眠狀態(tài)的植物根部在第一次季節(jié)性植物開花或發(fā)芽之前的90天、較佳地 30天內(nèi)收獲。該植物根部可來自屬于西洋蒲公英、紅果蒲公英、朝鮮蒲公英、日本蒲公英、平 滑蒲公英、紅果蒲公英和加利福尼亞蒲公英的種中的植物。
[0032]該植物根部較佳地在冷凍前干燥至小于大約10%的相對濕度。在接下來的所述 冷凍步驟中，根植物根部較佳地接觸或浸沒在液氮中，至平均冷凍溫度在大約-210Γ至大 約-30°C。
[0033] 在所述千磨步驟中，所述冷凍的根研磨，較佳地，至平均粒徑小于大約 50 μ m、更佳 地在大約1 μ m至大約30 μ m之間。所述千磨步驟可以通過研磨機實現(xiàn)，包括但不限于研缽 及研杵、粉粹機、沖擊式研磨機、微粉磨粉機，以對一個或多個根部細(xì)胞產(chǎn)生實質(zhì)性破壞。為 了減少暴露在干燥環(huán)境中升高的溫度中，最好冷卻研磨機，利用例如液氮，最好將研磨機冷 卻到低于大約-25°C,更佳地低于大約_50°C。
[0034] 在所述浸泡步驟中所用的溶劑可以額外地包括正戊烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷、苯、甲苯、 1,4-二氧己環(huán)、三氯甲烷、乙醚、二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙醋、丙酮、二甲基甲酰胺、乙腈、 二甲基亞砜、碳酸丙烯酯、甲酸、正丁醇、異丙醇、正丙醇、甲醇或醋酸中的一種或多種。所述 浸泡步驟的浸泡溫度較佳地在大約5°C至大約100°C，較佳地浸泡大約5分鐘至大約24小 時，有或沒有攪拌。
[0035]從混合物中的所述固體部分分離出所述液體溶液部分可以利用不同的分離技 術(shù)。這種技術(shù)包括、但不限于離心分離和過濾。如果采用離心分離，較佳地在5000Xg至 8000Xg之間進行。如果使用過濾，較佳地使用至少兩種不同孔徑的過濾器進行至少兩次， 例如大約〇· 45 μ m和大約0. 22 μ m。為了提高人體服用的安全性，用于過濾步驟的一種或多 種過濾器或濾紙可以設(shè)置成可以除菌的。
[0036] 在一個較佳實施例中，研磨溫度低于大約0°C、較佳地低于大約-25?、更佳地低 于大約-40°C。
[0037] 所述藥物較佳地包括一種包含大約5mg/kg體重/天至大約1000mg/kg體重/天、 更佳地在大約10mg/kg體重/天至大約70mg/kg體重/天范圍內(nèi)的所述蒲公英屬植物提取 物的劑量?；蛘?，較佳地在大約〇· 5g至大約70g，更佳地在大約l-4g的所述蒲公英屬植物 提取物包括在每日劑量形式的所述藥物中。
[0038] 在方面（1)中，本發(fā)明還提供一種用于治療或預(yù)防癌癥的藥物的制備方法，該方 法包括：冷凍蒲公英屬植物根部，以獲得冷凍的植物根，所述冷凍步驟至少產(chǎn)生部分破壞一 個或多個根部細(xì)胞的效果；干磨所述冷凍植物根，以獲得磨碎的植物根部粉末，其中在所述 千磨步驟中，冷凍的根的研磨溫度維持在低于大約40°C ;將該磨碎的植物根部粉末浸泡在 溶劑中，獲得含有液體溶液部分和固體部分的懸浮液；將所述液體溶液部分與所述固體部 分進行分離，以提供使用在所述藥物中的分離的液體提取物。
[0039] 在方面（2)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（1)所述的方法，其中所述癌癥是大腸 癌、胰腺癌、血癌或皮膚癌。
[0040] 在方面（3)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（1)和/或（2)所述的方法，其中所述癌 癥包括所述血癌或所述皮膚癌，并且選自由慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞白血病、慢性 單核細(xì)胞骨髓性白血病、霍奇金氏淋巴癌和黑色素瘤組成的組。
[0041] 在方面（4)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（1)至（3)中任意一個或多個任意組合 的方法，其中在所述冷凍步驟之前，該方法還包括干燥所述植物根部至相對濕度在大約5% 至大約10 %之間。
[0042]在方面（5)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（D至（4)中的任意一個或多個任意組 合的方法，其中所述蒲公英屬植物根部包括在植物開花或發(fā)芽之前或在芽生長停止之后收 獲的處于休眠狀態(tài)的蒲公英屬植物根部。
[0043] 在方面（6)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（1)至（5)中的任意一個或多個任意組 合的方法，其中所述處于休眠狀態(tài)的蒲公英屬植物根部在所述的植物開花或發(fā)芽之前大約 90天、較佳地大約30天內(nèi)收獲。
[0044] 在方面（7)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（1)至（6)中的任意一個或多個任意組 合的方法，其中所述蒲公英屬植物根部是來自屬于選自包括西洋蒲公英、紅果蒲公英、朝鮮 蒲公英、日本蒲公英、平滑蒲公英、紅果蒲公英和加利福尼亞蒲公英的組的種的植物中的一 種或幾種。
[0045] 在方面（8)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（1)至（7)中的任意一個或多個任意會且 合的方法，其中所述冷凍步驟包括將所述植物根部接觸或浸沒在液氮中，或者將所述植物 根部冷凍至平均冷凍溫度在大約-21(TC至大約-30°C之間。
