通過使用單鏈多肽融合蛋白進(jìn)行疼痛的治療的制作方法【專利摘要】治療分子的使用，用于特定疼痛病狀的治療，其中所述治療分子是單鏈的多肽融合蛋白，其包含：非細(xì)胞毒性的蛋白酶，或其片段，所述蛋白酶或蛋白酶片段能夠剪切疼痛感應(yīng)傳入器中胞吐融合器的蛋白；能夠結(jié)合所述疼痛感覺傳入器上結(jié)合位點(diǎn)的靶向部分，所述結(jié)合位點(diǎn)能夠進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)吞，以便被并入到所述疼痛感覺傳入器的內(nèi)涵體中；蛋白酶剪切位點(diǎn)，在該位點(diǎn)所述融合蛋白可被蛋白酶剪切，其中所述蛋白酶剪切位點(diǎn)位于所述非細(xì)胞毒性的蛋白酶或其片段和所述靶向部分之間；和轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域，其能夠從內(nèi)涵體中轉(zhuǎn)運(yùn)所述蛋白酶或蛋白酶片段，跨內(nèi)涵體膜并進(jìn)入所述疼痛感覺傳入器的細(xì)胞溶膠?！緦＠f明】通過使用單鏈多肽融合蛋白進(jìn)行疼痛的治療本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2007年6月I日、申請(qǐng)?zhí)枮?00780028089.0、題為“通過使用單鏈多肽融合蛋白進(jìn)行疼痛的治療”的專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。[0001]本發(fā)明涉及非細(xì)胞毒性的融合蛋白的用途，用于特定類型疼痛的治療。[0002]根據(jù)其在靶細(xì)胞上產(chǎn)生效果的類型，毒素可被一般地分為兩組。更詳細(xì)地，第一組毒素殺死它們的天然靶細(xì)胞，并因此是通常所說的細(xì)胞毒性毒素分子。這一組的毒素特別地由植物毒素，如蓖麻毒素和相思豆毒素；并由細(xì)菌毒素，如白喉毒素和假單胞菌外毒素A(PseudomonasexotoxinA)示例。細(xì)胞毒毒素在“魔法子彈”(如，免疫偶聯(lián)物(immunoconjugate)，其包含細(xì)胞毒毒素組分和與靶細(xì)胞特定標(biāo)記進(jìn)行結(jié)合的抗體)的設(shè)計(jì)中已經(jīng)吸引了極大的興趣，其被用于細(xì)胞紊亂和狀況，如癌癥的治療。細(xì)胞毒毒素典型地通過抑制蛋白合成的細(xì)胞過程殺死它們的靶細(xì)胞。[0003]第二組毒素，其被稱作非細(xì)胞毒性的毒素，不殺死(如它們的名字所證實(shí))它們天然的靶細(xì)胞。非細(xì)胞毒性的毒素與它們的細(xì)胞毒性相似物相比，吸引了較少的商用興趣，并且通過抑制蛋白合成以外的細(xì)胞過程對(duì)靶細(xì)胞產(chǎn)生它們的影響。非細(xì)胞毒性的毒素通過多種植物，并通過多種微生物，如梭菌屬某一種(Clostridiumsp.)和奈瑟菌屬某一種(Neisseriasp.)產(chǎn)生。[0004]梭菌神經(jīng)毒素是典型地具有150kDa數(shù)量級(jí)分子量的蛋白。它們由多種細(xì)菌屬類物種產(chǎn)生，特別地由梭菌類產(chǎn)生，最重要地，由破傷風(fēng)梭菌(C.tetani)和肉毒梭菌(C.botulinum)、丁酸梭菌(C.butyricum)和阿根廷梭菌(C.argentinense)的幾種菌株產(chǎn)生。目前有8種不同類型的梭菌毒素，即:破傷風(fēng)毒素，和血清型A、B、Cl、D、E、F和G的肉毒菌神經(jīng)毒素，并且它們都共享相似的結(jié)構(gòu)和作用形式。[0005]梭菌神經(jīng)毒素代表了一組主要的非神經(jīng)毒性的毒素分子，并通過宿主細(xì)菌作為單一多肽被合成，所述單一多肽通過蛋白水解剪切事件被翻譯后修飾，以形成由二硫鍵連接在一起的兩個(gè)多肽鏈。這兩條鏈被稱為具有約IOOkDa分子量的重鏈(H-鏈)，和具有約50kDa分子量的輕鏈(L-鏈)。[0006]L-鏈具有蛋白酶功能(鋅依靠肽鏈內(nèi)切酶活性)并顯示出對(duì)胞吐(exocytic)過程中涉及的囊泡和/或質(zhì)膜相關(guān)蛋白高的底物特異性。來自不同梭菌屬種或血清型的L-鏈可以水解三種底物蛋白之一中的不同但特異的肽鍵，所述三種底物蛋白為小突觸小泡蛋白(synaptobrevin)、突觸融合蛋白(syntaxin)或SNAP-25。這些底物是神經(jīng)分泌機(jī)制的重要組分。[0007]奈瑟菌屬,最重要地來自淋球菌(N.gonorrhoeae)的,產(chǎn)生功能相似的非細(xì)胞毒性蛋白酶。這些蛋白酶的一個(gè)實(shí)例是IgA蛋白酶(參見W099/58571)。[0008]現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)明確記載:毒素分子可以被重新靶向并非該毒素的天然靶細(xì)胞的細(xì)胞。當(dāng)被所謂的重新靶向時(shí)，修飾的毒素能夠結(jié)合目標(biāo)靶細(xì)胞，并且接下來轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞溶膠，能夠?qū)爰?xì)胞產(chǎn)生其效應(yīng)。所述重新祀向通過用不同的TM(祀向部分TargetingMoiety)替換該毒素的天然靶向部分(TM)完成。在這一點(diǎn)上，TM被選擇以便其結(jié)合目標(biāo)靶細(xì)胞，并允許修飾的毒素后續(xù)進(jìn)入革巴細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)涵體之內(nèi)。修飾的毒素也包含轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域，以使非細(xì)胞毒性的蛋白酶進(jìn)入細(xì)胞溶膠。該轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域可以是該毒素的天然轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域，或其可以是從具有轉(zhuǎn)運(yùn)活性的微生物蛋白中獲得的不同轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域。[0009]上述TM替換可以通過普通技術(shù)人員公知的傳統(tǒng)化學(xué)偶聯(lián)技術(shù)被實(shí)現(xiàn)。在這一點(diǎn)上，參考Hermanson,G.T.(1996),Bioconjugatetechniques,AcademicPress,并參考Wong,S.S.(1991),Chemistryofproteinconjugationandcross-linking,CRCPress。[0010]然而，化學(xué)偶聯(lián)通常是不精確的。例如，偶聯(lián)之后，TM可以在多于一個(gè)連接位點(diǎn)被連接到該偶聯(lián)物的剩余部分。[0011]化學(xué)偶聯(lián)也難以控制。例如，TM可以在蛋白酶組分和/或轉(zhuǎn)運(yùn)組分的連接位點(diǎn)被連接到修飾毒素的剩余部分。當(dāng)僅連接到所述組分之一(優(yōu)選地在單一位點(diǎn))對(duì)治療效力是期望的時(shí)候，這是有問題的。[0012]因此，化學(xué)偶聯(lián)導(dǎo)致混合種類的修飾毒素分子，這是不理想的。[0013]作為化學(xué)偶聯(lián)的替代方案，TM代替可以被單一多肽融合蛋白的重組制備實(shí)現(xiàn)(參見TO98/07864)。該技術(shù)基于體內(nèi)細(xì)菌機(jī)制，通過該機(jī)制，原生梭菌神經(jīng)毒素(即，全毒素)被制備，并產(chǎn)生具有以下結(jié)構(gòu)排列的融合蛋白:NH2-[蛋白酶組分]-[轉(zhuǎn)運(yùn)組分]-[TM]-C00H[0014]根據(jù)W098/07864，TM被置于朝向融合蛋白的C-末端。該融合蛋白隨后通過用蛋白酶處理被激活，所述蛋白酶在蛋白酶組分和轉(zhuǎn)運(yùn)組分之間剪切。