葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及抗腫瘤靶向藥物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，它包括以下步驟：步驟一，將鹽酸米托蒽醌溶液與殼聚糖醋酸溶液混合，得到殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液；步驟二，將殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液加入到葉酸氨鹽溶液中，然后繼續(xù)往葉酸氨鹽溶液中加入多聚磷酸鈉水溶液，混合均勻，得到葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系；步驟三，將葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系進(jìn)行離心得到沉淀物，將沉淀物洗滌后進(jìn)行冷凍干燥，得到葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。該制備方法避免有機(jī)溶劑的使用，大大縮短了反應(yīng)的時(shí)間，所制得的納米微粒對(duì)腫瘤細(xì)胞具有明顯的靶向作用，且生物相容性好。
【專利說(shuō)明】葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及抗腫瘤靶向藥物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法。
【背景技術(shù)】 [0002]抗腫瘤藥物往往存在選擇性不高的缺點(diǎn)，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也可能殺死機(jī)體正常細(xì)胞，毒副作用較大，給患者帶來(lái)極大的痛苦。葉酸受體是腫瘤選擇性藥物輸送的特異性靶點(diǎn)，葉酸受體在約30%的腫瘤細(xì)胞(如卵巢癌細(xì)胞、結(jié)腸直腸癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、腎癌細(xì)胞等)膜表面的活性和數(shù)量明顯高于一般正常細(xì)胞。在藥理學(xué)上，由于受體與其配體的結(jié)合具有特異性、選擇性、親合力強(qiáng)等特點(diǎn)，利用配體作為藥物載體或與載體偶聯(lián)，通過(guò)受體介導(dǎo)作用，可增加藥物在病灶局部的濃度，從而能夠提高藥物的療效，降低毒副作用，達(dá)到靶向治療的目的。因此，作為葉酸受體的配體，葉酸在腫瘤治療及預(yù)防中越來(lái)越顯示出其應(yīng)用價(jià)值。
[0003]殼聚糖是一種廣泛存在于自然界的聚陽(yáng)離子多糖衍生物，又稱可溶性甲殼質(zhì)、甲殼胺、幾丁聚糖等，其結(jié)構(gòu)類似于纖維素。經(jīng)殼聚糖負(fù)載的抗癌藥物的作用時(shí)間顯著延長(zhǎng)，并且殼聚糖本身就具有抗腫瘤的特性，殼聚糖作為抗癌藥物的載體和抗癌藥物共同使用后，能夠明顯地提高藥物療效并降低藥物的毒副作用，因此，殼聚糖是抗癌藥物的理想載體。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)中，將葉酸分子偶聯(lián)到藥物載體上的方法，多采用偶聯(lián)劑將葉酸制備成葉酸活性酯，并且在制備葉酸活性酯時(shí)需使用大量的有機(jī)溶劑(例如二甲基亞砜)作為液相用以進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)完畢后，為了除去有機(jī)溶劑，需要經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的透析步驟，才能徹底將有機(jī)溶劑去除。因此，現(xiàn)有技術(shù)將葉酸分子偶聯(lián)到藥物載體上的方法，一方面存在反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)和步驟繁瑣的缺點(diǎn)，導(dǎo)致整個(gè)制備時(shí)間長(zhǎng)，生產(chǎn)效率低；另一方面，所使用的偶聯(lián)劑和作為液相的有機(jī)溶劑通常具有毒性，且偶聯(lián)劑容易殘留，殘留的偶聯(lián)試劑容易對(duì)機(jī)體造成細(xì)胞毒性以及對(duì)大分子產(chǎn)生滅活。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，該制備方法簡(jiǎn)單且反應(yīng)時(shí)間短。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，它包括以下步驟:
步驟一，將鹽酸米托蒽醌溶液與殼聚糖醋酸溶液混合，得到殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液；
步驟二，在一定溫度下，將所述殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液加入到葉酸氨鹽溶液中，然后繼續(xù)往所述葉酸氨鹽溶液中加入多聚磷酸鈉水溶液，混合均勻，得到葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系；步驟三，將步驟二得到的葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系進(jìn)行離心得到沉淀物，將沉淀物洗滌后進(jìn)行真空冷凍干燥，得到葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0007]上述技術(shù)方案中，所述鹽酸米托蒽醌溶液、所述殼聚糖醋酸溶液、所述葉酸氨鹽溶液和所述多聚磷酸鈉水溶液的體積比為ImL~2mL:2mL~6mL:2mL~6mL:lmL~3mL。