[0046] 在方面（9)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（1)至（8)中的任意一個或多個任意組 合的方法，其中所述干磨步驟包括干燥研磨所述冷凍的根至平均粒徑小于大約100 μ m、較 佳地小于大約50 μ m。
[0047] 在方面（10)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（1)至（9)中的任意一個或多個任意組 合的方法，其中所述干磨步驟包括用選自由粉粹機、沖擊式研磨機和微粉磨粉機組成的組 的研磨機干燥研磨冷凍的根，其中將研磨機或它的部件冷卻至低于大約-25?，更佳地低于 大約-50?，以阻止熱量接觸到冰凍的根或磨碎的根部粉末。
[0048] 在方面（11)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（1)至（10)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述所述溶劑包括水、正戊烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷、苯、甲苯、1，4-二氧己環(huán)、 三氯甲烷、乙醚、二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、丙酮、二甲基甲酰胺、乙腈、二甲基亞砜、碳 酸丙烯酯、甲酸、正丁醇、異丙醇、正丙醇、乙醇、甲醇和醋酸中的一種或多種。
[0049] 在方面（12)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（1)至（11)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述浸泡步驟包括將所述磨碎的根部粉末以浸泡溫度在大約2°C至大約 150?、較佳地大約5°C至大約100?條件下浸泡在水中，較佳地浸泡大約5分鐘至大約料 小時，有或沒有攪拌。
[0050] 在方面（I3)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面⑴至（12)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述分離步驟包括過濾和離心分離中的至少一種，其中所述過濾可以是 實施一次，或者使用多個相同或不同孔徑的過濾器實施多次，所述離心分離是在 5〇〇〇Xg 至8000Xg之間進行。
[0051] 在方面（14)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（1)至（13)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述分離步驟包括用具有第一孔徑為大約〇. 45 μ m的第一過濾器和具有 第二孔徑為大約0· 22 μ m的第二過濾器過濾所述懸浮液至少兩次，其中所述第二過濾器是 用于除菌。
[0052] 在方面（I5)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（1)至（H)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中在所述干磨步驟之前，該方法還包括將所述植物根部切片，形成多個根部 切片。
[0053]在方面（I6)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（1)至（15)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述研磨溫度低于大約o°c。
[0054]在方面（Π )中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面⑴至（16)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述研磨溫度低于大約-25。(：，較佳地低于大約-4(TC。
[0055] 在方面（I8)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（1)至（17)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述方法還包括冷凍干燥分離后的液體提取物，以獲得提取物粉末，以 及，可選地，將所述提取物粉末與藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、粘結(jié)劑、輔助劑和抗癌劑中 的一種或多種混合。
[0056] 在方面（19)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面⑴至（18)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述抗癌劑是二甲雙胍、羥基脲、環(huán)磷酰胺和依托泊苷中的一種或多種。
[0057] 在方面（20)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面⑴至（19)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述藥物包括一個具有大約5mg/kg體重/天至大約1000mg/kg體重/天 的范圍內(nèi)的所述提取物粉末的劑量，更佳地在大約l〇mg/kg體重/天至大約70mg/kg體重 /天。
[0058] 在方面（21)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（1)至（20)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述藥物包括一個日劑量,該日劑量是具有大約0. 5g至大約70g，更佳地 在大約1至4g的所述提取物粉末。
