利用黃連及骨碎補有效部位配伍組方治療牙周炎的制劑的制作方法
【專利摘要】利用黃連及骨碎補有效部位配伍組方治療牙周炎的制劑，其原料組分按質(zhì)量比包括為：含黃連素80%以上的黃連有效部位水提取物10-15份；柚皮苷30.71%以上的骨碎補有效部位水提取物5-10份；制成“連補固齒膠囊”全身給藥；或者加入羥乙基纖維素，濃甘油，聚丙烯酸樹脂等輔料，制成一種新型外用中藥長效復(fù)方軟膏“連補固齒軟膏”，注射器式給藥方式在牙周袋局部易于操作。本發(fā)明對牙周炎有良好的治療作用。本發(fā)明具有處方小、療效顯著、無任何毒副作用的特點。特別是在局部應(yīng)用時，長期使用的抗炎效果與鹽酸二甲胺四環(huán)素軟膏(派麗奧)相似，但成骨效果明顯優(yōu)于派麗奧，是一種具有與西藥相似的長效性和易用性的新劑型口腔中成藥。
【專利說明】利用黃連及骨碎補有效部位配伍組方治療牙周炎的制劑 【技術(shù)領(lǐng)域】
[〇〇〇1] 本發(fā)明涉及一種中成藥的應(yīng)用及其制劑，特別涉及一種利用黃連及骨碎補有效部 位配伍組方治療牙周炎的制劑，采用牙周袋局部注射式給藥或全身口服給藥方式，用于治 療牙周炎。 【背景技術(shù)】
[0002] 牙周炎是口腔領(lǐng)域發(fā)病率最高的疾病，也是口腔醫(yī)療領(lǐng)域的疑難病癥，已成為成 年人牙齒喪失的主要病因。同時它對許多全身性疾病，如風(fēng)濕、心臟病、血液病、糖尿病等還 有誘發(fā)的作用，被認(rèn)為是繼癌癥、心腦血管疾病之后威脅人類身體健康的第三大殺手。牙周 炎是一種慢性細菌感染性疾病，牙周組織破壞主要是由宿主的免疫保護和破壞機制不平衡 所致，同時，由于其開放環(huán)境使得其炎癥愈合和組織再生比較困難，因此牙周炎的治療需要 同時達到控制炎癥、調(diào)節(jié)免疫、促進軟硬牙周組織再生。藥物治療是牙周炎治療的重要輔助 手段，但單純西藥僅能針對部分癥狀如炎癥等，且因易于產(chǎn)生耐藥性及毒副作用而難以長 期用藥。
[0003] 我國的中藥一貫以成本低、副作用小、療效顯著而為世界醫(yī)學(xué)所稱道，尤其是其中 的活性物質(zhì)具有通過多靶點、多環(huán)節(jié)發(fā)揮多種效應(yīng)的優(yōu)勢。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為，按臟腑辨證牙齒 屬于腎的范疇。牙周炎的主要病因是胃腸積熱、血氣虛弱、腎元虧損以及口腔不潔等因素， 主要病機是胃腑積熱，陽明火熾，濕熱熏蒸于上而形成牙宣，因此要以補腎虛、清胃熱、活血 解毒論治。很多中藥已證實同時具有消炎殺菌、調(diào)節(jié)免疫力、平衡骨代謝的作用，可能適合 于牙周炎的治療，主要包括大黃、黃連、黃連、五倍子、骨碎補、淫羊藿、補骨脂、玄參及當(dāng)歸 等。據(jù)此，一些中成藥方劑可用于牙周炎的治療，主要包括補腎固齒丸、婦科千金片、牛黃清 胃丸、玉女煎、左歸丸、右歸丸、益腎清火方等，其中固齒丸、固齒膏也是以古方六味地黃丸 為基礎(chǔ)配制的。
[0004] 但以上這些組方缺乏藥理學(xué)研究的支持，且從制劑質(zhì)量的角度上，這類藥物的穩(wěn) 定性、可控性也很難實現(xiàn)。中藥有效部位是指一味中藥或者復(fù)方中藥的提取物中，一類或幾 類化學(xué)成分的含量達到總提取物的50%以上，是一類或幾類成分的混合體。近年來，利用中 藥有效部位和成分配伍組方，已經(jīng)成為新近中成藥研究及臨床研發(fā)的特點。中藥有效部位 符合中醫(yī)藥應(yīng)用的傳統(tǒng)理論：整體觀念和辯證論治，具有多成分、多靶點的特點；中藥有效 成分和有效部位是通過提取方法的改進獲取的，可以視其為精制的中藥，較傳統(tǒng)的中藥更 為穩(wěn)定和可控；療效較傳統(tǒng)中藥更優(yōu)，并且毒副作用也較低；同時也節(jié)省了藥材。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種用于治療牙周炎的中 成藥制劑，從黃連、骨碎補單味藥中，分別篩選出其有效部位和指標(biāo)成分（有效成分），進而 將有效部位按最佳濃度和比例配伍組方為新藥劑，可用于臨床治療牙周炎。
