對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法及用所述方法檢測(cè)的基因的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法及用所述方法檢測(cè)的基因，尤其提供一種對(duì)誘發(fā)癌癥的AKR/J小鼠和正常的ICR小鼠照射低強(qiáng)度放射線，并從中采集胸腺，且針對(duì)所述胸腺而執(zhí)行微陣列化而分類免疫基因和細(xì)胞死亡基因，并擴(kuò)增所述基因且測(cè)定表達(dá)量，從而在癌癥誘發(fā)個(gè)體中發(fā)掘并在正常個(gè)體中得到驗(yàn)證的參與到胸腺癌抑制的對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法。這樣構(gòu)成的本發(fā)明的效果在于，通過防止干擾變量的介入，能夠準(zhǔn)確地檢測(cè)出對(duì)放射線起到特異的反應(yīng)的基因。
【專利說明】對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法及用所述方法 檢測(cè)的基因

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法及用所述方法檢測(cè) 的基因，尤其涉及一種對(duì)癌癥誘發(fā)小鼠和正常小鼠照射低強(qiáng)度放射線，從而由胸腺分類在 正常小鼠和癌癥誘發(fā)小鼠中共同特異地觀察到的與免疫和細(xì)胞死亡相關(guān)聯(lián)的基因的對(duì)低 強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 隨著工業(yè)及醫(yī)療用放射線的利用的增加，關(guān)于對(duì)人體的影響的研究正在多樣地進(jìn) 行，主要是利用放射線照射的癌癥治療方面的關(guān)注對(duì)象。已知高劑量電離放射線會(huì)引起DNA 損傷、基因變形以及包括癌癥的疾病，然而200mGy以下的劑量和6mGy/小時(shí)以下的劑量率 的放射線卻激活免疫反應(yīng)而抑制癌的出現(xiàn)。
[0003] 通常，對(duì)于放射線與致癌之間的相關(guān)性（尤其是基因反應(yīng)）的研究進(jìn)行至今，然而 夾雜有妨礙其結(jié)果的可靠性的干擾變量。然而，對(duì)于目前為止的大部分研究而言，使一部分 基因變形或者利用癌細(xì)胞株，因此無法說明構(gòu)成身體的細(xì)胞、組織、臟器以及在身體階段觀 察到的多種多樣的反應(yīng)。即，由于利用普通老鼠而評(píng)估基因反應(yīng)，因此表達(dá)基因多種多樣， 不僅如此，由于癌的出現(xiàn)并未局限于特定臟器，因此存在難以解釋基因反應(yīng)的問題。
[0004] 對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)中為了癌癥研究而利用細(xì)胞的方法而言，使基因發(fā)生改變或者將放 射線照射于致癌方面重要的P53缺失的癌細(xì)胞，因此與正常細(xì)胞的反應(yīng)根本上不同，故存 在無法將其結(jié)果應(yīng)用于個(gè)體的問題，且為了緩解這樣的缺點(diǎn)，利用基因與人類相似95%以 上的小鼠而進(jìn)行針對(duì)放射線的致癌研究。然而，由于通常的小鼠的自然癌變發(fā)生率很低，因 此利用多種多樣的癌癥研究用模型小鼠。
[0005] 現(xiàn)有的研究內(nèi)容為了發(fā)掘?qū)Φ蛷?qiáng)度（0.7mGy/小時(shí)）放射線敏感的基因而利用 了多種多樣的方法。然而，本發(fā)明中披露的基因卻未曾在現(xiàn)有技術(shù)中公開其為對(duì)低強(qiáng)度 (0. 7mGy/小時(shí)）放射線敏感的基因。