[0059] 在方面（22)中，本發(fā)明提供一種用于治療或預(yù)防癌癥的、包括蒲公英屬植物根部 提取物的藥物的制備方法，該方法包括下列步驟：（1)冷凍蒲公英屬植物根部，以獲得冷凍 的植物根，所述冷凍步驟至少產(chǎn)生部分破壞一個或多個根部細(xì)胞的效果，其中所述蒲公英 植物根部包括在植物發(fā)芽或開花之前或在芽生長停止后收獲的處于休眠狀態(tài)的蒲公英屬 植物根部；(2)干磨所述冷凍植物根，以獲得平均粒徑在小于大約100 μ m、較佳地小于大約 50 μ m的磨碎的植物根部粉末，其中在所述干磨步驟中，冷凍的根的研磨溫度維持在低于大 約40?; (3)將該磨碎的植物根部粉末浸泡在包括乙醇和水的其中一種或兩種溶劑中，生成 含有液體溶液部分和固體部分的混合物；(4)將所述液體溶液部分與所述固體部分進行分 離；以及（5)冷凍千燥所述液體溶液部分，獲得作為干燥的提取物粉末的蒲公英屬植物根 部提取物，并可選地，將該干燥的提取物部分與藥學(xué)可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、輔助劑 和抗癌劑中的一種或多種混合。
[0060] 在方面（23)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)所述的方法，其中所述癌癥是大腸 癌、胰腺癌、血癌或皮膚癌。
[0061] 在方面（24)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)和/或（23)所述的方法，其中所 述癌癥是慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞白血病、慢性單核細(xì)胞骨髓性白血病、霍奇金氏 淋巴癌或黑色素瘤。
[0062] 在方面（25)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)至（24)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述處于休眠狀態(tài)的蒲公英屬植物根部在第一季節(jié)性植物開花或發(fā)芽之 前大約90天、較佳地大約30天內(nèi)收獲。
[0063]在方面（26)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)至（25)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述蒲公英屬植物根部是來自屬于選自包括西洋蒲公英、紅果蒲公英、朝 鮮蒲公英、日本蒲公英、平滑蒲公英、紅果蒲公英和加利福尼亞蒲公英的組的種的植物中的 一種或多種。
[0064] 在方面（27)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)至（26)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中在所述冷凍步驟之前，該方法還包括干燥所述植物根部至相對濕度低于 大約10%。
[0065]在方面（28)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)至（27)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述冷凍步驟包括將所述植物根部接觸或浸沒在液氮中，冷凍至平均冷 凍溫度在大約-210°C至大約-30?之間。
[0066] 在方面（29)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)至（28)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述干磨步驟包括用研磨機干燥研磨所述冷凍的根至平均粒徑小于大約 5〇 μ m,并且產(chǎn)生對一個或多個根部細(xì)胞有實質(zhì)性破壞的效果，所述研磨機選自由粉粹機、 沖擊式研磨機和微粉磨粉機組成的組，其中所述干磨步驟還包括將所述研磨機冷卻至低于 大約-25°C。
[0067] 在方面（30)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)至（29)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述溶劑還包括正戊烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷、苯、甲苯、1，4-二氧己環(huán)、三氯甲 烷、乙醚、二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、丙酮、二甲基甲酰胺、乙腈、二甲基亞砜、碳酸丙烯 酯、甲酸、正丁醇、異丙醇、正丙醇、甲醇或醋酸。
[0068] 在方面（31)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)至（30)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述浸泡步驟包括將所述磨碎的植物根部粉末以浸泡溫度在大約5°C至 大約100°C條件下浸泡在溶劑中，較佳地浸泡大約5分鐘至大約24小時，有或沒有攪拌。 [0069] 在方面（32)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)至（31)中的任意一個或多個任 意組合的方法，其中所述分離步驟包括過濾和離心分離中的至少一種，其中所述過濾是進 行一次或者使用多個相同或不同孔徑的過濾器進行多次，所述離心分離是在5000Xg至 8000 Xg之間進行。
