Il-6結(jié)合分子的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了結(jié)合分子(例如抗體或其抗原結(jié)合片段)，其特異性結(jié)合于IL-6(例如人類，小鼠或非人靈長(zhǎng)類IL-6)并抑制其生物活性。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段結(jié)合于IL-6并抑制其對(duì)IL-6受體的結(jié)合。此類抗體或抗原結(jié)合片段對(duì)于治療IL-6相關(guān)的疾病或病癥(例如炎性疾病和癌癥)特別有用。
【專利說(shuō)明】IL-6結(jié)合分子
[0001]相關(guān)申請(qǐng)
[0002]本申請(qǐng)要求2012年5月23日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)61/650，883、2012年10月30日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)61/720，102和2012年11月14日提交的PCT/IB2012/056424的優(yōu)先權(quán)，均通過(guò)全文提述并入本文。
[0003]發(fā)明背景
[0004]白介素-6 (IL-6)是主要的促炎癥細(xì)胞因子。其導(dǎo)致免疫活性細(xì)胞和造血細(xì)胞的增殖和分化。人IL-6是由212個(gè)氨基酸組成的單一糖蛋白，其具有兩個(gè)N-連接的糖基化位點(diǎn)，并具有約26kDa的分子量。IL-6的結(jié)構(gòu)包含四個(gè)α-螺旋域，所述域具有四個(gè)半胱氨酸殘基的基序，這對(duì)于IL-6的三級(jí)結(jié)構(gòu)是必需的。IL-6信號(hào)傳導(dǎo)由IL-6對(duì)于可溶性或表面結(jié)合的IL-6受體α鏈(IL-6Ra)的結(jié)合介導(dǎo)，所述結(jié)合使得該復(fù)合物能夠與細(xì)胞表面跨膜gpl30亞基相互作用，所述亞基介導(dǎo)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)。
[0005]IL-6涉及炎性疾病的疾病發(fā)生，所述炎性疾病包括炎性自身免疫病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)，脊椎強(qiáng)直性關(guān)節(jié)病，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)，炎性腸病(IBD)，和Castleman病。IL-6亦涉及癌癥的疾病發(fā)生，所述癌包括前列腺癌，彌散性大細(xì)胞淋巴瘤，多發(fā)性骨髓瘤，和腎細(xì)胞癌。亦報(bào)道了 IL-6在促進(jìn)癌癥相關(guān)的食欲缺乏(anorexia)，口腔黏膜炎和惡病質(zhì)中的作用。
[0006]盡管本領(lǐng)域中已知來(lái)源于對(duì)非人動(dòng)物的免疫接種的IL-6結(jié)合分子，但這些分子通常需要大量的抗體工程(例如CDR移植和人源化)以減少其免疫原性。而且，所得的人源化變體通常受對(duì)IL-6靶的不理想的結(jié)合親和力困擾，并需要大量的抗體工程和親和力成熟以試圖恢復(fù)IL-6結(jié)合親和力。其最終結(jié)果是大多數(shù)IL-6抗體呈現(xiàn)對(duì)IL-6靶的不理想的結(jié)合親和力。
[0007]因此，考慮到IL-6在疾病發(fā)生中的重要性和已知的IL-6抗體的缺點(diǎn)，顯然在本領(lǐng)域中有對(duì)于改善的(例如幾乎未經(jīng)工程改造的)IL-6藥劑的需要，所述藥劑可抑制IL-6的生物活性，并因此治療與IL-6活性相關(guān)的疾病。
[0008]發(fā)明概述
[0009]本發(fā)明通過(guò)提供結(jié)合分子(例如抗體或其抗原結(jié)合片段)來(lái)改善現(xiàn)有技術(shù)，所述結(jié)合分子具有改善的結(jié)合概貌，即以高結(jié)合親和力(例如皮摩爾結(jié)合親和力)特異性結(jié)合于IL-6(例如人或非人靈長(zhǎng)類IL-6)并強(qiáng)力地抑制其生物活性(例如結(jié)合于IL-6受體)。在某些示例性實(shí)施方案中，本發(fā)明的IL-6結(jié)合分子來(lái)源于經(jīng)受用IL-6抗原的主動(dòng)免疫接種的駝?lì)愇锓N(例如美洲駝)的常規(guī)抗體全集。例如，本發(fā)明的駝?lì)悂?lái)源的IL-6結(jié)合分子可包含成對(duì)的VH/VL域或其它備選框架，其中VH或VL域的一個(gè)或多個(gè)超變環(huán)(hypervariable loop)(例如H1,H2,H3,L1,L2和/或L3)來(lái)源于所述騎類物種。而且,在某些實(shí)施方案中，至少所述超變環(huán)之一采取規(guī)范折疊(或規(guī)范折疊的組合)，其與人類抗體的折疊相同或?qū)嵸|(zhì)上相同。此類結(jié)合分子呈現(xiàn)高的人類同源性(序列和結(jié)構(gòu))并因此由于其低免疫原性而特別有用于治療IL-6相關(guān)的疾病或病癥(例如炎性疾病和癌癥)。令人驚訝的是，本發(fā)明的IL-6抗體呈現(xiàn)高結(jié)合親和力，可制造性(manufacturability)和熱穩(wěn)定性，而無(wú)需已知IL-6抗體通常所需的大量和耗時(shí)的抗體工程和親和力成熟。
[0010]因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供特異性結(jié)合于IL-6的結(jié)合分子，所述結(jié)合分子包含至少一個(gè)抗體⑶R，其中所述⑶R包含至少一個(gè)當(dāng)所述結(jié)合分子結(jié)合于IL-6時(shí)埋在IL-6的F229空穴或F279空穴中的氨基酸殘基。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VH域，所述VH域具有根據(jù)Kabat在98位的氨基酸，其當(dāng)所述抗體或片段結(jié)合于IL-6時(shí)，埋在IL-6的F229空穴中。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，在98位的氨基酸是色氨酸。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VL域，所述VL域具有根據(jù)Kabat在30位的氨基酸，其當(dāng)所述抗體或片段結(jié)合于IL-6時(shí)，埋在IL-6的F229空穴中。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，在30位的氨基酸是酪氨酸，在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VH域，所述VH域具有根據(jù)Kabat在99位的氨基酸，其當(dāng)所述抗體或片段結(jié)合于IL-6時(shí)，埋在IL-6的F279空穴中。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，在99位的氨基酸是纈氨酸。