[〇〇〇6] 利用黃連及骨碎補有效部位配伍組方治療牙周炎的制劑，其原料組分按質(zhì)量比包 括為：
[0007] 含黃連素80%以上的黃連有效部位水提取物 10-15份
[0008] 柚皮苷30. 71%以上的骨碎補有效部位水提取物5-10份
[〇〇〇9] 利用黃連及骨碎補有效部位配伍組方治療牙周炎的制劑，其原料組分按質(zhì)量比包 括為：
[0010] 含黃連素80%以h的黃連有效部位水提取物 0.2-03份 袖皮甘30.71 %以上的骨碎補有效部位水提取物 1.8-3.3份 二乙酸甘油痛 20-22.5份 聚內(nèi)烯晴樹11 Eudragit RS 2.5-5份 羚乙《纖維索 0.i5份 11'油 2丨.85份
[〇〇11] 黃連為毛莨科植物，具有清熱燥濕，瀉火解毒的功效；黃連的主要成分為多種生物 堿，包括小檗堿又稱黃連素（bcrberine)、黃連堿（coptisinc)、甲基黃連堿（worcnine)、和 表小檗堿（印ibcrberine)等。骨碎補為水龍骨科植物槲蕨的干燥根莖，功效為補腎強骨、 續(xù)傷止痛等；骨碎補水提取物是水溶性有效部位，而柚皮苷是其中最主要的一種黃酮成分。
[0012] 發(fā)明人首先通過四甲基偶氮唑藍（MTT)比色法、酶聯(lián)免疫吸附法（ELIISA)和半定 量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR)檢測人牙周膜細胞的堿性磷酸酶活性、I型膠原蛋白的 表達及〇PG mRNA的表達證實，1. Omg/L的骨碎補水提液（含柚皮苷30. 71%)對促進牙周膜 細胞增殖及向成骨方向轉(zhuǎn)化作用很強；還通過hPDLCs/CMC-HPLC/MS在線聯(lián)用法，篩選出黃 連的水部位為有效部位，其活性成分為鹽酸小檗堿（黃連素），MTT法檢測證實其可促進人 牙周膜細胞的增殖，ALP檢測證實其具有一定的成骨活性。
[0013] 發(fā)明人進而建立了 SD大鼠牙周炎模型，以黃連有效部位（33mg/kg/d)、骨碎補有 效部位（18mg/kg/d)的單味藥或組方藥灌胃干預(yù)治療。同過檢查各組大鼠的齦溝出血指 數(shù)、牙周袋深度、牙齒松動度及牙槽骨吸收值，并進行術(shù)區(qū)顯微CT掃描和組織病理學(xué)觀察； EILISA法檢測各組大鼠血清CRP水平的表達及齦溝液IL-1 β、TNFa、IL-8、PGE2的表達 水平；免疫組織化學(xué)法檢測大鼠牙周組織中RANKL和0PG的表達水平。結(jié)果證實，與使用 單味藥相比，全身應(yīng)用黃連水提取物與骨碎補水提取物配伍效果更佳，遂命名為"連補固齒 丸"（實施例1-6)。在小型豬牙周炎模型中，將黃連水提取物和骨碎補水提取物按11:6配 伍組方全身給藥，通過對牙周狀況（ΒΙ、Η))、齦溝液量、齦溝液內(nèi)因子（IL-8、IL-li3、PGE2) 的水平、X線及CT影像（骨相對體積、骨小梁密度及骨小梁數(shù)目）、HE染色及免疫組化染色 (TNF-a、IL-8及IL-1 β )等指標(biāo)的檢測，證實了 "連補固齒丸"（實施例1-6)對牙周炎有 很好的全身治療效果。