[0070] 在方面（33)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)至（32)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述分離步驟包括用具有第一孔徑為大約0. 45 μ m的第一過濾器和具有 第二孔徑為大約〇· 22 μ m的第二過濾器過濾所述混合物至少兩次，其中所述第一和/或第 二過濾器是用于除菌。
[0071] 在方面（34)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)至（33)中的任意一個或多個任 意組合的方法，其中所述抗癌劑包括二甲雙胍、羥基脲、環(huán)磷酰胺和依托泊苷中的一種或多 種。
[0072]在方面（35)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)至（34)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中在所述干磨步驟之前，該方法還包括將所述蒲公英屬植物根部切片，形成 數(shù)片平均尺寸在大約〇. 2cm至1. 5cm的根部切片。
[0073] 在方面（36)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)至（35)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述研磨溫度低于大約〇°C。
[0074] 在方面（37)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)至（36)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述研磨溫度低于大約-25°C，較佳地低于大約-40°C。
[0075] 在方面（38)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)至（37)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述藥物包括一種具有大約5mg/kg體重/天至大約lOOOrag/kg體重/天 的范圍內(nèi)的所述蒲公英屬植物根部提取物的劑量，更佳地在大約10mg/kg體重/天至大約 70mg/kg體重/天。
[0076] 在方面（39)中，本發(fā)明提供一種根據(jù)方面（22)至（38)中的任意一個或多個任意 組合的方法，其中所述藥物包括一種日劑量，該日劑量是具有大約0. 5g至大約7〇g，更佳地 在大約l-4g的所述蒲公英屬植物根部提取物。

【專利附圖】

【附圖說明】 ~
[0077] 圖丨是顯示基于用不同含量的DRE(x軸）治療的人急性T-細(xì)胞白血?。↗urkat) 細(xì)胞誘發(fā)細(xì)胞凋亡的百分?jǐn)?shù)（y軸）的柱狀圖。 、
[0078] 圖2是顯示不同濃度DRE(x軸）的Jurkat細(xì)胞的存活百分率（y軸）的柱狀圖。
[0079] 圖3是顯示用不同濃度的DRE(x軸）治療24、48或72小時后 A375人體黑色素瘤 細(xì)胞的存活百分率（y軸）的線圖。 、
[0080]圖4是一組用濃度為lmg/ml、2_ 5mg/ml、5mg/ml和l〇mg/ml的DRE、并且包括對照 組治療48小時后，用Hoechst 33?2熒光染料著色的A375人體黑色素瘤細(xì)胞的熒光顯微 鏡照片。 >
[0081] 圖 5 是一組用濃度為 〇· 6mg/ml、1. 〇mg/ml、2. 5mg/ml 和 5. Omg/ml 的 DRE、并且包括 對照組治療48小時后，用Hoechst熒光染料著色或Annexin-V染色劑著色（分別在頂部行 和底部行）的MV-4-11細(xì)胞的400倍放大的圖像。
[0082] 圖 6 是一組用濃度為 〇· 6mg/ml、1· 〇mg/ml、2. 5mg/ml 和 5. 0mg/ml 的 DRE、并且包括 對照組治療48小時后用Hoechst熒光染料著色或Annexin-V染色劑著色（分別在頂部行 和底部行）的U-937細(xì)胞的400倍放大的圖像。
[0083] 圖 7 是一組用濃度為 〇· 6mg/ml、1. 〇mg/ml、2· 5mg/ml 和 5. 0mg/ml 的 DRE、并且包括 對照組治療48小時后用Hoechst熒光染料著色或Annexin-V染色劑著色（分別在頂部行 和底部行）的HL-60細(xì)胞的400倍放大的圖像。
[0084] 圖 8 是用濃度為 0· 6mg/ml、1. 0mg/ml、2. 5mg/ml 和 5. 0mg/ml 的 DRE、并且包括對照 組治療48小時后，MV-4-11細(xì)胞被誘導(dǎo)凋亡的百分?jǐn)?shù)（y軸）的柱狀圖。
[0085] 圖 9 是顯示用濃度為 〇· 6mg/ml、l· 〇mg/ml、2· 5mg/ml 和 5. 0mg/ml 的 DRE、并且包括 對照組治療48小時后，HL-60細(xì)胞被誘導(dǎo)凋亡的百分?jǐn)?shù)（y軸）的柱狀圖。
[0086] 圖 10 是顯示用濃度為 0· 6mg/ml、l. 〇mg/ml、2. 5mg/ml 和 5. 0mg/ml 的 DRE、并且包 括對照組治療48小時后，U-937細(xì)胞被誘導(dǎo)凋亡的百分?jǐn)?shù)（y軸）的柱狀圖。
[0087] 圖11是顯示用0. 6mg/ml的DRE、并且包括對照組治療5分鐘、15分鐘、30分鐘和 60分鐘后，MV-4-11細(xì)胞中的Caspase-8的活力或活性（y軸）的柱狀圖。
[0088] 圖12是顯示用0. 6mg/nil的DRE、并且包括對照組治療5分鐘、15分鐘、30分鐘和 60分鐘后，MV-4-11細(xì)胞中的Caspase-3的活力或活性（y軸）的柱狀圖。
