專利名稱：一種京尼平固定活化素b的人工皮膚移植物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種人工皮膚移植物及制備方法，尤其涉及一種京尼平固定活化素B生長因子的人工皮膚移植物及制備方法。
背景技術(shù)：
隨著社會的不斷進步和醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展，不少疾病已經(jīng)得到有效的控制，但皮膚創(chuàng)傷卻有增無減。目前，全國有數(shù)百萬人受其傷害，因此，皮膚創(chuàng)傷是不可忽視的疾病，如燒傷或外傷，這些會損害到皮膚的表皮層與真皮層，甚至造成全層皮膚傷害，當(dāng)治療無法愈合的傷口時，常需通過自體皮膚移植來永久封閉傷口，而對于大面積的燒傷傷口或病人傷口再生能力較弱者而言，可供取皮的部位有限；對于開放性的感染性傷口，利用薄裂層皮膚移植物來作皮膚移植治療的成功率很高，但是，由于薄裂皮膚移植物的真皮層較薄，傷口終會形成增生或收縮的瘢痕孿縮現(xiàn)象而影響重建后皮膚功能。因此，各種不同的生物敷料被提出，并被顯示可用為裂層皮膚移植物的替代物。隨著傷口愈合研究的深入，人們認(rèn)識到使用生物敷料的目的不止是為了覆蓋創(chuàng)面，還必須能幫助傷口愈合，防止細(xì)菌侵襲，減少傷口區(qū)域的超高代謝和營養(yǎng)不良，降低疼痛和不適，防止結(jié)痂而促進愈合。臨床使用量最大的生物敷料是醫(yī)用脫脂棉，由于肉芽組織向敷料內(nèi)生長引起粘連，在揭除時產(chǎn)生痛苦和二次創(chuàng)傷，且積液易引起感染。針對這種情況，近幾年出現(xiàn)了許多新型敷料，廣受好評的是高分子水凝膠皮膚創(chuàng)傷修復(fù)敷料，其具有良好透氣性和透水性，能抵御細(xì)菌的侵入，并能根據(jù)創(chuàng)面的外形而成型，其不足之處在于膠體強度差、缺乏耐用性。為了增加膠體強度，高分子水凝膠皮膚創(chuàng)傷修復(fù)敷料的合成過程中，通常采用化學(xué)交聯(lián)、物理凍融、輻射合成三種方法，采用化學(xué)合成需要使用交聯(lián)劑和引發(fā)劑等有毒有害化學(xué)物質(zhì)，如戊二醛、碳化二亞胺，這又使合成的水凝膠敷料用于傷口護理時，增加了使用風(fēng)險；采用凍融法合成水凝膠敷料不存在 使用有毒有害化學(xué)物質(zhì)，使得其細(xì)胞毒性增加，存在潛在的安全問題。但是合成的敷料具有熱可逆性，在溫度較高時容易變形，使之不易運輸儲存，且凍融過程易使水凝膠敷料中的水分溢出，造成其保水能力大大降低，吸收傷口滲出液的能力也降低，從而影響其傷口護理效果，與皮膚不易貼合。采用輻射法合成的水凝膠敷料，由于輻射法制備的水凝膠機械強度較小，尤其是使用單一原料輻照時，產(chǎn)生的凝膠較脆。不論是皮膚移植物，還是皮膚移植物的替代物“生物敷料”，對于可以促進傷口快速愈合，且無毒，有良好的生物相容性的皮膚移植物的替代物，仍是人類迫切需要的和積極研究的方向。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種京尼平固定活化素B的人工皮膚移植物及制備方法。本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:
一種京尼平固定活化素B的人工皮膚移植物，包括由皮膚移植物支架材料制成的水凝膠，及分布在水凝膠中的經(jīng)京尼平交聯(lián)的活化素B。優(yōu)選的，皮膚移植物支架材料為殼聚糖、羧甲基殼聚糖、海藻酸鹽、明膠和膠原蛋白中的至少一種。優(yōu)選的，皮膚移植物支架材料為明膠和羧甲基殼聚糖。優(yōu)選的，在皮膚移植物支架材料的水溶液中，依次加入京尼平水溶液、活化素B，混合均勻，得混合液，然后成型加工，同時成膠，得京尼平固定活化素B的人工皮膚移植物。優(yōu)選的,混合液中皮膚移植物支架材料的濃度為5 20 g/mL。優(yōu)選的，皮膚移植物支架材料為質(zhì)量比為9:1的明膠、羧甲基殼聚糖的混合物。優(yōu)選的，混合液中活化素B的濃度為I 20ng/mL。優(yōu)選的，混合液中京尼平的濃度為0.01 0.5 g/mL。優(yōu)選的，制備過程中各原料均為無菌原料。本發(fā)明的有益效果是:
本發(fā)明的人工皮膚移植物無毒、無致熱原性，具有良好的生物相容性；可預(yù)防病原微生物入侵，降低感染發(fā)生率；可促進上皮組織快速愈合；減少創(chuàng)面體液滲出，并保持局部濕潤的微環(huán)境，可常規(guī)消毒和滅菌，便于儲存和運輸，應(yīng)用于燒傷、外傷等皮膚創(chuàng)傷修復(fù)中。