[0014] 發(fā)明人還用堿性磷酸酶法檢測了黃連水部位及骨碎補水提取液單獨及組方局部 應(yīng)用時，對人牙周膜細胞的成骨作用，提示與使用單味藥相比，黃連水提取物與骨碎補水提 取物配伍效果更佳。進一步借鑒L 16(4)4正交表進行實驗分組，通過不同濃度的黃連、骨碎 補有效部位配伍對LPS刺激下人牙周膜細胞產(chǎn)生PGE2的影響研究，證實了有3個濃度組的 黃連水部分+骨碎補水部位配伍產(chǎn)生的PGE2較少；進一步選用SD大鼠牙周炎模型，應(yīng)用3 組藥物進行牙周袋內(nèi)局部治療，并進行相關(guān)藥物局部應(yīng)用的療效檢測（方法同上），最終證 實0. lmg/L黃連水部位和lmg/L骨碎補水部位配伍的局部應(yīng)用療效最好。
[0015] 發(fā)明人還建立了以羥乙基纖維素，濃甘油，聚丙烯酸樹脂為主要輔料制備的中藥 復(fù)方緩釋凝膠系統(tǒng)，首先確定了緩釋凝膠中各成分的處方比例，進而確定連補配伍組方 (0. lmg/L黃連水部位+lmg/L骨碎補水部位）緩釋凝膠的最優(yōu)釋放濃度為6%，將其命名為 "連補固齒膏"（實施例7-12)。初步的毒理學(xué)研究證實，緩釋原位凝膠制劑無明顯毒副性， 可長期應(yīng)用。在小型豬牙周炎模型中，通過一系列藥理學(xué)檢測（方法同上），證實了實施例 8在牙周袋內(nèi)局部應(yīng)用時，具有明顯的消炎和成骨作用；且與陽性對照藥物派麗奧鹽酸米 諾環(huán)素軟膏（鹽酸二甲胺四環(huán)素）相比，長期應(yīng)用的抗炎效果與派麗奧相似，但成骨效果明 顯優(yōu)于派麗奧，可用于牙周炎的局部治療。
[0016] 最后，發(fā)明人選擇了 87例志愿者，在知情同意的基礎(chǔ)上，進行了初步的臨床試驗 研究。用基礎(chǔ)治療配合中藥復(fù)方緩釋凝膠的使用治療中重度牙周炎，并且與陽性藥物派麗 奧及單純牙周基礎(chǔ)治療做對比。結(jié)果證實，本發(fā)明能使中藥有效成分緩慢釋放，并能較長時 間地保持局部較高濃度，發(fā)揮其殺菌、抑菌的作用，能提高單純機械治療的效果，減少或延 緩復(fù)發(fā)，可作為治療慢性牙周炎的有效輔助手段。
[0017] 本發(fā)明利用中醫(yī)中藥進行牙周炎治療，遵循整體觀念、辨證論治的原則，將黃連水 提取物及骨碎補水提取物配伍，確定了指標(biāo)成分（有效成分）及最佳組方，通過臨床研究及 藥理學(xué)實驗，證實其能對牙周炎產(chǎn)生多維、多模式、多靶位、高效的治療效果。研究結(jié)果證 明，該中藥組方是一種可用于臨床治療牙周炎的藥物。在本研究之前，對以上兩種中藥有效 部位的配伍組方、最佳濃度和配比、藥理作用以及治療牙周病臨床用途等方面未見有任何 文獻資料報道。
[0018] 本發(fā)明具有處方小、制備方法簡單、加工成本低、療效顯著、無任何毒副作用的特 點，是一種具有與西藥相似的長效性和易用性的新劑型口腔中成藥，具有廣泛的臨床應(yīng)用 前景。 【專利附圖】

【附圖說明】
[0019] 圖1黃連與骨碎補復(fù)方制劑外觀，㈧實施例5 (連補膠囊）；(B)實施例8 (連補 軟膏）。
[0020] 圖2人牙周膜細胞（hroLCs)的培養(yǎng)和鑒定：(A)原代培養(yǎng)1周；(B)原代培養(yǎng)4 周；(C)HE染色，光鏡下觀察；(D)波形蛋白染色陽性；(E)角蛋白染色陰性。
[0021] 圖3MTT法檢測柚皮苷對hPDLCs增殖的影響：不同濃度組柚皮苷在不同時間點對 hPDLCs增殖的影響。（1. Omg/L組對細胞的增殖作用最為顯著（p〈0. 01)，并隨時間呈正相 關(guān)）。
[0022] 圖4柚皮苷對hPDLCs堿性磷酸酶活性及I型膠原蛋白表達的影響：⑷不同濃度 組柚皮苷對hPDLCs堿性磷酸酶活性的影響：1. Omg/L組ALP活性高于其他各組（p〈0. 01); (B)不同濃度組柚皮苷對hPDLCs I型膠原蛋白表達的影響：1. Omg/L組的I型膠原蛋白表 達量要高于其他濃度組（P〈〇. 01)。