雙鏈蛋白隨后被產(chǎn)生，其包含共價(jià)連接(通過二硫鍵)到含有轉(zhuǎn)運(yùn)組分加TM的另一單一多肽鏈的，作為單一多肽鏈蛋白酶組分的蛋白酶組分。盡管W098/07864的方法遵循了(按照融合蛋白的結(jié)構(gòu)排列而言)梭菌全毒素的天然表達(dá)系統(tǒng)，但是本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該系統(tǒng)可以導(dǎo)致某些融合蛋白的產(chǎn)生，其對(duì)預(yù)期的靶細(xì)胞具有本質(zhì)上降低的結(jié)合能力。[0015]這一問題在治療特定類型疼痛的情況下特別相關(guān)。[0016]本發(fā)明通過提供用于生產(chǎn)治療特定類型疼痛的藥物的治療分子的使用，解決了一個(gè)或多個(gè)上述問題，其中所述治療分子是單鏈的多肽融合蛋白，其包含:a.非細(xì)胞毒性的蛋白酶(anon-cytotoxicprotease)或其片段,所述蛋白酶或蛋白酶片段能夠剪切疼痛感應(yīng)傳入器(或傷害感應(yīng)傳入器，nociceptivesensoryafferent)中細(xì)胞外融合器(exocyticfusionapparatus)的蛋白；b.能夠結(jié)合疼痛感應(yīng)傳入器上之結(jié)合位點(diǎn)(BindingSite)的祀向部分(TargetingMoiety)，所述結(jié)合位點(diǎn)能夠進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)吞作用，以被并入疼痛感應(yīng)傳入器中的內(nèi)涵體內(nèi)；c.蛋白酶剪切位點(diǎn)(proteasecleavagesite),在該位點(diǎn)融合蛋白可被蛋白酶剪切，其中所述蛋白酶剪切位點(diǎn)位于非細(xì)胞毒性蛋白酶或其片段和靶向部分之間；和d.轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域(translocationdomain),其能夠?qū)⒌鞍酌富虻鞍酌钙螐膬?nèi)涵體中跨內(nèi)涵體膜轉(zhuǎn)運(yùn)，并進(jìn)入疼痛感應(yīng)傳入器的細(xì)胞溶膠中。[0017]本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)W098/07864的融合蛋白系統(tǒng)對(duì)需要N-末端區(qū)域與疼痛感應(yīng)傳入器上的結(jié)合位點(diǎn)相互作用的TMs來說不是最優(yōu)化的。這一問題對(duì)于TMs來說特別尖銳，所述TMs需要特定的N-末端氨基酸殘基或包括N-末端氨基酸殘基的特定序列的氨基酸殘基，用以與疼痛感應(yīng)傳入器上的結(jié)合位點(diǎn)相互作用。[0018]與W098/07864相反，本發(fā)明采用了非細(xì)胞毒性的融合蛋白，其中所述融合體的TM組分包括內(nèi)部區(qū)域中的相關(guān)結(jié)合區(qū)域或朝向TM中部(B卩，線性肽序列的中部)放置的氨基酸序列，或優(yōu)選地，朝向TM的N-末端放置，或更優(yōu)選地位于或接近N-末端的氨基酸序列。所述N-末端區(qū)域能夠結(jié)合疼痛感應(yīng)傳入器上的結(jié)合位點(diǎn)，并且所述TM優(yōu)選地有對(duì)特定的和界定的氨基酸殘基序列有要求，以在其N-末端是游離的。[0019]本文所述的化合物可被用于治療患有一種或多種類型慢性疼痛的患者，所述慢性疼痛包括神經(jīng)性疼痛、炎癥疼痛、頭痛、身體疼痛、內(nèi)臟疼痛和牽涉性疼痛。[0020]“治療”，用在這里，表示醫(yī)學(xué)上的處理。它包括，例如，給予本發(fā)明的化合物，以預(yù)防疼痛或減輕其嚴(yán)重性。[0021]術(shù)語“疼痛”，用在這里，表示任何不愉快的感官經(jīng)歷，通常與身體疾病相關(guān)。身體疾病對(duì)醫(yī)生可能明顯或可能不明顯。疼痛有兩種類型:慢性和急性。“急性疼痛”是突然發(fā)生的，短時(shí)間的疼痛。一種類型的急性疼痛，例如，是在皮膚或其它表面組織的傷口處，如由割傷或燒傷引起的，感覺到的皮膚疼痛。皮膚疼痛感受器僅終止于皮膚以下，并且由于高濃度的神經(jīng)末端，產(chǎn)生良好定義的短期局部疼痛。“慢性疼痛”是急性疼痛以外的疼痛。慢性疼痛包括神經(jīng)性疼痛、炎癥疼痛、頭痛、身體疼痛、內(nèi)臟疼痛和牽涉性疼痛。1.神經(jīng)性疼痛[0022]本發(fā)明所述的化合物可以被用于治療由任何以下神經(jīng)性疼痛狀況引起的或與其相關(guān)的疼痛?！吧窠?jīng)性疼痛”表示來自外周神經(jīng)系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)或兩者的不正常的感覺輸入，導(dǎo)致不適。A.神經(jīng)性疼痛的癥狀[0023]神經(jīng)性疼痛的癥狀可以包括持續(xù)、自發(fā)的疼痛，以及痛覺異常(allodynia)(對(duì)通常非疼痛的刺激的疼痛反應(yīng))、痛覺增敏(hyperalgesia)(對(duì)通常僅引起輕微不適的疼痛刺激，如針刺，產(chǎn)生的加重的反應(yīng))、或痛覺過敏(hyperpathia)(短暫的不適成為長期嚴(yán)重的疼痛)。B.神經(jīng)性疼痛的原因[0024]神經(jīng)性疼痛可由以下任意原因引起。1.外傷性損害，例如，如神經(jīng)壓迫傷(如，神經(jīng)壓迫、神經(jīng)拉伸、神經(jīng)卡壓(nerveentrapment)或不完整的神經(jīng)切面);脊柱傷(如，脊柱的一半切除);腿截肢；挫傷；炎癥(如，脊柱炎癥)；或手術(shù)過程。2.缺血性事件，包括，例如，中風(fēng)和心臟病發(fā)作。3.感染物4.暴露于毒性試劑，包括，例如，藥物、酒精、重金屬(如鉛、砷、汞)、工業(yè)試劑(如，溶劑、源自膠水的煙氣)或一氧化二氮。5.疾病，包括，例如炎癥性疾病，神經(jīng)性腫瘤，獲得性免疫缺陷綜合癥(acquiredimmunedeficiencysyndrome(AIDS)),萊姆病(Lymesdisease),麻風(fēng)病，代謝疾病，外周神經(jīng)疾病，如神經(jīng)瘤、單神經(jīng)病或多神經(jīng)病。C.神經(jīng)性疼痛的種類1.神經(jīng)痛神經(jīng)痛是沿一條或多條特異神經(jīng)路徑輻射的疼痛，通常在神經(jīng)結(jié)構(gòu)上沒有任何可顯示的病理改變。神經(jīng)痛的起因是多種多樣的?；瘜W(xué)腐蝕、炎癥、外傷(包括手術(shù))、被附近的結(jié)構(gòu)(如腫瘤)壓迫和感染都可以引發(fā)神經(jīng)痛。但是，在多種情況下，起因是未知的或不可識(shí)別的。神經(jīng)痛在老年人中最常見，但是它可以發(fā)生在任何年齡。神經(jīng)痛，包括但不限于三叉神經(jīng)痛、皰疫后神經(jīng)痛(post-herpeticneuralgia)、皰疫后神經(jīng)痛(postherpeticneuralgia)、舌咽神經(jīng)痛、坐骨神經(jīng)痛和非典型性面部疼痛。[0025]神經(jīng)痛是分布在單一神經(jīng)或多個(gè)神經(jīng)中的疼痛。實(shí)例是三叉神經(jīng)痛、非典型性面部疼痛和皰疹后神經(jīng)痛(由帶狀皰疹或皰疹引起)。受影響的神經(jīng)負(fù)責(zé)感覺從下顎到額頭的面部區(qū)域中的觸摸、溫度和壓力。該疾病通常引起短暫的劇痛，通常少于2分鐘并僅發(fā)生在面部的一側(cè)。疼痛可以多種方式描述，如“劇痛(stabbing)”、“劇烈的(sharp)”、“閃電般的(likelightning)”、“燒灼(burning)”和甚至“癢的(itchy)”。在非典型形式的三叉神經(jīng)痛中，疼痛也可以嚴(yán)重的或僅疼痛存在，并持續(xù)延長的時(shí)間。與三叉神經(jīng)痛(TN)相關(guān)的疼痛被識(shí)別為可以被經(jīng)歷的最劇烈的疼痛之一。