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圖1是實施例所得不同明膠、殼聚糖含量的人工皮膚移植物圖。
具體實施例方式下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但并不局限于此。實施例1
一種京尼平固定活化素B的人工皮膚移植物的制備方法，包括以下步驟:
1)原料提純:
稱取5g明膠溶于IOOmL蒸餾水中，加熱至50°C攪拌溶解；
稱取IOg羧甲基殼聚糖溶于IOOmL蒸餾水中，攪拌室溫下溶解；
將溶解后的明膠、羧甲基殼聚糖溶液分別15000轉(zhuǎn)/min高速離心5min，分離得到上清液，分別冷凍干燥24h，分別得到純化后的明膠、羧甲基殼聚糖；
2)京尼平固定活化素B生長因子的人工皮膚移植物制備
分別稱取純化后的明膠2.25g、羧甲基殼聚糖0.25g，紫外滅菌30min，然后均加入到滅菌的蒸餾水中，加熱至50°C攪拌溶解并冷卻至室溫，用滅菌的蒸餾水定容至40mL，得明膠、羧甲基殼聚糖混合液；
稱取25mg京尼平溶解于IOmL滅菌的蒸餾水中，過濾滅菌，得京尼平水溶液；
將京尼平水溶液倒入明膠、羧甲基殼聚糖混合液中，室溫下攪勻，加入50uL 10 u g/mL的活化素 B 溶液(R&D Systems, Inc.Catalog Number:659_AB/CF),攪勻后倒入模具中，置于4°C下成膠，得京尼平固定活化素B生長因子的人工皮膚移植物，所得產(chǎn)品至于4°C或者-70°C保存，產(chǎn)品液狀下各個成分的最終比例是:明膠4.5 g/mL，羧甲基殼聚糖0.5 g/mL，京尼平0.05 g/mL，活化素B 10ng/mL。所得產(chǎn)品的示意圖見圖1中的左圖。實施例2一種京尼平固定活化素B的人工皮膚移植物的制備方法，包括以下步驟:
1)按實施例1的方法將明膠、羧甲基殼聚糖提純；
2)人工皮膚移植物的制備:
分別稱取純化后的明膠4.5g、羧甲基殼聚糖0.5g，紫外滅菌30min，然后加入到滅菌的蒸餾水中，加熱至50°C攪拌溶解并冷卻至室溫，用滅菌的蒸餾水定容至40mL，得明膠、羧甲基殼聚糖混合液；
稱取25mg京尼平溶解于IOmL滅菌的蒸餾水中，過濾滅菌，得京尼平水溶液；
將京尼平水溶液倒入明膠、羧甲基殼聚糖混合液中，室溫下攪勻，加入50uL 10 u g/mL的活化素B溶液，攪勻后倒入模具中，置于4°C下成膠，得京尼平固定活化素B生長因子的人工皮膚移植物，所得產(chǎn)品至于4°C或者-70°C保存，產(chǎn)品液狀下各個成分的最終比例是:明膠9 g/mL,羧甲基殼聚糖I g/mL,京尼平0.05 g/mL,活化素B 10ng/mL。所得產(chǎn)品的示意圖見圖1中的中圖。實施例3
一種京尼平固定活化素B的人工皮膚移植物的制備方法，包括以下步驟:
1)按實施例1的方法將明膠、羧甲基殼聚糖提純；
2)人工皮膚移植物的制備: 分別稱取純化后的明膠9g、羧甲基殼聚糖lg，紫外滅菌30min，然后均加入到滅菌的蒸餾水中，加熱至50°C攪拌溶解并冷卻至室溫，用滅菌的蒸餾水定容至40mL，得明膠、羧甲基殼聚糖混合液；
稱取25mg京尼平溶解于IOmL滅菌的蒸餾水中，過濾滅菌，得京尼平水溶液；
將京尼平水溶液倒入明膠、羧甲基殼聚糖混合液中，室溫下攪勻，加入50uL 10 u g/mL的活化素B溶液，攪勻后倒入模具中，置于4°C下成膠，得到京尼平固定活化素B生長因子的人工皮膚移植物，所得產(chǎn)品至于4°C或者-70°C保存，產(chǎn)品液狀下各個成分的最終比例是:明膠18g/mL,羧甲基殼聚糖2g/mL,京尼平0.05 g/mL,活化素B 10ng/mL。所得產(chǎn)品的示意圖見圖1中的右圖。圖1中從左到右的三個產(chǎn)品，顏色逐漸升高，透明度也逐漸降低，產(chǎn)品的強度從左到右也依次升高，可見明膠、羧甲基殼聚糖總的含量越低，所得人工皮膚移植物越柔軟，硬度越小，根據(jù)不同的病癥，選用不同強度的人工皮膚移植物。實施例4
一種京尼平固定活化素B的人工皮膚移植物的制備方法，包括以下步驟:
1)按實施例1的方法將明膠、羧甲基殼聚糖提純；
2)人工皮膚移植物的制備:
分別稱取純化后的明膠5g、羧甲基殼聚糖lg，紫外滅菌30min，然后均加入到滅菌的蒸餾水中，加熱至50°C攪拌溶解并冷卻至室溫，用滅菌的蒸餾水定容至40mL，得明膠、羧甲基殼聚糖混合液；
稱取5mg京尼平溶解于IOmL滅菌的蒸餾水中，過濾滅菌，得京尼平水溶液；
