Cd27l抗原結(jié)合蛋白的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及CD27L抗原結(jié)合蛋白、此類抗體、編碼所述CD271抗原結(jié)合蛋白的多核苷酸、抗體藥物綴合物組合物以及診斷和治療與CD27L表達(dá)相關(guān)的疾病的方法。
【專利說明】CD27L抗原結(jié)合蛋白
[0001]相關(guān)申請
[0002]本申請要求2011年9月22日提交的美國臨時申請N0.61/538，024的權(quán)益，其內(nèi)容據(jù)此通過引用方式整體并入。
[0003]本申請連同序列表以電子格式提交。序列表以標(biāo)題為A-1437-US_NP(USNon-Prov)_ST25.txt的文件提供，它在2012年9月17日生成，大小為94.3KB。序列表的電子格式中信息通過引用方式整體并入本文。
發(fā)明領(lǐng)域
[0004]本發(fā)明的領(lǐng)域涉及包含能夠結(jié)合CD27L的抗體的抗原結(jié)合蛋白的組合物、以及相關(guān)的方法。
[0005]背景
[0006]⑶27L(⑶70，TNFSF7)是II型內(nèi)在膜蛋白，它在正常組織上的表達(dá)高度限制在活化的T和B細(xì)胞的亞組、樹狀細(xì)胞和在胸腺上皮中細(xì)胞的少量亞組。通過⑶27L與它的受體⑶27結(jié)合來介導(dǎo)⑶27L的生物功能，其包括增強(qiáng)或者調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，所述⑶27主要表達(dá)在淋巴樣細(xì)胞上。CD27L/CD27相互作用調(diào)節(jié)B-細(xì)胞增殖和分化以及T-細(xì)胞共同刺激/活化。在CD27缺陷的小鼠中CD27L/CD27相互作用的破壞沒有導(dǎo)致缺少免疫攻擊(immunechallenge)的任何表型(Grewal, Expert Opin.Ther.Targets.12, 341-351 (2008)) ?
[0007]除了在正常組織上它非常有限的表達(dá)，⑶27L在一些B細(xì)胞非霍奇金氏淋巴瘤(B-NHL)腫瘤亞型中、在前-B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)中和在B細(xì)胞型-慢性淋巴細(xì)胞性白血病(B-CLL)中表達(dá)相對較高水平。在腎細(xì)胞癌(RCC)中也觀察到⑶27L的異常表達(dá)，但在正常腎臟或者其它正常組織中未觀察到。因此，CD27L近似表現(xiàn)出與“腫瘤特異性抗原”的那些性質(zhì)一致的性質(zhì)(Grewal, Expert Opin.Ther.Targets.12, 341-351 (2008))。
[0008]每年，在美國約49，000名患者患上RCC，他們中超過40，000多人被診斷為ccRCC (American Cancer Society:Cancer Facts and Figures final (2008)。盡管在最近4年已經(jīng)證實(shí)RCC的一些較新治療方法，但是具有轉(zhuǎn)移性RCC的患者的5年存活率依然維持在 10-20%的較低水平下(Nat1nal Caner Institute.SEER cancer statistics factsheet:cancer of the kidney and renal pelvis—2008年存取)，因而仍然存在顯著未得到滿足的醫(yī)療需求。預(yù)期表達(dá)CD27L的每年新診斷出ccRCC患者(美國)的預(yù)計數(shù)量為約36，000。目前預(yù)估有64，000名具有活動性疾病的ccRCC患者。
[0009]在報道異常表達(dá)⑶27L的B細(xì)胞惡性腫瘤中，彌散性大細(xì)胞B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)的B-NHL亞組和濾泡性淋巴瘤(FL)顯示如使用經(jīng)驗(yàn)證的抗體在冷凍的切片上通過IHC所證實(shí)的最高表達(dá)的發(fā)生率，其范圍為FL的33%至DLBCL的71% (Lens等人，Brit.J.Hematol.106，491-503 (1999)。如在冷凍的腫瘤切片上通過IHC或者在循環(huán)腫瘤細(xì)胞上通過流式細(xì)胞計量術(shù)評估，50-89 %的B-CLL腫瘤也表達(dá)⑶27L (Ranheim等人，Blood85,3556-3565(1965) ;Trentin 等人，Cancer Res.57，4940-4947 (1997))。
[0010]在美國目前具有活性B-NHL的127，000名患者中，約50%這些患者表現(xiàn)出DLBCL(中間等級)亞型(Morton 等人，Bloodl07，265-276 (2002))。盡管有用于 DLBCL患者的護(hù)理治療標(biāo)準(zhǔn)的利妥昔單抗(Rituxan)以及環(huán)磷酰胺、阿霉素、長春新堿、強(qiáng)的松(CHOP)，但是幾乎50%會復(fù)發(fā)。因此，在該疾病中，仍然也有未滿足的醫(yī)療需求。
[0011]概述
[0012]本發(fā)明提供抗-CD27L抗原結(jié)合蛋白，例如，抗體及其功能片段?？?CD27L抗原結(jié)合蛋白特別用于治療與異常細(xì)胞增殖(例如，癌癥)和/或炎癥相關(guān)的疾病和疾患的方法中。
[0013]在第一方面中，CD27L抗原結(jié)合蛋白包含:a)與SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69 或者 SEQ IDN0:70表示的氨基酸序列具有至少90%同一性、至少95%同一性或者相同的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；b)與 SEQ ID NO:17,SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQID NO:22, SEQ ID NO:23或者SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列具有至少90%同一性、至少95%同一性或者相同的重鏈可變結(jié)構(gòu)域；或者c) a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0014]第一方面的優(yōu)選抗原結(jié)合蛋白包括包含與SEQ ID NO:63表示的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一性或者相同的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID N0:17表示的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一性或者相同的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含與SEQ IDNO:64表示的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一性或者相同的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一性或者相同的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含與SEQ ID NO:65表示的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一性或者相同的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一'I"生或者相同的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含與SEQ ID NO:66表不的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一性或者相同的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一性或者相同的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含與SEQ IDNO:67表示的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一性或者相同的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一性或者相同的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含與SEQ ID NO:68表示的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一性或者相同的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一性或者相同的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含與SEQ ID NO:69表示的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一性或者相同的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID NO:23表示的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一性或者相同的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；以及包含與SEQ IDNO:70表示的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一性或者相同的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列具有至少90%、至少95%同一性或者相同的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些。