[0026]簡(jiǎn)單的刺激，如吃、說話、洗臉或任何輕微的觸碰或感覺可以引起發(fā)作(甚至微風(fēng)的感覺)。發(fā)作可以一群發(fā)生或作為單獨(dú)的發(fā)作發(fā)生。[0027]癥狀包括位于任何位置急劇、劇烈的疼痛或持續(xù)、燒灼的疼痛，通常位于或接近身體的表面，對(duì)每個(gè)期間來說發(fā)生在相同的位置；痛沿特定神經(jīng)途徑的疼；由于疼痛受影響的身體部分受損的功能，或由于伴隨的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)損傷的肌肉衰弱；提高的皮膚敏感性或受影響皮膚區(qū)域的麻木(與局部麻醉相似的感覺，如奴佛卜因注射(Novacaineshot));和被解釋為疼痛的任何觸摸或壓力。運(yùn)動(dòng)也可能是疼痛的。[0028]三叉神經(jīng)痛是最常見形式的神經(jīng)痛。它影響面部主要的感官神經(jīng)，三叉神經(jīng)(“三叉的”文字上表示“三個(gè)起點(diǎn)(threeorigins)”,指的是神經(jīng)分成3個(gè)分支)。其癥狀包括嚴(yán)重的疼痛在面部的一側(cè)突然而短暫的發(fā)作，沿著該側(cè)三叉神經(jīng)所牽扯的區(qū)域。疼痛發(fā)作可能嚴(yán)重到足以引起面部扭曲，其典型地指疼痛抽筋(神經(jīng)疫攣(ticdouloureux))。有時(shí)，三叉神經(jīng)痛的起因是血管或小腫瘤壓迫神經(jīng)。疾病，諸如多發(fā)性硬化癥(影響腦和脊柱的炎癥性疾病)、某些形式的關(guān)節(jié)炎和糖尿病(高血糖)也可能引起三叉神經(jīng)痛，但并非總能識(shí)別出起因。在這種情況下，某些運(yùn)動(dòng)，如咀嚼、說話、吞咽或接觸面部的區(qū)域可能引發(fā)劇烈疼痛的痙攣。[0029]相關(guān)但相當(dāng)不常見的神經(jīng)痛影響舌咽神經(jīng)，其為咽喉提供感覺。該神經(jīng)痛的癥狀是位于咽喉的短暫、沖擊狀發(fā)作的疼痛。[0030]神經(jīng)痛可能發(fā)生在諸如帶狀皰疹的感染之后，帶狀皰疹由帶狀皰疹病毒，一種皰疹病毒引起。這種神經(jīng)痛在帶狀皰疹的疹子痊愈后產(chǎn)生持續(xù)的灼燒疼痛。疼痛由于受影響區(qū)域的運(yùn)動(dòng)或與其接觸而惡化。并非所有診斷為帶狀皰疹的那些患者繼續(xù)經(jīng)歷皰疹后神經(jīng)痛，它會(huì)比帶狀皰疹更疼。疼痛和敏感可以持續(xù)數(shù)月或甚至數(shù)年。疼痛通常是對(duì)任何接觸，但特別是輕觸不可忍受的敏感形式。皰疹后神經(jīng)痛不限制在面部；它可以發(fā)生在身體的任何位置，但通常發(fā)生在帶狀皰疹疹子的部位。[0031]由于疼痛和患病期間的社交孤立，抑郁是常見的。[0032]皰疹后神經(jīng)痛可能在初始的皰疹感染的標(biāo)志已經(jīng)消失很長時(shí)間后惡化?？赡芤鹕窠?jīng)痛的其它感染性疾病是梅毒和萊姆病(Lymedisease)。[0033]糖尿病是神經(jīng)痛的另一常見誘因。這一非常常見的醫(yī)學(xué)問題影響幾乎1/20的美國成年人。糖尿病損害向神經(jīng)提供循環(huán)的微小動(dòng)脈，導(dǎo)致神經(jīng)纖維故障及有時(shí)的神經(jīng)損失。糖尿病可以產(chǎn)生幾乎任何神經(jīng)痛，包括三叉神經(jīng)痛、腕管綜合癥(carpaltunnelsyndrome)(手部和腕部的疼痛和麻木)和感覺異常性股痛(由于股外側(cè)皮神經(jīng)損傷引起的大腿麻木和疼痛)。血糖的嚴(yán)格控制可以預(yù)防糖尿病的神經(jīng)損傷并可以加速發(fā)生神經(jīng)痛的患者的恢復(fù)。[0034]可能與神經(jīng)痛相關(guān)的其它醫(yī)學(xué)癥狀為慢性腎衰竭和卟啉癥(porphyria)-—種遺傳疾病，其中身體不能清除身體中血液正常分解后產(chǎn)生的某些物質(zhì)本身。某些藥物也可能引起這個(gè)問題。[0035]2.傳入神經(jīng)阻滯傳入神經(jīng)阻滯表示來自身體一部分的感覺輸入的缺失，并可以由外周感覺纖維或形成中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)的打斷而引起。傳入神經(jīng)阻滯疼痛癥狀包括，但不限于腦或脊柱的損傷、中風(fēng)后疼痛、幻覺痛、半身不遂、上臂神經(jīng)叢撕裂傷、腰部神經(jīng)根病(radiculopathies)。[0036]3.復(fù)雜性局部疼痛綜合癥(CRPSs)CRPS是起因于感應(yīng)維持疼痛(sympathetically-maintained)的慢性疼痛綜合癥，并以兩種形式存在。CRPSl現(xiàn)在代替術(shù)語“反射性交感神經(jīng)營養(yǎng)不良綜合癥(reflexsympatheticdystrophysyndrome)”。它是一種慢性神經(jīng)病變,最常見發(fā)生在輕微或重大創(chuàng)傷后的胳膊和腿部。CRPSl與嚴(yán)重的疼痛；指甲、骨骼和皮膚上的變化；和對(duì)受影響肢體的觸碰提高的敏感度相關(guān)聯(lián)。CRPS2替代術(shù)語皮膚灼熱痛(causalgia)，并且其起因于識(shí)別出的對(duì)神經(jīng)的傷害。CRPS包括但不限于I型CRPS(反射性交感神經(jīng)營養(yǎng)不良綜合癥)和II型CRPS(皮膚灼熱痛)。4.神經(jīng)病變[0037]神經(jīng)病變是神經(jīng)的功能或病理改變，并且通過感覺或運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元異常被臨床表征。[0038]中樞神經(jīng)病變是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的功能或病理改變。[0039]外周神經(jīng)病變是一個(gè)或多個(gè)外周神經(jīng)中的功能或病理改變。外周神經(jīng)從中樞神經(jīng)系統(tǒng)(腦和脊柱)傳遞信息給肌肉和其它器官，并從皮膚、關(guān)節(jié)和其它器官傳遞回大腦。當(dāng)這些神經(jīng)無法攜帶信息往返大腦和脊柱時(shí)，外周神經(jīng)病變發(fā)生，導(dǎo)致疼痛、感覺缺失、或無法控制肌肉。在一些情況下，控制血管、腸道和其它器官的神經(jīng)的失效導(dǎo)致異常的血壓、消化問題和其它基本身體過程的缺失。神經(jīng)病變的風(fēng)險(xiǎn)因素包括糖尿病、酗酒和暴露于某些化學(xué)物質(zhì)和藥品。一些人具有神經(jīng)病變的遺傳傾向。在神經(jīng)上長時(shí)間的壓力是另一種發(fā)生神經(jīng)損傷的風(fēng)險(xiǎn)。受壓傷可能由長時(shí)間不動(dòng)(如長時(shí)間的手術(shù)過程或長期患病)或由對(duì)神經(jīng)的壓迫引起。多神經(jīng)病變表示通常同等影響兩側(cè)身體的廣布過程。癥狀取決于何種類型的神經(jīng)被影響。三種主要類型的神經(jīng)為感覺、運(yùn)動(dòng)和自主神經(jīng)。神經(jīng)病變可以影響所有三種類型神經(jīng)的任何一種或組合。癥狀也取決于該病癥影響整個(gè)軀體或僅影響一束神經(jīng)(如源自創(chuàng)傷)。慢性炎癥性多神經(jīng)病變的原因是異常的免疫反應(yīng)。特異抗原、免疫過程和激發(fā)因子不同，并且在多種情況下是未知的。它可能與其它癥狀關(guān)聯(lián)發(fā)生，如HIV、炎癥性腸病、紅斑狼瘡、慢性活動(dòng)性肝炎和血細(xì)胞異常。[0040]外周神經(jīng)病變可能包括單一神經(jīng)或神經(jīng)束功能或病理的改變(單神經(jīng)病變)，或影響多個(gè)神經(jīng)的功能或病理改變(多神經(jīng)病變)。