[0011 ] 在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VH域和VL域，所述VH域包含超變環(huán)Hl，H2和H3，其中所述VH域多肽與VL域配對(duì)，所述VL域包含超變環(huán)LI，L2和L3，其中超變環(huán)H1-H3和L1-L3至少之一通過(guò)用IL-6抗原對(duì)羊駝屬(Lama)物種進(jìn)行免疫接種而從該羊駝屬物種的常規(guī)抗體獲得。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，超變環(huán)Hl，H2，LI，L2和L3的至少之一呈現(xiàn)預(yù)測(cè)的或?qū)嶋H的相應(yīng)規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)，其與人抗體中出現(xiàn)的Hl，H2，LI，L2或L3超變環(huán)的規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)相同或?qū)嵸|(zhì)上相同。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，超變環(huán)Hl和H2的至少之一各呈現(xiàn)預(yù)測(cè)的或?qū)嶋H的規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)，其與相應(yīng)的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)相同或?qū)嵸|(zhì)上相同。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，超變環(huán)LI，L2和L3的至少之一各呈現(xiàn)預(yù)測(cè)的或?qū)嶋H的規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)，其與相應(yīng)的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)相同或?qū)嵸|(zhì)上相同。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，超變環(huán)Hl和H2的至少之一形成預(yù)測(cè)的或?qū)嶋H的規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，其與已知出現(xiàn)于人類種系VH域的規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的相應(yīng)的組合相同或?qū)嵸|(zhì)上相同。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，超變環(huán)Hl和H2的至少之一形成規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，其對(duì)應(yīng)于選自下組的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合:1-1，1-2，1-3，1-4 ，1-6，2-1，3-1和3_5。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，超變環(huán)LI和L2的至少之一形成預(yù)測(cè)的或?qū)嶋H的規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，其與已知出現(xiàn)于人類種系VL域的規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的相應(yīng)的組合相同或?qū)嵸|(zhì)上相同。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，超變環(huán)LI和L2的至少之一形成規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，其對(duì)應(yīng)于選自下組的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合:11_7，13-7 (A, B, C)，14-7(A, B),12-11,14-11,12-12,2-1,3-1，4-1和 6-1。
[0012]在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VH域和VL域，其中所述結(jié)合分子的VH域和/或VL域與一個(gè)或多個(gè)對(duì)應(yīng)人類VH或VL域在框架區(qū)FR1，F(xiàn)R2，F(xiàn)R3和FR4內(nèi)具有90%或更高的序列同一性。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VH域和VL域，且為親本結(jié)合分子的種系化變體，其中所述結(jié)合分子的VH域和VL域之一或兩者與親本非人類抗體的對(duì)應(yīng)VH域和VL域相比，在框架區(qū)內(nèi)包含總共I至10個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述親本結(jié)合分子是常規(guī)的駝?lì)惪贵w。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子是抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0013]在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VH域，所述VH域包含SEQ IDno:500[X1PdvvtgfhydX2]中列出的hcdr3氨基酸序列，或其序列變體，其中:
[0014]X1是任何氨基酸，優(yōu)選D或Y ;
[0015]X2是任何氨基酸，優(yōu)選Y或N ;和[0016]其中所述序列變體在所述序列中包含一個(gè)，兩個(gè)或三個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，HCDR3氨基酸序列選自下組:SEQ ID N0:497_499。
[0017]在某些實(shí)施方案中，所述VH域進(jìn)一步包含SEQ ID NO: 507 [VIXJXADTYYSPSUQS]中列出的HCDR2氨基酸序列或其序列變體，其中:
[0018]Xl是任何氨基酸，優(yōu)選D，Y或N ;
[0019]X2是任何氨基酸，優(yōu)選D或E ;
[0020]X3是任何氨基酸，優(yōu)選A或G ;
[0021 ] X4是任何氨基酸，優(yōu)選E或K ;和
[0022]其中所述序列變體在所述序列中包含一個(gè)，兩個(gè)或三個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，HCDR2氨基酸序列選自下組:SEQ ID NO: 501-506。
[0023]在某些實(shí)施方案中，所述VH域進(jìn)一步包含在SEQ ID NO: 512 [X1X2YYX3WX4]中列出的HCDRl氨基酸序列，或其序列變體，其中:
[0024]Xl是任何氨基酸，優(yōu)選T，S或P ;