[0006] 在本發(fā)明的對(duì)低強(qiáng)度（0? 7mGy/小時(shí)）放射線敏感的基因譜（geneprofile)的發(fā) 掘方面，有如下的現(xiàn)有技術(shù)。
[0007] ①在人類乳腺上皮細(xì)胞中利用基因探測(cè)方法而發(fā)掘出了對(duì)放射線敏感的基因 (Malone J，Ullrich R(2007)Radiat Res 167:176-1847)。
[0008] ②在照射放射線的人類淋巴球中，利用微陣列和定量核酸擴(kuò)增法而發(fā)現(xiàn)了對(duì)早期 放射線敏感的基因（TurtoiAet.al. (2008)IntJRadiatBiol84 :375-387)。
[0009] ③在照射l_7Gy的雄性BALB/c小鼠中，通過血液蛋白質(zhì)分析而發(fā)掘出了生物學(xué)劑 量標(biāo)記因子（OssetrovaNI，BlakelyWF(2009)IntJRadiatBiol85:837-850)。
[0010] ④通過針對(duì)代表生物學(xué)網(wǎng)絡(luò)的500個(gè)基因的線性回歸分析，確認(rèn)了包含C-Jun、 HDAC1、RELA(NFKB的p65subunit)、PKC-beta、SUM〇-l、c-Abl、STATl、AR、CDKl、IRFl的 10 個(gè)樞紐基因（hubgene)網(wǎng)絡(luò)（EschrichSet.al. (2009)IntJRadiatOncolBiolPhys 75 ：497-505)〇
[0011] ⑤在277個(gè)人類淋巴球細(xì)胞株中，發(fā)掘出了可預(yù)測(cè)放射線反應(yīng)的單堿基變異標(biāo)記 因子（NiuNet.al. (2010)GenomeRes20:1482-1492)。
[0012] ⑥在最近的研究中，利用作為模仿人類的表皮組織的三維組織模型的EPI-200 組織，對(duì)放射線照射反應(yīng)提供了新的見解（MezentsevA,AmundsonSA(2011)RadiatRes175 ：677-688)〇
[0013] ⑦在測(cè)定放射線暴露和毒性方面，將基于RNA的表達(dá)分析法利用為了生物學(xué)劑量 評(píng)估手段（Pogosova-AgadjanyanELet.al. (2011)RadiatRes175:172-184)。
[0014] ⑧利用多重定量核酸擴(kuò)增法和特定基因表達(dá)分析法而在人類淋巴球和白血球 中發(fā)掘出了對(duì)放射線敏感的基因（KabacikSet.al. (2011)IntJRadiatBiol87: 115-129)。
[0015] 基于此，本申請(qǐng)的發(fā)明人致力于尋找對(duì)低強(qiáng)度電離放射線反應(yīng)敏感的基因的過程 中，分析對(duì)免疫（Ighg、Saa2、Defb6、Reg3g、Tac2 以及Igh_VJ558)和細(xì)胞死亡（Klklb27) 重要的7個(gè)基因的功能，并確認(rèn)沒有關(guān)于所述7個(gè)基因的報(bào)告，從而完成了本發(fā)明。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0016] 技術(shù)問題
[0017] 本發(fā)明的目的在于提供一種對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法及用所 述方法檢測(cè)的基因。
[0018] 技術(shù)方案
[0019] 為了達(dá)到如上所述的目的，本發(fā)明提供一種對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢 測(cè)方法，包括如下步驟：1)對(duì)誘發(fā)癌癥的AKR/J小鼠和正常的ICR小鼠照射低強(qiáng)度放射線； II)從所述AKR/J小鼠和ICR小鼠中采集胸腺；III)對(duì)所述胸腺執(zhí)行微陣列化；IV)通過維 恩圖分析而由所述微陣列分類與免疫或細(xì)胞死亡相關(guān)聯(lián)的基因；V)擴(kuò)增所述基因，并測(cè)定 表達(dá)量，而且，從癌癥誘發(fā)個(gè)體中發(fā)掘并在正常個(gè)體中驗(yàn)證，且參與到胸腺癌抑制。