[0041]外周神經(jīng)病奪遺傳疾病進(jìn)行性排骨肌萎縮癥(Charcot-Marie-Toothdisease)弗里德賴希氏共濟(jì)失調(diào)(Friedreich’sataxia)全身或代謝失調(diào)糖尿病(糖尿病神經(jīng)痛)膳食缺乏(特別是維生素B-12)過量飲酒(酒精性神經(jīng)痛)尿毒癥(源自腎衰竭)癌癥感染或炎癥性病癥AIDS肝炎科羅拉多壁虱熱白喉格林-巴利綜合癥(Guillain-Barresyndrome)HIV感染而沒有AIDS發(fā)展麻風(fēng)病萊姆病(Lyme)結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎結(jié)節(jié)病干燥綜合癥(Sjogrensyndrome)梅毒全身紅斑狼瘡淀粉狀物質(zhì)(amylοid)暴露于有毒化合物吸入膠水或其它有毒化合物一氧化二氮工業(yè)試劑一特別是溶劑重金屬(鉛、砷、汞等)從屬于像鎮(zhèn)痛劑腎病的藥物的神經(jīng)痛多種誘因貧血(降低的氧/降低的血流)長時(shí)間暴露于冷的溫度a.多神經(jīng)病變多神經(jīng)病變是外周神經(jīng)病變，包括由多個(gè)外周神經(jīng)損傷或解體引起的運(yùn)動(dòng)或某一區(qū)域感覺的缺失。多神經(jīng)病變疼痛包括，但不限于脊髓灰質(zhì)炎后綜合癥、乳房切除術(shù)后綜合癥(postmastectomysyndrome)、糖尿病神經(jīng)痛、酒精性神經(jīng)痛、淀粉狀物質(zhì)(amyloid)、毒素、AIDS、甲狀腺機(jī)能減退、尿毒癥、維生素缺乏、化療引起的疼痛、2’，3’-雙脫氧胞苷(ddC)治療、格林-巴利綜合癥(Guillain_Barr6syndrome)或法布瑞氏癥(Fabry’sdisease)。b.單神經(jīng)病變單神經(jīng)病變是外周神經(jīng)病變，包括由單一外周神經(jīng)或神經(jīng)束損傷或解體引起的運(yùn)動(dòng)或某一區(qū)域感覺的缺失。單神經(jīng)病變最常見由起因于自創(chuàng)傷或外傷的局部區(qū)域損傷引起，盡管偶爾地，全身疾病可能引起單獨(dú)的神經(jīng)損傷(如多數(shù)單神經(jīng)炎(mononeuritismultiplex))。常見的原因是直接外傷、對(duì)神經(jīng)長時(shí)間的壓迫、和由附近身體結(jié)構(gòu)的腫脹或受傷對(duì)神經(jīng)的壓迫。損傷包括神經(jīng)髓鞘(遮蓋物)的解體或部分神經(jīng)細(xì)胞(軸突)的解體。損傷減緩或阻止了沖動(dòng)通過神經(jīng)的傳導(dǎo)。單神經(jīng)病變可能涉及身體的任何部分。單神經(jīng)病變痛包括，但不限于坐骨神經(jīng)功能異常、腓總神經(jīng)功能異常、橈神經(jīng)功能異常、尺神經(jīng)功能異常、顱骨單神經(jīng)病變V1、顱骨單神經(jīng)病變VI1、顱骨單神經(jīng)病變III(壓迫型)、顱骨單神經(jīng)病變III(糖尿病型)、腋神經(jīng)功能異常、腕管綜合癥、股神經(jīng)功能異常、脛神經(jīng)功能異常、面神經(jīng)麻痹(Be11’spalsy)、胸廓出口綜合癥、腕管綜合癥和第六(外展)神經(jīng)麻痹。c.普遍的外周神經(jīng)病變普遍的外周神經(jīng)病變是對(duì)稱的，并且通常是由于各種全身疾病和病痛過程，這些疾病和病痛過程影響外周神經(jīng)系統(tǒng)的整體。它們被進(jìn)一步分為幾個(gè)類別:1.遠(yuǎn)端軸突病變(Distalaxonopathies)是神經(jīng)元的一些代謝或毒性錯(cuò)亂的結(jié)果。它們可能由代謝疾病引起，例如糖尿病，腎衰竭，缺乏綜合癥(deficiencysyndrome),如營養(yǎng)不良和酗酒，或毒素或藥物的影響。遠(yuǎn)端軸突病變(也被成為逆行死亡神經(jīng)病變(dyingbackneuropathy))是一種外周神經(jīng)病變,其起因于外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)神經(jīng)元的一些代謝或毒性的混亂。這是神經(jīng)對(duì)代謝或毒素紊亂的最常見反應(yīng)，并且照這樣，可由代謝疾病引起，例如糖尿病，腎衰竭，缺乏綜合癥(deficiencysyndrome),如營養(yǎng)不良和酗酒，或毒素或藥物的影響。遠(yuǎn)端軸突病變的最常見誘因是糖尿病，并且最常見的遠(yuǎn)端軸突病變是糖尿病神經(jīng)痛。i1.髓鞘質(zhì)病是由于髓鞘質(zhì)的主要攻擊，引起沖動(dòng)傳導(dǎo)的急性失敗。最常見的誘因是急性炎癥性脫髓鞘多神經(jīng)病變(acuteinflammatorydemyelinatingpolyneutopathy(AIDP，也被稱作格林-巴利綜合癥))，雖然其它誘因包括慢性炎癥性脫髓鞘綜合癥(CIDP)、遺傳代謝紊亂(如，腦白質(zhì)營養(yǎng)不良)或毒素。髓鞘質(zhì)病是由于髓鞘或髓鞘化許旺細(xì)胞(myelinatingSchwanncells)的大部分解體,其使得軸突完整,但引起沖動(dòng)傳導(dǎo)的急性衰竭。脫髓鞘化減緩或完全阻止了電沖動(dòng)通過神經(jīng)的傳導(dǎo)。最常見的誘因是急性炎癥性脫髓鞘多神經(jīng)病變(AIDP，也被稱作格林-巴利綜合癥)，雖然其它誘因包括慢性炎癥性脫髓鞘綜合癥(CIDP)、遺傳代謝紊亂(如，腦白質(zhì)營養(yǎng)不良或進(jìn)行性腓骨肌萎縮)或毒素。ii1.神經(jīng)病變是外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)神經(jīng)元破壞的結(jié)果。它們可能由運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病，感覺神經(jīng)病變(如，帶狀皰疹)，毒素或自主神經(jīng)功能異常。神經(jīng)毒素可能引起神經(jīng)病變，例如化學(xué)治療試劑長春新堿。神經(jīng)病變是由于外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)的神經(jīng)元損傷，導(dǎo)致外周神經(jīng)病變，引起的功能異常。它可能由運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病，感覺神經(jīng)病變(如，帶狀皰疹)，有毒物質(zhì)或自主神經(jīng)功能異常?；加猩窠?jīng)病變的人可能以多種形式存在，取決于誘因、其影響神經(jīng)細(xì)胞的方式，和被影響最嚴(yán)重的神經(jīng)細(xì)胞的類型。iv.聚焦節(jié)流神經(jīng)病變(Focalentrapmentneuropathies)(如腕管綜合癥)I1.炎癥性疼痛[0042]本發(fā)明所述的化合物可以被用于治療由任何以下炎癥性癥狀引起的或與其相關(guān)的疼痛。[0043]A.關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)炎包括，例如，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；青少年風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE);痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎；硬皮?。还顷P(guān)節(jié)炎；牛皮癬關(guān)節(jié)炎；強(qiáng)直性脊柱炎；萊特氏綜合癥(Reiter’ssyndrome)(反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎)；成人斯提耳病(adultStill’sdisease);病毒感染引起的關(guān)節(jié)炎；細(xì)菌感染引起的關(guān)節(jié)炎，例如，如淋病性關(guān)節(jié)炎和非淋病性細(xì)菌關(guān)節(jié)炎(膿毒性關(guān)節(jié)炎)；三期萊姆病(TertiaryLymedisease);結(jié)核性關(guān)節(jié)炎；和真菌感染引起的關(guān)節(jié)炎,例如，如芽生菌病。