[0008]上述技術(shù)方案中，步驟一中，所述鹽酸米托蒽醌溶液是通過(guò)將鹽酸米托蒽醌溶于水中配制而成，所述鹽酸米托蒽醌溶液的質(zhì)量/體積濃度為0.5mg/mL~3mg/mL。
[0009]上述技術(shù)方案中，步驟一中，所述殼聚糖醋酸溶液是通過(guò)將殼聚糖溶于醋酸溶液中配制而成，所述殼聚糖醋酸溶液的質(zhì)量/體積濃度為lmg/mL飛mg/mL ;所述醋酸溶液的質(zhì)量百分濃度為1%~5%。
[0010]上述技術(shù)方案中，步驟二中，所述葉酸氨鹽溶液是通過(guò)將葉酸粉末溶于氨水中配制而成，所述葉酸氨鹽溶液的質(zhì)量/體積濃度為0.2mg/mL^lmg/mL ;所述氨水的質(zhì)量百分濃度為35%~45%。
[0011]上述技術(shù)方案中，步驟二中，所述多聚磷酸鈉水溶液是通過(guò)將多聚磷酸鈉溶于水中配制而成，所述多聚磷酸鈉水溶液的質(zhì)量/體積濃度為lmg/mL~4mg/mL。
[0012]上述技術(shù)方案中，所述多聚磷酸鈉為三聚磷酸鈉、四聚磷酸鈉或五聚磷酸鈉中的任意一種。 [0013]上述技術(shù)方案中，步驟二中，在磁力攪拌和水浴加熱的條件下，將所述殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液加入到葉酸氨鹽溶液中，然后往所述葉酸氨鹽溶液中繼續(xù)加入多聚磷酸鈉水溶液，加入完畢后，繼續(xù)磁力攪拌10mirT20min ；
所述磁力攪拌的速度為900r/min~1000r/min ;所述水浴加熱的溫度為50°C~60°C。
[0014]上述技術(shù)方案中，步驟二中，將所述殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液用注射器以逐滴滴入的方式加入到葉酸氨鹽溶液中，然后往所述葉酸氨鹽溶液中繼續(xù)用注射器以逐滴滴入的方式加入多聚磷酸鈉水溶液，所述逐滴滴入的速度均為I滴/秒~3滴/秒。
[0015]上述技術(shù)方案中，步驟三中，將沉淀物洗滌用的洗滌液是pH值為4.0-6.0的醋酸溶液；步驟三的離心速度為4500r/mirT5500r/min,離心時(shí)間為20mirT40min ;步驟三的真空冷凍干燥的真空度為8 Pa~12Pa，冷凍溫度為_(kāi)18°C '22°C，真空冷凍干燥的時(shí)間為9小時(shí)~11小時(shí)。
[0016]其中，所述鹽酸米托蒽醌溶液、所述殼聚糖醋酸溶液、所述葉酸氨鹽溶液和所述多聚磷酸鈉水溶液配制完成后，均用微孔濾膜過(guò)濾后再用于制備葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。優(yōu)選的，所述微孔濾膜的孔徑為0.2 μ m-Ο.45 μ m。
[0017]本發(fā)明的有益效果是:
(I)本發(fā)明提供的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，是對(duì)殼聚糖進(jìn)行親水改性，即將殼聚糖、葉酸和鹽酸米托蒽醌在水相中一步偶聯(lián)，避免了有機(jī)溶劑的使用，大大縮短了反應(yīng)的時(shí)間。
[0018](2)本發(fā)明提供的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，與現(xiàn)有技術(shù)中葉酸偶聯(lián)殼聚糖的方法相比，本發(fā)明的制備方法無(wú)需使用大量的有機(jī)試劑和有毒的偶聯(lián)劑，能夠避免偶聯(lián)劑的殘留，從而避免偶聯(lián)劑對(duì)機(jī)體造成細(xì)胞毒性以及對(duì)大分子產(chǎn)生滅活。[0019](3)本發(fā)明提供的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，所制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒對(duì)腫瘤細(xì)胞具有明顯的靶向作用，且制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的生物相容性好，并且能夠提升鹽酸米托蒽醌的控釋性和靶向性，從而提高鹽酸米托蒽醌抗腫瘤的療效。
[0020](4)本發(fā)明提供的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，所制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒具有粒徑可控的特點(diǎn)，通過(guò)控制各反應(yīng)因素，能夠控制葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的粒徑大小，其中，上述反應(yīng)因素包括:葉酸氨鹽溶液和殼聚糖醋酸溶液的質(zhì)量/體積濃度；鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液的體積比；殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液的滴入速度，水浴加熱的溫度；磁力攪拌的速度。
[0021](5)本發(fā)明提供的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，所制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒在透射電鏡下觀察，具有顆粒形態(tài)圓整、顆粒大小均勻、無(wú)黏連的特點(diǎn)，而且該葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備重復(fù)性良好，所制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的粒徑為25納米~40納米。
[0022](6)本發(fā)明提供的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，所制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒對(duì)鹽酸米托蒽醌的包封率高達(dá)89.9%~90.9%,載藥率為19.5%~20.7%。
