烏雞阿膠口服液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種烏雞阿膠口服液及其制備方法，方法的步驟如下：1、將烏雞粉加入質(zhì)量比為1:5-15，乙醇含量為30%--70%的乙醇水溶液，浸漬提取12-36小時(shí)，過濾，浸漬提取1-3次，合并濾液，靜置30～60小時(shí)，上清液回收乙醇并濃縮至在60℃時(shí)相對(duì)密度為0.95～0.99的浸膏；2、將枸杞子和大棗，加入3～8質(zhì)量倍的水煎煮20～60分鐘，過濾，收集濾液，煎煮1～3次，合并濾液并濃縮至在60℃時(shí)相對(duì)密度為1.00～1.10的浸膏；3、將阿膠，加入5～10質(zhì)量倍的水煎煮烊化，收集濾液，4、將步驟1至3獲得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸鉀，混勻，加入合并后的浸膏質(zhì)量的1.0～1.5倍的水，加入枸櫞酸調(diào)節(jié)pH為4.0～5.0，攪拌20～40分鐘；過濾，將濾液體裝入包裝瓶?jī)?nèi)；100～120℃滅菌30～60分鐘，得到一種烏雞阿膠口服液。
【專利說明】烏雞阿膠口服液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種養(yǎng)血補(bǔ)肝保健食品，特別是涉及一種烏雞阿膠口服液及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]“女性以血為本”，血液在身體循環(huán)過程中傳遞氧與各種營(yíng)養(yǎng)成分，直接滋養(yǎng)五臟六腑，幫助調(diào)節(jié)女性內(nèi)分泌平衡。女性在驚奇、孕期、產(chǎn)后、術(shù)后容易虧耗氣血，如果氣血不足，在內(nèi)影響月經(jīng)、睡眠，在外影響肌膚晦暗、發(fā)黃，人更顯老。研究發(fā)現(xiàn)，每5個(gè)女性中就有I個(gè)貧血。及時(shí)補(bǔ)氣養(yǎng)血,對(duì)每個(gè)女性都十分重要。
[0003]烏雞:又名烏骨雞，是中國(guó)特有的藥用珍禽。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究，烏雞內(nèi)含豐富的黑色素，蛋白質(zhì)，B族維生素等18種氨基酸和18種微量元素，其中煙酸、維生素E、磷、鐵、鉀、鈉的含量均高于普通雞肉，膽固醇和脂肪含量卻很低。烏雞的血清總蛋白和球蛋白質(zhì)含量均明顯高于普通雞。烏雞肉中含氨基酸高于普通雞，而且含鐵元素也比普通雞高很多，是營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高的滋補(bǔ)品，被人們稱烏雞是“黑了心的寶貝”；所以，烏雞是補(bǔ)虛勞、養(yǎng)身體的上好佳品。食用烏雞可以提高生理機(jī)能、延緩衰老、強(qiáng)筋健骨。對(duì)防治骨質(zhì)疏松、佝僂病、婦女缺鐵性貧血癥等有明顯功效。《本草綱目》認(rèn)為烏骨雞有補(bǔ)虛勞羸弱，制消渴，益產(chǎn)婦，治婦人崩中帶下及一些虛損諸病的功用。
[0004]大棗:作為中藥應(yīng)用已有2000多年的歷史，主要用于中氣不足、脾胃虛弱、體倦乏力、食少便糖、血虛萎黃、婦女臟躁等證的治療。近年來藥理研究發(fā)現(xiàn)，大棗中含有多種生物活性物質(zhì)，如大棗多糖、黃酮類、皂苷類、三萜類、生物堿類、環(huán)磷酸腺苷(cAMP)、環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)等，對(duì)人體有多種保健治病功效。
`[0005]枸杞子:作為中藥，其有補(bǔ)腎益精，養(yǎng)肝明目，補(bǔ)血安神，生津止渴，潤(rùn)肺止咳的功效。用于治肝腎陰虧，腰膝酸軟，頭暈，目眩，目昏多淚，虛勞咳嗽，消渴，遺精等癥。
[0006]阿膠:阿膠作為馬科動(dòng)物驢的干燥皮或者鮮皮經(jīng)煎煮、濃縮制成的固體膠，其性平，味甘，歸肺、肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)血滋陰、潤(rùn)燥，止血功效，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，阿膠具有改善貧血、補(bǔ)血、促進(jìn)凝血，促進(jìn)造血，增強(qiáng)免疫功能，促進(jìn)骨愈合，維護(hù)機(jī)體微生態(tài)平衡等作用。上述物質(zhì)盡管有對(duì)人體有很好的作用，但服用不太方便。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種烏雞阿膠口服液。