[0015]在第二方面中，CD27L抗原結(jié)合蛋白包含:a)與SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQID NO:65, SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69 或者 SEQ ID NO:70表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；b)與 SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23或者SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的重鏈可變結(jié)構(gòu)域；或者c)a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0016]第二方面的優(yōu)選抗原結(jié)合蛋白包括包含與SEQ ID NO:63表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID N0:17表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含與SEQ ID NO:64表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含與SEQ ID NO:65表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID NO: 19表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含與SEQ ID NO:66表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含與SEQ ID NO:67表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID N O:21表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含與SEQ ID NO:68表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID N0:22表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含與SEQ ID NO:69表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID NO:23表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；以及包含與SEQ ID NO:70表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列具有不超過十個或不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些。
[0017]在第三方面中，CD27L抗原結(jié)合蛋白包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和重鏈可變結(jié)構(gòu)域，該輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含:a)與SEQ ID NO:71表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:79表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2 ；以及與SEQ ID NO:87表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR3 ；b)與SEQ ID NO:72表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:80表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2 ；以及與SEQ ID NO:88表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR3 ；c)與SEQ ID NO:73表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:81表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2 ;以及與SEQ ID NO:89表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR3 ；d)與SEQ ID NO:74表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:82表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2 ;以及與SEQ ID NO:90表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR3 ；e)與SEQ ID NO:75表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:83表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2 ;以及與SEQ ID NO:91表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR3 ；f)與SEQ ID NO:76表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:84表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2 ;以及與SEQ ID NO:92表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR3 ；g)與SEQ ID NO:77表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:85表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2 ;以及與SEQ ID NO:93表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR3 ;或者h(yuǎn))與SEQ ID NO:78表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:86表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2 ；以及與SEQ ID NO:94表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR3 ;和所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含:i)與SEQ ID NO:25表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:33表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2 ;以及與SEQ ID NO:41表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ；j)與SEQ ID NO:26表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:34序列表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2 ；以及與SEQ ID NO:42表示的H⑶R3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ；k)與SEQ ID NO:27表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:35表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2 ；以及與SEQ ID NO:43表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ；1)與SEQ ID NO:28表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:36表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2 ；以及與SEQ ID NO:44表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ；m)與SEQ ID NO:29表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:37表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2 ；以及與SEQ ID NO:45表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ；n)與SEQ ID NO:30表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:38表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2 ；以及與SEQ ID NO:46表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ；o)與SEQ ID NO:31表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:39表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2 ；以及與SEQ ID NO:47表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ;或者P)與SEQ ID NO:32表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:40表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2 ；以及與SEQ ID NO:48表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3。