[0044]B.自免疫疾病自免疫疾病包括，例如格林-巴利綜合癥、橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto’sthyroiditis)、惡性貧血、愛迪生氏病(Addison’sdisease)、〗型糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、皮肌炎、干燥綜合癥(Sjogren’ssyndrome)、紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、重癥肌無力、萊特氏綜合癥和格雷氏病(Grave’sdisease)。[0045]C.結(jié)締組織疾病結(jié)締組織疾病包括，例如脊柱關(guān)節(jié)炎(spondyloarthritis)、皮肌炎和肌纖維痛(fibromyalgia)ο[0046]D.受傷由受傷引起的炎癥可能引起慢性炎癥性疼痛，所述受傷包括，例如組織或關(guān)節(jié)的擠壓、刺穿、拉伸。[0047]E.感染由感染引起的炎癥可能引起慢性炎癥性疼痛，所述感染包括，例如肺結(jié)核或間質(zhì)性角膜炎。[0048]F.神經(jīng)炎神經(jīng)炎是影響神經(jīng)或一組神經(jīng)的炎癥性過程。癥狀取決于涉及的神經(jīng)，但可能包括疼痛、感覺異常、局部麻痹或感覺減退(麻木)。實(shí)例包括:a.臂神經(jīng)炎b.眼球后神經(jīng)病變，一種炎癥性過程，其影響恰好位于眼球后的視神經(jīng)。c.視神經(jīng)病變，一種影響視神經(jīng)的炎癥性過程，在受影響的眼中引起突然下降的視力。視神經(jīng)炎的誘因未知。視神經(jīng)(連接眼睛和腦的神經(jīng))的突然發(fā)炎導(dǎo)致髓鞘的腫脹和解體。炎癥偶爾可能是病毒感染的結(jié)果，或其可能由自免疫疾病，如多發(fā)性硬化引起。風(fēng)險(xiǎn)因素與可能的誘因相關(guān)。d.前庭神經(jīng)炎，病毒感染引起的影響前庭神經(jīng)的炎癥性過程。[0049]G.關(guān)節(jié)炎癥關(guān)節(jié)的炎癥，如由粘液囊炎或肌腱炎引起的，例如，可能引起慢性炎癥性疼痛。II1.頭痛[0050]本發(fā)明所述的化合物可以被用于治療由任何以下頭痛癥狀引起的或與其相關(guān)的疼痛。頭痛(醫(yī)學(xué)上也被稱為頭痛(cephalgia))是頭部輕微到嚴(yán)重疼痛的一種癥狀；有時(shí)頸部或上背部疼痛可能也被解釋為頭痛。它可能表明潛在的局部或全身疾病，或可能是其本身的疾病。[0051]A.肌肉/肌原性頭痛肌肉/肌原性頭痛表現(xiàn)為包括面部和頸部肌肉的收緊(tightening)或緊張(tensing);它們可能向前額輻射。緊張性頭痛是最常見形式的肌原性頭痛。[0052]緊張性頭痛是涉及頭部、頭皮或頸部疼痛或不適的癥狀，通常與這些區(qū)域的肌肉緊張相關(guān)。緊張性頭痛起因于頸部和頭皮肌肉的收縮。這一肌肉收縮的一個(gè)原因是對(duì)壓力、沮喪或緊張的反應(yīng)。導(dǎo)致頭部長時(shí)間保持在一個(gè)位置不運(yùn)動(dòng)的任何活動(dòng)可以引起頭痛。這樣的活動(dòng)包括打字或使用計(jì)算機(jī)，用手進(jìn)行的精細(xì)工作和顯微鏡的使用。在寒冷的屋子中睡覺或以頸部處在不正常的位置下進(jìn)行睡覺，也可能引發(fā)這一類型的頭痛。緊張型頭痛包括，但不限于陣發(fā)性緊張性頭痛和慢性緊張性頭痛。[0053]B.血管性頭痛最常見類型的血管性頭痛是偏頭痛。其它類型的血管性頭痛包括集束性頭痛，其引起緊張型頭痛的反復(fù)陣發(fā)；和高血壓導(dǎo)致的頭痛。1.偏頭痛偏頭痛是異源疾病，其通常包括反復(fù)頭痛。偏頭痛與其它頭痛不同，因?yàn)樗鼈儼橛衅渌Y狀發(fā)生，例如，如惡心、嘔吐或?qū)饷舾小Ｔ诖蠖鄶?shù)人中，抽動(dòng)的疼痛僅在頭部一側(cè)感受得到。臨床癥狀，例如先兆癥狀的類型、預(yù)征候的存在、或相關(guān)癥狀，如眩暈，可能在具有不同潛在病理生理和遺傳機(jī)理的患者亞組中觀察到。偏頭痛包括，但不限于沒有先兆的偏頭痛(普通偏頭痛)、具有先兆的偏頭痛(傳統(tǒng)偏頭痛)、月經(jīng)偏頭痛、等價(jià)偏頭痛(migraineequivalent)(無頭痛性的偏頭痛(acephalicheadache))、復(fù)雜型偏頭痛(complicatedmigraine)、腹型偏頭痛(abdominalmigraine)和混合型緊張偏頭痛(mixedtensionmigraine)。2.集束型頭痛集束型頭痛影響一側(cè)頭部(單側(cè)的)并且可能與眼睛流淚和鼻塞相關(guān)聯(lián)。它們集群發(fā)生，每天在相同時(shí)間反復(fù)發(fā)生，持續(xù)數(shù)周后緩和。[0054]D.高血壓頭痛[0055]E.牽引性(Traction)和炎癥性頭痛牽引性和炎癥性頭痛通常是從中風(fēng)到鼻竇炎的其它病癥的癥狀。[0056]F.激素型頭痛[0057]G.反彈性頭痛反彈性頭痛，也被稱為藥物過度使用頭痛(medicationoveruseheadaches),在過度頻繁服用藥物以緩解頭痛時(shí)發(fā)生。反彈性頭痛每天經(jīng)常發(fā)生，并可會(huì)非常疼痛。[0058]H.慢性鼻竇炎頭痛鼻竇炎是鼻旁竇細(xì)菌、真菌、病毒、過敏或自免疫的炎癥。慢性鼻竇炎是普通感冒最常見的并發(fā)癥之一。癥狀包括:鼻塞；面部疼痛；頭痛；發(fā)燒；全身不適；濃綠或黃鼻涕；俯身時(shí)面部“腫脹(fullness)”感惡化。在少數(shù)情況下，慢性上頜鼻竇炎也可以由牙齒感染細(xì)菌的蔓延引起。慢性增生性嗜酸性鼻竇炎(Chronichyperplasticeosinophilicsinusitis)是非感染形式的慢性鼻竇炎。[0059]1.器質(zhì)性頭痛[0060]J.猝發(fā)性頭痛猝發(fā)性頭痛是與癲癇活動(dòng)關(guān)聯(lián)的頭痛。IV.身體疼痛[0061]本發(fā)明所述的化合物可以被用于治療由任何以下身體疼痛狀況引起的或與其相關(guān)的疼痛。身體疼痛開始于韌帶、肌腱、骨骼、血管和甚至神經(jīng)本身。其用身體疼痛感受器檢測(cè)。在這些區(qū)域中的疼痛受體的缺乏產(chǎn)生比皮膚疼痛時(shí)間更長的，遲鈍，局部化較差的疼痛；實(shí)例包括扭傷和骨折。額外的實(shí)例包括以下。[0062]A.過度肌肉緊張過度肌肉緊張可以通過，例如扭傷或拉傷引起。[0063]B.反復(fù)性動(dòng)作疾病反復(fù)性動(dòng)作病可以起因于手部、腕部、肘部、肩部、頸部、背部、臀部、膝蓋、足部、腿部或腳踝的過度使用。[0064]C.肌肉疾病引起身體疼痛的肌肉疾病包括，例如，多發(fā)性肌炎、皮肌炎、狼瘡、肌纖維痛、風(fēng)濕性多肌痛和橫紋肌溶解。[0065]D.肌肉痛肌肉痛是肌肉疼痛并且是多種疾病和紊亂的癥狀。肌肉痛最常見的誘因是肌肉或肌肉群的過度使用或過度拉伸。無外傷史的肌肉痛通常是由于病毒感染。較長時(shí)期的肌肉痛可能是代謝肌病、一些營養(yǎng)缺乏或慢性疲勞綜合癥的指示。[0066]E.感染感染可以引起身體疼痛。這些感染的實(shí)例包括，例如，肌肉中的膿腫，旋毛蟲病，流感，萊姆病(Lymedisease)，瘧疾，落基山斑疹熱，禽流感，普通感冒，社區(qū)獲得性肺炎，腦膜炎，猴痘，嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥，中毒性休克綜合癥，旋毛蟲病，傷寒癥和上呼吸道感染。[0067]F.藥物藥物可以引起身體疼痛。這樣的藥物包括，例如，可卡因，降低膽固醇的抑制素(statin)(如阿托伐他汀(atorvastatin)、辛找他汀(simvastatin)和洛弗斯特丁(1vastatin))和降低血壓的ACE抑制劑(如依那普利(enalapril)和卡托普利(captopril))。V.內(nèi)臟疼痛[0068]本發(fā)明所述的化合物可以被用于治療由任何以下內(nèi)臟疼痛狀況引起的或與其相關(guān)的疼痛。內(nèi)臟疼痛起始于身體的內(nèi)臟或器官。