[0089] 圖13是一組用濃度為2. 5mg/ml、5mg/ml和7. 5mg/ml的DRE、包括對照組（行）治 療24小時、48小時、72小時和96小時（列）的用Hoechst熒光染料著色的PANC-1細(xì)胞圖 像。
[0090] 圖14是顯示用濃度為2. 5mg/ml、5mg/ml和7. 5mg/ml的DRE、包括對照組治療24 小時、48小時、72小時和96小時（X軸）的PANC-1細(xì)胞的細(xì)胞凋亡的平均百分?jǐn)?shù)（y軸） 的柱狀圖。
[0091] 圖15是一組用普通過濾水或包含5. Omg/ml的DRE的水治療一個月（分別在左列 和右列）后40倍或63倍放大（分別在頂部行和底部行）的伊紅染色的balb/c小鼠的肝 臟組織圖像。
[0092] 圖16是顯示用濃度為2. 5mg/ml或5. 0mg/ml的DRE、包括對照組治療不同天數(shù)（x 軸）的balb/c小鼠體重（y軸）的線圖。
[0093] 圖17是一組用濃度為0· 4mg/ml、0. 6mg/ml和2. 5mg/ml的DRE、包括對照組治療96 小時后，用Hoechst 33342熒光染色劑著色（上行）或在相襯照明（底行）上看到的DnFADD 細(xì)胞400倍放大的顯微鏡圖像。
[0094] 圖18是顯示用濃度為0. 4mg/ml、0. 6mg/ml和2. 5mg/ml (X軸）、包括對照組的DRE 治療的外周血單個核細(xì)胞的細(xì)胞死亡平均百分?jǐn)?shù)（y軸）的柱狀圖。
[0095] 圖19是顯示用濃度為0. 4mg/ml和0. 6mg/ml的DRE (X軸）、包括對照組治療的外 周血單個核細(xì)胞的濃度（y軸）的柱狀圖。
[0096] 圖20是顯示用通過使用臺盼藍拒染試驗獲得的濃度為0. 6mg/ml和2. 5mg/ml的 DRE (X軸）、包括對照組治療的DnFADD細(xì)胞的濃度（y軸）圖。
[0097] 圖21是顯示用DRE、包括對照組治療15分鐘、30分鐘、60分鐘、180分鐘和1440 分鐘的DnFADD細(xì)胞中Caspase-8的平均顯示的活力或活性（y軸）的柱狀圖。
[0098] 圖22是一組用濃度為1. Omg/ml、2. 5mg/ml和5. Omg/ml的DRE、包括對照組治療 后，從最新診斷的白血病病人中分、離并用Hoescht或Annexin-V染色劑（分別在頂部行和 底部行）著色的外周血單個核細(xì)胞的圖像。
[0099] 圖23是顯示用濃度為1. Omg/ml、2. 5mg/ml和5. Omg/ml的DRE、包括對照組治療 24小時或48小時后，從最新診斷的白血病病人中分離并被誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的外周血單個核 細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)（y軸）的柱狀圖。
[01 00]圖 24 是顯示用濃度為 0. 5mg/ml、1. Omg/ml、1. 5mg/ml、2. 0mg/ml、2. 5mg/ml、 3. 0mg/ml、3_ 5mg/ml、4. 0mg/ml、4. 5mg/ml、5· 0mg/ml、5. 5mg/ml 和 6. Omg/ml 的 DRE、包括對 照組治療24、4S、72和96個小時后HT-29人體大腸癌細(xì)胞的存活率百分?jǐn)?shù)（y軸）的柱狀 圖。
[0101] 圖25是一組用普通過濾水（上行）或用DRE治療一個月（底行）后，經(jīng)伊紅染色 的balb/c小鼠心臟、腎臟和肝臟組織的圖像。
[0102] 圖26是顯示用DRE、包括對照組治療不同天數(shù)（X軸）的balb/c小鼠的重量（y 軸）的線圖。
[0103] 圖27是顯示從經(jīng)DRE、包括對照組治療的balb/c小鼠收集到的尿樣中發(fā)現(xiàn)的蛋白 質(zhì)的含量（y軸）的柱狀圖。
[0104] 圖28是顯不不同天數(shù)（X軸）對照組CD-I nu/rm小鼠的體重（y軸）的線圖。
[0105] 圖29是顯不用濃度為2. 5mg/ml的DRE治療不同天數(shù)（X軸）的CD-1 nu/nu小鼠 的體重（y軸）的線圖。
[0106] 圖3〇是CD-1 nu/nu小鼠移植HT-29細(xì)胞、并用過濾的普通過濾水治療三個星期 后的照片。
[0107] 圖31是CD-1 nu/nu小鼠移植HT-29細(xì)胞、并用濃度為2. 5mg/ml的DRE治療三個 星期后的照片。
[0108] 圖32是顯示用濃度為2_5mg/ml的DRE、包括對照組治療不同天數(shù)（X軸）的 CD-Inu/nu小鼠的腫瘤體積（y軸）的柱狀圖。
[0109]圖33是一組用普通過濾水治療一個月后，用1〇倍或63倍放大（分別為頂部行和 底部兩行）的經(jīng)伊紅染色的CD-I nu/nu小鼠心臟、腎臟、肝臟和異種器官移植的腫瘤組織 圖像。
[0110] 圖34是一組用濃度為2. 5mg/ml的DRE治療一個月后，用10倍或63倍放大（分 別為頂部行和底部兩行）的經(jīng)伊紅染色的CD-1 nu/nu小鼠心臟、腎臟、肝臟和異種器官移 植的腫瘤組織圖像。

【具體實施方式】
[0111] 根據(jù)本發(fā)明的較佳實施例，用于治療和/或預(yù)防腫瘤的蒲公英屬植物根部提取物 被制備。為制備出較佳的蒲公英屬植物根部提取物，在加拿大安大略省，在春季開花之前的 大約30天、以及正好在秋季的開始的時候，西洋蒲公英種的蒲公英被采集。采集到的植物 在水中清洗，然后切下莖的基部以獲得根部。然后將收獲到的根部切成大約在長度方向上 1/4"長的切片。
[0112] 將切成的根部切片浸沒在液氮中大約5-10分鐘，直到完全冷凍。冷凍的切片在沖 擊式研磨機中研磨至平均粒徑大約小于45 μ m。將磨碎的根部浸泡在沸騰過的蒸餾水中浸 泡1個小時，以溶解活性化合物。