[0025]X2是任何氨基酸，優(yōu)選R或S ;
[0026]X3是任何氨基酸，優(yōu)選A或V ;
[0027]X4是任何氨基酸，優(yōu)`選S或T ;和
[0028]其中所述序列變體在所述序列中包含一個(gè)，兩個(gè)或三個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述HCDRl氨基酸序列選自下組:SEQ ID N0:508_511。
[0029]在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VH域，所述VH域包含SEQ ID NO: 497，501和508中分別列出的HCDR3，HCDR2和HCDRl氨基酸序列。
[0030]在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子進(jìn)一步包含VL域，其中所述VL域包含SEQ IDNO: 524 [ASYX1X2X3X4X5X6X7]中列出的IXDR3氨基酸序列，或其序列變體，其中:
[0031]Xl是任何氨基酸，優(yōu)選R或K ;
[0032]X2是任何氨基酸，優(yōu)選N，H，R，S，D，T或Y ;
[0033]X3是任何氨基酸，優(yōu)選F，Y，T，S或R ;
[0034]X4是任何氨基酸，優(yōu)選N或I ;
[0035]X5是任何氨基酸，優(yōu)選N或D ;
[0036]X6是任何氨基酸，優(yōu)選V，N，G或A ;
[0037]X7是任何氨基酸，優(yōu)選V或I ;和
[0038]其中所述序列變體包含所述序列的一個(gè)，兩個(gè)或三個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述LCDR3氨基酸序列選自下組:SEQ ID NO: 513-523.[0039]在某些實(shí)施方案中，所述VL域進(jìn)一步包含SEQ ID NO:535[X1VX2X3RX4S]中列出的LCDR2氨基酸序列，或其序列變體，其中:
[0040]Xl是任何氨基酸，優(yōu)選R，K，D，A或E ;
[0041]X2是任何氨基酸，優(yōu)選S，N或T ;
[0042]X3是任何氨基酸，優(yōu)選T，K或Y ;
[0043]X4是任何氨基酸，優(yōu)選A，T或V ;和
[0044]其中所述序列變體包含所述序列的一個(gè)，兩個(gè)或三個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述LCDR2氨基酸序列選自下組:SEQ ID N0:525_534。[0045]在某些實(shí)施方案中，所述VL域進(jìn)一步包含SEQ ID NO: 542 [AGX1X2X3DX4GX5X6X7YVs]中列出的LCDRl氨基酸序列，或其序列變體，
[0046]其中
[0047]Xl是任何氨基酸，優(yōu)選A或T ;
[0048]X2是任何氨基酸，優(yōu)選S或N ;
[0049]X3是任何氨基酸，優(yōu)選S，E或N ;
[0050]X4是任何氨基酸，優(yōu)選V或I ;
[0051]X5是任何氨基酸，優(yōu)選G，Y，T或F ;
[0052]X6是任何氨基酸，優(yōu)選G或Y ;
[0053]X7是任何氨基酸，優(yōu)選N，D或A ;和
[0054]其中所述序列變體包含所述序列的一個(gè)，兩個(gè)或三個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述IXDRl氨基酸序列選自下組:SEQ ID N0:538_541。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VL域，所述VL域包含SEQ ID NO: 513，525和536中分別列出的LCDR3，IXDR2和IXDRl氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含:VH域，其具有SEQ IDNO: 497，501和508中分別列出的HCDR3，HCDR2和HCDRl氨基酸序列；和VL域，其具有SEQID N0:513,525和536中分別列出的LCDR3，LCDR2和LCDRl氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VH域，其與SEQ ID NO: 152中列出的氨基酸序列具有至少85%序列同一性。在 某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VH域，其氨基酸序列選自下組:SEQ IDNO: 127-232和569-571。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VH域，其氨基酸序列為SEQID NO: 152。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VL域，其與SEQ ID N0:416中列出的氨基酸序列具有至少85%序列同一性。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VL域，其氨基酸序列選自下組:SEQ ID N0:391-496。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VL域，其氨基酸序列為SEQ ID N0:416。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含:VH域，其具有SEQ IDNO: 152中列出的氨基酸序列；和VL域，其具有SEQ ID NO:中416列出的氨基酸序列。
[0055]在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含所述Hl和H2環(huán)，其形成規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，所述組合對(duì)應(yīng)于見于人類IACY抗體結(jié)構(gòu)中的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合3-1。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含所述LI和L2環(huán)，其形成規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，所述組合對(duì)應(yīng)于見于人類3MUG抗體結(jié)構(gòu)中的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合6 λ -1。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含所述LI，L2和L3環(huán)，其形成規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，所述組合對(duì)應(yīng)于見于人類3MUG抗體結(jié)構(gòu)中的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合6 λ -1-5。
[0056]在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VH域，所述VH域包含SEQ IDNO:544[RAGX1GX2G]中列出的HCDR3氨基酸序列，或其序列變體，其中:
[0057]X1是任何氨基酸，優(yōu)選W ；
[0058]X2是任何氨基酸，優(yōu)選M，A，L，S或N ;和
[0059]其中所述序列變體包含所述序列的一個(gè)，兩個(gè)或三個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述HCDR3氨基酸序列選自下組:SEQ ID NO:543, SEQ ID NO:566, SEQ IDNO:567 和 SEQ ID NO:568。
[0060]在某些實(shí)施方案中，所述VH域進(jìn)一步包含SEQ IDNO:554[X1Isx2X3Gx4SX5X6YX7DSVKG]中列出的HCDR2氨基酸序列，或其序列變體，其中:[0061]Xl是任何氨基酸，優(yōu)選A，P或R ;
[0062]X2是任何氨基酸，優(yōu)選A或S ;
[0063]X3是任何氨基酸，優(yōu)選S或G ;
[0064]X4是任何氨基酸，優(yōu)選G或V ;
[0065]X5是任何氨基酸，優(yōu)選A或T ;
[0066]X6是任何氨基酸，優(yōu)選Y，N或S ;
[0067]X7是任何氨基酸，優(yōu)選G，A或T ;和
[0068]其中所述序列變體包含所述序列的一個(gè)，兩個(gè)或三個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述HCDR2氨基酸序列選自下組:SEQ ID N0:545_553。
[0069]在某些實(shí)施方案中，所述VH域進(jìn)一步包含SEQ ID NO:562[X1X2X3X4X5]中列出的HCDRl氨基酸序列，或其序列變體，其中:
[0070]Xl是任何氨基酸，優(yōu)選S或T ;
[0071]X2是任何氨基酸，優(yōu)選H或Y ;
[0072]X3是任何氨基酸，優(yōu)選A或R ;
[0073]X4是任何氨基酸，優(yōu)`選M或L ;
[0074]X5是任何氨基酸，優(yōu)選S或Y ;和
[0075]其中所述序列變體包含所述序列的一個(gè)，兩個(gè)或三個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述HCDRl氨基酸序列選自下組:SEQ ID N0:555_561。
[0076]在某些實(shí)施方案中，所述VH域包含HCDR3，其具有選自下組的氨基酸序列:SEQ IDNO: 543，566，567和568，和包含分別在SEQ ID NO: 545和555中列出的HCDR2和HCDRl氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子進(jìn)一步包含VL域，其中所述VL域包含SEQ IDNO: 563中列出的LCDR3氨基酸序列，或其序列變體，其中所述序列變體包含所述序列的一個(gè)，兩個(gè)或三個(gè)氨基酸取代。在某些實(shí)施方案中，所述VL域進(jìn)一步包含SEQ ID N0:564中列出的LCDR2氨基酸序列，或其序列變體，其中所述序列變體包含所述序列的一個(gè)，兩個(gè)或三個(gè)氨基酸取代。在某些實(shí)施方案中，所述VL域進(jìn)一步包含SEQ ID NO:565中列出的IXDRl氨基酸序列，或其序列變體，其中所述序列變體包含所述序列的一個(gè)，兩個(gè)或三個(gè)氨基酸取代。在某些實(shí)施方案中，所述VL域包含分別在SEQ ID NO: 563，564和565中列出的LCDR3，IXDR2和IXDRl氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含:VH域，其具有分別在SEQ ID NO: 544，545和555中列出的HCDR3，HCDR2和HCDRl氨基酸序列；和VL域，其具有分別在SEQ ID勵(lì):563，564和565中列出的1^0?3，1^0)1?2和1^0)1?1氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VH域，其與SEQ ID N0:86中列出的氨基酸序列具有至少85%序列同一性。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VH域，其具有的氨基酸序列選自下組:SEQ ID NO: 39-126和569-571。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VH域，其具有的氨基酸序列選自 SEQ ID NO:86，SEQ ID NO:569，SEQ ID NO:570 和 SEQ ID NO:571。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VL域，其與SEQ ID NO:350中列出的氨基酸序列具有至少85%序列同一'丨生。在某些實(shí)施方案中,所述結(jié)合分子包含VL域,其具有的氨基酸序列選自下組:SEQ ID NO:303-390。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含VL域，其具有的氨基酸序列為SEQ ID NO: 350。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含:VH域，其具有SEQ ID N0:86,SEQ ID NO:569, SEQ ID NO:570或SEQ ID NO:571中列出的氨基酸序列JPVL域，其具有SEQ ID NO:350中列出的氨基酸序列。
[0077]在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含Hl和H2環(huán)，其形成規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，所述組合對(duì)應(yīng)于見于人類IDFB抗體結(jié)構(gòu)中的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合1-3。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含LI和L2環(huán)，其形成規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，所述組合對(duì)應(yīng)于見于人類IMFA抗體結(jié)構(gòu)中的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合7 λ-1。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含L1，L2和L3環(huán)，其形成規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，所述組合對(duì)應(yīng)于見于人類3MUG抗體結(jié)構(gòu)中的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合7 λ -1-4。 [0078]在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子是Fab片段，其以低于2110_5^的解離速率(0ff-rate)(通過(guò)表面等離子共振測(cè)量的kf)結(jié)合于人類IL-6。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子以亞皮摩爾結(jié)合親和力結(jié)合于人類IL-6抗原。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子以單數(shù)位飛摩爾的結(jié)合親和力結(jié)合于人類IL-6抗原。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含超變環(huán)，其從羊駝屬的常規(guī)抗體無(wú)需后續(xù)親和力成熟而獲得。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子以少于0.1pM的IC50抑制IL-6誘導(dǎo)的B9雜交瘤細(xì)胞的增殖。