[0023](7)本發(fā)明提供的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，所制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒在PH值為1.2人工胃液或pH值為6.8的人工腸液中均具有良好的緩控釋作用，且無(wú)突釋現(xiàn)象。
[0024](8)本發(fā)明提供 的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，具有反應(yīng)條件溫和、制備方法簡(jiǎn)單、易于工業(yè)化生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0025]利用附圖對(duì)發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但附圖中的實(shí)施例不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)以下附圖獲得其它的附圖。
[0026]圖1是本發(fā)明的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法的實(shí)施例1所制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的透射電鏡圖。
【具體實(shí)施方式】
[0027]下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0028]本發(fā)明的鹽酸米托蒽醌是一種抗癌藥物。
[0029]實(shí)施例1。
[0030]葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，它包括以下步驟:
步驟一，將鹽酸米托蒽醌溶液與殼聚糖醋酸溶液混合，得到殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液；
其中，鹽酸米托蒽醌溶液是通過(guò)將鹽酸米托蒽醌溶于水中配制而成，本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液的質(zhì)量/體積濃度為lmg/mL。[0031]其中，殼聚糖醋酸溶液是通過(guò)將殼聚糖溶于醋酸溶液中配制而成，本實(shí)施例中，殼聚糖醋酸溶液的質(zhì)量/體積濃度為2mg/mL，醋酸溶液的質(zhì)量百分濃度為2%。
[0032]步驟二，在磁力攪拌和水浴加熱的條件下，用注射器將殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液以I滴/秒的速度逐滴滴入葉酸氨鹽溶液中，然后繼續(xù)往葉酸氨鹽溶液中以I滴/秒的速度逐滴滴入三聚磷酸鈉水溶液，滴加完畢后，繼續(xù)磁力攪拌15min ;得到葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系；
本實(shí)施例中，磁力攪拌的速度為950r/min ;水浴加熱的溫度為55°C。
[0033]其中，葉酸氨鹽溶液是通過(guò)將葉酸粉末溶于氨水中配制而成，葉酸氨鹽溶液的質(zhì)量/體積濃度為0.5mg/mL ;氨水的質(zhì)量百分濃度為40%。
[0034]其中，三聚磷酸鈉水溶液是通過(guò)將三聚磷酸鈉溶于水中配制而成，三聚磷酸鈉水溶液的質(zhì)量/體積濃度為2mg/mL。
[0035]步驟三，將步驟二得到的葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系進(jìn)行離心得到藍(lán)綠色沉淀物，然后用pH值為5.0的醋酸溶液洗滌沉淀物，然后再重復(fù)上述離心和洗滌步驟，共重復(fù)三次，最后將沉淀物進(jìn)行真空冷凍干燥，得到葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0036]本實(shí)施例中，離心速度為5000r/min，離心時(shí)間為30min ;真空冷凍干燥的真空度為10Pa，冷凍溫度為_(kāi)20°C，真空冷凍干燥的時(shí)間為10小時(shí)。
[0037]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液的體積比為ImL:5mL:5mL:2mL。
[0038]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液配制完成后，均用孔徑為0.22 μ m的微孔濾膜過(guò)濾后再用于制備葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0039]本實(shí)施例1制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒對(duì)腫瘤細(xì)胞具有明顯的靶向作用，且制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的生物相容性好，并且能夠提升鹽酸米托蒽醌的控釋性和靶向性，從而提高鹽酸米托蒽醌抗腫瘤的療效。
[0040]實(shí)施例2。
[0041]葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，它包括以下步驟:
步驟一，將鹽酸米托蒽醌溶液與殼聚糖醋酸溶液混合，得到殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液；
其中，鹽酸米托蒽醌溶液是通過(guò)將鹽酸米托蒽醌溶于水中配制而成，本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液的質(zhì)量/體積濃度為3mg/mL。