[0113] 在提取/溶解步驟之后，包含有活性化合物的蒸餾水用孔徑大約為0.45μπι的 濾紙真空過濾，以移除其它植物物質(zhì)（plant matter)和過量的纖維。然后將得到的濾液 在-80°C下冷凍千燥，以獲得粉末的根部提取物。經(jīng)千燥的提取物放在水中重構(gòu)，給出最終 濃度為l〇〇mg/ml的存貨樣本。該根部提取物的存貨樣本進一步用孔徑大約為0. 22 μ m的 細(xì)菌過濾紙真空過濾，以殺菌、制備提取物備用。為了給藥，將大約lg的粉末根部提取物重 新溶解在大約10ml的沸騰過的水中，并過濾。然后濾液可以對診斷有癌癥的病人給藥。較 佳地，用于給藥的粉末根部提取物與水的比例應(yīng)該每100ml大約在0. lg至50g之間的量。
[0114] 將本發(fā)明的植物根部提取物的幾份分離、并準(zhǔn)備為生物活性試驗做測試?；贒RE 誘到細(xì)胞凋亡的機制，多種化合物能夠單獨地或與一個或多個不同目標(biāo)結(jié)合地產(chǎn)生活性。 而且，本發(fā)明的DRE在包括那些對白血病、大腸癌、胰腺癌和黑色素瘤中實施的體外研究顯 示，在人體癌細(xì)胞系中可選擇性地誘發(fā)程序化的細(xì)胞死亡類型I和類型II，同時保持非腫 瘤細(xì)胞對細(xì)胞凋亡和自噬誘導(dǎo)不敏感。尤其，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，DRE可通過靶向于癌細(xì)胞上的死 亡受體，例如Fas或TNF死亡受體家族，或者激活死亡誘導(dǎo)信號復(fù)合物，來快速激活外在細(xì) 胞死亡通路，從而誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，通過治療后Caspase-8的快速激活和隨后的Caspase-3的 激活可以證實這一點。
[0115] 而且，在DRE中的化合物顯示出可直接靶向于癌細(xì)胞的線粒體，意味著DRE的成分 可直接與線粒體互相作用，引起它的不穩(wěn)定，來釋放促凋亡因子并產(chǎn)生活性氧。DRE被認(rèn)為 是包含了多種可能具有多重靶標(biāo)的化合物，并可以是以水溶性鹽、配位體衍生物或其它相 互作用/結(jié)合的蛋白的形式存在。
[0116] 本發(fā)明的藥物，采用大量細(xì)胞系測試它的活性和/或安全性。除此之外，還用從十 個不同癌癥病人中分離出來的細(xì)胞系做體外實驗，這十個不同癌癥病人患有慢性淋巴細(xì)胞 白血病、慢性髓細(xì)胞白血病或慢性單核細(xì)胞骨髓白血病。從這些病人中收集的血樣用不同 劑量的蒲公英根部提取物處理48小時。與從健康的志愿者中分離出的血液細(xì)胞系相比，蒲 公英根部提取物顯示出對慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞白血病和慢性單核細(xì)胞骨髓白 血病的細(xì)胞系的誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。
[0117] 下面還提供一個表格，這個表格綜述了許多在其它細(xì)胞系上做的額外測試和從每 個測試的細(xì)胞系獲得的實驗數(shù)據(jù)：

【權(quán)利要求】
1. 一種制備用于治療或預(yù)防癌癥的藥物的方法，該方法包括： 冷凍蒲公英屬植物根部，以獲得冷凍的植物根，所述冷凍步驟至少產(chǎn)生部分破壞一個 或多個根部細(xì)胞的效果； 干燥研磨所述冷凍植物根，以獲得磨碎的根部粉末，其中在所述干燥研磨步驟中，冷凍 的根的研磨溫度維持在低于大約4〇°C ; 將該磨碎的根部粉末浸泡在溶劑中，獲得含有液體萃取部分和固體顆粒部分的懸浮 液；以及 將所述液體萃取部分與所述固體顆粒部分進行分離，以提供使用在所述藥劑中的分離 的液體提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述癌癥是大腸癌、胰腺癌、血癌或皮膚 癌。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述癌癥包括所述血癌或所述皮膚癌，并 且選自由慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞白血病、慢性單核細(xì)胞骨髓性白血病、霍奇金氏 淋巴癌和黑色素瘤組成的組。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項所述的方法，其特征在于，在所述冷凍步驟之前，該方 法還包括千燥所述植物根部至相對濕度在大約5%至大約10%之間。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述蒲公英屬植物根部 包括在植物開花或發(fā)芽之前或在芽生長停止之后收獲的處于休眠狀態(tài)的蒲公英屬植物根 部。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述處于休眠狀態(tài)的蒲公英屬植物根部 在所述的植物開花或發(fā)芽之前大約90天、較佳地大約30天內(nèi)收獲。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述蒲公英屬植物根部 是來自于屬于選自包括西洋蒲公英、紅果蒲公英、朝鮮蒲公英、日本蒲公英、平滑蒲公英、紅 果蒲公英和加利福尼亞蒲公英的組的種的植物。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1-7中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述冷凍步驟包括將所 述植物根部接觸或浸沒在液氮中，或者將所述植物根部冷凍至平均冷凍溫度在大約-21〇°C 至大約-30Γ之間。