[0020] 并且，本發(fā)明提供一種胸腺癌抑制診斷用標(biāo)記，包括：從由參與到胸腺癌抑制 的Ighg(NM_001472541)、Saa2(NM_011314)、Reg3g(NM_011260)、Defb6(NM_054074)、 Tac2(NM_009312)以及Igh-VJ558(NM_001474025)構(gòu)成的組中選擇的免疫基因或 Klklb27(NM_020268)細(xì)胞死亡基因。
[0021] 而且，本發(fā)明提供一種包括如上所述的標(biāo)記的胸腺癌抑制診斷用套件。
[0022] 并且，本發(fā)明提供一種包括如上所述的標(biāo)記的胸腺癌診斷用微陣列。
[0023] 而且，本發(fā)明提供一種用于治療或抑制胸腺癌的基因的檢測(cè)方法，包括如下步 驟：1)對(duì)除了人類的具有胸腺癌的哺乳動(dòng)物照射放射線；II)使從被照射所述放射線的 哺乳動(dòng)物中提取的胸腺組織與實(shí)驗(yàn)物質(zhì)相接觸；III)由所述胸腺組織測(cè)定從由作為參 與到胸腺癌抑制的基因的Ighg(NM_001472541)、Saa2(NM_011314)、Reg3g(NM_011260)、 Defb6(NM_054074)、Tac2(NM_009312)以及Igh-VJ558(NM_001474025)構(gòu)成的組中選擇的 免疫基因或Klklb27(NM_020268)細(xì)胞死亡基因的表達(dá)變化。
[0024] 以下，詳細(xì)說明本發(fā)明。
[0025] 根據(jù)本發(fā)明，已知參與到免疫反應(yīng)的Ighg和Igh_VJ558被低強(qiáng)度放射線照射所激 活。低強(qiáng)度放射線照射表現(xiàn)出能夠在胸腺癌發(fā)生過程中激活免疫反應(yīng)。
[0026] 并且，分析得出Saa2在脂肪細(xì)胞中參與到系統(tǒng)炎癥反應(yīng)和游離脂肪酸生產(chǎn) (Lopez-NievaPet.al. (2004)Carcinogenesis25:1299-1304)。而且，分析得出Reg3g參 與到炎癥反應(yīng)（BeverlyLJ，F(xiàn)elsherDW(2005)CancerRes65:7159-7168)。另外，分析 得出Defb6參與到泌尿生殖器官的免疫反應(yīng)（YamaguchiYet.al. (2002)JImmunol169: 2516-2523)。
[0027] 而且，分析得出在神經(jīng)細(xì)胞和無神經(jīng)細(xì)胞中Tac2被主要地觀察到，并在雄性中參 與到促性腺激素的合成（CoranderMPet.al. (2010)JNeuroendocrinol22 :181_187)。并 且，Klklb27被分析為絲氨酸蛋白酶（serineprotease)。根據(jù)REACT0ME(人類生物學(xué)反應(yīng) 及信號(hào)通路數(shù)據(jù)庫），分析得出參與到胰島素生長激素蛋白質(zhì)結(jié)合（REACT0ME: 1494374)。
[0028] 在放射線對(duì)人體的影響方面，許多致癌研究進(jìn)行至今，然而由于利用了癌細(xì)胞、基 因變形的細(xì)胞株或者普通小鼠，因此難以說明多種多樣的身體反應(yīng)（基因反應(yīng)）。尤其，未 曾在個(gè)體層次上發(fā)掘?qū)Φ蛷?qiáng)度（〇.7mGy/小時(shí)）放射線敏感的基因譜并說明功能。在本發(fā) 明中，1)針對(duì)正常的ICR小鼠和胸腺癌發(fā)病的AKR/J小鼠，用低強(qiáng)度（0. 7mGy/小時(shí)）放射 線照射（致癌刺激因子）之后，發(fā)掘出在胸腺中特異地表達(dá)的對(duì)低強(qiáng)度放射線敏感的基因 譜并分析功能，然后，2)欲使用為可用于診斷胸腺癌發(fā)生階段的基因譜的構(gòu)成要素。