[0042]其中，殼聚糖醋酸溶液是通過(guò)將殼聚糖溶于醋酸溶液中配制而成，本實(shí)施例中，殼聚糖醋酸溶液的質(zhì)量/體積濃度為5mg/mL，醋酸溶液的質(zhì)量百分濃度為4%。
[0043]步驟二，在磁力攪拌和水浴加熱的條件下，用注射器將殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液以2滴/秒的速度逐滴滴入葉酸氨鹽溶液中，然后繼續(xù)往葉酸氨鹽溶液中以2滴/秒的速度逐滴滴入四聚磷酸鈉水溶液，滴加完畢后，繼續(xù)磁力攪拌10min ;得到葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系；
本實(shí)施例中，磁力攪拌的速度為1000r/min ;水浴加熱的溫度為50°C。
[0044]其中，葉酸 氨鹽溶液是通過(guò)將葉酸粉末溶于氨水中配制而成，葉酸氨鹽溶液的質(zhì)量/體積濃度為lmg/mL ;氨水的質(zhì)量百分濃度為45%。
[0045]其中，四聚磷酸鈉水溶液是通過(guò)將四聚磷酸鈉溶于水中配制而成，四聚磷酸鈉水溶液的質(zhì)量/體積濃度為4mg/mL。
[0046]步驟三，將步驟二得到的葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系進(jìn)行離心得到藍(lán)綠色沉淀物，然后用PH值為6.0的醋酸溶液洗滌沉淀物，然后再重復(fù)上述離心和洗滌步驟，共重復(fù)三次，最后將沉淀物進(jìn)行真空冷凍干燥，得到葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0047]本實(shí)施例中，離心速度為4500r/min，離心時(shí)間為40min ;真空冷凍干燥的真空度為8Pa，冷凍溫度為_(kāi)22°C，真空冷凍干燥的時(shí)間為10.5小時(shí)。
[0048]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液的體積比為2mL:6mL:6mL:3mL。
[0049]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液配制完成后，均用孔徑為0.2 μ m的微孔濾膜過(guò)濾后再用于制備葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0050]本實(shí)施例2制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒對(duì)腫瘤細(xì)胞具有明顯的靶向作用，且制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的生物相容性好，并且能夠提升鹽酸米托蒽醌的控釋性和靶向性，從而提高鹽酸米托蒽醌抗腫瘤的療效。
[0051]實(shí)施例3。
[0052]葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，它包括以下步驟:
步驟一，將鹽酸米托蒽醌溶液與殼聚糖醋酸溶液混合，得到殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液；
其中，鹽酸米托蒽醌溶液是通過(guò)將鹽酸米托蒽醌溶于水中配制而成，本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液的質(zhì)量/體積濃度為0.5mg/mL。
[0053]其中，殼聚糖醋酸溶液是通過(guò)將殼聚糖溶于醋酸溶液中配制而成，本實(shí)施例中，殼聚糖醋酸溶液的質(zhì)量/體積濃度為lmg/mL，醋酸溶液的質(zhì)量百分濃度為1%。
[0054]步驟二，在磁力攪拌和水浴加熱的條件下，用注射器將殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液以3滴/秒的速度逐滴滴入葉酸氨鹽溶液中,然后繼續(xù)往葉酸氨鹽溶液中以3滴/秒的速度逐滴滴入五聚磷酸鈉水溶液，滴加完畢后，繼續(xù)磁力攪拌20min ;得到葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系；
本實(shí)施例中，磁力攪拌的速度為900r/min ;水浴加熱的溫度為60°C。
[0055]其中，葉酸氨鹽溶液是通過(guò)將葉酸粉末溶于氨水中配制而成，葉酸氨鹽溶液的質(zhì)量/體積濃度為0.2mg/mL ;氨水的質(zhì)量百分濃度為35%。
[0056]其中，五聚磷酸鈉水溶液是通過(guò)將五聚磷酸鈉溶于水中配制而成，五聚磷酸鈉水溶液的質(zhì)量/體積濃度為lmg/mL。
[0057]步驟三，將步驟二得到的葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系進(jìn)行離心得到藍(lán)綠色沉淀物，然后用pH值為4.0的醋酸溶液洗滌沉淀物，然后再重復(fù)上述離心和洗滌步驟，共重復(fù)三次，最后將沉淀物進(jìn)行真空冷凍干燥，得到葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0058]本實(shí)施例中，離心速度為5500r/min，離心時(shí)間為20min ;真空冷凍干燥的真空度為12Pa，冷凍溫度為_(kāi)18°C，真空冷凍干燥的時(shí)間為9.5小時(shí)。
[0059]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液的體積比為1.5mL -AmL:3mL: ImL0
[0060]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液配制完成后，均用孔徑為0.45 μ m的微孔濾膜過(guò)濾后再用于制備葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0061]本實(shí)施例3制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒對(duì)腫瘤細(xì)胞具有明顯的靶向作用，且制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的生物相容性好，并且能夠提升鹽酸米托蒽醌的控釋性和靶向性，從而提高鹽酸米托蒽醌抗腫瘤的療效。