[0018]第三方面的優(yōu)選CD27L抗原結(jié)合蛋白包括包含a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和i)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含b)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和j)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含c)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和k)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含d)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和I)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含e)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和m)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含f)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和η)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；包含g)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和ο)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些；以及包含h)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和P)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的那些。
[0019]在本發(fā)明的第四方面中，第一、第二或第三方面的⑶27L抗原結(jié)合蛋白以小于或等于2xlO_nM的親和力結(jié)合人CD27L。
[0020]在本發(fā)明的第五方面中，第一、第二、第三或第四方面的⑶27L抗原結(jié)合蛋白抑制⑶27L與⑶27的結(jié)合。
[0021]在本發(fā)明的第六方面中，第一、第二、第三、第四或第五方面的⑶27L抗原結(jié)合蛋白為抗體，例如人抗體。優(yōu)選的抗體包括包含具有SEQ ID:56表示的氨基酸序列的輕鏈和具有SEQ ID NO: 10表示的氨基酸序列的重鏈的那些抗體；包含具有SEQ ID:57表示的氨基酸序列的輕鏈和具有SEQ ID NO: 11表示的氨基酸序列的重鏈的那些；包含具有SEQ ID:58表示的氨基酸序列的輕鏈和具有SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列的重鏈的那些；包含具有SEQ ID:59表示的氨基酸序列的輕鏈和具有SEQ ID NO:13表示的氨基酸序列的重鏈的那些；包含具有SEQ ID:60表示的氨基酸序列的輕鏈和具有SEQ ID N0:14表示的氨基酸序列的重鏈的那些；包含具有SEQ ID:61表示的氨基酸序列的輕鏈和具有SEQ ID NO:15表示的氨基酸序列的重鏈的那些；以及包含具有SEQ ID:62表示的氨基酸序列的輕鏈和具有SEQ ID NO:16表示的氨基酸序列的重鏈的那些。
[0022]在第七方面中，第一、第二、第三、第四、第五或第六方面的⑶27L抗原結(jié)合蛋白與藥物或化療劑綴合。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，使用接頭，使藥物或化療劑與抗原結(jié)合蛋白(例如抗體)綴合。優(yōu)選的接頭包括不可裂解的接頭，例如MCC。優(yōu)選的化療劑為DM1。因此，在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，第七方面提供通過MCC接頭與DMl綴合的第一、第二、第三、第四、第五或第六方面的CD2 7L抗原結(jié)合蛋白，該MCC接頭附接一個或多個賴氨酸殘基。
[0023]使DMl與⑶27L抗原結(jié)合蛋白(例如抗體)綴合的方法產(chǎn)生包含與DMl-綴合的抗體群的組合物，每個抗體具有一定范圍的DMl分子。可以測定組合物的平均數(shù)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，每個CD27L抗原結(jié)合蛋白(例如抗體)的DMl分子的平均數(shù)介于I和10之間、介于3和7之間或者介于4和6之間。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的第一、第二、第三、第四、第五、第六或第七方面的⑶27L抗原結(jié)合蛋白的組合物具有約4.0、約4.1、約4.2、約
4.3、約 4.4、約 4.5、約 4.6、約 4.7、約 4.8、約 4.9、約 5.0、約 5.1、約 5.2、約 5.3、約 5.4、約
5.5、約5.6、約5.7、約5.8、約5.9或約6.0的每個⑶27L抗原結(jié)合蛋白的DMl分子的平均數(shù)。這些組合物可含有治療有效量的CD27L抗原結(jié)合蛋白以及可被凍干。
[0024]在第八方面中，本發(fā)明提供編碼CD27L抗原結(jié)合蛋白的一種或多種多肽組分的分離的核酸，例如，抗體輕鏈或抗體重鏈。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸編碼多肽，該多肽包含:
[0025]a)與 SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69或者SEQ ID NO:70表示的氨基酸序列具有至少95%同一性的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；
[0026]b)與 SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:
21、SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23或者SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列具有至少95%同一性的重鏈可變結(jié)構(gòu)域；
[0027]c)與 SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:
67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69或者SEQ ID NO:70表示的氨基酸序列具有不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；
[0028]d)與 SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23或者SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列具有不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的重鏈可變結(jié)構(gòu)域；
[0029]e)輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包含:
[0030]i)與SEQ ID NO:71表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:79表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO:87表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ；
[0031]ii)與SEQ ID NO -J2表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:80表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO:88表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ；
[0032]iii)與SEQ ID NO:73表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:81表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2 ；以及與SEQ ID NO:89表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ；
[0033]iv)與SEQ ID NO:74表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:82表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO:9 0表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ；
[0034]V)與SEQ ID NO:75表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:83表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO:91表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ；
[0035]vi)與SEQ ID NO:76表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:84表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO:92表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ；
[0036]vii)與SEQ ID NO:77表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:85表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2 ；以及與SEQ ID NO:93表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR3 ;或者