[0079]在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子呈現(xiàn)大于65°C的熔解溫度(Tm)。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子是親本駝?lì)惪贵w的種系化變體，所述種系化變體與所述親本駝?lì)惪贵w相比具有更高的熔解溫度。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子在HEK293細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)后以至少20mg/ml的水平表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子表征為低于約10.0，例如低
于約6.0的EpiBase?評(píng)分。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子抑制IL-6對(duì)IL-6受體的
結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子抑制gpl30對(duì)IL-6受體的結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子特異性結(jié)合于人類和食蟹猴IL-6。在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合分子包含至少一個(gè)來(lái)自特異性結(jié)合于IL-6的駝?lì)惪贵w的⑶R。
[0080]在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含任何前述權(quán)利要求的結(jié)合分子，和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。
[0081]在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了治療IL-6相關(guān)疾病或病癥的方法，其包括向需要該治療的受試者施用有效量的本發(fā)明的藥物組合物。
[0082]在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離的核酸，其編碼本文中公開的結(jié)合分子。
[0083]在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了重組表達(dá)載體，其包含本發(fā)明的核酸分子。
[0084]在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了宿主細(xì)胞，其包含本發(fā)明的重組表達(dá)載體。
[0085]附圖簡(jiǎn)述
[0086]圖1描述了測(cè)量本發(fā)明的抗體的體外IL-6中和活性的細(xì)胞增殖測(cè)定的結(jié)果。
[0087]圖2描述了測(cè)量本發(fā)明的抗體的體內(nèi)效力的上皮卵巢癌小鼠腫瘤異種移植實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
[0088]圖3A-B顯示本發(fā)明的61H7抗體的駝?lì)悂?lái)源的超變環(huán)(L1_L3，H1和H2)采用預(yù)測(cè)的人類抗體的規(guī)范折疊和規(guī)范折疊組合。
[0089]圖4A-B顯示本發(fā)明的68F2抗體及其種系化變體(129D3)的駝?lì)悂?lái)源的超變環(huán)(L1-L3，Hl和H2)采用預(yù)測(cè)的人類抗體的規(guī)范折疊和規(guī)范折疊組合。
[0090]圖5描述了 IL-6的空間填充模型，其分別與以下疊合(overlay): (A) IL-受體的F229 ； (B) IL-6 受體的 F229 和 61H7VH 的 W98, (C) IL-6 受體的 F229 和 68F2VL 的 Y30 ;和(D)IL-6 受體的 F229，61H7VH 的 W98 和 68F2VH 的 V99，均按照 Kabat 編號(hào)。[0091]圖6描述了對(duì)于IL-6受體結(jié)合重要的IL-6上的兩個(gè)表面結(jié)合空穴的空間填充模型，其與下述疊合:IL_6受體的殘基F229和F279，以及68F2VL的殘基Y30和68F2VH的V99，均根據(jù)Kabat編號(hào)(在該結(jié)構(gòu)中為Y32和V104)。
[0092]圖7A-B描述68F2及其種系化變體129D3的熱穩(wěn)定性，其在Biacore中用固定化的糖基化人類IL-6針對(duì)下述進(jìn)行測(cè)量:(A)本發(fā)明的其它種系化變體IL-6抗體和(B)其它參照抗體。每個(gè)圖的上部描述了熔解曲線，而下部列出了對(duì)于每個(gè)抗體的Tm值。
[0093]圖8描述抗體克隆68F2，129D3 (68F2的種系化變體)和103A1 (61H7的變體)的血清穩(wěn)定性。亦包括了參照抗體GL18。
[0094]圖9描述對(duì)于本發(fā)明的IL-6抗體，相對(duì)于參照抗體(以粗體顯示)(包括完全的人類抗體阿達(dá)木單抗(adalimumab) (Humira))的低免疫原性(Epibase)評(píng)分。
[0095]圖1OA-B描述(A) 68F2和(B) 61H7的VH和VL的比對(duì)，描述與其相應(yīng)的種系化變體129D3和111A7的框架區(qū)的高水平的序列同源性。亦顯示了導(dǎo)入每個(gè)分子的框架改變的最小數(shù)目(總共為13)。
[0096]圖1lA-B 顯示(A)CNT0328 和⑶ VH_rabbit (ALD518)的 VH 和 VK 的比對(duì)，描述與其相應(yīng)的種系化變體CNT0136和VH_human(ALD518)的框架區(qū)的高水平的序列同源性。亦顯示了導(dǎo)入每個(gè)分子的框架改變的最小數(shù)目(總共為36和46)。
[0097]圖12顯示129D3IgGl抗體及其變體在食蟹猴中的藥代動(dòng)力學(xué)概貌。
[0098]圖13描述測(cè)量本發(fā)明的抗體的體內(nèi)效力的血清淀粉狀蛋白A(SAA)小鼠模型實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
[0099]圖14描述測(cè)量本發(fā)`明的抗體的體內(nèi)效力的小鼠銀屑病異種移植物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