[0029] 本發(fā)明提供一種對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法，包括如下步驟：1) 對(duì)誘發(fā)癌癥的AKR/J小鼠和正常的ICR小鼠照射低強(qiáng)度放射線；II)從所述AKR/J小鼠和 ICR小鼠中采集胸腺；III)對(duì)所述胸腺執(zhí)行微陣列化；IV)通過維恩圖分析而由所述微陣列 分類與免疫或細(xì)胞死亡相關(guān)聯(lián)的基因；V)擴(kuò)增所述基因，并測(cè)定表達(dá)量，而且，從癌癥誘發(fā) 個(gè)體中發(fā)掘并在正常個(gè)體中驗(yàn)證，并參與到胸腺癌抑制。
[0030] 在本發(fā)明的對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法中，優(yōu)選地，所述低強(qiáng)度 電離放射線是以0. 7mGy/小時(shí)的強(qiáng)度最終照射1. 7Gy的放射線劑量的Y線Cs-137,而且， 本發(fā)明的所述方法優(yōu)選被利用為胸腺癌診斷用套件的制作、癌癥患者的癌變進(jìn)展及治療程 度的評(píng)估、工業(yè)及醫(yī)療從事人員的放射線暴露與致癌之間的相關(guān)性評(píng)估、放射線與致癌的 因果關(guān)系評(píng)估、對(duì)于放射線暴露的生物學(xué)劑量評(píng)估、或者基于低強(qiáng)度放射線的胸腺癌的引 發(fā)及進(jìn)展度評(píng)估的指標(biāo)。
[0031] 并且，在本發(fā)明的對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法中，所述癌癥優(yōu)選 為胸腺癌，此時(shí)，所述步驟II)中的胸腺的采集優(yōu)選在由于癌癥而開始出現(xiàn)死亡的時(shí)間點(diǎn) 上進(jìn)行。
[0032] 而且，在本發(fā)明的對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法中，優(yōu)選地，關(guān) 于所述免疫的基因從由Ighg(NM_001472541)、Saa2(NM_011314)、Reg3g(NM_011260)、Defb6(NM_054074)、Tac2(NM_009312)以及Igh-VJ558(NM_001474025)構(gòu)成的組中選擇， 且關(guān)于細(xì)胞死亡的基因?yàn)镵lklb27(NM_020268)，在此，優(yōu)選地，所述IIghg(NM_001472541) 基因由記為序列號(hào)1和2的引物擴(kuò)增，Saa2(NM_011314)基因由記為序列號(hào)3和4的引物 擴(kuò)增，Reg3g(NM_011260)基因由記為序列號(hào)5和6的引物擴(kuò)增，Defb6(NM_054074)基因由 記為序列號(hào)7和8的引物擴(kuò)增，Tac2(NM_009312)基因由記為序列號(hào)9和10的引物擴(kuò)增， Tac2(NM_009312)基因由記為序列號(hào)11和12的引物擴(kuò)增，而Klklb27(NM_020268)基因由 記為序列號(hào)13和14的引物擴(kuò)增。