[0037]viii)與SEQ ID NO:78表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:86表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2 ；以及與SEQ ID NO:94表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR3 ;或者
[0038]f)重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包含:
[0039]i)與SEQ ID NO:25表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:33表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO:41表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ；
[0040]ii)與SEQ ID NO:26表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:34序列表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2 ；以及與SEQ ID NO:42表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ；
[0041]iii)與SEQ ID NO:27表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:35表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2 ；以及與SEQ ID NO:43表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ；
[0042]iv)與SEQ ID NO:28表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:36表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO:44表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ；
[0043]V)與SEQ ID NO:29表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的H⑶Rl ;與SEQ ID NO:37表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO:45表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ；
[0044]vi)與SEQ I D NO:30表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:38表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO:46表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ；
[0045]vii)與SEQ ID NO:31表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:39表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2 ；以及與SEQ ID NO:47表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ;或者
[0046]viii)與SEQ ID NO:32表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:40表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2 ；以及與SEQ ID NO:48表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3。
[0047]在第八方面的某些實(shí)施方案中，多肽編碼抗體輕鏈并且與SEQ ID NO:49、SEQ IDNO:50, SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54 或者 SEQ ID NO:55表示的核苷酸序列具有至少80%、至少90%、至少95%或者100%同一性。在第八方面的其它實(shí)施方案中，多肽編碼抗體重鏈并且與SEQ ID N0:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQID NO:6,SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或者SEQ ID NO:9表示的核苷酸序列具有至少80%、至少90%、至少95%或者100%同一性。
[0048]在第九方面中，本發(fā)明提供包含一種或多種第八方面的分離的核酸的表達(dá)載體。在某些實(shí)施方案中，表達(dá)載體編碼抗體輕鏈、抗體重鏈或者抗體輕鏈和重鏈兩者。
[0049]在第十方面中，本發(fā)明提供重組宿主細(xì)胞，該重組宿主細(xì)胞包含可操作連接啟動子的一種或多種第八方面的分離的核酸；該重組宿主細(xì)胞包括包含一種或多種本發(fā)明的第九方面的表達(dá)載體的重組宿主細(xì)胞。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，重組宿主細(xì)胞分泌結(jié)合CD27L的抗體。優(yōu)選的宿主細(xì)胞為哺乳動物宿主細(xì)胞，包括CHO細(xì)胞系。
[0050]在第十一方面，本發(fā)明提供通過使接頭和藥物(例如，化療劑)與第一、第二、第三、第四、第五或第六方面的CD27L抗原結(jié)合蛋白的任一種綴合制備第七方面的CD27L抗體藥物綴合物的方法。接頭和藥物可首先連接，然后與CD27L抗原結(jié)合蛋白綴合；或者接頭可首先與CD27L抗原結(jié)合蛋白綴合，然后連接藥物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，接頭為MCC和藥物為DM1。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，⑶27L抗原結(jié)合蛋白為包含如SEQ ID NO:63表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:17表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Abl);包含如SEQ ID NO:64表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:18表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab2);包含如SEQ ID N0:65表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:19表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab3);包含如SEQ ID NO:66表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:20表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab4);包含如SEQ ID NO:67表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:21表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab5);包含如SEQ ID NO:68表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:22表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab6);包含如SEQ ID NO:69表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:23表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab7);或者包含如SEQ ID NO:70表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID N0:24表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab8)，該抗體通過MCC來與DMl綴合，即通過在抗體內(nèi)的一個或多個賴氨酸殘基與MCC或MCC-DMl化學(xué)反應(yīng)。