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1-8中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述干燥研磨步驟包括 干燥研磨所述冷凍的根至平均粒徑小于大約100 μ m、較佳地小于大約50 y m。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1-9中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述干燥研磨步驟包括 用選自由粉粹機、沖擊式研磨機和微粉磨粉機組成的組的研磨機干燥研磨所述冷凍的根， 其中將研磨機或它的部件冷卻至低于大約-25°C，更佳地低于大約_ 5〇?，以阻止熱量接觸 到所述冷凍的根或磨碎的根部粉末。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1-10中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述溶劑包括水、正戊 烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷、苯、甲苯、1，4-二氧己環(huán)、三氯甲烷、乙醚、二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙 酯、丙酮、二甲基甲酰胺、乙腈、二甲基亞砜、碳酸丙烯酯、甲酸、正丁醇、異丙醇、正丙醇、乙 醇、甲醇和醋酸中的一種或多種。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1-11中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述浸泡步驟包括將 所述磨碎的根部粉末浸泡在水中，浸泡溫度在大約5°C至大約100°C浸泡在水中，較佳地浸 泡大約5分鐘至大約24小時，有或沒有攪拌。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1-12中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述分離步驟包括過 濾和離心分離中的至少一種，其中所述過濾是進行一次或者使用多種相同或不同孔徑的過 濾器進行多次，所述離心分離是在5000Xg至8000Xg之間進行。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1-13中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述分離步驟包括用 具有第一孔徑為大約〇· 45 μ m的第一過濾器和具有第二孔徑為大約0· 22 μ m的第二過濾器 過濾所述懸浮液至少兩次，其中所述第二過濾器是用于除菌。
15. 根據(jù)權(quán)利要求1-14中的任意一項所述的方法，其特征在于，在所述干燥研磨步驟 之前，該方法還包括將所述植物根部切片，形成多個根部切片。
16. 根據(jù)權(quán)利要求1-15中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述研磨溫度低于大 約(TC。
17. 根據(jù)權(quán)利要求1-16中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述研磨溫度低于大 約-25?，較佳地低于大約-40°C。
18. 根據(jù)權(quán)利要求1-17中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述方法還包括冷凍 干燥分離后的液體提取物，以獲得提取物粉末，以及，可選地，將所述提取物粉末與藥學(xué)上 可接受的載體、稀釋劑、粘結(jié)劑、輔助劑和抗癌劑中的一種或多種混合。
19. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，所述抗癌劑是二甲雙胍、羥基脲、環(huán)磷 酰胺和依托泊苷中的一種或多種。
20. 根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的方法，其特征在于，所述藥劑包括一種具有大約5mg/ kg體重/天至大約l〇〇〇mg/kg體重/天的范圍內(nèi)的所述提取物粉末的劑量，更佳地在大約 10mg/kg體重/天至大約70mg/kg體重/天。
21. 根據(jù)權(quán)利要求1-20中的任意一項所述的方法，所述藥劑包括一日劑量，該日劑量 是具有大約〇. 5g至大約70g、更佳地在大約1至4g的所述提取物粉末。
22. -種制備用于治療或預(yù)防癌癥的包括蒲公英屬植物根部提取物的藥物的方法，其 特征在于，該方法包括下列步驟： (1) 冷凍蒲公英屬植物根部，以獲得冷凍的植物根，所述冷凍步驟至少產(chǎn)生部分破壞至 少一個根部細(xì)胞的效果，其中所述蒲公英植物根部包括在植物發(fā)芽或開花之前或在芽生長 停止后采摘的處于休眠狀態(tài)的蒲公英屬植物根部； (2) 干燥研磨所述冷凍植物根，以獲得平均粒徑在小于大約1〇〇 μ m、較佳地小于大約 50 μ m的磨碎的植物根部粉末，其中在所述干燥研磨步驟中，冷凍的根的研磨溫度維持在低 于大約40? ; (3) 將該磨碎的植物根部粉末浸泡在包括乙醇和水的其中一種或兩種溶劑中，生成含 有液體溶液部分和固體部分的混合物； (4) 將所述液體溶液部分與所述固體部分進行分離；以及 (5) 冷凍千燥所述液體溶液部分，獲得作為干燥的提取物粉末的蒲公英屬植物根部提 取物，并可選地，將該干燥的提取物部分與藥學(xué)可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、輔助劑和抗 癌劑中的一種或多種混合。
23. 根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述癌癥是大腸癌、胰腺癌、血癌或皮 膚癌。