[0008]本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種烏雞阿膠口服液的制備方法。
[0009]本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下:
烏雞阿膠口服液的制備方法，包括如下步驟:
(1)按質(zhì)量百分比稱取:烏雞粉5%~25%，阿膠5%~15%，枸杞子20%~50%，大棗20%~50% ；山梨酸鉀0.01%~0.1% ;甜菊糖甙0.01%~0.1% ；
(2)按質(zhì)量比為1:5~15的比例，將所述烏雞粉加體積濃度為30%~70%的乙醇水溶液，浸潰提取12~36小時(shí)，過濾，收集濾液，提取I~3次，合并濾液，靜置30~60小時(shí)，上清液回收乙醇并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為0.95~0.99的浸膏；
(3)將所述枸杞子和大棗，加入3~8質(zhì)量倍的水煎煮20~60分鐘，過濾，收集濾液，煎煮I~3次，合并濾液并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為1.00~1.10的浸膏；
(4)將所述阿膠，加入5~10質(zhì)量倍的水煎煮烊化，收集濾液；
(5 )將步驟(2 )和(4 )獲得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸鉀，混勻，加入合并后的浸膏質(zhì)量的1.0~1.5倍的水，加入枸櫞酸調(diào)節(jié)pH為4.0~5.0，攪拌20~40分鐘；過濾，將濾液體裝入包裝瓶?jī)?nèi)；滅菌柜濕熱100~120°C滅菌30~60分鐘，得到一種烏雞阿膠口服液。
[0010]步驟(1)優(yōu)選為:按質(zhì)量百分比稱取:烏雞粉10%~20%，阿膠5%~10%，枸杞子30%~40%，大棗30%~40% ；山梨酸鉀0.05%~0.1% ;甜菊糖甙0.03%~0.07%。
[0011]步驟(2)優(yōu)選為:按質(zhì)量比為1:8~11的比例，將所述烏雞粉加體積濃度為40%~55%的乙醇水溶液，浸潰提取18~28小時(shí)，過濾，收集濾液，提取I~3次，合并濾液，靜置40~50小時(shí)，上清液回收乙醇并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為0.95~0.99的浸膏。
[0012]步驟(2)最好是:按質(zhì)量比為1:9~10的比例，將所述烏雞粉加體積濃度為40%~50%的乙醇水溶液，浸潰提取24小時(shí)，過濾，收集濾液，提取2次，合并濾液，靜置45~48小時(shí)，上清液回收乙醇并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為0.97~0.98的浸膏。
[0013]步驟(3)優(yōu)選為:將所述枸杞子和大棗，加入6質(zhì)量倍的水煎煮40分鐘，過濾，收集濾液，煎煮2次 ，合并濾液并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為1.05的浸膏。
[0014]步驟(5)優(yōu)選為:將步驟(2)至(4)獲得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸鉀，混勻，加入合并后的浸膏質(zhì)量的1.3倍的水，加入枸櫞酸調(diào)節(jié)pH為4.3~4.7，攪拌30分鐘；過濾，將濾液體裝入包裝瓶?jī)?nèi)；滅菌柜濕熱110°C滅菌30分鐘，即得。
[0015]烏雞粉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為:水分:小于等于8.0%，揮發(fā)性堿性物質(zhì):消耗0.005mol/L的硫酸滴定液不得超過20.0ml ;含氮量:大于等于6.0%。
[0016]上述方法制備的一種烏雞阿膠口服液。
【具體實(shí)施方式】
[0017]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0018]下面各實(shí)施例所用的烏雞粉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為:水分:小于等于8.0%，揮發(fā)性堿性物質(zhì):消耗0.005mol/L的硫酸滴定液不得超過20.0ml ;含氮量:大于等于6.0%。