[0023] 圖5柚皮苷對hPDLCs OPG mRNA表達的影響：(A) L Omg/L柚皮苷對hPDLCs OPGmRNA表達相對量的影響：0PGmRNA相對量較加藥前有明顯的差異，并且隨著時間的延長 而逐漸增強；(B)柚皮苷干預(yù)牙周膜細胞后各組β -actin、0PG電泳圖：0PG、β -actin的擴 增產(chǎn)物分別為342bp、179bp。注：各泳道從右到左依次為：Bio Marker I ;0-actin對照組 (0、1、3、5、7、9天）；柚皮苷組（0、1、3、5、7、9天）。
[0024] 圖 6hPDLCs/CMC-HPLC/MS 在線聯(lián)用示意圖：Position A :hPDLCs/CMC - 維流 路：Ml (流動相1) -PI (色譜泵1) -S1 (復(fù)雜樣品）-DUV (紫外檢測器）-Cl (hroLCs/CMC 柱）-EC1 (富集柱1) -W1 (廢液1) ;HPLC/MS二維流路：M2 (流動相2) -P2 (色譜泵2) -EC2 (富 集柱 2) -C2 (C18 柱）-DMS (MS 檢測器）-W2 (廢液 2)。Position B :hPDLCs/CMC - 維流 路:Ml (流動相1) -P1 (色譜泵1) -S1 (復(fù)雜樣品）-DUV (紫外檢測器）-Cl (hroLCs/CMC 柱）-EC2 (富集柱2) -W1 (廢液1) ;HPLC/MS二維流路:M2 (流動相2) -P2 (色譜泵2) -EC1 (富 集柱 1) -C2 (C18 柱）-DMS (MS 檢測器）-W2 (廢液 2)。
[0025] 圖7hroLCs/CMC_HPLC/MS在線聯(lián)用法篩選中藥黃連的有效成分：A辛伐他汀在 hroLCs/CMC-online-HPLC/MS系統(tǒng)上分析的二維色譜圖（A辛伐他汀在hPDLCs/CMC上的色 譜圖；B hroLCs/CMC上保留組分R1富集后在HPLC/MS上的色譜圖；S辛伐他汀直接經(jīng)HPLC/ MS分析的色譜圖；R0辛伐他汀在hPDLCs/CMC上的不保留組分；R1辛伐他汀在hPDLCs/ CMC上的保留色譜峰；R1-1R1在HPLC/MS分析后的主要色譜峰）；B鹽酸小檗堿在hPDLCs/ CMC-online-HPLC/MS系統(tǒng)上分析的二維色譜圖（A鹽酸小檗堿在hPDLCs/CMC上的色譜圖；B hroLCs/CMC上保留組分R1富集后在HPLC/MS上的色譜圖；S鹽酸小檗堿直接經(jīng)HPLC/MS分 析的色譜圖；R0鹽酸小檗堿在hPDLCs/CMC上的不保留組分；R1鹽酸小檗堿在hPDLCs/CMC 上的保留色譜峰；R1-1R1在HPLC/MS分析后的主要色譜峰）；C黃連-水提取物（HL-5)在 hroLCs/CMC-online-HPLC/MS系統(tǒng)上分析的二維色譜圖（A黃連-水提取物在hPDLCs/CMC 上的色譜圖；B hroLCs/CMC上保留組分R1 (兩條線之間）富集后在HPLC/MS上的色譜圖；S 黃連-水提取物直接經(jīng)HPLC/MS分析的色譜圖；R0黃連-水提取物在hPDLCs/CMC上的不 保留組分；R1黃連-水提取物在hPDLCs/CMC上的保留色譜峰；R1-1R1在HPLC/MS分析后的 主要色譜峰）。
[0026] 圖8黃連素和辛伐他汀對hPDLCs增殖和堿性磷酸酶活性的影響：(A-E)黃連素和 辛伐他汀對hPDLCs增殖的影響；(F-I)黃連素對hPDLCs堿性磷酸酶活性的影響*P < 0. 05 和< 0. 01相比對照組；（J)黃連素對hPDLCs堿性磷酸酶活性的影響（ALP染色法）。
[0027] 圖9治療4周后各組大鼠頜骨組織病理切片（10X)。