[0100]圖15描述在腎細(xì)胞癌小鼠腫瘤異種移植物模型中測(cè)量本發(fā)明的抗體的體內(nèi)效力的實(shí)驗(yàn)中觀察到的腫瘤生長(zhǎng)數(shù)據(jù)。
[0101]圖16描述在腎細(xì)胞癌小鼠腫瘤異種移植物模型中測(cè)量本發(fā)明的抗體的體內(nèi)效力的實(shí)驗(yàn)中觀察到的存活數(shù)據(jù)的Kaplan-Meier圖。
[0102]圖17描述在腎細(xì)胞癌小鼠腫瘤異種移植物模型中測(cè)量本發(fā)明的抗體的體內(nèi)效力的實(shí)驗(yàn)中觀察到的腫瘤生長(zhǎng)數(shù)據(jù)，所有藥劑以3mg/kg給藥。
[0103]圖18描述在腎細(xì)胞癌小鼠腫瘤異種移植物模型中測(cè)量本發(fā)明的抗體的體內(nèi)效力的實(shí)驗(yàn)中觀察到的存活數(shù)據(jù)的Kaplan-Meier圖,所有藥劑以3mg/kg給藥。
[0104]發(fā)明詳述
[0105]1.定義
[0106]為了使得本發(fā)明可更容易理解，首先定義了某些術(shù)語(yǔ)。
[0107]如用于本文中，術(shù)語(yǔ)“IL-6”指白介素-6。IL-6核苷酸和多肽序列在本領(lǐng)域中是公知的。例示性人類IL-6氨基酸序列列于GenBank保藏G1: 10834984，而例示性的小鼠IL-6氨基酸序列列于GenBank保藏G1: 13624311。
[0108]如用于本文中，術(shù)語(yǔ)“抗體”指免疫球蛋白分子，其包含四個(gè)多肽鏈，即通過(guò)二硫鍵相互連接的兩個(gè)重(H)鏈和兩個(gè)輕(L)鏈，以及其多聚物(例如IgM)。每條重鏈包含重鏈可變區(qū)(縮寫為VH)和重鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)包含三個(gè)域:CH1，CH2和CH3。每條輕鏈包含輕鏈可變區(qū)(縮寫為VL)和輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)包含一個(gè)域(CLl)。VH和VL區(qū)可進(jìn)一步細(xì)分為具有超變性的區(qū)，稱為互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)，散布于稱為框架區(qū)(FR)的更保守的區(qū)中。
[0109]如用于本文中，術(shù)語(yǔ)抗體的“抗原結(jié)合片段”包括任何天然存在的，酶法可獲得的，合成的，或遺傳工程的多肽或糖蛋白，其特異性結(jié)合抗原以形成復(fù)合物。抗體的抗原結(jié)合片段可例如從完整抗體分子使用任何合適的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)如蛋白分解消化或重組遺傳工程技術(shù)(涉及對(duì)編碼抗體可變域和任選地恒定域的DNA的操作和表達(dá))來(lái)衍生。抗原結(jié)合部分的非限定性實(shí)例包括:(i)Fab片段；(ii)F(ab’)2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(V)單鏈Fv(scFv)分子；(vi) dAb片段；和(vii)由模仿抗體的超變區(qū)的氨基酸殘基組成的最小識(shí)別單元(例如，分離的互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R))。其它工程改造的分子，如二價(jià)抗體(diabody)，三價(jià)抗體(triabody),四價(jià)抗體(tetrabody)和微抗體(minibody),亦涵蓋于表述“抗原結(jié)合部分”之內(nèi)。
[0110]如用于本文中，術(shù)語(yǔ)“可變區(qū)”或“可變域”指下述事實(shí):可變域VH和VL的某些部分在序列方面在抗體之間廣泛不同，并用于每種特定抗體對(duì)其靶抗原的結(jié)合和特異性。然而，所述差異在抗體的可變域中并非平均分布。其聚集在每個(gè)VL域和VH域中稱為“超變環(huán)”的三個(gè)區(qū)段，其形成抗原結(jié)合位點(diǎn)的一部分。V拉姆達(dá)輕鏈域的第一、第二和第三個(gè)超變環(huán)在本文中稱作LI ( λ )，L2 ( λ )和L3 ( λ )，并可定義為包含VL域中的殘基24-33 (Ll(A),由9，10或11個(gè)氨基酸殘基組成)，49-53 (L2 ( λ )，由3個(gè)殘基組成)和90-96 (L3 ( λ )，由5個(gè)殘基組成)(Morea等，Methods20:267-279 (2000))。V卡帕輕鏈域的第一，第二和第三個(gè)超變環(huán)在本文中稱作LI U)，L2(k)和L3(k)，并可定義為包含VL域中的殘基25-33 (LI (O，由6，7，8，11，12或13個(gè)殘基組成)，49-53 (L2( O，由3個(gè)殘基組成)和90-97 (L3 ( K )，由 6 個(gè)殘基組成)(Morea 等，Methods20:267-279 (2000))。VH 域的第一，第二和第三個(gè)超變環(huán)在本文中稱作Hl，H2和H3并可定義為包含VH域中的殘基25-33 (H1，由7，8或9個(gè)殘基組成)，52-56 (H2，由3或4個(gè)殘基組成)和91-105 (H3，長(zhǎng)度高度可變)(Morea 等，Methods20:267-279 (2000))。
[0111]除非另行指明，術(shù)語(yǔ)LI，L2和L3分別指VL域的第一，第二和第三個(gè)超變環(huán)，并涵蓋從V卡帕和V拉姆達(dá)同種型獲得的超變環(huán)。術(shù)語(yǔ)Hl，H2和H3分別指VH域的第一，第二和第三個(gè)超變環(huán),并涵蓋從任何已知的重鏈同種型(包括Y, ε，δ，α或μ)獲得的超變環(huán)。
[0112]超變環(huán)LI，L2，L3，HI, Η2和Η3可各包含如下所定義的“互補(bǔ)決定區(qū)”或“⑶R”的部分。術(shù)語(yǔ)“超變環(huán)”和“互補(bǔ)決定區(qū)”并不是嚴(yán)格同義的，因?yàn)槌儹h(huán)(HV)基于結(jié)構(gòu)而定義，而互補(bǔ)決定區(qū)(Q)R)基于序列變異性而定義(Kabat等，Sequences of Proteinsof Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service, National Institutes ofHealth, Bethesda, MD.，1983)，且對(duì)HV和CDR的限制在一些VH和VL域中可為不同的。
[0113]VL和VH域的⑶R通?？啥x為包含下述氨基酸:輕鏈可變域的殘基 24-34(CDRLl)，50-56(CDRL2)和 89-97(CDRL3)和重鏈可變域的殘基 31-35 或3l-35b(CDRHl)，50-65(CDRH2)和 95-102(CDRH3)(Kabat 等，Sequences of Proteins ofImmunological Interest,5th Ed.Public Health Service, National Institutes ofHealth, Bethesda, MD.(1991))。因此，HV可包含于相應(yīng)的CDR中，且本文中提及VH和VL域的“超變環(huán)”可解釋為亦涵蓋對(duì)應(yīng)的CDR，反之亦然，除非另行指明。