[0019]烏雞粉采用的是各個(gè)廠商生產(chǎn)的，保證滿足烏雞粉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的烏雞粉即可。
[0020]實(shí)施例1
烏雞阿膠口服液的制備方法，包括如下步驟:
(1)按質(zhì)量百分比稱取:烏雞粉10%，阿膠10%，枸杞子40%，大棗39.9% ;山梨酸鉀
0.07% ;甜菊糖甙0.03% ；
(2)按質(zhì)量比為1:9的比例，將所述烏雞粉加體積濃度為40%的乙醇水溶液，浸潰提取24小時(shí)，過濾，收集濾液，提取2次，合并濾液，靜置48小時(shí)，上清液回收乙醇并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為0.97的浸膏；
(3)將枸杞子和大棗，加入6質(zhì)量倍的水煎煮40分鐘，過濾，收集濾液，煎煮2次，合并濾液并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為1.05的浸膏；
(4)將所述阿膠，加入5倍質(zhì)量倍的水煎煮烊化，收集濾液；
(5 )將步驟(2 )至(4 )獲得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸鉀，混勻，加入合并后的浸膏質(zhì)量的1.3倍的水，加入枸櫞酸調(diào)節(jié)pH為4.3，攪拌30分鐘；過濾，將濾液體裝入包裝瓶?jī)?nèi)；滅菌柜濕熱110°C滅菌30分鐘，即得。
[0021]實(shí)施例2
烏雞阿膠口服液的制備方法，包括如下步驟:
Cl)按質(zhì)量百分比稱取:烏雞粉16%，阿膠5%，枸杞子38.88%，大棗40% ;山梨酸鉀0.05% ;甜菊糖甙0.07% ；
(2)按質(zhì)量比為1:10的比例，將所述烏雞粉加體積濃度為50%的乙醇水溶液，浸潰提取24小時(shí)，過濾，收集濾液，提取2次，合并濾液，靜置45小時(shí)，上清液回收乙醇并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為0.98的浸膏；
(3)將枸杞子和大棗，加入6倍質(zhì)量倍的水煎煮40分鐘，過濾，收集濾液，煎煮2次，合并濾液并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為1.05的浸膏；
(4)將所述阿膠，加入10質(zhì)量倍的水煎煮烊化，收集濾液； (5 )將步驟(2 )至(4 )獲得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸鉀，混勻，加入合并后的浸膏質(zhì)量的1.3倍的水，加入枸櫞酸調(diào)節(jié)pH為4.5，攪拌30分鐘；過濾，將濾液體裝入包裝瓶?jī)?nèi)；滅菌柜濕熱110°C滅菌30分鐘，即得。
[0022]實(shí)施例3
烏雞阿膠口服液的制備方法，包括如下步驟:
(1)按質(zhì)量百分比稱取:烏雞粉11.87%，阿膠8%，枸杞子30%,大棗50% ;山梨酸鉀0.1% ；甜菊糖甙0.03% ；
(2)按質(zhì)量比為1:11的比例，將所述烏雞粉加體積濃度為40%的乙醇水溶液，浸潰提取28小時(shí)，過濾，收集濾液，提取3次，合并濾液，靜置40小時(shí)，上清液回收乙醇并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為0.96的浸膏；
(3)將枸杞子和大棗，加入6倍質(zhì)量倍的水煎煮40分鐘，過濾，收集濾液，煎煮2次，合并濾液并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為1.05的浸膏；
(4)將所述阿膠，加入6倍質(zhì)量倍的水煎煮烊化，收集濾液；
(5 )將步驟(2 )至(4 )獲得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸鉀，混勻，加入合并后的浸膏質(zhì)量的1.3倍的水，加入枸櫞酸調(diào)節(jié)pH為4.7，攪拌30分鐘；過濾，將濾液體裝入包裝瓶?jī)?nèi)；滅菌柜濕熱110°C滅菌30分鐘，即得。
[0023]實(shí)施例4
烏雞阿膠口服液的制備方法，包括如下步驟:
(1)按質(zhì)量百分比稱取:烏雞粉5%，阿膠14.9%，枸杞子50%，大棗30% ;山梨酸鉀0.05% ；甜菊糖式0.05% ；
(2)按質(zhì)量比為1:8的比例，將所述烏雞粉加體積濃度為55%的乙醇水溶液，浸潰提取18小時(shí)，過濾，收集濾液，靜置50小時(shí)，上清液回收乙醇并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為0.99