[0062]實(shí)施例4。
[0063]葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，它包括以下步驟:
步驟一，將鹽酸米托蒽醌溶液與殼聚糖醋酸溶液混合，得到殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液；
其中，鹽酸米托蒽醌溶液是通過(guò)將鹽酸米托蒽醌溶于水中配制而成，本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液的質(zhì)量/體積濃度為2mg/mL。
[0064]其中，殼聚糖醋酸溶液是通過(guò)將殼聚糖溶于醋酸溶液中配制而成，本實(shí)施例中，殼聚糖醋酸溶液的質(zhì)量/體積濃度為3mg/mL，醋酸溶液的質(zhì)量百分濃度為5%。
[0065]步驟二，在磁力攪拌和水浴加熱的條件下，用注射器將殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液以I滴/秒的速度逐滴滴入葉酸氨鹽溶液中，然后繼續(xù)往葉酸氨鹽溶液中以2滴/秒的速度逐滴滴入三聚磷酸鈉水溶液，滴加完畢后，繼續(xù)磁力攪拌13min ;得到葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系；
本實(shí)施例中，磁力攪拌的速度為970r/min ;水浴加熱的溫度為52°C。
[0066]其中，葉酸氨鹽溶液是通過(guò)將葉酸粉末溶于氨水中配制而成，葉酸氨鹽溶液的質(zhì)量/體積濃度為0.7mg/mL ;氨水的質(zhì)量百分濃度為38%。
[0067]其中，三聚磷酸鈉水溶液是通過(guò)將三聚磷酸鈉溶于水中配制而成，三聚磷酸鈉水溶液的質(zhì)量/體積濃度為3mg/mL。
[0068]步驟三，將步驟二得到的葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系進(jìn)行離心得到藍(lán)綠色沉淀物，然后用pH值為4.5的醋酸溶液洗滌沉淀物，然后再重復(fù)上述離心和洗滌步驟，共重復(fù)三次，最后將沉淀物進(jìn)行真空冷凍干燥，得到葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0069]本實(shí)施例中，離心速度為4800r/min，離心時(shí)間為33min ;真空冷凍干燥的真空度為9Pa，冷凍溫度為_(kāi)19°C，真空冷凍干燥的時(shí)間為9小時(shí)。
[0070]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液的體積比為1.2mL:2mL:4mL:1.5mL。
[0071]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液配制完成后，均用孔徑為0.3 μ m的微孔濾膜過(guò)濾后再用于制備葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0072]本實(shí)施例4制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒對(duì)腫瘤細(xì)胞具有明顯的靶向作用，且制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的生物相容性好，并且能夠提升鹽酸米托蒽醌的控釋性和靶向性，從而提高鹽酸米托蒽醌抗腫瘤的療效。
[0073]實(shí)施例5。
[0074]葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，它包括以下步驟:
步驟一，將鹽酸米托蒽醌溶液與殼聚糖醋酸溶液混合，得到殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液； 其中，鹽酸米托蒽醌溶液是通過(guò)將鹽酸米托蒽醌溶于水中配制而成，本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液的質(zhì)量/體積濃度為1.5mg/mL。
[0075]其中，殼聚糖醋酸溶液是通過(guò)將殼聚糖溶于醋酸溶液中配制而成，本實(shí)施例中，殼聚糖醋酸溶液的質(zhì)量/體積濃度為4mg/mL，醋酸溶液的質(zhì)量百分濃度為3%。
[0076]步驟二，在磁力攪拌和水浴加熱的條件下，用注射器將殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液以3滴/秒的速度逐滴滴入葉酸氨鹽溶液中,然后繼續(xù)往葉酸氨鹽溶液中以I滴/秒的速度逐滴滴入四聚磷酸鈉水溶液，滴加完畢后，繼續(xù)磁力攪拌17min ;得到葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系；
本實(shí)施例中，磁力攪拌的速度為930r/min ;水浴加熱的溫度為58°C。
[0077]其中，葉酸氨鹽溶液是通過(guò)將葉酸粉末溶于氨水中配制而成，葉酸氨鹽溶液的質(zhì)量/體積濃度為0.8mg/mL ;氨水的質(zhì)量百分濃度為36%。
[0078]其中，四聚磷酸鈉水溶液是通過(guò)將四聚磷酸鈉溶于水中配制而成，四聚磷酸鈉水溶液的質(zhì)量/體積濃度為2.5mg/mL。
[0079]步驟三，將步驟二得到的葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系進(jìn)行離心得到藍(lán)綠色沉淀物，然后用pH值為5.5的醋酸溶液洗滌沉淀物，然后再重復(fù)上述離心和洗滌步驟，共重復(fù)三次，最后將沉淀物進(jìn)行真空冷凍干燥，得到葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0080]本實(shí)施例中，離心速度為5200r/min，離心時(shí)間為22min ;真空冷凍干燥的真空度為llPa，冷凍溫度為_(kāi)21°C，真空冷凍干燥的時(shí)間為11小時(shí)。