[0033] 對(duì)于所述步驟IV)由所述微陣列分類相關(guān)基因而言，其特征在于，相比于照射放 射線之前的癌癥誘發(fā)個(gè)體，更青睞于從照射放射線之后的癌癥誘發(fā)個(gè)體中通過微陣列檢 測(cè)出過表達(dá)的基因，然后通過基因功能的檢索而解明所述過表達(dá)的基因的原形。關(guān)于微 陣列分析將在后述的實(shí)施例中詳細(xì)說明，且利用序列號(hào)為1號(hào)?14號(hào)的引物而進(jìn)行了驗(yàn) 證，而基因功能的檢索則在后述的實(shí)施例中通過BioCarta(http://www.biocarta,com/)、 GenMAPP(http://www.genmapp.org/)、生物信息數(shù)據(jù)庫DAVID(http://appsl.niaid.nih. gov/david/)和Pubmed數(shù)據(jù)庫（ http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)而實(shí)施，然而并不局限于 此。
[0034] 在本發(fā)明中使用的"對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因"是指與照射放射線之前的 癌癥誘發(fā)個(gè)體相比而言在照射放射線之后的癌癥誘發(fā)個(gè)體中差別性地過表達(dá)的基因。艮P， 表示在癌癥誘發(fā)個(gè)體中由于放射線刺激而誘導(dǎo)表達(dá)模式的變化的基因，且可以是與特定的 癌癥有關(guān)聯(lián)的靶基因（即，腫瘤形成基因或腫瘤抑制基因）。檢測(cè)出這樣的癌特異性基因， 從而確立針對(duì)癌癥患者的放射線治療的分子機(jī)制，由此可以對(duì)放射線治療效果的提高做出 貢獻(xiàn)，不僅如此，通過發(fā)掘新的腫瘤形成基因或腫瘤抑制基因而調(diào)節(jié)其表達(dá)，從而可以為分 子生物學(xué)水平上的癌癥治療劑或者治療方法的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
[0035] 并且，本發(fā)明提供一種胸腺癌抑制診斷用標(biāo)記，包括：從由參與到胸腺癌抑制 的Ighg(NM_001472541)、Saa2(NM_011314)、Reg3g(NM_011260)、Defb6(NM_054074)、 Tac2(NM_009312)以及Igh-VJ558(NM_001474025)構(gòu)成的組中選擇的免疫基因或 Klklb27(NM_020268)細(xì)胞死亡基因。
[0036] 而且，本發(fā)明提供一種包括如上所述的標(biāo)記的胸腺癌抑制診斷用套件。
[0037] 并且，本發(fā)明提供一種包括如上所述的標(biāo)記的胸腺癌診斷用微陣列。
[0038] 而且，本發(fā)明提供一種用于治療或抑制胸腺癌的基因的檢測(cè)方法，包括如下步 驟：1)對(duì)除了人類的具有胸腺癌的哺乳動(dòng)物照射放射線；II)使從被照射所述放射線的 哺乳動(dòng)物中提取的胸腺組織與實(shí)驗(yàn)物質(zhì)相接觸；III)由所述胸腺組織測(cè)定從由作為參 與到胸腺癌抑制的基因的Ighg(NM_001472541)、Saa2(NM_011314)、Reg3g(NM_011260)、 Defb6(NM_054074)、Tac2(NM_009312)以及Igh-VJ558(NM_001474025)構(gòu)成的組中選擇的 免疫基因或Klklb27(NM_020268)細(xì)胞死亡基因的表達(dá)變化。
[0039] 在本發(fā)明中，針對(duì)作為胸腺癌研究模型的AKR/J小鼠和作為正常的鼠種的ICR小 鼠，照射低強(qiáng)度（〇.7mGy/小時(shí)）Y線（Cs-137)，并在AKR/J小鼠因胸腺癌而開始出現(xiàn)死亡 的時(shí)間點(diǎn)（100天）上采集了胸腺。針對(duì)采集的胸腺而執(zhí)行微陣列化，然后通過維恩圖分析 而分類對(duì)低強(qiáng)度（〇. 7mGy/小時(shí)）放射線表現(xiàn)出敏感的反應(yīng)的免疫基因和細(xì)胞死亡基因，并 將對(duì)低強(qiáng)度（〇. 7mGy/小時(shí)）放射線表現(xiàn)出敏感反應(yīng)的所述基因進(jìn)行核酸擴(kuò)增，并測(cè)定出表 達(dá)量。