24. 根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述癌癥是慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性 髓細(xì)胞白血病、慢性單核細(xì)胞骨髓性白血病、霍奇金氏淋巴癌或黑色素瘤。
25. 根據(jù)權(quán)利要求22-24中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述處于休眠狀態(tài)的 蒲公英屬植物根部在第一季節(jié)性植物開花或發(fā)芽之前大約90天、較佳地大約30天內(nèi)收獲。
26. 根據(jù)權(quán)利要求22-25中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述蒲公英屬植物根 部是來自于屬于選自包括西洋蒲公英、紅果蒲公英、朝鮮蒲公英、日本蒲公英、平滑蒲公英、 紅果蒲公英和加利福尼亞蒲公英的組的種的植物。
27. 根據(jù)權(quán)利要求22-26中的任意一項所述的方法，其特征在于，在所述冷凍步驟之 前，該方法還包括干燥所述植物根部至相對濕度低于大約1〇%。
28. 根據(jù)權(quán)利要求22-27中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述冷凍步驟包括 將所述植物根部接觸或浸沒在液氮中，冷凍至平均冷凍溫度在大約-210°C至大約-30?之 間。
29. 根據(jù)權(quán)利要求22-28中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述干燥研磨步驟包 括用研磨機干燥研磨所述冷凍的根至平均粒徑小于大約50 μ m，并且產(chǎn)生對一個或多個根 部細(xì)胞有實質(zhì)性破壞的效果，所述研磨機選自由粉粹機、沖擊式研磨機和微粉磨粉機組成 的組，其中所述干燥研磨步驟還包括將所述研磨機冷卻至低于大約_25°C。
30. 根據(jù)權(quán)利要求22-29中的任意一個所述的方法，其特征在于，所述溶劑還包括正戊 烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷、苯、甲苯、1，4-二氧己環(huán)、三氯甲烷、乙_、二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙 酯、丙酮、二甲基甲酰胺、乙腈、二甲基亞砜、碳酸丙烯酯、甲酸、正丁醇、異丙醇、正丙醇、甲 醇或醋酸。
31. 根據(jù)權(quán)利要求22-30中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述浸泡步驟包括將 所述磨碎的植物根部粉末以浸泡溫度在大約5°C至大約100°C浸泡在溶劑中，較佳地浸泡 大約5分鐘至大約24小時，有或沒有攪拌。
32. 根據(jù)權(quán)利要求22-31中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述分離步驟包括過 濾和離心分離中的至少一種，其中所述過濾是進行一次或者使用多種相同或不同孔徑的過 濾器進行多次，所述離心分離是在5000 X g至8000 X g之間進行。
33. 根據(jù)權(quán)利要求22-32中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述分離步驟包括用 具有第一孔徑為大約〇. 45 μ m的第一過濾器和具有第二孔徑為大約0. 22 μ m的第二過濾器 過濾所述混合物至少兩次，其中所述第一和/或第二過濾器是用于除菌。
34. 根據(jù)權(quán)利要求22-33中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述抗癌劑包括二甲 雙胍、羥基脲、環(huán)磷酰胺和依托泊苷中的一種或多種。
35. 根據(jù)權(quán)利要求22-34中的任意一項所述的方法，其特征在于，在所述千燥研磨步 驟之前，該方法還包括將所述蒲公英屬植物根部切片，形成多個平均尺寸在大約〇. 2cm至 1.5cm的根部切片。
36. 根據(jù)權(quán)利要求22-35中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述研磨溫度低于大 約(TC。
37. 根據(jù)權(quán)利要求22-36中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述研磨溫度低于大 約-25°C，較佳地低于大約-40°C。
38. 根據(jù)權(quán)利要求22-37中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述藥劑包括一種具 有大約5mg/kg體重/天至大約lOOOmg/kg體重/天的范圍內(nèi)的所述蒲公英屬植物根部提 取物的劑量，更佳地在大約l〇mg/kg體重/天至大約70mg/kg體重/天。
39.根據(jù)權(quán)利要求22-37中的任意一項所述的方法，其特征在于，所述藥劑包括一種日 劑量，該日劑量是具有大約〇. 5g至大約70g、更佳地在大約l-4g的所述蒲公英屬植物根部 提取物。
【文檔編號】A61K36/288GK104203260SQ201380007584
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2013年2月8日 優(yōu)先權(quán)日:2012年2月10日
【發(fā)明者】希亞朗·潘迪, 卡羅琳·瑪麗·哈姆, 帕梅拉·烏祖阿左·歐瓦杰 申請人:溫莎大學(xué)