[0081]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液的體積比為1.7mL:3mL:2mL:2.5mL。
[0082]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液配制完成后，均用孔徑為0.3 μ m的微孔濾膜過(guò)濾后再用于制備葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0083]本實(shí)施例5制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒對(duì)腫瘤細(xì)胞具有明顯的靶向作用，且制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的生物相容性好，并且能夠提升鹽酸米托蒽醌的控釋性和靶向性，從而提高鹽酸米托蒽醌抗腫瘤的療效。
[0084]實(shí)施例6。
[0085]葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，它包括以下步驟:
步驟一，將鹽酸米托蒽醌溶液與殼聚糖醋酸溶液混合，得到殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液；
其中，鹽酸米托蒽醌溶液是通過(guò)將鹽酸米托蒽醌溶于水中配制而成，本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液的質(zhì)量/體積濃度為2.5mg/mL。
[0086]其中，殼聚糖醋酸溶液是通過(guò)將殼聚糖溶于醋酸溶液中配制而成，本實(shí)施例中，殼聚糖醋酸溶液的質(zhì)量/體積濃度為2.5mg/mL，醋酸溶液的質(zhì)量百分濃度為3.5%。
[0087]步驟二，在磁力攪拌和水浴加熱的條件下，用注射器將殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液以2滴/秒的速度逐滴滴入葉酸氨鹽溶液中,然后繼續(xù)往葉酸氨鹽溶液中以I滴/秒的速度逐滴滴入五聚磷酸鈉水溶液，滴加完畢后，繼續(xù)磁力攪拌ISmin ;得到葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系；
本實(shí)施例中，磁力攪拌的速度為980r/min ; 水浴加熱的溫度為54°C。
[0088]其中，葉酸氨鹽溶液是通過(guò)將葉酸粉末溶于氨水中配制而成，葉酸氨鹽溶液的質(zhì)量/體積濃度為0.6mg/mL ;氨水的質(zhì)量百分濃度為41%。
[0089]其中，五聚磷酸鈉水溶液是通過(guò)將五聚磷酸鈉溶于水中配制而成，五聚磷酸鈉水溶液的質(zhì)量/體積濃度為3.5mg/mL。
[0090]步驟三，將步驟二得到的葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系進(jìn)行離心得到藍(lán)綠色沉淀物，然后用pH值為5.0的醋酸溶液洗滌沉淀物，然后再重復(fù)上述離心和洗滌步驟，共重復(fù)三次，最后將沉淀物進(jìn)行真空冷凍干燥，得到葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0091]本實(shí)施例中，離心速度為5300r/min，離心時(shí)間為21min ;真空冷凍干燥的真空度為10Pa，冷凍溫度為_(kāi)19°C，真空冷凍干燥的時(shí)間為10.2小時(shí)。
[0092]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液的體積比為 1.3mL:4.5mL:5.5mL:1.8mL。
[0093]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液配制完成后，均用孔徑為0.4 μ m的微孔濾膜過(guò)濾后再用于制備葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0094]本實(shí)施例6制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒對(duì)腫瘤細(xì)胞具有明顯的靶向作用，且制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的生物相容性好，并且能夠提升鹽酸米托蒽醌的控釋性和靶向性，從而提高鹽酸米托蒽醌抗腫瘤的療效。
[0095]實(shí)施例7。
[0096]葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，它包括以下步驟:
步驟一，將鹽酸米托蒽醌溶液與殼聚糖醋酸溶液混合，得到殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液；
其中，鹽酸米托蒽醌溶液是通過(guò)將鹽酸米托蒽醌溶于水中配制而成，本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液的質(zhì)量/體積濃度為0.8mg/mL。
[0097]其中，殼聚糖醋酸溶液是通過(guò)將殼聚糖溶于醋酸溶液中配制而成，本實(shí)施例中，殼聚糖醋酸溶液的質(zhì)量/體積濃度為1.8mg/mL，醋酸溶液的質(zhì)量百分濃度為2.5%。
[0098]步驟二，在磁力攪拌和水浴加熱的條件下，用注射器將殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液以I滴/秒的速度逐滴滴入葉酸氨鹽溶液中，然后繼續(xù)往葉酸氨鹽溶液中以3滴/秒的速度逐滴滴入三聚磷酸鈉水溶液，滴加完畢后，繼續(xù)磁力攪拌16min ;得到葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系；
