一種痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫動物模型的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫動物模型的制備方法，包括如下步驟：（1）將苯甲酸雌二醇溶液施用于發(fā)情期大鼠，施用劑量為1.5ml/100g，每5天施用一次，連續(xù)4次，所述苯甲酸雌二醇溶液的濃度為3.75mg/ml；（2）從第一次施用苯甲酸雌二醇溶液當(dāng)天開始，灌胃1ml/100g的高脂乳，每天灌胃一次，連續(xù)20次，所述高脂乳每100ml包含如下重量配比的原料：膽固醇20g、膽酸鈉3g、動物油脂35g、丙二醇20ml、吐溫-8010ml，其余為水。本發(fā)明采用皮下注射雌二醇與灌胃高脂乳聯(lián)合造模的方式，成功地誘導(dǎo)痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫動物模型，應(yīng)用前景良好。
【專利說明】一種痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫動物模型的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫動物模型的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]卵巢囊腫(ovarian cysts, 0C)指卵巢內(nèi)部或表面生成腫塊,腫塊內(nèi)的物質(zhì)通常是液體，有時也可能是固體，或是液體與固體的混合。卵巢囊腫是最常見的婦科疾病，可發(fā)生于任何女性年齡，尤其多發(fā)于育齡期婦女。卵巢囊腫的發(fā)病機制有多個方面，主要是下丘腦-垂體-卵巢功能紊亂導(dǎo)致病理性地促性腺激素分泌，影響卵泡的產(chǎn)生、發(fā)育、釋放等環(huán)節(jié)，最終形成卵巢囊腫。卵巢囊腫在中醫(yī)屬于“積聚”、“癥瘕”和“腸覃”的范疇，其形成多因經(jīng)期或產(chǎn)后六淫外邪入侵，七情損傷，房事不慎及飲食勞倦，以致正氣虛弱，氣血津液失調(diào)，久則臟腑失和，氣滯血瘀，血脈受阻，痰濕凝結(jié)，久積成為卵巢囊腫。
[0003]痰淤互結(jié)型卵巢囊腫主要表現(xiàn)是卵巢病變，血脂升高，血流變各指標(biāo)升高，并伴有雌二醇含量的增多，中醫(yī)認(rèn)為痰淤互結(jié)型卵巢囊腫主由外感濕熱之邪以及情志內(nèi)傷，致氣滯、痰飲、淤血停滯郁久化熱而致。當(dāng)今社會，生活節(jié)奏快，生活習(xí)慣不規(guī)律，心理壓力大，造成卵巢囊腫發(fā)病率高，因此，開發(fā)新型痰淤互結(jié)型卵巢囊腫藥物具有重要的臨床意義和社會價值。
[0004]目前，未見痰淤互結(jié)型卵巢囊腫的動物模型，難以有效進行新藥篩選。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫動物模型的制備方法。
[0006]本發(fā)明痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫動 物模型的制備方法，包括如下步驟:
[0007](I)將苯甲酸雌二醇溶液施用于發(fā)情期大鼠，施用劑量為1.5ml/100g，每5天施用一次，連續(xù)4次,所述苯甲酸雌二醇溶液的濃度為3.75mg/ml ；
[0008](2)從第一次施用苯甲酸雌二醇溶液當(dāng)天起，灌胃lml/100g的高脂乳，每天灌胃一次,連續(xù)20次，所述高脂乳每IOOml包含如下重量配比的原料:膽固醇20g、膽酸鈉3g、動物油脂35g、丙二醇20ml、吐溫-8010ml，其余為水。
[0009]步驟(I)中，所述的施用方式是皮下注射。
[0010]步驟(2)中，所述動物油脂是豬油。
[0011]本發(fā)明還提供了一種建立痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫動物模型的組合物，每IOOml包含如下重量配比的原料:膽固醇20g、膽酸鈉3g、動物油脂35g、丙二醇20ml、吐溫-8010ml，其余為水。
[0012]所述動物油脂是豬油。
[0013]本發(fā)明還提供了前述動物模型在篩選治療痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫的藥物中的用途。
[0014]本發(fā)明還提供了篩選治療痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫藥物的方法，它包括如下步驟:
[0015]a、按照前述方法，建立痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫動物模型；[0016]b、將候選藥物施用于動物模型；
[0017]C、用動物模型評價潛在的治療痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫的藥物。
[0018]本發(fā)明造模方法可以誘導(dǎo)大鼠卵巢病變，血脂升高、血流變各指標(biāo)升高，并伴有雌二醇含量的增多，出現(xiàn)痰淤互結(jié)型卵巢囊腫的臨床表現(xiàn)，成功地建立了痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫動物模型，并且，給藥方法簡單，可重復(fù)性強。
[0019]顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0020]以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0021]圖1空白組卵巢HE染色X4 ;
[0022]圖2模型組卵巢HE染色X 4，A—卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞缺失；
[0023]圖3模型組卵巢HE染色X 4，A—卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞缺失，顆粒細(xì)胞層減少；B—完全黃體化的卵泡；C—有卵母細(xì)胞的卵泡。
【具體實施方式】
[0024]實施例1本發(fā)明痰瘀互結(jié)型卵巢囊 腫動物模型的建立方法
[0025]I材料與方法
[0026]1.1實驗動物
[0027]健康SD清潔雌性未孕大鼠，體重150±10g。由四川大學(xué)實驗動物中心提供(動物合格證號=SCXK川2008-24)，適應(yīng)性喂養(yǎng)I周后備用。
[0028]1.2主要試劑