[0051]在第十二方面中，本發(fā)明提供治療癌癥的方法，它包括向患者施用治療有效量的組合物，該組合物包含治療有效量的第一、第二、第三、第四、第五或第六方面的CD27L抗原結(jié)合蛋白。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，CD27L抗原結(jié)合蛋白為包含如SEQ ID NO:63表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:17表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Abl);包含如SEQ ID NO:64表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID N0:18表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab2);包含如SEQ ID NO:65表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:19表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab3);包含如SEQ ID NO:66表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:20表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab4);包含如SEQ ID NO:67表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:21表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab5);包含如SEQ ID NO:68表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:22表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab6);包含如SEQ ID NO:69表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:23表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab7);或者如SEQ ID NO:70表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID N0:24表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab8)。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，CD27L抗原結(jié)合蛋白通過接頭(MCC)與化療劑(例如，DMl)綴合。在第十二方面的其它優(yōu)選實(shí)施方案中，抗體包含增強(qiáng)的效應(yīng)子功能。
[0052]在一些實(shí)施方案中，向具有腎細(xì)胞癌(RCC)、透明細(xì)胞RCC、頭頸癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、乳腺癌、腦腫瘤、鼻咽癌、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、伯基特氏淋巴瘤、間變性大細(xì)胞淋巴瘤(ALCL)、多發(fā)性骨髓瘤、皮膚T-細(xì)胞淋巴瘤、結(jié)節(jié)性小卵裂細(xì)胞淋巴瘤(nodular small cleaved-celllymphomas)、淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、外周T-細(xì)胞淋巴瘤、倫南德氏淋巴瘤(Lennert' slymphomas)、免疫母細(xì)胞性淋巴瘤、T-細(xì)胞白血病/淋巴瘤(ATLL)、成人T-細(xì)胞白血病(T-ALL)、中心母細(xì)胞/中心細(xì)胞(cb/cc)濾泡性淋巴瘤癌(entroblastic/centrocytic (cb/cc) follicular lymphoma cance)、B 系彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤(diffuselarge cell lymphoma of B lineage)、血管免疫母細(xì)胞性淋巴結(jié)病(AILD)樣T細(xì)胞淋巴瘤(ang1immunoblastic lymphadenopathy (AILD) -like T cell lymphoma)、HIV 相關(guān)體腔型淋巴瘤(HIV associated body cavity based lymphoma)、胚胎癌、未分化鼻咽癌(undifferentiated carcinoma o f the rhino-pharynx)、卡斯?fàn)柭喜?Castleman' sdisease)、卡波西氏肉瘤(Kaposi ' s Sarcoma)、多發(fā)性骨髓瘤、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥(Waldenstrom' s macroglobulinemia)或者其它B細(xì)胞淋巴瘤的患者施用⑶27L抗原結(jié)合蛋白。
[0053]在某些實(shí)施方案中，在施用⑶27L抗原結(jié)合蛋白之前將來自患者的樣品用于測試⑶27L表達(dá)。通過測試在樣品中編碼⑶27L的RNA的存在或⑶27L蛋白的存在可測定⑶27L表達(dá)。樣品可以為血液樣品或者活組織檢查。
[0054]在第十三方面中，本發(fā)明提供治療自身免疫或炎性疾患的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治療有效量的第一、第二、第三、第四、第五或第六方面的任一種的CD27L抗原結(jié)合蛋白。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，CD27L抗原結(jié)合蛋白為包含如SEQ ID N0:63表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:17表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Abl);包含如SEQ ID NO:64表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:18表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab2);包含如SEQ ID N0:65表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:19表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab3);包含如SEQ ID NO:66表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:20表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab4);包含如SEQ ID NO:67表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:21表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab5);包含如SEQ ID NO:68表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:22表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab6);包含如SEQ ID NO:69表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:23表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab7);或者包含如SEQ ID NO:70表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID N0:24表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列的抗體(例如，Ab8)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，CD27L抗原結(jié)合蛋白抑制CD27與CD27L的結(jié)合。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，自身免疫或炎性疾患為全身性紅斑狼瘡(SLE)、胰島素依賴型糖尿病(IDDM)、炎性腸道疾病(IBD)、多發(fā)性硬化(MS)、牛皮癬、自身免疫性甲狀腺炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)或者腎小球性腎炎。在其它實(shí)施方案中，該治療抑制或預(yù)防在患者中移植排斥或移植物抗宿王病。
[0055]附圖簡述
[0056]圖1.⑶27L抗原結(jié)合蛋白的示例性實(shí)施方案的功能和物理特征的概況。
[0057]圖2.隨著時間的推移(A) Ab4 (A4)和Ab8 (A8)以及它們的綴合對應(yīng)物向786-0細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)化水平和速率的測量。
[0058]圖3.在增加抗鏈霉抗生素蛋白-MCC-DMl、Ab4_MCC_DMl和Ab8_MCC_DMl濃度下培養(yǎng)786-0細(xì)胞4天。使用CELL-TITER-GL0試劑測定對細(xì)胞生長的作用，其使用熒光示值讀數(shù)(luminescent read-out)測定細(xì)胞數(shù)目。
[0059]圖4.在786-0異種移植物模型中Ab4_MCC_DMl和Ab8_MCC_DMl的劑量反應(yīng)。在第24天的靜脈內(nèi)劑量在指示劑量下通過箭頭表示。
[0060]圖5.在Cak1-1異種移植物模型中Ab4_MCC_DMl和Ab8_MCC_DMl的劑量反應(yīng)。通過箭頭表示靜脈內(nèi)給藥方案。
[0061]圖6.在Raji異種移植物模型中Ab4_MCC_DMl的劑量反應(yīng)。通過箭頭表示靜脈內(nèi)給藥方案。
[0062]圖7.在786-0異種移植物模型中Ab4_MCC_DMl的不同劑量反應(yīng)。
[0063]圖8.針對Raji腫瘤細(xì)胞的Ab4_MCC_DMl抗體依賴細(xì)胞細(xì)胞毒性(ADCC)分析。
[0064]圖9.針對Raji和786_0腫瘤細(xì)胞的Ab4_MCC_DMl抗體依賴細(xì)胞吞噬作用(ADCP)分析。
[0065]圖10.通過掩蔽型(masked) IHC得出“陽性”的主要冷凍腫瘤樣品的⑶27L表達(dá)的比較。結(jié)果表明:在ccRCC患者樣品中，總體⑶27L蛋白表達(dá)最高，隨后為DLBCL (彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤)；B-CLL和FL樣品。
[0066]圖11.⑶27L mRNA和蛋白表達(dá)分析的結(jié)果。結(jié)果表明:在RCC、B-NHL和CLL中⑶27L表達(dá)很普遍。
[0067]圖12示出在本文中實(shí)施例2中描述的Ab-MCC-DMlADC的結(jié)構(gòu)。
[0068]具體實(shí)施方案的詳細(xì)描述
[0069]本文所使用的章節(jié)標(biāo)題僅用于組織目的，不應(yīng)當(dāng)解釋為限制描述的主題。在該說明書的主體內(nèi)引用的所有參考文獻(xiàn)通過引用方式明確地整體并入。