本實(shí)施例中，磁力攪拌的速度為920r/min ;水浴加熱的溫度為57°C。
[0099]其中，葉酸氨鹽溶液是通過(guò)將葉酸粉末溶于氨水中配制而成，葉酸氨鹽溶液的質(zhì)量/體積濃度為0.4mg/mL ;氨水的質(zhì)量百分濃度為43%。[0100]其中，三聚磷酸鈉水溶液是通過(guò)將三聚磷酸鈉溶于水中配制而成，三聚磷酸鈉水溶液的質(zhì)量/體積濃度為1.5mg/mL。
[0101]步驟三，將步驟二得到的葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系進(jìn)行離心得到藍(lán)綠色沉淀物，然后用PH值為5.0的醋酸溶液洗滌沉淀物，然后再重復(fù)上述離心和洗滌步驟，共重復(fù)三次，最后將沉淀物進(jìn)行真空冷凍干燥，得到葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0102]本實(shí)施例中，離心速度為4600r/min，離心時(shí)間為38min ;真空冷凍干燥的真空度為9.5Pa，冷凍溫度為-19.5°C，真空冷凍干燥的時(shí)間為9.8小時(shí)。
[0103]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液的體積比為 1.8mL:5.5mL:5.8mL:2.1mL。
[0104]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液配制完成后，均用孔徑為0.25 μ m的微孔濾膜過(guò)濾后再用于制備葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0105]本實(shí)施例7制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒對(duì)腫瘤細(xì)胞具有明顯的靶向作用，且制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的生物相容性好，并且能夠提升鹽酸米托蒽醌的控釋性和靶向性，從而提高鹽酸米托蒽醌抗腫瘤的療效。
[0106]實(shí)施例8。
[0107]葉酸偶聯(lián)殼聚 糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，它包括以下步驟:
步驟一，將鹽酸米托蒽醌溶液與殼聚糖醋酸溶液混合，得到殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液；
其中，鹽酸米托蒽醌溶液是通過(guò)將鹽酸米托蒽醌溶于水中配制而成，本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液的質(zhì)量/體積濃度為2.2mg/mL。
[0108]其中，殼聚糖醋酸溶液是通過(guò)將殼聚糖溶于醋酸溶液中配制而成，本實(shí)施例中，殼聚糖醋酸溶液的質(zhì)量/體積濃度為3.5mg/mL，醋酸溶液的質(zhì)量百分濃度為4.5%。
[0109]步驟二，在磁力攪拌和水浴加熱的條件下，用注射器將殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液以I滴/秒的速度逐滴滴入葉酸氨鹽溶液中，然后繼續(xù)往葉酸氨鹽溶液中以I滴/秒的速度逐滴滴入三聚磷酸鈉水溶液，滴加完畢后，繼續(xù)磁力攪拌16min ;得到葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系；
本實(shí)施例中，磁力攪拌的速度為990r/min ;水浴加熱的溫度為51 °C。
[0110]其中，葉酸氨鹽溶液是通過(guò)將葉酸粉末溶于氨水中配制而成，葉酸氨鹽溶液的質(zhì)量/體積濃度為0.9mg/mL ;氨水的質(zhì)量百分濃度為44%。
[0111]其中，三聚磷酸鈉水溶液是通過(guò)將三聚磷酸鈉溶于水中配制而成，三聚磷酸鈉水溶液的質(zhì)量/體積濃度為1.8mg/mL。
[0112]步驟三，將步驟二得到的葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系進(jìn)行離心得到藍(lán)綠色沉淀物，然后用pH值為5.5的醋酸溶液洗滌沉淀物，然后再重復(fù)上述離心和洗滌步驟，共重復(fù)三次，最后將沉淀物進(jìn)行真空冷凍干燥，得到葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0113]本實(shí)施例中，離心速度為5100r/min，離心時(shí)間為28min ;真空冷凍干燥的真空度為10.5Pa，冷凍溫度為-20.5°C，真空冷凍干燥的時(shí)間為9.6小時(shí)。[0114]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液的體積比為 1.1mL:3.8mL:4.2mL:2.3mL。
[0115]本實(shí)施例中，鹽酸米托蒽醌溶液、殼聚糖醋酸溶液、葉酸氨鹽溶液和多聚磷酸鈉水溶液配制完成后，均用孔徑為0.35 μ m的微孔濾膜過(guò)濾后再用于制備葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
[0116]本實(shí)施例8制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒對(duì)腫瘤細(xì)胞具有明顯的靶向作用，且制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的生物相容性好，并且能夠提升鹽酸米托蒽醌的控釋性和靶向性，從而提高鹽酸米托蒽醌抗腫瘤的療效。
[0117]檢測(cè)指標(biāo)