的浸膏；
(3)將所述枸杞子和大棗，加入3質(zhì)量倍的水煎煮60分鐘，過濾，收集濾液，濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為1.0O的浸膏；
(4)將所述阿膠，加入7倍質(zhì)量倍的水煎煮烊化，收集濾液；
(5 )將步驟(2 )至(4 )獲得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸鉀，混勻，加入合并后的浸膏質(zhì)量的1.0質(zhì)量倍的水，加入枸櫞酸調(diào)節(jié)pH為5.0，攪拌20分鐘；過濾，將濾液體裝入包裝瓶?jī)?nèi)；滅菌柜濕熱11 (TC滅菌60分鐘，即得。
[0024]實(shí)施例5
烏雞阿膠口服液的制備方法，包括如下步驟:
Cl)按質(zhì)量百分比稱取:烏雞粉25%，阿膠15%，枸杞子20%，大棗39.89% ;山梨酸鉀
0.1% ;甜菊糖甙0.01% ；
(2)按質(zhì)量比為1:9的比例，將所述烏雞粉加體積濃度為50%的乙醇水溶液，浸潰提取20小時(shí)，過濾，收集濾液，提取2次，合并濾液，靜置45小時(shí)，上清液回收乙醇并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為0.95的浸膏；
(3)將枸杞子和大棗，加入4質(zhì)量倍的水煎煮50分鐘，過濾，收集濾液，煎煮2次，合并濾液并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為1.05的浸膏；
(4)將所述阿膠，加入8倍質(zhì)量倍的水煎煮烊化，收集濾液；
(5 )將步驟(2 )至(4 )獲得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸鉀，混勻，加入合并后的浸膏質(zhì)量的1.2倍的水，加入枸櫞酸調(diào)節(jié)pH為4.5，攪拌30分鐘；過濾，將濾液體裝入包裝瓶?jī)?nèi)；滅菌柜濕熱110°C滅菌`45分鐘，即得。
[0025]實(shí)施例6
烏雞阿膠口服液的制備方法，包括如下步驟:
(1)按質(zhì)量百分比稱取:烏雞粉25%，阿膠15%，枸杞子39.8%，大棗20% ;山梨酸鉀0.1% ；甜菊糖甙0.1% ;
(2)按質(zhì)量比為1:5的比例，將所述烏雞粉加體積濃度為70%的乙醇水溶液，浸潰提取12小時(shí)，過濾，收集濾液，提取3次，合并濾液，靜置30小時(shí)，上清液回收乙醇并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為0.99的浸膏；
(3)將桂圓肉，枸杞子和大棗，加入5質(zhì)量倍的水煎煮40分鐘，過濾，收集濾液，煎煮3次，合并濾液并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為1.10的浸膏；
(4)將所述阿膠，加入9倍質(zhì)量倍的水煎煮烊化，收集濾液；
(5 )步驟(2 )至(4 )獲得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸鉀，混勻，加入合并后的浸膏質(zhì)量的1.4倍的水,加入枸櫞酸調(diào)節(jié)pH為4.2,攪拌40分鐘；過濾,將濾液體裝入包裝瓶?jī)?nèi)；滅菌柜濕熱120°C滅菌30分鐘，即得。
[0026]實(shí)施例7
烏雞阿膠口服液的制備方法，包括如下步驟:
Cl)按質(zhì)量百分比稱取:烏雞粉15%，桂圓肉8%，枸杞子38.5%，大棗38.44% ;山梨酸鉀0.01% ;甜菊糖甙0.05% ；
(2)按質(zhì)量比為1:15的比例，將所述烏雞粉加體積濃度為30%的乙醇水溶液，浸潰提取36小時(shí)，過濾，收集濾液，靜置60小時(shí)，上清液回收乙醇并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為0.95的浸膏；
(3)將枸杞子和大棗，加入8質(zhì)量倍的水煎煮20分鐘，過濾，收集濾液，煎煮2次，合并濾液并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為1.05的浸膏；
(4)將所述阿膠，加入10倍質(zhì)量倍的水煎煮烊化，收集濾液；
(5 )將步驟(2 )至(4 )獲得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸鉀，混勻，加入合并后的浸膏質(zhì)量的1.5倍的水，加入枸櫞酸調(diào)節(jié)pH為4.0，攪拌30分鐘；將濾液體裝入包裝瓶?jī)?nèi)；滅菌柜濕熱100°C滅菌60分鐘，即得。