[0114]可變域的更高度保守的部分稱作框架區(qū)(FR)，如下文所定義。天然重鏈和輕鏈的可變域各包含四個(gè)FR (分別為FRl，F(xiàn)R2，F(xiàn)R3和FR4)，其主要呈β -層疊構(gòu)型，由三個(gè)超變環(huán)連接。每個(gè)鏈中的超變環(huán)通過(guò)FR緊密結(jié)合在一起，與來(lái)自其它鏈的超變環(huán)一起參與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的形成。對(duì)抗體的結(jié)構(gòu)分析揭示了由互補(bǔ)決定區(qū)形成的結(jié)合位點(diǎn)的形狀和序列之間的關(guān)系(Chothia 等，J.Mol.Biol.227:799-817 (1992) ；Tramontano 等，J.Mol.Biol，215:175-182(1990))。盡管其具有高度序列差異性，但六個(gè)環(huán)中的五個(gè)僅采用主鏈構(gòu)象的一個(gè)小全集，這稱為“規(guī)范結(jié)構(gòu)”。這些構(gòu)象首先由環(huán)的長(zhǎng)度決定，其次由在環(huán)中和框架區(qū)中的某些位置上關(guān)鍵殘基的存在決定，其通過(guò)填充(packing)，氫鍵鍵合，或呈現(xiàn)不常見的主鏈構(gòu)象的能力而決定構(gòu)象。
[0115]如用于本文中，術(shù)語(yǔ)“互補(bǔ)決定區(qū)”或“CDR”指見于重鏈和輕鏈多肽的可變區(qū)內(nèi)的非連續(xù)性抗原結(jié)合位點(diǎn)。這些特定區(qū)由Kabat等，J.Biol.Chem.252,6609-6616 (1977)和Kabat Sequences of protein of immunological interest.(1991),和由 Chothia 等，J.Mol.Biol.196:901-917(1987)和由 MacCallum 等，J.Mol.Biol.262:732-745 (1996)描述，其中該定義包括相互比較時(shí)氨基酸殘基的重疊或一部分。將涵蓋如上述每一個(gè)引用的參考文獻(xiàn)中定義的CDR的氨基酸殘基列出以供比較。優(yōu)選地，術(shù)語(yǔ)“CDR”是基于序列比較由Kabat定義的Q)R。
[0116]表1:CDR 定義
[0117]
【權(quán)利要求】
1.一種結(jié)合分子，其特異性結(jié)合于IL-6，所述結(jié)合分子包含至少一種抗體⑶R，其中所述CDR包含至少一個(gè)氨基酸殘基，當(dāng)所述結(jié)合分子結(jié)合于IL-6時(shí)，所述氨基酸殘基埋于IL-6上的F229空穴或F279空穴中。
2.權(quán)利要求1的結(jié)合分子，其包含VL域，所述VL域在根據(jù)Kabat的位置30具有氨基酸，當(dāng)所述結(jié)合分子結(jié)合于IL-6時(shí)，所述氨基酸埋于IL-6上的F229空穴中。
3.權(quán)利要求2的結(jié)合分子，其中在位置30的氨基酸是酪氨酸。
4.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的結(jié)合分子，其包含VH域，所述VH域在根據(jù)Kabat的位置99具有氨基酸，當(dāng)所述結(jié)合分子結(jié)合于IL-6時(shí)，所述氨基酸埋于IL-6上的F279空穴中。
5.權(quán)利要求4的結(jié)合分子，其中在位置99的氨基酸是纈氨酸。
6.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的結(jié)合分子，其為抗體或其抗原結(jié)合片段。
7.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的結(jié)合分子，其包含VH域，所述VH域包含選自下組的HCDR3氨基酸序列:SEQ ID NO: 497-500，543，544，566，567 和 568。
8.權(quán)利要求7的結(jié)合分子，其中所述VH進(jìn)一步包含選自下組的HCDR2氨基酸序列:SEQID NO:501-507 和 545-554。
9.權(quán)利要求7或8的結(jié)合分子，其中所述VH進(jìn)一步包含選自下組的HCDRl氨基酸序列:SEQ ID NO:508-512 和 555-562。
10.權(quán)利要求7-9任一項(xiàng)的結(jié)合分子，其進(jìn)一步包含VL域，其中所述VL域包含選自下組的 LCDR3 氨基酸序列:S EQ ID NO:513-524 和 563。
11.權(quán)利要求10的結(jié)合分子，其中所述VL域進(jìn)一步包含選自下組的IXDR2氨基酸序列:SEQ ID NO:525-535 和 564。
12.權(quán)利要求10或11的結(jié)合分子，其中所述VL域進(jìn)一步包含選自下組的IXDRl氨基酸序列:SEQ ID NO:536-542 和 565。
13.權(quán)利要求6的結(jié)合分子，其包含VH域，所述VH域具有選自下組的氨基酸序列:SEQID NO:1-232 和 569-571。
14.權(quán)利要求6的結(jié)合分子，其包含VL域，所述VL域具有選自下組的氨基酸序列:SEQID NO:233-496 ο
15.權(quán)利要求6的結(jié)合分子，其包含:VH域，所述VH域具有選自下組的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1-232和569-571 ;和VL域，所述VL域具有選自下組的氨基酸序列:SEQ IDNO:233-496。
16.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的結(jié)合分子，其包含VH域和VL域，所述VH域包含超變環(huán)Hl，H2和H3，其中所述VH域多肽與VL域配對(duì)，所述VL域包含超變環(huán)LI，L2和L3，其中超變環(huán)H1-H3和L1-L3至少之一是從通過(guò)用IL-6抗原主動(dòng)免疫接種羊駝屬(Lama)物種得到的羊駝屬物種常規(guī)抗體獲得的。