[0028] 圖10治療4周、12周后小型豬各組牙周狀況。A1 :連補組4周，B1 :連補組4周X 線片，C1 :連補組4周CT片；A2 :牙周炎組4周，B2 :牙周炎組4周X線片，C2 :牙周炎組4 周CT片；A3 :連補組12周，B3 :連補組12周X線片，C3 :連補組12周CT片；A4 :牙周炎組 12周，B4 :牙周炎組12周X線片，C4 :牙周炎組12周CT片。
[0029] 圖11各組小型豬治療4周、12周后組織病理切片（4X)。A1 :正常組4周，B1 :牙 周炎組4周，C1 :連補組4周；A2 :正常組4周，B2 :牙周炎組4周，C2 :連補組4周。
[0030] 圖12中藥有效部位原位緩釋凝膠的制備流程圖。
[0031] 圖132%、4%、6%連補緩釋凝膠體外釋放情況。
[0032] 圖14大鼠唇粘膜HE染色鏡下觀察（x400)。A連補組；B空白凝膠組；C空白對照 組。
[0033] 圖15局部藥物治療1個月及3個月后的X光片及CT影像。
[0034] 圖16局部藥物治療1個月及3個后各組HE染色鏡下觀察。A1連補緩釋凝膠1個 月組；B1派麗奧1個月組；C1空白凝膠1個月組；A2連補緩釋凝膠3個月組；B2派麗奧3 個月組；C2空白凝膠3個月組。 【具體實施方式】
[0035] 實施例1
[0036] 本實施例的原料重量組成成份為：15份黃連水提取物（黃連素80%)及8份骨碎 補水提取物（柚皮苷30. 71%);明膠1份，甘油2份。
[0037] 實施例2
[0038] 本實施例的原料重量組成成份為：14份黃連水提取物（黃連素80%)及9份骨碎 補水提取物（柚皮苷30. 71%);明膠1份，甘油2份。
[0039] 實施例3
[〇〇4〇] 本實施例的原料重量組成成份為：13份黃連水提取物（黃連素80%)及10份骨碎 補水提取物（柚皮苷30. 71%);明膠1份，甘油2份。
[0041] 實施例4
[0042] 本實施例的原料重量組成成份為：12份黃連水提取物（黃連素80%)及5份骨碎 補水提取物（柚皮苷30. 71%);明膠1份，甘油2份。
[0043] 實施例5
[0044] 本實施例的原料重量組成成份為：11份黃連水提取物（黃連素80%)及6份骨碎 補水提取物（柚皮苷30. 71%);明膠1份，甘油2份。
[0045] 實施例6
[0046] 本實施例的原料重量組成成份為：10份黃連水提取物（黃連素80%)及7份骨碎 補水提取物（柚皮苷30. 71%);明膠1份，甘油2份。
[0047] 以上實施例的制備方法，包括以下步驟：
[0048] 1、將骨碎補原料粉碎，水煎三次，水煎液直接用大孔樹脂進行提取和分離，70%的 酒精沖洗，濃縮，上噴霧干燥器，測定柚皮苷濃度為30. 71% ;
[0049] 2、酸提堿沉法提取黃連水提取物，即將黃連原料用酸性溶液侵泡，調(diào)節(jié)PH至堿性 并過濾，濾液調(diào)節(jié)PH至酸性，加食鹽溶解過濾，調(diào)PH過濾得粗品，雙蒸水溶解、過濾、真空干 燥得到成品，測定黃連素濃度為80% ;
[0050] 3、將⑴與⑵制備的細粉混合均勻，加入占混合藥粉重量16%的72%乙醇，制成 軟材，在制粒機中用20目篩網(wǎng)制粒，在干燥室中以62°C的溫度烘2小時，過20目篩整粒，混 合均勻；
[0051] 4、取明膠1份，甘油2份，純凈水2份，50°C加熱，充分?jǐn)嚢?，抽真?小時，上機器， 經(jīng)注射器化成膠皮，將（3)原料加入成型，經(jīng)轉(zhuǎn)籠定型，除濕、烘干即得內(nèi)服藥。
[0052] 本發(fā)明實施例1-6采用水煎法聯(lián)用大孔樹脂法提取和分離骨碎補的有效部位，其 有效成分（指標(biāo)成分）為柚皮苷；用酸提堿沉法提取和分離黃連的有效部位，其有效成分 (指標(biāo)成分）為黃連素。黃連和骨碎有效部位可配伍組方，制成"連補固齒膠囊"，全身給 藥，即口服藥。