[0027]各實(shí)施例制備的產(chǎn)品檢測(cè)方法:
【檢查】pH值應(yīng)為4.0-5.0
相對(duì)密度應(yīng)為0.98-1.10
【含量測(cè)定】精密量取本品40ml，照氮測(cè)定法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄L L第一法)測(cè)定，即得。
[0028]本品每Iml含氮(N)量不得少于0.6mg。
[0029]本發(fā)明烏雞阿膠口服液的功效試驗(yàn)，
本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)采用實(shí)施例1-7制備的的烏雞阿膠口服液。
[0030]I材料和方法
1.1樣品受試物:烏雞阿膠口服液，人擬用劑量為每日20.0ml/60kg。Bw，所用樣品為4倍濃縮液，棕色液體。
[0031]1.2試驗(yàn)動(dòng)物18—22g雌性SPF級(jí)昆明種小鼠160只，合格證號(hào):SCXK (軍)2009-003 0000105`
1.3試驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境:SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室。
[0032]1.4劑量選擇:本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了低、中、高三各劑量組，分別為0.417ml/kg.Bw、0.833ml/kg.Bw、1.667 ml/kg.Bw,即相當(dāng)于人擬用劑量的5倍、10倍、20倍。低、中、高劑量組分別取本樣品受試物4倍濃縮液4.17ml,8.33ml和16.67ml，均價(jià)蒸餾水至200ml，充分混勻，按
0.2ml/10g.bw灌胃，對(duì)照組給予等量的蒸餾水，每日一次，連續(xù)30天，末次給受試物后24小時(shí)測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。將試驗(yàn)動(dòng)物分為四個(gè)大組，每組40只，然后每組40只動(dòng)物又分為4各小組，分別對(duì)照和低、中、高三各劑量組，每組10只，其中一組進(jìn)行HG50測(cè)試、抗體生成細(xì)胞檢測(cè)、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(足趾增厚法);2組進(jìn)行小鼠淋巴腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)、臟/體比值測(cè)定；3組進(jìn)行碳廓清試驗(yàn)；4組進(jìn)行小鼠淋巴轉(zhuǎn)化試驗(yàn)、NK細(xì)胞活性測(cè)定試驗(yàn)。
[0033]1.5試驗(yàn)方法
1.5.1臟器/體重比值測(cè)定:給受試物30天后，稱取脾臟、胸腺，計(jì)算臟/體比。
[0034]1.5.2遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(足跖增厚法):給受試物30天，第25天腹腔注射2%SRBC，免疫4天后，測(cè)量左后足跖部厚度，同時(shí)在測(cè)量部位注射20%SRBC 20ul，24小時(shí)后再次測(cè)量
1.5.3conA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)(MTT法):給受試物30天，無菌取脾，制成單細(xì)胞懸液，，HANK’S液洗3遍，調(diào)整細(xì)胞濃度為3*108個(gè)/ml。將細(xì)胞懸液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1ml，一孔加75ulConA液(100ug/ml)，另一孔為對(duì)照，置5%C02，，37°C孵箱中培養(yǎng)72小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束前4小時(shí)，每孔吸取上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTT (5mg/ml) 50ul/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入Iml酸性異丙醇，吹打均勻，使紫色結(jié)晶完全溶解，以570nm波長(zhǎng)測(cè)定光密度值。