[0070]標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可用于重組DNA、寡核苷酸合成、組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化、蛋白純化等。根據(jù)制造商的說明書或者如本領(lǐng)域通常所完成或者如本文所述可進(jìn)行酶反應(yīng)和純化技術(shù)。根據(jù)本領(lǐng)域眾所周知的常見方法和如在說明書整篇中引用和討論的各種一般和更加具體引用中所述，通?？蛇M(jìn)行以下程序和技術(shù)。參見例如，Sambrook等人,2001, Molecular Cloning:A Laboratory Manuel,第 3 版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, cold SpringHarbor, N.Y.，其通過引用方式并入本文中用于任何目的。除非提供具體定義，則與本文所述的分析化學(xué)、有機(jī)化學(xué)以及醫(yī)療和藥物化學(xué)相關(guān)的所用術(shù)語以及實(shí)驗(yàn)室程序和技術(shù)為眾所周知和本領(lǐng)域常用的那些。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可用于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、配制以及患者的遞送和治療。
[0071]CD27L
[0072]抗原結(jié)合蛋白結(jié)合⑶27L，它也稱為⑶70和TNFSF7。⑶27L首先在美國專利N0.5，573，924中描述。本文提供的示例性人⑶27L氨基酸序列為SEQ ID NO:1，其對應(yīng)NCBI參考序列NP_001423.1(G1:4507605)。在某些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白阻斷⑶27L與它的受體CD27的相互作用。提供的示例性CD27氨基酸序列為SEQ ID NO:2，其對應(yīng)Swiss-Prot:P26842.2(G1:269849546)。成熟 CD27 氨基酸序列對應(yīng) SEQ ID NO:2 的氨基酸 20-260。
[0073]CD27L杭原結(jié)合蛋白
[0074]本發(fā)明提供特異性結(jié)合CD27L的抗原結(jié)合蛋白?？乖Y(jié)合蛋白的實(shí)施方案包括特異性結(jié)合CD27L的肽和/或多肽。這些肽或多肽可任選包括一種或多種端口 -翻譯修飾(port-translat1nal modificat1n)。抗原結(jié)合蛋白的實(shí)施方案包括特異性結(jié)合⑶27L的如本文各自定義的抗體及其片段。這些包括特異性結(jié)合人CD27L的抗體，包括抑制CD27L結(jié)合和/或活化CD27的那些抗體。
[0075]本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白特異性結(jié)合CD27L。如本文所使用的“特異性結(jié)合”是指抗原結(jié)合蛋白比其它蛋白優(yōu)先結(jié)合CD27L。在一些實(shí)施方案中，“特異性結(jié)合”是指相比其它蛋白，⑶27L抗原結(jié)合蛋白具有對⑶27L的更高親和力。特異性結(jié)合⑶27L的⑶27L抗原結(jié)合蛋白可具有對人CD27L的以下結(jié)合親和力:小于或等于1x10_7M、小于或等于2xlO_7M、小于或等于3xlO_7M、小于或等于4xlO_7M、小于或等于5xlO_7M、小于或等于6xlO_7M、小于或等于7χ1()-7Μ、小于或等于8X10_7M、小于或等于9χ1()-7Μ、小于或等于1χ10_8Μ、小于或等于2xlO_8M、小于或等于3χ10_8Μ、小于或等于4χ10_8Μ、小于或等于5χ10_8Μ、小于或等于6χ10_8Μ、小于或等于7χ10_8Μ、小于或等于8χ10_8Μ、小于或等于9χ10_8Μ、小于或等于1χ10_9Μ、小于或等于2χ10_9Μ、小于或等于3χ10_9Μ、小于或等于4χ10_9Μ、小于或等于5χ10_9Μ、小于或等于6xlO_9M、小于或等于7χ10_9Μ、小于或等于8χ10_9Μ、小于或等于9χ10_9Μ、小于或等于ΙχΙΟ,Μ、小于或等于2x10—、、小于或等于3x10—、、小于或等于‘χΙΟ,Μ、小于或等于δχΙΟ,Μ、小于或等于θχΙΟ,Μ、小于或等于?χΙΟ,Μ、小于或等于δχΙΟ,Μ、小于或等于9x10—、、小于或等于1Χ10_ηΜ、小于或等于2Χ10_ηΜ、小于或等于3Χ10_ηΜ、小于或等于4Χ10_ηΜ、小于或等于5Χ10_ηΜ、小于或等于6Χ10_ηΜ、小于或等于7Χ10_ηΜ、小于或等于8Χ10_ηΜ、小于或等于9χ10_ηΜ、小于或等于1χ10_12Μ、小于或等于2χ10_12Μ、小于或等于3χ10_12Μ、小于或等于4χ10_12Μ、小于或等于5χ10_12Μ、小于或等于6χ10_12Μ、小于或等于7χ10_12Μ、小于或等于8χ10_12Μ或者小于或等于9χ10_12Μ。測定抗原結(jié)合蛋白的結(jié)合親和力的方法是本領(lǐng)域眾所周知的。實(shí)施例1提供示例性方法。
[0076]應(yīng)理解，當(dāng)提及本文⑶27L-結(jié)合抗體的各個實(shí)施方案時，它也涵蓋其⑶27L-結(jié)合片段。CD27L-結(jié)合片段包含保留特異性結(jié)合CD27L能力的本文所述的任何抗體片段或者結(jié)構(gòu)域。CD27L-結(jié)合片段可以在本文所述的任何支架中。
[0077]在某些治療實(shí)施方案中，⑶27L抗原結(jié)合蛋白抑制⑶27L與⑶27的結(jié)合和/或抑制與⑶27L和⑶27的結(jié)合相關(guān)的一種或多種生物活性，例如，⑶27-介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)。這些抗原結(jié)合蛋白被稱為“中和”。在某些實(shí)施方案中，中和CD27L抗原結(jié)合蛋白特異性結(jié)合⑶27L和抑制介于10%至100%之間來自任意處的⑶27L與⑶27的結(jié)合，例如抑制了至少約 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、
44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、
69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、
94、95、96、97、98、99%或更多。例如，通過測定抗原結(jié)合蛋白阻斷⑶27_Fc與MP-1細(xì)胞的結(jié)合能力可測試⑶27L抗原結(jié)合蛋白的中和能力(Slack等人，Int.1mmunol.(1995)7(7):1087-1092))。
[0078]抗原結(jié)合蛋白的實(shí)施方案包含具有一個或多個互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)的如本文各自定義的支架結(jié)構(gòu)。實(shí)施方案還包括包含支架結(jié)構(gòu)的抗原結(jié)合蛋白，該支架結(jié)構(gòu)具有一個或多個抗體可變結(jié)構(gòu)域(重或輕)。實(shí)施方案包括抗體，該抗體包含選自Abl輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(LCv)、Ab2LCv、Ab3LCv、Ab4LCv、Ab5LCv、Ab6LCv、Ab7LCv 和 Ab8LCv(分別為 SEQ IDNO:63-70)組成的組的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和/或選自Abl重鏈可變結(jié)構(gòu)域(HCv)、Ab2HCv、Ab3HCv、Ab4HCv、Ab5HCv、Ab6HCv、Ab7HCv 和 Ab8HCv(分別為 SEQ ID NO:17-24)組成的組的重鏈可變結(jié)構(gòu)域、及其片段、衍生物、突變蛋白和變體。
[0079]包含AblLCv的示例性輕鏈為包含SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的輕鏈。
[0080]包含Ab2LCv的示例性輕鏈為包含SEQ ID NO:57表示的氨基酸序列的輕鏈。
[0081]包含Ab4LCv的示例性輕鏈為包含SEQ ID NO:58表示的氨基酸序列的輕鏈。
[0082]包含Ab5LCv的示例性輕鏈為包含SEQ ID NO:59表示的氨基酸序列的輕鏈。
[0083]包含Ab6LCv的示例性輕鏈為包含SEQ ID NO:60表示的氨基酸序列的輕鏈。
[0084]包含Ab7LCv的示例性輕鏈為包含SEQ ID NO:61表示的氨基酸序列的輕鏈。
[0085]包含Ab8LCv的示例性輕鏈為包含SEQ ID NO:62表示的氨基酸序列的輕鏈。
[0086]包含AblHCv的示例性重鏈為包含SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列的重鏈。
[0087]包含Ab2HCv的示例性重鏈為包含SEQ ID NO: 11表示的氨基酸序列的重鏈。
[0088]包含Ab4HCv的示例性重鏈為包含SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列的重鏈。
[0089]包含Ab5HCv的示例性重鏈為包含SEQ ID NO:13表示的氨基酸序列的重鏈。
[0090]包含Ab6HCv的示例性重鏈為包含SEQ ID NO:14表示的氨基酸序列的重鏈。
[0091]包含Ab7HCv的示例性重鏈為包含SEQ ID NO:15表示的氨基酸序列的重鏈。
[0092]包含Ab8HCv的示例性重鏈為包含SEQ ID NO:16表示的氨基酸序列的重鏈。
[0093]設(shè)想的支架另外的例子包括:纖連蛋白、新制癌菌素CBM4-2、脂質(zhì)運(yùn)載蛋白、T-細(xì)胞受體、蛋白-A結(jié)構(gòu)域(蛋白Z)、Im9、TPR蛋白、鋅指結(jié)構(gòu)域、pVII1、禽胰多肽、GCN4、Wff結(jié)構(gòu)域Src同源結(jié)構(gòu)域3、PDZ結(jié)構(gòu)域、TEM-1 β -內(nèi)酰胺酶、硫氧還蛋白、葡萄球菌核酸酶、PHD-指結(jié)構(gòu)域、CL-2、BPT1、APP1、HPST1、大腸桿菌素(ecotin)、LAC1-DU LDT1、MT1-11、蝎毒素、昆蟲抵抗素-A肽、EET1-11、Min-23、CBD、PBP、細(xì)胞色素b-562、Ldl受體結(jié)構(gòu)域、Y-晶體蛋白、遍在蛋白、運(yùn)鐵蛋白和/或C-型凝素樣結(jié)構(gòu)域。非抗體支架和它們作為治療方法的用途在 Gebauer 和 Skerra, Curr.0pin.Chem.B1l.，13:245-255 (2009)以及 Binz 等人，Nat.B1tech.,23(10) =1257-1268(2005)中綜述，其通過引用方式整體并入本文。