[0040] 其結(jié)果，通過本發(fā)明而發(fā)掘出對(duì)低強(qiáng)度（0. 7mGy/小時(shí)）放射線表現(xiàn)出敏感反應(yīng)的 免疫（Ighg、Saa2、Defb6、Reg3g、Tac2 以及Igh_VJ558)和細(xì)胞死亡（Klklb27)方面重要 的7個(gè)基因，且低強(qiáng)度（0. 7mGy/小時(shí)）放射線通過激活胸腺細(xì)胞內(nèi)的與免疫（Ighg、Saa2、 Defb6、Reg3g、TaC2以及Igh-VJ558)和細(xì)胞死亡相關(guān)聯(lián)的基因（Klklb27)，從而抑制了胸腺 癌。正是這樣，本發(fā)明通俗易懂地披露了相關(guān)基因的功能，并規(guī)定因胸腺癌而觀察到死亡的 第100天而采集胸腺，從而能夠一貫性地觀察到對(duì)低強(qiáng)度放射線表現(xiàn)出反應(yīng)的糖代謝基因 反應(yīng)。
[0041] 因此，本發(fā)明可以廣泛地應(yīng)用為如下用途：1)用于開發(fā)胸腺癌診斷用診斷套件的 基因譜；2)在低強(qiáng)度放射線環(huán)境中生活的工業(yè)及醫(yī)療從事人員的致癌因果關(guān)系評(píng)估指標(biāo)； 3)供診斷癌癥患者的癌變并確立治療對(duì)策的信息用基因譜；4)可用于區(qū)分放射線暴露與 胸腺癌發(fā)生之間的因果關(guān)系的指標(biāo)；5)用于針對(duì)低強(qiáng)度放射線暴露的生物學(xué)劑量評(píng)估的 新的基因指標(biāo)。另外，6)對(duì)電離放射線敏感的糖代謝信號(hào)傳遞可應(yīng)用為針對(duì)低強(qiáng)度放射線 暴露的靶向治療。
[0042] 有益效果
[0043] 對(duì)于如上所述地構(gòu)成的對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法而言，可利用 為用于制作胸腺癌診斷用套件的低強(qiáng)度放射線敏感性指標(biāo)基因譜，并能夠利用為可用于評(píng) 估癌癥患者的癌變進(jìn)展及治療程度的低強(qiáng)度放射線敏感性指標(biāo)基因。并且，能夠利用為可 用于評(píng)估工業(yè)及醫(yī)療從事人員的放射線暴露與致癌之間的相關(guān)性的低強(qiáng)度放射線敏感性 指標(biāo)基因，并能夠利用為可用于評(píng)估放射線與致癌之間的因果關(guān)系的低強(qiáng)度放射線敏感性 指標(biāo)。而且，可利用為用于針對(duì)放射線暴露的生物學(xué)劑量評(píng)估的新的指標(biāo)，并能夠利用為評(píng) 估基于低強(qiáng)度（〇. 7mGy/小時(shí)）放射線的胸腺癌抑制效果的低強(qiáng)度放射線敏感性指標(biāo)基因。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0044] 圖1以圖解方式表示由低強(qiáng)度（0.7mGy/小時(shí)）放射線將胸腺細(xì)胞內(nèi)的與免疫 (Ighg、Saa2、Defb6、Reg3g、Tac2 以及Igh-VJ558)和細(xì)胞死亡相關(guān)聯(lián)的基因（Klklb27)激 活而抑制胸腺癌。
[0045] 圖2的變化圖表示用低強(qiáng)度（0. 7mGy/小時(shí)）放射線照射AKR/J小鼠和ICR小鼠 之后飼養(yǎng)，并在AKR/J小鼠因胸腺癌而開始出現(xiàn)死亡的時(shí)間點(diǎn)（100天）上采集胸腺而計(jì)測(cè) 胸腺重量，且以此為指標(biāo)而分析對(duì)放射線敏感的基因反應(yīng)。

【具體實(shí)施方式】
[0046] 以下，通過實(shí)施例更具體地說明本發(fā)明。然而，以下實(shí)施例只是為了說明本發(fā)明， 本發(fā)明的權(quán)利范圍并不是被以下實(shí)施例所限定。