內(nèi)臟疼痛感受器被置于身體器官或內(nèi)腔中。在這些區(qū)域中疼痛感受器的進(jìn)一步缺乏產(chǎn)生了通常比身體疼痛更疼且時(shí)間更長的疼痛。內(nèi)臟疼痛極其難定位，并且內(nèi)臟組織的若干損傷顯示出“牽涉性(referred)”疼痛，其中感覺被定位于與受傷位置完全無關(guān)的區(qū)域。內(nèi)臟疼痛的實(shí)例包括以下。[0069]A.功能性內(nèi)臟疼痛功能性內(nèi)臟疼痛包括，例如，腸道易激綜合癥(irritablebowelsyndrome)和慢性功能性腹痛(CFAP)，功能性便秘和功能性消化不良，非心源性胸痛(NCCP)和慢性腹痛。[0070]B.慢性胃腸炎慢性胃腸炎癥包括，例如，胃炎，腸炎，像例如，克羅恩氏病(Crohn’sdisease)、潰瘍性結(jié)腸炎、顯微鏡結(jié)腸炎、憩室炎(diverticulitis)和腸胃炎；間質(zhì)性膀胱炎；腸缺血；膽囊炎；闌尾炎；食道胃酸逆流(gastroesophagealreflux);潰瘍，腎結(jié)石,尿路感染,胰腺炎和疝氣。[0071]C.自免疫疼痛自免疫疼痛包括，例如，結(jié)節(jié)病和脈管炎。[0072]D.器質(zhì)性內(nèi)臟疼痛器質(zhì)性內(nèi)臟疼痛包括，例如，起因于腸道外傷、炎癥或病變性損傷，或由腫瘤侵入感覺神經(jīng)分布產(chǎn)生。[0073]E.治療誘導(dǎo)的內(nèi)臟疼痛治療誘導(dǎo)的內(nèi)臟疼痛包括，例如，接受化學(xué)療法的疼痛，或接受放射性療法的疼痛。V1.牽涉性疼痛[0074]本發(fā)明所述的化合物可以被用于治療由任何以下牽涉性疼痛狀況引起的或與其相關(guān)的疼痛。[0075]牽涉性疼痛來自定位于與疼痛刺激部位不同區(qū)域的疼痛。通常，當(dāng)神經(jīng)在位于或接近其起點(diǎn)被壓迫或損傷時(shí)，牽涉性疼痛發(fā)生。在這種情況下，疼痛的感覺一般在該神經(jīng)達(dá)到的區(qū)域被感覺到，盡管損傷起始于另外的地方。常見的實(shí)例發(fā)生在椎間盤突出，其中從脊柱伸出的神經(jīng)根部被相鄰的盤物質(zhì)壓迫。盡管疼痛可能來源于受損的椎間盤本身，疼痛也將在被壓迫神經(jīng)達(dá)到的區(qū)域(例如，大腿、膝蓋或腳)被感覺到。緩解神經(jīng)根部的壓力可能緩解牽涉性疼痛，只要永久性神經(jīng)損傷還沒有發(fā)生。心肌缺血(部分心肌組織血流的缺少)可能是被最熟知的牽涉性疼痛的實(shí)例；感覺可以發(fā)生在胸腔上部，受限的感覺(restrictedfeeling)，或左肩、臂或甚至手的疼痛。[0076]本發(fā)明所述的非細(xì)胞毒性蛋白酶組分是非細(xì)胞毒性的蛋白酶或其片段，所述蛋白酶或蛋白酶片段能夠剪切以下三種底物蛋白的一種中存在的不同但特異的肽鍵，所述底物蛋白為疼痛感應(yīng)傳入器(nociceptivesensoryafferent)中胞吐融合器(exocyticfusionapparatus)的小突觸小泡蛋白(synaptobrevin)、突觸融合蛋白(syntaxin)或SNAP-25。這些底物是神經(jīng)分泌機(jī)制的重要組分。本發(fā)明所述的非細(xì)胞毒性蛋白酶組分優(yōu)選地為奈瑟菌屬IgA蛋白酶或其片段，或梭菌屬神經(jīng)毒素L-鏈或其片段。特別優(yōu)選的非細(xì)胞毒性蛋白酶組分為肉毒菌神經(jīng)毒素(BoNT)L-鏈或其片段。[0077]本發(fā)明所述的轉(zhuǎn)運(yùn)組分使非細(xì)胞毒性蛋白酶(或其片段)能夠轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)靶細(xì)胞，以便蛋白酶活性的功能表達(dá)發(fā)生在靶細(xì)胞的細(xì)胞溶膠中。轉(zhuǎn)運(yùn)組分優(yōu)選地能夠在低PH值的條件下，在脂膜上形成離子可滲透的孔。優(yōu)選地，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)僅使用蛋白分子的那些部分能夠在內(nèi)涵體膜中形成孔。轉(zhuǎn)運(yùn)部分可能從微生物蛋白來源獲得，特別地從細(xì)菌或病毒蛋白來源獲得。因此，在一種實(shí)施方式中，轉(zhuǎn)運(yùn)組分是諸如細(xì)菌毒素或病毒蛋白的酶的轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域。本發(fā)明所述的轉(zhuǎn)運(yùn)組分優(yōu)選地為梭菌屬神經(jīng)毒素H-鏈或其片段。最優(yōu)選地，它是區(qū)域Hn(或其功能組分)，其中Hn表示梭菌屬神經(jīng)毒素H-鏈的部分或片段，其約等價(jià)于H-鏈氨基端的一半，或?qū)?yīng)于完整H-鏈中該片段的區(qū)域。[0078]本發(fā)明所述的TM組分負(fù)責(zé)將本發(fā)明所述的融合蛋白結(jié)合到靶細(xì)胞的結(jié)合位點(diǎn)(BindingSite)。因此，TM組分簡(jiǎn)單地是配體,通過它本發(fā)明所述的融合蛋白結(jié)合到選定的靶細(xì)胞。[0079]在本發(fā)明的文字中，靶細(xì)胞是疼痛感覺傳入器，優(yōu)選地是初級(jí)的疼痛傳入器(例如A-纖維，如Aδ-纖維或C-纖維)。因此，本發(fā)明所述的融合蛋白能夠抑制神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)節(jié)物質(zhì)[如，谷氨酰胺、P物質(zhì)、降血鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin-generelatedP印tide(CGRP))和/或神經(jīng)肽Y]從疼痛感受傳入器神經(jīng)元的分散群落中的釋放。在使用中，融合蛋白降低或防止感覺傳入器信號(hào)(如神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)控物質(zhì))從外周向中樞疼痛纖維的傳導(dǎo)；并因此具有作為治療疼痛，特別是慢性疼痛的治療分子的應(yīng)用。[0080]確定TM結(jié)合到疼痛感受傳入器是常規(guī)。例如，簡(jiǎn)單的放射性位移實(shí)驗(yàn)可能被采用，其中代表疼痛感覺傳入器的組織或細(xì)胞(如DRGs)在過量未標(biāo)記配體存在的情況下被暴露給已經(jīng)標(biāo)記(如氚化)的配體。在這樣的實(shí)驗(yàn)中，非特異和特異結(jié)合的相對(duì)比例可以被估計(jì)，由此允許確認(rèn)配體結(jié)合到疼痛感覺傳入器靶細(xì)胞。任選地，該測(cè)試可能包括一種或多種結(jié)合拮抗劑，并且該測(cè)試可能進(jìn)一步包括觀察配體結(jié)合的損失。這一類型實(shí)驗(yàn)的實(shí)例可以在Hulme,E.C.(1990),Receptor-bindingstudies,abriefoutline,pp.303-311,InReceptorbiochemistry,APracticalApproach,Ed.E.C.Hulme,OxfordUniversityPress中找到。[0081]當(dāng)與相應(yīng)的“游離(free)”TM比較時(shí)，本發(fā)明所述的融合蛋白通常顯示出對(duì)疼痛感覺傳入器靶細(xì)胞降低的結(jié)合親和度(在達(dá)100倍的區(qū)間)。然而，盡管有這一觀察結(jié)果，本發(fā)明所述的融合蛋白令人吃驚地顯示出良好的效力。這可歸因于兩個(gè)主要的特征。第一，所述非細(xì)胞毒性蛋白酶組分是催化的一因此，若干這些分子的治療效果被迅速擴(kuò)大。第二，在疼痛感受傳入器上存在的受體僅需要發(fā)揮用于治療進(jìn)入的通路作用，而非必須需要被刺激到要求的水平，以便達(dá)到配體-受體介導(dǎo)的藥物反應(yīng)。因此，本發(fā)明所述的融合蛋白可能以比其它類型的止痛分子，如NSAIDS、嗎啡和加巴噴丁(Gabapentin)所使用低的多的劑量被給藥。