(一)透射電鏡測(cè)定葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的粒徑利用透射電鏡觀察實(shí)施例1至實(shí)施例8所制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒，所制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的粒徑為25納米~40納米，且納米微粒的顆粒形態(tài)圓整、大小均勻、無(wú)黏連。
[0118](二)包封率和載藥率的測(cè)定
將實(shí)施例1至實(shí)施例8所制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒進(jìn)行包封率
和載藥率的測(cè)定，實(shí)施例1至實(shí)施例8所制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒
樣品分另_ 1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#、8#表示，測(cè)定數(shù)據(jù)見(jiàn)表1:
表1包封率和載藥率的測(cè)定數(shù)據(jù)表
【權(quán)利要求】
1.葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，其特征在于:它包括以下步驟: 步驟一，將鹽酸米托蒽醌溶液與殼聚糖醋酸溶液混合，得到殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液； 步驟二，在一定溫度下，將所述殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液加入到葉酸氨鹽溶液中，然后繼續(xù)往所述葉酸氨鹽溶液中加入多聚磷酸鈉水溶液，混合均勻，得到葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系； 步驟三，將步驟二得到的葉酸-殼聚糖-鹽酸米托蒽醌微球水分散體系進(jìn)行離心得到沉淀物，將沉淀物洗滌后進(jìn)行真空冷凍干燥，得到葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，其特征在于:所述鹽酸米托蒽醌溶液、所述殼聚糖醋酸溶液、所述葉酸氨鹽溶液和所述多聚磷酸鈉水溶液的體積比為ImL~2mL:2mL~6mL:2mL~6mL:lmL~3mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，其特征在于:步驟一中，所述鹽酸米托蒽醌溶液是通過(guò)將鹽酸米托蒽醌溶于水中配制而成，所述鹽酸米托蒽醌溶液的質(zhì)量/體積濃度為0.5mg/mL~3mg/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所 述的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，其特征在于:步驟一中，所述殼聚糖醋酸溶液是通過(guò)將殼聚糖溶于醋酸溶液中配制而成，所述殼聚糖醋酸溶液的質(zhì)量/體積濃度為lmg/mL飛mg/mL ;所述醋酸溶液的質(zhì)量百分濃度為1%~5%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，其特征在于:步驟二中，所述葉酸氨鹽溶液是通過(guò)將葉酸粉末溶于氨水中配制而成，所述葉酸氨鹽溶液的質(zhì)量/體積濃度為0.2mg/mL^lmg/mL ;所述氨水的質(zhì)量百分濃度為35%~45%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，其特征在于:步驟二中，所述多聚磷酸鈉水溶液是通過(guò)將多聚磷酸鈉溶于水中配制而成，所述多聚磷酸鈉水溶液的質(zhì)量/體積濃度為lmg/mL~4mg/mL。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，其特征在于:所述多聚磷酸鈉為三聚磷酸鈉、四聚磷酸鈉或五聚磷酸鈉中的任意一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，其特征在于:步驟二中，在磁力攪拌和水浴加熱的條件下，將所述殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液加入到葉酸氨鹽溶液中，然后往所述葉酸氨鹽溶液中繼續(xù)加入多聚磷酸鈉水溶液，加入完畢后，繼續(xù)磁力攪拌IOmin~20min ； 所述磁力攪拌的速度為900r/min~1000r/min ;所述水浴加熱的溫度為50°C~60°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，其特征在于:步驟二中，將所述殼聚糖與鹽酸米托蒽醌混合液用注射器以逐滴滴入的方式加入到葉酸氨鹽溶液中，然后往所述葉酸氨鹽溶液中繼續(xù)用注射器以逐滴滴入的方式加入多聚磷酸鈉水溶液，所述逐滴滴入的速度均為I滴/秒~3滴/秒。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葉酸偶聯(lián)殼聚糖-鹽酸米托蒽醌納米微粒的制備方法，其特征在于:步驟三中，將沉淀物洗滌用的洗滌液是pH值為4.(Te.0的醋酸溶液；步驟三的離心速度為4500r/min~5500r/min，離心時(shí)間為20min~40min ;步驟三的真空冷凍干燥的真空度為8 Pa~12Pa， 冷凍溫度為_(kāi)18°C~_22°C，真空冷凍干燥的時(shí)間為9小時(shí)~11小時(shí)。
【文檔編號(hào)】A61K47/36GK103637990SQ201310715403
【公開(kāi)日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2013年12月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月23日
【發(fā)明者】王煒 申請(qǐng)人:廣東醫(yī)學(xué)院