[0047] 〈實(shí)施例1>
[0048] 從日本SLC公司購入作為胸腺癌研究模型的雌性AKR/J小鼠和正常的雌性ICR小 鼠。利用Y線發(fā)生裝置（IBL147C，CIS生物國際（CISbiointernational)，法國）而對(duì) 所述AKR/J小鼠照射（137Cs，0. 7mGy/小時(shí)）低強(qiáng)度放射線而使最終劑量達(dá)到1. 7Gy。將結(jié) 束低強(qiáng)度放射線照射的小鼠移到屏蔽了放射線的無菌飼養(yǎng)設(shè)備而飼養(yǎng)100天并觀察了胸 腺癌的發(fā)生。為了基因分析，對(duì)在相同的實(shí)驗(yàn)條件下單獨(dú)飼養(yǎng)的正常小鼠（ICR小鼠）照射 低強(qiáng)度（〇. 7mGy/小時(shí)）放射線，并將100天以后采集的胸腺在液氮中急速冷凍，然后執(zhí)行 了基因分析。
[0049] 〈實(shí)施例2>微陣列及基因分析
[0050] 所述實(shí)施例1的結(jié)果，利用癌癥研究用模型小鼠（AKR/J小鼠）而發(fā)掘出對(duì)低強(qiáng)度 (0. 7mGy/小時(shí)）放射線敏感的基因，并在正常小鼠（ICR小鼠）中得到了證明。即，從照射了 低強(qiáng)度（〇. 7mGy/小時(shí)）放射線的AKR/J小鼠和ICR小鼠的胸腺中發(fā)掘?qū)Φ蛷?qiáng)度（0. 7mGy/ 小時(shí)）放射線特異地引起反應(yīng)的基因并對(duì)功能進(jìn)行了解釋。利用維恩圖、定量核酸擴(kuò)增法、 以及統(tǒng)計(jì)程序SAS(ANOVA和t-test)而進(jìn)行了分析。
[0051] 為了確認(rèn)其結(jié)果，對(duì)所述基因進(jìn)行了核酸擴(kuò)增。具體而言，為了對(duì)從照射了低強(qiáng)度 (0. 7mGy/小時(shí)）放射線的AKR/J小鼠和ICR小鼠中采集的胸腺進(jìn)行微陣列化并針對(duì)于對(duì)低 強(qiáng)度放射線表現(xiàn)出敏感反應(yīng)的基因計(jì)測(cè)表達(dá)量，利用記載于下面的表1中的引物而進(jìn)行了 擴(kuò)增。
[0052] [表 1]
[0053]

【權(quán)利要求】
1. 一種對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法，包括如下步驟： I) 對(duì)誘發(fā)癌癥的AKR/J小鼠和正常的ICR小鼠照射低強(qiáng)度放射線； II) 從所述AKR/J小鼠和ICR小鼠中采集胸腺； III) 對(duì)所述胸腺執(zhí)行微陣列化； IV) 通過維恩圖分析而由所述微陣列分類與免疫或細(xì)胞死亡相關(guān)聯(lián)的基因； V) 擴(kuò)增所述基因，并測(cè)定表達(dá)量， 而且，從癌癥誘發(fā)個(gè)體中發(fā)掘并在正常個(gè)體中驗(yàn)證。
2. 如權(quán)利要求1所述的對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法，其特征在于， 所述低強(qiáng)度電離放射線是以〇. 7mGy/小時(shí)的強(qiáng)度最終照射1. 7Gy的放射線劑量的γ線 Cs-137。
3. 如權(quán)利要求1所述的對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法，其特征在于，所 述方法被利用為胸腺癌診斷用套件的制作、癌癥患者的癌變進(jìn)展及治療程度的評(píng)估、工業(yè) 及醫(yī)療從事人員的放射線暴露與致癌之間的相關(guān)性評(píng)估、放射線與致癌的因果關(guān)系評(píng)估、 對(duì)于放射線暴露的生物學(xué)劑量評(píng)估、或者基于低強(qiáng)度放射線的胸腺癌的引發(fā)及進(jìn)展度評(píng)估 的指標(biāo)。