后者分子典型地以高微克到毫克(甚至到數(shù)百毫克)的量被給藥，而本發(fā)明所述的融合蛋白可能以低得多的劑量給藥，典型地至少低10倍，而更典型地至少低100倍。[0082]TM優(yōu)選地包含最多50個(gè)氨基酸殘基,更優(yōu)選地最多40個(gè)氨基酸殘基,特別優(yōu)選地最多30個(gè)氣基酸殘基，和最優(yōu)選地最多20個(gè)氣基酸殘基。[0083]阿片樣物質(zhì)(Opioids)代表優(yōu)選的本發(fā)明所述的TM。在肽家族內(nèi)包括腦啡肽(met和leu)、內(nèi)源性嗎啡(endomorphin)l和2、β-內(nèi)啡肽和強(qiáng)啡肽。阿片樣物質(zhì)肽經(jīng)常被用于臨床，以修飾對(duì)疼痛感受器和疼痛反應(yīng)中涉及的其它細(xì)胞的活性。如三級(jí)世界衛(wèi)生組織止痛劑梯度(AnalgesicLadder),阿片樣物質(zhì)具有進(jìn)入慢性癌癥和非癌癥性疼痛藥物治療的所有三個(gè)階段的切入點(diǎn)，強(qiáng)調(diào)了它們對(duì)疼痛治療的重要性。提到阿片樣物質(zhì)，包括其片段、變異體和衍生物，它們保留了結(jié)合疼痛感受傳入器的能力。[0084]本發(fā)明所述的TM也可以是在疼痛感受傳入器上，更特別地在初級(jí)疼痛傳入器上存在的一個(gè)或多個(gè)受體發(fā)揮“激動(dòng)劑”作用的分子。傳統(tǒng)地，激動(dòng)劑已經(jīng)被認(rèn)為是能夠在細(xì)胞內(nèi)提高或降低活性的任何分子，即簡(jiǎn)單地引起細(xì)胞活性改變的任何分子。例如，傳統(tǒng)方式的激動(dòng)劑包括能夠與細(xì)胞上受體結(jié)合病起始反應(yīng)或活性的化學(xué)物質(zhì)，或通過激活受體引起活性反應(yīng)的藥物，無論該反應(yīng)是細(xì)胞活性的提高或降低。[0085]然而，對(duì)于本發(fā)明的目的，激動(dòng)劑更特異地被界定為能夠刺激靶細(xì)胞內(nèi)胞吐融合過程(exocyticfusion)的分子,該過程容易被能夠剪切所述祀細(xì)胞中胞吐融合元件的蛋白的蛋白酶(或其片段)抑制。[0086]因此，本發(fā)明特定激動(dòng)劑的定義排除了傳統(tǒng)上被認(rèn)為是激動(dòng)劑的多種分子。例如，在其通過結(jié)合到TrkA受體啟動(dòng)神經(jīng)元分化的能力方面，神經(jīng)生長因子(NGF)是激動(dòng)劑。然而，當(dāng)由上述條件評(píng)估時(shí)，NGF不是激動(dòng)劑，因?yàn)樗皇前氯诤象w的主要誘導(dǎo)劑。此外，NGF刺激的過程(即細(xì)胞分化)不易于被非細(xì)胞毒性毒素分子的蛋白酶活性抑制。[0087]結(jié)合疼痛感受傳入器上受體的TM的激動(dòng)劑的性質(zhì)可以用實(shí)施例10中所述的方法確認(rèn)。[0088]在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述TM的目標(biāo)是ORL1受體。該受體是G蛋白偶聯(lián)類受體的一個(gè)成員，并且具有7個(gè)跨膜域結(jié)構(gòu)。ORL1受體的性質(zhì)在Mogil&Pasternak(2001),PharmacologicalReviews,Vol.53,N0.3，pages381_415中被詳細(xì)討論。[0089]在一種實(shí)施方式中，TM是結(jié)合(優(yōu)選地特異結(jié)合)ORL1受體的分子。更優(yōu)選地，TM是ORL1受體的“激動(dòng)劑”。術(shù)語“激動(dòng)劑”在文中如上文定義。[0090]結(jié)合ORL1受體的TM激動(dòng)劑的性質(zhì)可以用實(shí)施例10中所述的方法確認(rèn)。這些方法基于前述實(shí)驗(yàn)(參見，Inoueetal.1998[Proc.Natl.Acad.Sc1.，95，10949-10953])，其證實(shí)了受體的天然激動(dòng)劑，傷害感受肽(或者孤啡肽)(nociceptin))，引發(fā)了P物質(zhì)從疼痛感受初級(jí)傳入器神經(jīng)元釋放的誘導(dǎo)。這被以下事實(shí)支持:>傷害感受肽誘導(dǎo)的反應(yīng)通過特異受體(P物質(zhì)受體)拮抗劑消除；和>用辣椒素(其耗盡小直徑初級(jí)傳入器神經(jīng)元中的P物質(zhì))預(yù)處理細(xì)胞減弱了傷害感受肽誘導(dǎo)的反應(yīng)。[0091]相似地，Inoue等人證實(shí)了A類肉毒菌神經(jīng)毒素的足底內(nèi)注射消除了傷害感受肽誘導(dǎo)的反應(yīng)。由于已知BoNT抑制P物質(zhì)從初級(jí)傳入器神經(jīng)元的釋放(Welchetal.，2000,Toxicon,38，245-258)，這證實(shí)了傷害感受肽-ORL1相互作用與P物質(zhì)的后續(xù)釋放之間的關(guān)聯(lián)。[0092]因此，如果TM引起P物質(zhì)從疼痛感覺傳入器神經(jīng)元釋放的誘導(dǎo)，TM可以被稱為在ORL1受體具有激動(dòng)劑活性(參見實(shí)施例10)。[0093]在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述TM是傷害感受肽一ORL1受體的天然配體。傷害感受肽靶向ORL1受體，具有高親和度。其它優(yōu)選TMs的實(shí)例包括:【權(quán)利要求】1.單鏈的多肽融合蛋白，其包含:a).非細(xì)胞毒性蛋白酶或其片段，所述蛋白酶或蛋白酶片段能夠剪切疼痛感應(yīng)傳入器的胞吐融合器的蛋白；b).能夠結(jié)合所述疼痛感應(yīng)傳入器上之結(jié)合位點(diǎn)的靶向部分，所述結(jié)合位點(diǎn)能夠進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)吞作用，以被并入疼痛感應(yīng)傳入器中的內(nèi)涵體內(nèi)；c).蛋白酶剪切位點(diǎn)，在該位點(diǎn)所述融合蛋白可被蛋白酶剪切，其中所述蛋白酶剪切位點(diǎn)位于所述非細(xì)胞毒性蛋白酶或其片段與所述靶向部分之間；d).轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域，其能夠?qū)⑺龅鞍酌富虻鞍酌钙螐膬?nèi)涵體中跨內(nèi)涵體膜轉(zhuǎn)運(yùn)，并進(jìn)入所述疼痛感應(yīng)傳入器的細(xì)胞溶膠中；其中所述靶向部分位于所述蛋白酶剪切位點(diǎn)和所述轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域之間，并且其中所述靶向部分和所述蛋白酶剪切位點(diǎn)由最多10個(gè)氨基酸殘基分隔，并且其中所述靶向部分和所述蛋白酶剪切位點(diǎn)不由O個(gè)氨基酸殘基分隔。2.單鏈的多肽融合蛋白，其包含:a).非細(xì)胞毒性蛋白酶或其片段，所述蛋白酶或蛋白酶片段能夠剪切疼痛感應(yīng)傳入器的胞吐融合器的蛋白；b).能夠結(jié)合所述疼痛感應(yīng)傳入器上之結(jié)合位點(diǎn)的靶向部分，所述結(jié)合位點(diǎn)能夠進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)吞作用，以被并入所述疼痛感應(yīng)傳入器中的內(nèi)涵體內(nèi)；c).蛋白酶剪切位點(diǎn)，在該位點(diǎn)所述融合蛋白可被蛋白酶剪切，其中所述蛋白酶剪切位點(diǎn)位于所述非細(xì)胞毒性蛋白酶或其片段與所述靶向部分之間；d).轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域，其能夠?qū)⑺龅鞍酌富虻鞍酌钙螐膬?nèi)涵體中跨內(nèi)涵體膜轉(zhuǎn)運(yùn)，并進(jìn)入所述疼痛感應(yīng)傳入器的細(xì)胞溶膠中；其中所述靶向部分位于所述蛋白酶剪切位點(diǎn)和所述轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域之間，并且其中所述蛋白酶(或其片段)和所述轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域彼此由最多100個(gè)氨基酸殘基隔開。