[0053] 實施例7
[0054] 本實施例的原料重量組成成份為：1份黃連水提取物（黃連素80%)及9份骨碎 補水提取物（柚皮苷30. 71%)，揮干后定量為3g ;22. 5g三乙酸甘油酯，2. 5g聚丙烯酸樹脂 Eudragit RS，0. 15g輕乙基纖維素，2L 85g甘油。
[0055] 實施例8
[0056] 本實施例的原料重量組成成份為：1份黃連水提取物（黃連素80%)及10份骨碎 補水提取物（柚皮苷30. 71%)，揮干后定量為3g ;22. 5g三乙酸甘油酯，2. 5g聚丙烯酸樹脂 Eudragit RS，0. 15g輕乙基纖維素，2L 85g甘油。
[0057] 實施例9
[0058] 本實施例的原料重量組成成份為：1份黃連水提取物（黃連素80%)及11份骨碎 補水提取物（柚皮苷30. 71%)，揮干后定量為3g ;22. 5g三乙酸甘油酯，2. 5g聚丙烯酸樹脂 Eudragit RS，0. 15g輕乙基纖維素，2L 85g甘油。
[0059] 實施例10
[〇〇6〇] 本實施例的原料重量組成成份為：1份黃連水提取物（黃連素80%)及9份骨 碎補水提取物（柚皮苷30. 71%)，揮干后定量為3g ;20g三乙酸甘油酯，5g聚丙烯酸樹脂 Eudragit RS，0. 15g輕乙基纖維素，2L 85g甘油。
[0061] 實施例11
[0062] 本實施例的原料重量組成成份為：1份黃連水提取物（黃連素80%)及10份骨 碎補水提取物（柚皮苷30. 71%)，揮干后定量為3g ;20g三乙酸甘油酯，5g聚丙烯酸樹脂 Eudragit RS，0. 15g輕乙基纖維素，2L 85g甘油。
[0063] 實施例12
[0064] 本實施例的原料重量組成成份為：1份黃連水提取物（黃連素80%)及11份骨 碎補水提取物（柚皮苷30. 71%)，揮干后定量為3g ;20g三乙酸甘油酯，5g聚丙烯酸樹脂 Eudragit RS，0. 15g輕乙基纖維素，2L 85g甘油。
[0065] 以上實施例的制備方法，包括以下步驟：
[〇〇66] 1、將骨碎補原料粉碎，水煎三次，水煎液直接用大孔樹脂進行提取和分離，70%的 酒精沖洗，濃縮，上噴霧干燥器，雙蒸水溶解，測定柚皮苷濃度為30. 71% ;
[〇〇67] 2、酸提堿沉法提取黃連水提取物，即將黃連原料用酸性溶液侵泡，調(diào)節(jié)PH至堿性 并過濾，濾液調(diào)節(jié)PH至酸性，加食鹽溶解過濾，調(diào)PH過濾得粗品，雙蒸水溶解過濾得到成 品，測定黃連素濃度為80%;
[0068] 3、取處方量的甘油加熱至90-100°C，恒溫，攪拌下加入處方量羥乙基纖維素，高速 攪拌至羥乙基纖維素完全溶解；
[〇〇69] 4、取處方量的甘油三乙酸酯加熱至45_50°C，恒溫，在攪拌下加入處方量聚丙烯酸 樹脂Eudragit RS攪拌至完全溶解；
[0070] 5、將上述（3)溶液的溫度降至45_50°C，按黃連素柚皮苷質(zhì)量比1:10的比例加入 處方量黃連骨碎補水提取物，低速攪拌至藥物完全溶解；
[0071] 6、將第（4)步中得到的溶液在低速攪拌下加入到上述（5)藥物溶液中，45-50°C保 溫條件下攪拌至均質(zhì)即得外用藥。
[0072] 本發(fā)明實施例7-12通過加入羥乙基纖維素，濃甘油，聚丙烯酸樹脂等輔料，制成 一種新型外用中藥長效復(fù)方軟膏"連補固齒軟膏"，牙周袋內(nèi)局部用藥，即外用藥。
[0073] 臨床試驗
[0074] 1、受試藥物：黃連骨碎補緩釋凝膠制劑（實施例8,簡稱連補軟膏，參照圖1)
[0075] 2、試驗?zāi)康模涸u價實施例8中藥復(fù)方牙周緩釋凝膠制劑輔助治療牙周炎的療效和 安全性。
[0076] 3、試驗設(shè)計
[0077] 3. 1試驗適應(yīng)癥：用于慢性牙周炎患者接受潔治、刮治根面平整后的輔助治療。