4. 如權(quán)利要求1所述的對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法，其特征在于，所 述癌癥為胸腺癌。
5. 如權(quán)利要求1所述的對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法，其特征在于，所 述步驟II)中的胸腺的采集是在由于癌癥而開始出現(xiàn)死亡的時(shí)間點(diǎn)上進(jìn)行。
6. 如權(quán)利要求1所述的對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法，其特征在于， 關(guān)于所述免疫的基因從由 Ighg(NM_001472541)、Saa2(NM_011314)、Reg3g(NM_011260)、 Defb6(NM_054074)、Tac2(NM_009312)以及 Igh-VJ558(NM_001474025)構(gòu)成的組中選擇，且 關(guān)于細(xì)胞死亡的基因?yàn)镵lklb27(NM_020268)。
7. 如權(quán)利要求6所述的對(duì)低強(qiáng)度電離放射線敏感的基因的檢測(cè)方法，其特征在于，所 述Iighg(NM_001472541)基因由記為序列號(hào)1和2的引物擴(kuò)增，Saa2(NM_011314)基因由 記為序列號(hào)3和4的引物擴(kuò)增，Reg3g(NM_011260)基因由記為序列號(hào)5和6的引物擴(kuò)增， Defb6(NM_054074)基因由記為序列號(hào)7和8的引物擴(kuò)增，Tac2(NM_009312)基因由記為 序列號(hào)9和10的引物擴(kuò)增，Tac2(NM_009312)基因由記為序列號(hào)11和12的引物擴(kuò)增，而 Klklb27(NM_020268)基因由記為序列號(hào)13和14的引物擴(kuò)增。
8. -種胸腺癌抑制診斷用標(biāo)記，包括： 從由參與到胸腺癌抑制的 Ighg(NM_001472541)、Saa2(NM_011314)、 Reg3g(NM_011260)、Defb6 (NM_054074)、Tac2 (NM_009312)以及 Igh-VJ558 (NM_001474025) 構(gòu)成的組中選擇的免疫基因或Klklb27(NM_020268)細(xì)胞死亡基因。
9. 一種胸腺癌抑制診斷用套件，包括權(quán)利要求8所述的標(biāo)記。
10. -種胸腺癌診斷用微陣列，包括權(quán)利要求8所述的標(biāo)記。
11. 一種用于治療或抑制胸腺癌的基因的發(fā)掘方法，包括如下步驟： I) 對(duì)除了人類的具有胸腺癌的哺乳動(dòng)物照射放射線； II) 使從被照射所述放射線的哺乳動(dòng)物中提取的胸腺組織與實(shí)驗(yàn)物質(zhì)相接觸； ΠΙ)由所述胸腺組織測(cè)定從由作為參與到胸腺癌抑制的基因的Ighg(NM_001472541)、 Saa2 (NM_011314)、Reg3g(NM_011260)、Defb6(NM_054074)、Tac2(NM_009312)以及 Igh-VJ558(NM_001474025)構(gòu)成的組中選擇的免疫基因或Klklb27(NM_020268)細(xì)胞死亡 基因的表達(dá)變化。
【文檔編號(hào)】A61N5/00GK104271764SQ201280073087
【公開日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2012年5月18日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月10日
【發(fā)明者】金熙善, 崔承鎮(zhèn), 崔茂鉉, 奉珍鐘, 申碩澈 申請(qǐng)人:韓國水力原子力株式會(huì)社