將京尼平水溶液倒入明膠、羧甲基殼聚糖混合液中，室溫下攪勻，加入L 10 u g/mL的活化素B溶液，攪勻后倒入模具中，置于4°C下成膠，得京尼平固定活化素B生長因子的人工皮膚移植物，所得產(chǎn)品至于4°C或者-70°C保存。產(chǎn)品液狀下各個成分的最終比例是:明膠10 g/mL,羧甲基殼聚糖2 g/mL,京尼平0.01 g/mL,活化素B Ing/mL。
實施例5
一種京尼平固定活化素B的人工皮膚移植物的制備方法，包括以下步驟:
1)按實施例1的方法將明膠、羧甲基殼聚糖提純；
2)人工皮膚移植物的制備:
分別稱取純化后的明膠5g、羧甲基殼聚糖lg，紫外滅菌30min，然后均加入到滅菌的蒸餾水中，加熱至50°C攪拌溶解并冷卻至室溫，用滅菌的蒸餾水定容至40mL，得明膠、羧甲基殼聚糖混合液；
稱取0.25mg京尼平溶解于IOmL滅菌的蒸餾水中，過濾滅菌，得京尼平水溶液；
將京尼平水溶液倒入明膠、羧甲基殼聚糖混合液中，室溫下攪勻，加入IOOuL IOug/mL的活化素B溶液，攪勻后倒入模具中，置于4°C下成膠，得京尼平固定活化素B生長因子的人工皮膚移植物，所得產(chǎn)品至于4°C或者-70°C保存。產(chǎn)品液狀下各個成分的最終比例是:明膠10 g/mL,羧甲基殼聚糖2 g/mL,京尼`平0.5 g/mL,活化素B 20ng/mL。
權(quán)利要求
1.一種京尼平固定活化素B的人工皮膚移植物，包括由皮膚移植物支架材料制成的水凝膠，及分布在水凝膠中的經(jīng)京尼平交聯(lián)的活化素B。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工皮膚移植物，其特征在于:皮膚移植物支架材料為殼聚糖、羧甲基殼聚糖、海藻酸鹽、明膠和膠原蛋白中的至少一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人工皮膚移植物，其特征在于:皮膚移植物支架材料為明膠和羧甲基殼聚糖。
4.權(quán)利要求1 3任一項所述的人工皮膚移植物的制備方法，包括以下步驟:在皮膚移植物支架材料的水溶液中，依次加入京尼平水溶液、活化素B，混合均勻，得混合液，然后成型加工，同時成膠，得京尼平固定活化素B的人工皮膚移植物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工皮膚移植物的制備方法，其特征在于:混合液中皮膚移植物支架材料的濃度為5 20 g/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的人工皮膚移植物的制備方法，其特征在于:皮膚移植物支架材料為質(zhì)量比為9:1的明膠、羧甲基殼聚糖的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工皮膚移植物的制備方法，其特征在于:混合液中活化素B的濃度為I 20ng/mL。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工皮膚移植物的制備方法，其特征在于:混合液中京尼平的濃度為0.01 0.5 g/mL。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工皮膚移植物的制備方法，其特征在于:制備過程中各原料均為無菌原料。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種京尼平固定活化素B的人工皮膚移植物及其制備方法，該人工皮膚移植物包括由皮膚移植物支架材料制成的水凝膠，及分布在水凝膠中的經(jīng)京尼平交聯(lián)的活化素B；其制備方法在皮膚移植物支架材料的水溶液中，依次加入京尼平水溶液、活化素B，混合均勻，然后成型加工，同時成膠，得產(chǎn)品。本發(fā)明產(chǎn)品無毒、無致熱原性，具有良好的生物相容性；可預(yù)防病原微生物入侵，降低感染發(fā)生率；可促進上皮組織快速愈合；減少創(chuàng)面體液滲出，并保持局部濕潤的微環(huán)境，可常規(guī)消毒和滅菌，便于儲存和運輸，應(yīng)用于燒傷、外傷等皮膚創(chuàng)傷修復(fù)中。
文檔編號A61L27/22GK103083721SQ20131002087
公開日2013年5月8日 申請日期2013年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月18日
發(fā)明者張琳, 張璐, 陳世萱 申請人:南方醫(yī)科大學(xué)