3.單鏈的多肽融合蛋白，其包含:a).非細(xì)胞毒性蛋白酶或其片段，所述蛋白酶或蛋白酶片段能夠剪切疼痛感應(yīng)傳入器的胞吐融合器的蛋白；b).能夠結(jié)合所述疼痛感應(yīng)傳入器上之結(jié)合位點(diǎn)的靶向部分，所述結(jié)合位點(diǎn)能夠進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)吞作用，以被并入所述疼痛感應(yīng)傳入器中的內(nèi)涵體內(nèi)；c).蛋白酶剪切位點(diǎn)，在該位點(diǎn)所述融合蛋白可被蛋白酶剪切，其中所述蛋白酶剪切位點(diǎn)位于所述非細(xì)胞毒性蛋白酶或其片段與所述靶向部分之間；d).轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域，其能夠?qū)⑺龅鞍酌富虻鞍酌钙螐膬?nèi)涵體中跨內(nèi)涵體膜轉(zhuǎn)運(yùn)，并進(jìn)入所述疼痛感應(yīng)傳入器的細(xì)胞溶膠中；其中所述靶向部分位于所述蛋白酶剪切位點(diǎn)和所述轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域之間，并且其中(i)所述非細(xì)胞毒性蛋白酶組分與所述融合蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)組分形成二硫鍵，其中形成二硫鍵的所述蛋白酶組分的氨基酸殘基位于所述蛋白酶組分的最后20個(gè)C-末端氨基酸殘基之內(nèi)，并且形成二硫鍵的第二部分的所述轉(zhuǎn)運(yùn)組分內(nèi)的氨基酸殘基位于所述轉(zhuǎn)運(yùn)組分的前20個(gè)N-末端氨基酸殘基之內(nèi)；或(ii)所述非細(xì)胞毒性蛋白酶組分與所述融合蛋白的TM組分形成二硫鍵，其中形成二硫鍵的所述蛋白酶組分的氨基酸殘基位于所述蛋白酶組分的最后20個(gè)C-末端氨基酸殘基之內(nèi)，并且形成二硫鍵的第二部分的在所述TM組分中的氨基酸殘基位于所述TM組分的最后20個(gè)C-末端氨基酸殘基之內(nèi)。4.根據(jù)權(quán)利要求1的融合蛋白，其中所述靶向部分和所述蛋白酶剪切位點(diǎn)由最多5個(gè)氣基酸殘基分隔。5.根據(jù)權(quán)利要求2或3的融合蛋白，其中所述靶向部分和所述蛋白酶剪切位點(diǎn)由最多10個(gè)氨基酸殘基分隔，優(yōu)選地由最多5個(gè)氨基酸殘基分隔，更優(yōu)選地由O個(gè)氨基酸殘基分隔。6.根據(jù)任一前述權(quán)利要求的融合蛋白，其中所述非細(xì)胞毒性蛋白酶是梭菌神經(jīng)毒素L-鏈蛋白酶或IgA蛋白酶。7.根據(jù)任一前述權(quán)利要求的融合蛋白，其中所述靶向部分是選自如下的阿片樣物質(zhì)靶向部分:傷害感受肽、β-內(nèi)啡肽、內(nèi)啡素-1、內(nèi)啡素_2、強(qiáng)啡肽、met-腦啡肽、Ieu-腦啡肽、甘丙肽、和PAR-2肽。8.根據(jù)任一前述權(quán)利要求的融合蛋白，其中所述轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域是梭菌神經(jīng)毒素的HN區(qū)域、或選自如下的轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域:白喉毒素、假單胞菌外毒素A的結(jié)構(gòu)域I1、炭疽病毒素、源自流感病毒血凝素的融合和/或兩親肽、塞姆利基森林病毒融合蛋白、水泡性口炎病毒糖蛋白G、SER病毒F蛋白、泡沫病毒包膜糖蛋白。9.根據(jù)權(quán)利要求7的融合蛋白，其中所述阿片樣物質(zhì)靶向部分:(i)是存在于疼痛感應(yīng)傳入器上的受體的激動(dòng)劑，優(yōu)選地其中所述阿片樣物質(zhì)靶向部分是初級(jí)疼痛感應(yīng)傳入器上存在的受體的激動(dòng)劑；(ii)結(jié)合ORLl受體，優(yōu)選地其中所述阿片樣物質(zhì)靶向部分特異地結(jié)合ORLl受體，更優(yōu)選地，其中所述阿片樣物質(zhì)靶向部分是ORLl受體的激動(dòng)劑。10.根據(jù)權(quán)利要求7-9任一項(xiàng)的融合蛋白，其中所述阿片樣物質(zhì)靶向部分與SEQIDN0.38或其片段具有至少70%的同源性，或其中所述靶向部分與SEQIDN0.38或其片段具有至少80%的同源性；或其中所述靶向部分與SEQIDN0.38或其片段具有至少90%的同源性；或其中所述靶向部分與SEQIDN0.38或其片段具有至少95%的同源性；或其中所述靶向部分是SEQIDN0.38或其片段，或其中所述靶向部分是SEQIDNos:40、42、44、46、48或50之一，或其中其中所述靶向部分是傷害感受肽。11.根據(jù)任一前述權(quán)利要求的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含純化標(biāo)記；優(yōu)選地，其中所述融合蛋白包含純化標(biāo)記，其存在于所述融合蛋白的N-末端和/或C-末端；更優(yōu)選地，其中所述純化標(biāo)記通過肽間隔分子被連接到所述融合蛋白。12.根據(jù)任一前述權(quán)利要求的融合蛋白，其中所述轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域由肽間隔分子與所述靶向部分分隔。13.核酸序列，其編碼根據(jù)任一前述權(quán)利要求的多肽融合蛋白。14.DNA載體，其包括啟動(dòng)子、根據(jù)權(quán)利要求13的核酸序列，其中所述DNA序列位于所述啟動(dòng)子的下游，并且終止子位于所述DNA構(gòu)建物的下游。15.根據(jù)權(quán)利要求13或者權(quán)利要求14的DNA序列的互補(bǔ)DNA鏈。16.用于制備根據(jù)權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)所述的單鏈多肽融合蛋白的方法，包括:在宿主細(xì)胞中，表達(dá)根據(jù)權(quán)利要求13的核酸序列、或者權(quán)利要求14的DNA載體。17.制備非細(xì)胞毒性的劑的方法，包括:a.使根據(jù)權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)所述的單鏈多肽融合蛋白與能夠剪切所述蛋白酶剪切位點(diǎn)的蛋白酶接觸；b.剪切所述蛋白酶剪切位點(diǎn)；并由此形成雙鏈融合蛋白。18.非細(xì)胞毒性的多肽，可通過權(quán)利要求17述的方法獲得，其中所述多肽是雙鏈多肽，并且其中:(a).所述第一條鏈包含非細(xì)胞毒性的蛋白酶或其片段，所述蛋白酶或蛋白酶片段能夠剪切疼痛感應(yīng)傳入器的胞吐融合器的蛋白；(b).所述第二條鏈包含靶向部分和轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域，其能夠?qū)⒌鞍酌富虻鞍酌钙螐膬?nèi)涵體中跨內(nèi)涵體膜轉(zhuǎn)運(yùn)并進(jìn)入所述疼痛感應(yīng)傳入器的所述細(xì)胞溶膠中；并且所述第一條鏈和第二條鏈被二硫鍵連接在一起。19.根據(jù)權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)的融合蛋白或者根據(jù)權(quán)利要求18的多肽的用于制備藥物中的用途，所述藥物用于治療、預(yù)防或緩解疼痛，優(yōu)選地，其中所述疼痛是慢性疼痛?！疚臋n編號(hào)】A61P25/04GK103602650SQ201310439850【公開日】2014年2月26日申請(qǐng)日期:2007年6月1日優(yōu)先權(quán)日:2006年6月1日【發(fā)明者】K·福斯特,J·查多克,P·馬科斯,P·斯坦庫姆,K·R·奧基,J·弗朗西斯,L·斯圖爾德申請(qǐng)人:賽恩泰新公司,愛力根公司