[0035]1.5.4半數(shù)溶血值(HG50)的測(cè)定:給受試物30天，于第25天腹腔注射2% SRBC,免疫5天后，收集血清，試管內(nèi)加入300倍稀釋的血清1ml、10% SRBC0.5ml、補(bǔ)體lml，37°C水浴20分鐘，冰浴終止反應(yīng)，離心，取上清1ml，加都氏試劑3ml，10分鐘后540nm比色。
[0036]1.5.5抗體生成細(xì)胞檢測(cè):給受試物30天，于第25天腹腔注射2% SRBC,免疫5天后，脫臼處死，取脾，制成細(xì)胞懸液，200目篩網(wǎng)過濾,用hanks液洗3次,每次1000r/min離心lOmin，將細(xì)胞懸浮于5目錄RPMI1640培養(yǎng)液中，并調(diào)整細(xì)胞濃度為5*106個(gè)/ml。將表層培養(yǎng)基加熱溶解，15°C水浴保溫，與等量2倍濃度hanks液混合，分裝小試管，每管0.5ml，加入50ull0%SRBC，20ul皮細(xì)胞懸液混勻，倒片，二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)I小時(shí)，加入SA緩沖液稀釋的補(bǔ)體(1: 10)，繼續(xù)培養(yǎng)I小時(shí)，計(jì)數(shù)溶血空斑處。
[0037]1.5.6小鼠碳廓清試驗(yàn):給受試物30天后，尾靜脈注射3.5倍稀釋的印度墨汁(每IOg體重0.1ml)，分別于第2、10分鐘內(nèi)眥取血20ul，加入到2.98ml0.1%碳酸鈉溶液中，600nm比色。另取肝、脾稱重，計(jì)算吞噬指數(shù)。
[0038]1.5.7小鼠腹腔巨噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(半內(nèi)體法)給受試物30天后，每鼠腹腔注射20%雞紅細(xì)胞懸液1ml，間隔30min，頸椎脫臼處死動(dòng)物，將其仰位固定于鼠板上，正中剪開腹壁皮膚，經(jīng)腹腔注入生理鹽水2ml，轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板Imin吸出腹腔洗液1ml，平均分滴于2片載玻片上，放入墊有紗布的搪瓷盤內(nèi)，于37°C孵箱溫育30min，孵畢，生理鹽水漂洗，晾干，以1:1丙酮甲醇溶液固定，4%Giemsa染色lOmin，計(jì)數(shù)吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)及被吞噬的巨噬細(xì)胞數(shù)
1.5.8 NK細(xì)胞活性測(cè)定(乳酸脫氫酶測(cè)定法):實(shí)驗(yàn)前24h將YAC-1細(xì)胞(靶細(xì)胞)進(jìn)行傳代培養(yǎng)，用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為4*105個(gè)/ml。無菌取脾，制成單細(xì)胞懸液，hanks液洗3遍，調(diào)整細(xì)胞濃度為4*107個(gè)/ml，去靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞各IOOul (效靶比50:1 )，加入U(xiǎn)型96孔培養(yǎng)板，靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各IOOul，靶細(xì)胞最大釋放孔加靶細(xì)胞和1%NP40各lOOul，均設(shè)3個(gè)復(fù)孔，于37°C、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h，每孔吸取上清液IOOul置瓶底96孔培養(yǎng)板中，同時(shí)加入LDH基液lOOul，反應(yīng)3min，每孔加入lmol/1的HCL30ul，在酶標(biāo)儀492nm測(cè)定光密度值。
[0039]1.6結(jié)果統(tǒng)計(jì):用SPSSl1.5 FOR Window進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)。
2結(jié)果
2.1本樣品受試物濃縮液對(duì)小鼠體重的影響
表1受試物對(duì)免疫I組小鼠體重的影響(g，均值土標(biāo)準(zhǔn)差)
【權(quán)利要求】