17.權(quán)利要求16的結(jié)合分子，其中: a)超變環(huán)Hl，H2，LI，L2和L3至少之一呈現(xiàn)預(yù)測(cè)或?qū)嶋H的規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)，其與人抗體中出現(xiàn)的Hl，H2，LI，L2或L3超變環(huán)的相應(yīng)規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)相同或?qū)嵸|(zhì)上相同； b)超變環(huán)Hl和H2各呈現(xiàn)預(yù)測(cè)的或?qū)嶋H的規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)，其與相應(yīng)的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)相同或?qū)嵸|(zhì)上相同； c)超變環(huán)LI，L2和L3各呈現(xiàn)預(yù)測(cè)的或?qū)嶋H的規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)，其與相應(yīng)的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)相同或?qū)嵸|(zhì)上相同； d)超變環(huán)Hl和H2形成預(yù)測(cè)的或?qū)嶋H的規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，其與已知出現(xiàn)于人類種系VH域的規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的相應(yīng)的組合相同或?qū)嵸|(zhì)上相同； e)超變環(huán)Hl和H2形成規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，其對(duì)應(yīng)于選自下組的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合:1-1，1-2，1-3，1-4，1-6，2-1，3-1 和 3-5 ； f)超變環(huán)LI和L2形成預(yù)測(cè)的或?qū)嶋H的規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，其與已知出現(xiàn)于人類種系VL域的規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的相應(yīng)的組合相同或?qū)嵸|(zhì)上相同； g)超變環(huán)LI和L2形成規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，其對(duì)應(yīng)于選自下組的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合:11_7，13-7 (A, B, C)，14-7 (A, B)，12-11，14-11，12-12，2-1，3-1，4-1 和 6-1 ； h)超變環(huán)Hl和H2形成規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，其對(duì)應(yīng)于如見于人類IACY抗體結(jié)構(gòu)中的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的3-1組合； i)超變環(huán)LI和L2形成規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，其對(duì)應(yīng)于如見于人類3MUG抗體結(jié)構(gòu)中的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的6 λ -1組合；和/或 j)超變環(huán)L1，L2和L3形成規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的組合，其對(duì)應(yīng)于如見于人類3MUG抗體結(jié)構(gòu)中的人類規(guī)范折疊結(jié)構(gòu)的6 λ -1-5組合。
18.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的結(jié)合分子，其 a)抑制IL-6對(duì)IL-6受體的結(jié)合； b)抑制gpl30對(duì)IL-6受體的結(jié)合；
c)特異性結(jié)合于人類和食蟹猴(cynomolgusmonkey) IL-6 ； d)包含至少一個(gè)來(lái)自特異性結(jié)合于IL-6的馬它類(camelid)抗體的Q)R； e)特征為具有少于約10.0的EpiBase?-評(píng)分； f)在HEK293細(xì)胞中通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)以至少20mg/ml表達(dá)； g)呈現(xiàn)大于65°C 的熔解溫度(melting temperature, Tm)； h)以少于0.1pM的IC50抑制IL-6誘導(dǎo)的B9雜交瘤細(xì)胞的增殖； i)以少于ZxKT5iT1的解離速率(通過(guò)表面等離子共振測(cè)得的kj結(jié)合于人類IL-6； j)是親本駝?lì)惪贵w的種系化變體，所述種系化變體與親本駝?lì)惪贵w相比具有更高的熔解溫度； k)包含至少一個(gè)來(lái)自羊駝屬常規(guī)抗體而無(wú)后續(xù)親和力成熟的⑶R ； I)當(dāng)以天然的IgGlFc格式靜脈內(nèi)施用于食蟹猴時(shí)，具有至少9日，優(yōu)選至少15日的血清半衰期；或 m)是親本結(jié)合分子的種系化變體，其中所述結(jié)合分子包含VH和VL域，且其中所述結(jié)合分子的VH和VL域之一或兩者與親本非人類抗體的相應(yīng)VH和VL域相比，在框架區(qū)中包含總共I至10個(gè)氨基酸取代；和/或包含VH和VL域，其中所述結(jié)合分子的VH和VL域之一或兩者在框架區(qū)FR1，F(xiàn)R2，F(xiàn)R3和FR4中與一個(gè)或多個(gè)相應(yīng)的人類VH或VL域具有90%或更高的序列同一性。
19.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的結(jié)合分子，其包含VH域，所述VH域具有選自下組的氨基酸序列:SEQ ID NO: 1-232和569-571，其中至少一個(gè)谷氨酰胺變成谷氨酸。
20.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的結(jié)合分子，其包含人Fe域，所述Fe域具有雙重突變H433K/N434F。
21.一種藥物組合物，其包含前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的結(jié)合分子和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。
22.—種處理IL-6相關(guān)的疾病或病癥的方法,其包括向需要此處理的受試者施用有效量的權(quán)利要求21的藥物組合物。
23.一種分離的核酸，其編碼權(quán)利要求1-20任一項(xiàng)的結(jié)合分子。
24.一種重組表達(dá)載體，其包含權(quán)利要求23的核酸。
25.—種宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求24的重組表達(dá)載體。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK103601806SQ201310193693
【公開日】2014年2月26日 申請(qǐng)日期:2013年5月23日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月23日
【發(fā)明者】C.布蘭切托特, J.德哈德, T.德賴爾, N.A.德瓊格, S.P.范德沃寧, N.G.H.翁奇內(nèi) 申請(qǐng)人:亞根-X公司