[0078] 3. 2試驗設(shè)計原則：采用隨機單盲、平行對照的試驗方法，進行臨床對比驗證；為 保證試驗結(jié)束時，試驗例數(shù)至少達到每組20例，計劃試驗組20+20例，對照組20+20例，共 計80對；試驗組為黃連骨碎補緩釋凝膠，對照組為鹽酸米諾環(huán)素軟膏和空白組；因治療其 他疾病而使用的藥物應(yīng)相應(yīng)記錄。
[0079] 3. 3受試者選擇
[〇〇8〇] 3. 3. 1診斷標(biāo)準(zhǔn)：慢性牙周炎（根據(jù)1999年新建的國際牙周病疾病分類標(biāo)準(zhǔn)）； 中度及中度以上的病損，選擇觀察牙的牙周袋探診深度（PD)至少有一個位點> 5mm，但 < 10mm。
[0081] 3. 3. 2入選標(biāo)準(zhǔn)：中度及中度以上慢性牙周炎患者；口內(nèi)預(yù)留牙彡10顆；PD : 5-10m，Β0Ρ(+);年齡25-65歲，性別不限；自愿參加本研究，服從治療方案，來院隨訪；簽署 知情同意書；以上如任何一個答案為"否"，則不能參加試驗。
[0082] 3. 3. 3排除標(biāo)準(zhǔn)：實驗前3月內(nèi)使用過抗菌藥物；實驗前6月內(nèi)接受過牙周治療； 女性妊娠或哺乳，或者擬生育者；有嚴(yán)重心、肝、腎、內(nèi)分泌及血液疾?。挥兴幬镞^敏史者； 以上如任何一個答案為"是"，則不能參加試驗。
[0083] 3. 3. 4退出標(biāo)準(zhǔn)：試驗中發(fā)現(xiàn)不符合病例標(biāo)準(zhǔn)者；資料不全者；未遵從醫(yī)囑用藥 者；自動退出者；因藥物過敏或不良反應(yīng)而終止試驗者（不列入觀察病例統(tǒng)計，但應(yīng)計入不 良反應(yīng)病例中評價）；出現(xiàn)嚴(yán)重不良事件并緊急揭盲者；失訪者；其他。
[0084] 3. 4給藥方案：首診時進行牙周檢查，篩選病人，齦上潔治術(shù)之后，基線檢查，確定 病人個觀察牙位，進行臨床檢查及齦溝液檢查，血尿常規(guī)檢查、肝腎功能及心電圖檢查。然 后給予基礎(chǔ)治療（即潔治、刮治、根面平整），隨后牙周袋內(nèi)注入實驗藥物，指導(dǎo)病人口腔衛(wèi) 生，試驗組與對照組同方法。復(fù)診安排：用藥前、用藥1周、用藥2周、用藥3周、用藥四周、 用藥3個月、用藥6個月、用藥9個月、用藥12個月。醫(yī)生應(yīng)定期對受試者進行隨訪，督促 其正確執(zhí)行醫(yī)囑。每位受試者只能參加一次研究。
[0085] 3. 5觀察指標(biāo)
[0086] 3. 5. 1主訴癥狀指標(biāo)：包括牙齦出血、牙齦紅腫、牙松動等。臨床意義判定：1無；2 有輕微異常；3中等異常；4嚴(yán)重異常。
[〇〇87] 3. 5. 2臨床指標(biāo)：取不同象限的觀察牙位，每個觀察牙記錄6個位點；牙周袋探 診深度（PD，mm):使用標(biāo)準(zhǔn)化牙周探針，所得數(shù)據(jù)四舍五入；附著水平測定（CAL，mm):釉牙 骨質(zhì)界至牙周袋底的距離；出血指數(shù)（BI):記錄頰側(cè)三個位點及舌側(cè)一個位點；菌斑指數(shù) (PLI):菌斑染色后記錄各牙面菌斑染色面積；根分叉病變、松動度、牙槽骨吸收。
[0088] 3. 5. 3銀溝液檢查：Waterman40#濾紙，裁剪成10_X 2mm大小，放入1. 5mlEP管 中，高壓蒸汽滅菌，恒溫烤箱烤干，稱重，編號記錄，備用。將無菌濾紙條沿頰側(cè)牙面輕輕插 入齦溝或牙周袋，遇阻力停滯30秒，30秒后取出立即置入無菌EP管中（注意濾紙條沾血則 棄去不用），在盡可能短的時間內(nèi)再次稱重并記錄，計算出齦溝液重量，_70°C凍存?zhèn)溆谩｝l 溝液中IL-8含量的檢測（ELISA法）；齦溝液中IL-1 β、PGE2含量的檢測（ELISA法）；測 量步驟同IL-8含量的檢測步驟，得到數(shù)據(jù)后，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣本中IL-1、PEG2的 濃度。