1.烏雞阿膠口服液的制備方法，其特征是包括如下步驟: (1)按質(zhì)量百分比稱取:烏雞粉5%~25%，阿膠5%~15%，枸杞子20%~50%，大棗20%~50% ；山梨酸鉀0.01%~0.1% ;甜菊糖甙0.01%~0.1% ； (2)按質(zhì)量比為1:5~15的比例，將所述烏雞粉加體積濃度為30%~70%的乙醇水溶液，浸潰提取12~36小時(shí)，過濾，收集濾液，提取I~3次，合并濾液，靜置30~60小時(shí)，上清液回收乙醇并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為0.95~0.99的浸膏； (3)將所述枸杞子和大棗，加入3~8質(zhì)量倍的水煎煮20~60分鐘，過濾，收集濾液，煎煮I~3次，合并濾液并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為1.00~1.10的浸膏； (4)將所述阿膠，加入5~10質(zhì)量倍的水煎煮烊化，收集濾液； (5 )將步驟(2 )至(4 )獲得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸鉀，混勻，加入合并后的浸膏質(zhì)量的1.0~1.5倍的水，加入枸櫞酸調(diào)節(jié)pH為4.0~5.0，攪拌20~40分鐘；過濾，將濾液體裝入包裝瓶?jī)?nèi)；滅菌柜濕熱100~120°C滅菌30~60分鐘，得到一種烏雞阿膠口服液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的烏雞阿膠口服液的制備方法，其特征是所述步驟(1)為:按質(zhì)量百分比稱取:烏雞粉10%~20%，阿膠5%~10%，枸杞子30%~40%，大棗30%~40% ；山梨酸鉀0.05%~0.1% ;甜菊糖甙0.03%~0.07%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的烏雞阿膠口服液的制備方法，其特征是所述步驟(2)為:按質(zhì)量比為1:8~11的比例，將所述烏雞粉加體積濃度為40%~55%的乙醇水溶液，浸潰提取18~28小時(shí)，過濾，收集濾液，提取I~3次，合并濾液，靜置40~50小時(shí)，上清液回收乙醇并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為0.95~0.99的浸膏。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的烏雞阿膠口服液的制備方法，其特征是所述步驟(2)為:按質(zhì)量比為1:9~10的比例，將所述烏雞粉加體積濃度為40%~50%的乙醇水溶液，浸潰提取24小時(shí)，過濾，收集濾液，提取2次，合并濾液，靜置45~48小時(shí)，上清液回收乙醇并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為0.97~0.98的浸膏。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的烏雞阿膠口服液的制備方法，其特征是所述步驟(3)為:將所述枸杞子和大棗，加入6質(zhì)量倍的水煎煮40分鐘，過濾，收集濾液，煎煮2次，合并濾液并濃縮至在60°C時(shí)相對(duì)密度為1.05的浸膏。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的烏雞阿膠口服液的制備方法，其特征是所述步驟(5)為:將步驟(2)至(4)獲得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸鉀，混勻，加入合并后的浸膏質(zhì)量的1.3倍的水，加入枸櫞酸調(diào)節(jié)pH為4.3~4.7，攪拌30分鐘；過濾，將濾液體裝入包裝瓶?jī)?nèi)；滅菌柜濕熱110°C滅菌30分鐘，即得。
7.根據(jù)權(quán)利要求1~6之一所述的烏雞阿膠口服液的制備方法，其特征是所述烏雞粉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為:水分:小于等于8.0%，揮發(fā)性堿性物質(zhì):消耗0.005mol/L的硫酸滴定液不得超過20.0ml ;含氮量:大于等于6.0%。
8.權(quán)利要求1~7之一的方法制備的烏雞阿膠口服液。
【文檔編號(hào)】A61K9/08GK103751414SQ201310686368
【公開日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2013年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月11日
【發(fā)明者】楊桂芝 申請(qǐng)人:天津凱鏞藥業(yè)有限公司