[0029]苯甲酸雌二醇注射液，苯甲酸雌二醇的濃度為5mg/ml (天津金耀氨基酸有限公司，國藥準(zhǔn)字H12020529);橄欖油(成都市科龍化工制劑廠)；膽固醇(上海伯奧生物科技有限公司)；藥用吐溫-80 (南京威爾化工有限公司)；快速改良巴氏染液(南京建成科技有限公司)；雌二醇EISA試劑盒(上海晶研生物科技有限公司)；總膽固醇(CHO)試劑盒、甘油三酯(TG)試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)試劑盒及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)試劑盒，均由北京北化康泰臨床試劑有限公司提供。
[0030]1.3主要儀器
[0031]切片機(Leica有限公司);ZPJ-1展片機(天津天利航空機有限公司)；101_2A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市泰斯特儀器有限公司)；Biotek酶標(biāo)儀(Gene Company有限公司)；D系列全自動生化儀(Sinnowa有限公司)；BX41正置突光顯微鏡(Olympus有限公司)。
[0032]1.4實驗方法
[0033]取膽固醇20g、膽酸鈉3g、動物油脂35g、丙二醇20ml、吐溫_8010ml，加蒸餾水至100ml，混勻，配制成為高脂乳，備用。
[0034]用橄欖油稀釋苯甲酸雌二醇注射液，苯甲酸雌二醇注射液與橄欖油的比例為3:1(v/v),得濃度為3.75mg/ml的苯甲酸雌二醇溶液,備用。[0035]將SD大鼠按照體重隨機分成空白對照組和模型組，每組10只。空白對照組不做處理。模型組:在大鼠的發(fā)情期，皮下注射苯甲酸雌二醇溶液，注射劑量為1.5ml/100g，在第5天，10天，15天時各加注I次；從第I次注射苯甲酸雌二醇溶液當(dāng)天開始，每天按大鼠體重灌胃高脂乳，灌胃劑量為lml/100g，總共造模20天。
[0036]造模給藥第20天，股靜脈取全血3ml檢測血流變學(xué)，另取3ml離心得血清用試劑盒采用D系列全自動生化儀測定CHO、TG、LDL-C, HDL-C ;取血清E2試劑盒采用Biotek酶標(biāo)儀測定E2含量；剖取雙側(cè)卵巢稱重并計算臟器系數(shù)，用排水法測定體積；取左側(cè)卵巢，勻漿，離心取上清，用E2試劑盒采用Biotek酶標(biāo)儀測定E2含量；留存右側(cè)卵巢，固定、脫水、石臘包埋、切片、HE染色觀察卵巢組織病理學(xué)變化。
[0037]1.5統(tǒng)計學(xué)方法
[0038]采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行分析，正態(tài)分布計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土S)表示。各組間采用單因素方差分析，檢驗標(biāo)準(zhǔn)以p〈0.05為有顯著性差異，P〈0.01及P〈0.001為有極顯著性差異。
[0039]2 結(jié)果
[0040]2.1卵巢組織HE染色結(jié)果
[0041]如圖1所示，空白組卵巢內(nèi)見各期發(fā)育階段的卵泡，未見明顯病變。
[0042]如圖2?3所示，模型組卵巢多出現(xiàn)典型的卵巢囊腫病變特征:較多早期發(fā)育的小卵泡和閉鎖卵泡，囊狀擴張卵泡明顯增加，各種發(fā)育階段卵泡減少，顆粒細(xì)胞層減少至2-3層，一些大的囊狀卵泡幾乎沒有顆粒細(xì)胞，卵泡膜增厚；卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞缺失，放射冠消失；間質(zhì)細(xì)胞明顯增生，很多外覆卵泡的卵泡內(nèi)膜黃素化，卵巢間質(zhì)有時可見黃素化間質(zhì)細(xì)胞。
[0043]2.2卵巢臟器系數(shù)
[0044]卵巢臟器系數(shù)和卵巢體積的檢測結(jié)果見下表1:
[0045]表I各組大鼠卵巢臟器系數(shù)及體積的比較(又土SD，n=10)
【權(quán)利要求】
1.一種痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫動物模型的制備方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)將苯甲酸雌二醇溶液施用于發(fā)情期大鼠，施用劑量為1.5ml/100g,每5天施用一次，連續(xù)4次，所述苯甲酸雌二醇溶液的濃度為3.75mg/ml ； (2)從第一次施用苯甲酸雌二醇溶液當(dāng)天開始，灌胃lml/100g的高脂乳，每天灌胃一次,連續(xù)20次，所述高脂乳每IOOml包含如下重量配比的原料:膽固醇20g、膽酸鈉3g、動物油脂35g、丙二醇20ml、吐溫-8010ml，其余為水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(I)中，所述的施用方式是皮下注射。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:步驟(2)中，所述動物油脂是豬油。
4.一種建立痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫動物模型的組合物，其特征在于:每IOOml包含如下重量配比的原料:膽固醇20g、膽酸鈉3g、動物油脂35g、丙二醇20ml、吐溫_8010ml，其余為水。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的飼料，其特征在于:所述動物油脂是豬油。
6.權(quán)利要求1?3任意一項所述方法制備的動物模型在篩選治療痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫的藥物中的用途。
7.一種篩選治療痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫的藥物的方法，其特征在于:它包括如下步驟: a、按照權(quán)利要求1?3任意一項所述方法，建立痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫動物模型； b、將候選藥物施用于動物模型； c、用動物模型評價潛在的治療痰瘀互結(jié)型卵巢囊腫的藥物。
【文檔編號】A61K31/575GK103432166SQ201310377265
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月26日
【發(fā)明者】張仲林, 凌保東, 鐘玲, 臧志和, 袁明勇, 辛志偉, 彭延娟, 顏曉燕, 盛艷梅 申請人:成都醫(yī)學(xué)院