[0089] 3. 5. 4實驗室檢查：心電圖檢查；血常規(guī)檢查、尿常規(guī)檢查；肝腎功能檢查（ALT、 AST、BUN、CR);分別在基線（首診）時和用藥結(jié)束時檢測。
[0090] 3. 5. 5影像學(xué)檢查：x線片；CBCT掃描。
[0091] 3. 5. 6數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析：ELISA結(jié)果采用試劑公司提供的Curve ExpertL 3軟件包， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析兩兩比較采用配對t檢驗，多個樣本比較的方差分析LSD檢 驗。以P< 0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。計量資料采用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差進行統(tǒng)計描述，采 用t檢驗或方差分析（AN0VA)或Wilcoxon秩和檢驗進行比較。計數(shù)資料采用頻數(shù)（構(gòu)成 比）進行統(tǒng)計描述，采用X 2檢驗或非參數(shù)檢驗。等級資料用秩和檢驗或Ridit分析。
[0092]
[0093] 4、病例資料：
【權(quán)利要求】
1. 利用黃連及骨碎補有效部位配伍組方治療牙周炎的制劑，其特征在于，其原料組分 按質(zhì)量比包括為： 含黃連素80%以上的黃連有效部位水提取物 10-15份 柚皮苷30. 71%以上的骨碎補有效部位水提取物5-10份。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用黃連及骨碎補有效部位配伍組方治療牙周炎的制劑，其 其特征在于，其原料組分按質(zhì)量比包括為： 含黃迕素80%的黃迮有效部位水提取物 11份 袖皮fi 30.71%的#碎補冇效部位水提取物 6份 I削交 1份 甘油 2#?·
3. 利用黃連及骨碎補有效部位配伍組方治療牙周炎的制劑，其原料組分按質(zhì)量比包括 為： 含黃連索80%以上的黃連釘效部位水提取物 0.2-0.3 +份 袖皮Τ?: 30.71%以h的竹碎補存效部位水提取物 1.8-3.3份 -·:乙酸 1+汕_ 20-22.5 份 聚 Λ'烯酸樹脂 Eudragit RS 2.5-5 U ° 羥乙基纖維素 0.丨5份 甘油 2L85份
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用黃連及骨碎補有效部位配伍組方治療牙周炎的制劑，其 其特征在于，其原料組分按質(zhì)量比包括為： 1份黃連素80%的黃連水提取物及10份柚皮苷30. 71%的骨碎補水提取物，揮干后定量 為3g ;22· 5g三乙酸甘油酯，2. 5g聚丙烯酸樹脂Eudragit RS，0· 15g羥乙基纖維素，21. 85g 甘油。
【文檔編號】A61K36/718GK104083466SQ201310669976
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2013年12月10日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月10日
【發(fā)明者】李昂, 王嗣岑, 茍建重, 孫俊毅 申請人:西安交通大學(xué)