[0094]本發(fā)明的一些方面包括包含以下可變結(jié)構(gòu)域的抗體:AblLCv/AblHCv(SEQ ID NO:63/SEQ ID NO:17)、Ab2LCv/Ab2HCv(SEQ ID NO:64/SEQ ID NO: 18)、Ab3LCv/Ab3HCv (SEQID NO:65/SEQ ID NO:19)、Ab4LCv/Ab4HCv (SEQ ID NO:66/SEQ ID NO:20)、Ab5LCv/Ab5HCv(SEQ ID NO:67/SEQ ID NO:21)、Ab6LCv/Ab6HCv(SEQ ID NO:68/SEQ ID NO:22)、Ab7LCv/Ab7HCv(SEQ ID NO:69/SEQ ID NO:23)、Ab8LCv/Ab8HCv(SEQ ID NO:70/SEQ ID NO:24)、及其組合、及其片段、衍生物、突變蛋白和變體。
[0095]本發(fā)明的示例性抗體包括Abl (SEQ ID NO:56/SEQ ID NO: 10)、Ab2 (SEQ ID NO:57/SEQ ID NO:11)、Ab4 (SEQ ID NO:58/SEQ ID NO:12)、Ab5 (SEQ ID NO:59/SEQ ID NO:13)、Ab6(SEQ ID NO:60/SEQ ID NO:14)、Ab7 (SEQ ID NO:61/SEQ ID NO:15)、Ab8 (SEQ IDNO:62/SEQ ID NO:16)。
[0096]通常，抗體輕和重鏈的各可變結(jié)構(gòu)域包含三種⑶R。重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含重鏈CDRl (HCDRl)、重鏈CDR2 (HCDR2)和重鏈CDR3 (HCDR3)。輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含輕鏈⑶Rl (IXDRl)、輕鏈⑶R2 (IXDR2)和輕鏈⑶R3 (IXDR3)。在某些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含在本文所述的優(yōu)選可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)含有的一種或多種CDR。
[0097]這些⑶R的例子包括但不限于:
[0098]AblLCv:LCDR1 (SEQ ID NO:71)、LCDR2 (SEQ ID NO:79)和 LCDR3 (SEQ ID NO:87)的 CDR ；
[0099]Ab2LCv:LCDR1 (SEQ ID NO:72)、LCDR2 (SEQ ID NO:80)和 LCDR3 (SEQ ID NO:88)的 CDR ；
[0100]Ab3LCv:LCDRl (SEQ ID NO:73)、LCDR2 (SEQ ID NO:81)和 LCDR3 (SEQ ID NO:89)的 CDR ；
[0101]Ab4LCv:LCDRl (SEQ ID NO:74)、LCDR2 (SEQ ID NO:82)和 LCDR3 (SEQ ID NO:90)的 CDR ；
[0102]Ab5LCv:LCDRl (SEQ ID NO:75)、LCDR2 (SEQ ID NO:83)和 LCDR3 (SEQ ID NO:91)的 CDR ；
[0103]Ab6LCv:LCDRl (SEQ ID NO:76)、LCDR2 (SEQ ID NO:84)和 LCDR3 (SEQ ID NO:92)的 CDR ；
[0104]Ab7LCv:LCDRl (SEQ ID NO:77)、LCDR2 (SEQ ID NO:85)和 LCDR3 (SEQ ID NO:93)的 CDR ；
[0105]Ab8LCv:LCDRl (SEQ ID NO:78)、LCDR2 (SEQ ID NO:86)和 LCDR3 (SEQ ID NO:94)的 CDR ；
[0106]AblHCv:HCDR1 (SEQ ID NO:25)、HCDR2 (SEQ ID NO:33)和 HCDR3 (SEQ ID NO:41)的 CDR ；
[0107]Ab2HCv:HCDR1 (SEQ ID NO:26)、HCDR2 (SEQ ID NO:34)和 HCDR3 (SEQ ID NO:42)的 CDR ；
[0108]Ab3HCv:HCDR1 (SEQ ID NO:27)、HCDR2 (SEQ ID NO:35)和 HCDR3 (SEQ ID NO:43)的 CDR ；
[0109]Ab4HCv:HCDR1 (SEQ ID NO:28)、HCDR2 (SEQ ID NO:36)和 HCDR3 (SEQ ID NO:44)的 CDR ；
[0110]Ab5HCv:HCDR1 (SEQ ID NO:29)、HCDR2 (SEQ ID NO:37)和 HCDR3 (SEQ ID NO:45)的 CDR ；
[0111]Ab6HCv:HCDR1 (SEQ ID NO:30)、HCDR2 (SEQ ID NO:38)和 HCDR3 (SEQ ID NO:46)的 CDR ；
[0112]Ab7HCv:HCDR1 (SEQ ID NO:31)、HCDR2 (SEQ ID NO:39)和 HCDR3 (SEQ ID NO:47)的CDR ；以及
[0113]Ab8HCv:HCDR1 (SEQ ID NO:32)、HCDR2 (SEQ ID NO:40)和 HCDR3 (SEQ ID NO:48)的 CDR。
[0114]在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含:A)包含具有選自SEQ ID NO:71、72、73、
74、75、76、77和78組成的組的氨基酸序列的LCDRl ;具有選自SEQ ID NO:79、80、81、82、83、
84、85和86組成的組的氨基酸序列的LCDR2 ;和/或具有選自SEQ ID NO:87、88、89、90、91、92、93和94組成的組的氨基酸序列的IXDR3的多肽(例如，輕鏈)；和/或B)包含具有選自SEQ ID N0:25、26、27、28、29、30、31和32組成的組的氨基酸序列的HCDRl ;具有選自SEQ ID NO: 33、34、35、36、37、38、39和40組成的組的氨基酸序列的HCDR2和/或具有選自SEQ ID NO:41、42、43、44、45、46、47和48組成的組的氨基酸序列的HCDR3的多肽(例如，
重鏈)。
[0115]在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含:A)包含AblLCv、Ab2LCv、Ab3LCv、Ab4LCv、Ab5LCv、Ab6LCv、Ab7LCv 和 Ab8LCv 中任一種的 LCDR1、LCDR2 和 LCDR3 的輕鏈氨基酸序列；和抝包含 AblHCv、Ab2HCv、Ab3HCv、Ab4HCv、Ab5HCv、Ab6HCv、Ab7HCv和Ab8HCv 中任一種的HCDRl、HCDR2和HCDR3的重鏈氨基酸序列。
[0116]在某些實(shí)施方案中，⑶R包括與本文所示的示例性⑶R不超過一個、不超過兩個、不超過三個、不超過四個、不超過五個或者不超過六個氨基酸添加、缺失或者置換。
[0117]本發(fā)明的一些方面包括包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的抗體，該輕鏈可變結(jié)構(gòu)域選自SEQID NO:63、64、65、66、67、68、69和70組成的組。本發(fā)明的一些方面包括包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域的抗體，該重鏈可變結(jié)構(gòu)域選自SEQ ID N0:17、18、19、20、21、22、23和24組成的組。而且，本發(fā)明的一些方面包括包含A)選自SEQ ID NO:63、64、65、66、67、68、69和70組成的組的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和B)選自SEQ ID N0:17、18、19、20、21、22、23和24組成的組的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的抗體。
[0118]本發(fā)明的抗體可包含本領(lǐng)域已知的任何恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)可以為例如K-或λ-型輕鏈恒定區(qū)，例如，人K-或λ-型輕鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)可以為例如，α-、δ-、ε _、Y或μ -型重鏈恒定區(qū),例如,人α-、δ-、ε-、y-或μ-型重鏈恒定區(qū)。在一個實(shí)施方案中，輕或重鏈恒定區(qū)為天然存在的恒定區(qū)的片段、衍生物、變體或突變蛋白。
[0119]本發(fā)明的一些方面包括包含輕鏈可變區(qū)的抗體，該輕鏈可變區(qū)選自具有不超過一個、不超過兩個、不超過三個、不超過四個、不超過五個、不超過六個、不超過七個、不超過八個、不超過九個或不超過十個氨基酸添加、缺失或者置換的SEQ ID NO:63、64、65、66、67、68,69和70組成的組。本發(fā)明的一些方面包括包含重鏈可變區(qū)的抗體，該重鏈可變區(qū)選自具有不超過一個、不超過兩個、不超過三個、不超過四個、不超過五個、不超過六個、不超過七個、不超過八個、不超過九個或不超過十個氨基酸添加、缺失或者置換的SEQ ID NO:17,
18、19、20、21、22、23和24組成的組。而且，本發(fā)明的一些方面包括抗體，其包含:A)包含具有不超過一個、不超過兩個、不超過三個、不超過四個、不超過五個、不超過六個、不超過七個、不超過八個、不超過九個或不超過十個氨基酸添加、缺失或者置換的選自SEQ ID NO:
63、64、65、66、67、68、69和70組成的組的輕鏈可變區(qū)；和B)具有不超過一個、不超過兩個、不超過三個、不超過四個、不超過五個、不超過六個、不超過七個、不超過八個、不超過九個或不超過十個氨基酸添加、缺失或者置換的選自SEQ ID N0:17、18、19、20、21、22、23和24組成的組的重鏈可變區(qū)。例如，在某些示例性實(shí)施方案中，抗體包含:1)SEQ ID NO:66表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的變體，其中在位置51處苯丙氨酸突變?yōu)榱涟彼岷?或在位置105處脯氨酸突變?yōu)楦拾彼峄蚬劝滨０罚?) SEQ ID NO:20表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的變體，其中在位置I處谷氨酰胺突變?yōu)楣劝彼岷?或在位置16處精氨酸突變?yōu)楦拾彼?；或者SEQ ID NO:66表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的變體，其中在位置51處苯丙氨酸突變?yōu)榱涟彼岷?或在位置105處脯氨酸突變?yōu)楦拾彼峄蚬劝滨０?；以及SEQ ID NO:20表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的變體，其中在位置I處谷氨酰胺突變?yōu)楣劝彼岷?或在位置16處精氨酸突變?yōu)楦拾彼帷?br> [0120]在一種變型中，抗原結(jié)合蛋白包含與選自SEQ ID NO:63、64、65、66、67、68、69和70組成的組的輕鏈氨基酸序列具有至少80 %、至少81%、至少82 %、至少83 %、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91 %、至少92%、至少93 %、至少94 %、至少95 %、至少96 %、至少97 %、至少98 %或至少99 %同一性的氨基酸序列。在另一變型中，抗原結(jié)合蛋白包含與選自SEQ ID N0:17、18、19、20、21、22、23和24組成的組的重鏈氨基酸序列具有至少80%、至少81 %、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91 %、至少92%、至少93 %、至少94 %、至少95 %、至少96 %、至少97 %、至少98 %或至少99 %同一性的氨基酸序列。在又進(jìn)一步的實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含:A)與選自SEQ ID N0:63、64、65、66、67、
68、69和70組成的組的輕鏈氨基酸序列具有至少80%、至少81 %、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性的氨基酸序列；和抝與選自SEQ ID NO:17、18、19、20、21、22、23和24組成的組的重鏈氨基酸序列具有至少80 %、至少81%、至少82 %、至少83 %、至少84 %、至少85 %、至少86 %、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95 %、至少96 %、至少97 %、至少98 %或至少99 %同一性的氨基酸序列。
[0121]在某些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含輕鏈和/或重鏈CDR3。在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含選自 SEQ ID NO:87、88、89、90、91、92、93、94、41、42、43、44、45、46、47 和48表示的序列的組的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，氨基酸序列包括與SEQ ID NO:87,
88、89、90、91、92、93、94、41、42、43、44、45、46、47 和 48 表示的示例性序列的不超過一個、不超過兩個、不超過三個、不超過四個、不超過五個或不超過六個氨基酸添加、缺失或者置換。因此，本發(fā)明的實(shí)施方案包括抗原結(jié)合蛋白，其包含與選自SEQ ID NO:87、88、89、90、
91、92、93、94、41、42、43、44、45、46、47和48表示的序列的組的氨基酸序列具有至少80%、至少81 %、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性的氨基酸序列。
[0122]在某些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含輕鏈和/或重鏈CDR2。在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含選自 SEQ ID NO:79、80、81、82、83、84、85、86、33、34、35、36、37、38、39 和40表示的序列的組的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，氨基酸序列包括與SEQ ID NO:79,
80、81、82、83、84、85、86、33、34、35、36、37、38、39 和 40 表示的示例性序列的不超過一個、不超過兩個、不超過三個、不超過四個、不超過五個、或不超過六個氨基酸添加、缺失或者置換。因此，本發(fā)明的實(shí)施方案包括抗原結(jié)合蛋白，其包含與選自SEQ ID N0:79、80、81、82、
83、84、85、86、33、34、35、36、37、38、39和40表示的序列的組的氨基酸序列具有至少80%、至少81 %、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性的氨基酸序列。
[0123]在某些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含輕鏈和/或重鏈CDRl。在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含選自 SEQ ID NO:71、72、73、74、75、76、77、78、25、26、27、28、29、30、31 和32表示的序列的組的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，氨基酸序列包括與SEQ ID NO:7U72、73、74、75、76、77、78、25、26、27、28、29、30、31 和 32 表示的示例性序列的不超過一個、不超過兩個、不超過三個、不超過四個、不超過五個、或不超過六個氨基酸添加、缺失或者置換。因此，本發(fā)明的實(shí)施方案包括抗原結(jié)合蛋白，其包含與選自SEQ ID N0:71、72、73、74、
75、76、77、78、25、26、27、28、29、30、31和32表示的序列的組的氨基酸序列具有至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性的氨基酸序列。
[0124]本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白包含常見抗體的支架，其分別包括人和單克隆抗體、雙特異性抗體、雙體、微抗體、結(jié)構(gòu)域抗體、合成抗體(有時本文稱為“抗體模擬物”)、嵌合抗體、抗體融合物(有時稱為“抗體綴合物”)以及它們各自的片段?？蓪⑸鲜鯟DR(包括CDR的各種組合)移植至以下任意支架內(nèi)。
[0125]如本文所使用，術(shù)語“抗體”是指如本文分別所述包含特異性結(jié)合抗原的一條或多條多肽鏈的各種形式的單體或多聚體蛋白。在某些實(shí)施方案中，通過重組DNA技術(shù)來產(chǎn)生抗體。在另外的實(shí)施方案中，通過天然存在的抗體的酶或化學(xué)裂解來產(chǎn)生抗體。在另一方面中，抗體選自以下組成的組:a)人抗體；b)人源化抗體；c)嵌合抗體；d)單克隆抗體；e)多克隆抗體；f)重組抗體；g)抗原結(jié)合片段；h)單鏈抗體；i)雙鏈抗體；j)三鏈抗體；k)四鏈抗體;l)Fab片段;m)F(ab，)2片段；n) IgA抗體；o) IgD抗體；p) IgE抗體；q) IgGl抗體；r) IgG2抗體；s) IgG3抗體；t) IgG4抗體；以及u) IgM抗體。
[0126]可變區(qū)包含嵌入構(gòu)架區(qū)(稱為構(gòu)架區(qū)FR1、FR2、FR3和FR4)內(nèi)的至少三個重或輕鏈 CDR。Kabat 等人，1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, PublicHealth Service N.1.H., Bethesda, MD。常見抗體結(jié)構(gòu)單元通常包含四聚體。各四聚體通常由兩個相同的多肽鏈對構(gòu)成，各對具有一個“輕”和一個“重”鏈。各鏈的氨基末端部分包括主要負(fù)責(zé)抗原識別的約100至110或更多個氨基酸的可變區(qū)。各鏈的羧基末端部分定義主要負(fù)責(zé)效應(yīng)子功能的恒定區(qū)。人輕鏈分為K或λ輕鏈。重鏈分為μ、δ、Y、α、或ε，并分別定義抗體的同種型為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。IgG具有多個亞類，其包括但不限于IgGU IgG2、IgG3和IgG4。IgM具有包括但不限于IgMl和IgM2的亞類。本發(fā)明的實(shí)施方案包括并入如本文所述的抗原結(jié)合蛋白的可變結(jié)構(gòu)域或CDR的抗體的所有這些類別和亞類。
[0127]一些天然存在的抗體(例如在駱駝和羊駝中發(fā)現(xiàn)的那些)為由兩條重鏈組成的二聚體，它沒有包括輕鏈。本發(fā)明涵蓋可結(jié)合CD27L的兩條重鏈的二聚抗體、或其片段。
[0128]重和輕鏈的可變區(qū)通常具有與通過三個高可變區(qū)連接的相對保守構(gòu)架區(qū)(FR)相同的基本結(jié)構(gòu)，即，互補(bǔ)性決定區(qū)或CDR。CDR主要負(fù)責(zé)抗原識別和結(jié)合。來自每對兩條鏈的⑶R通過構(gòu)架區(qū)對齊，使能夠結(jié)合特異性表位。由N-末端至C-末端，輕和重鏈均包含結(jié)構(gòu)域FRl、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。氨基酸與各結(jié)構(gòu)域的對齊是依據(jù)Kabat的定義。
[0129]⑶R構(gòu)成抗原結(jié)合的主要表面接觸點(diǎn)。⑶R3或者輕鏈以及特別是重鏈的⑶R3可構(gòu)成在輕和重鏈可變區(qū)內(nèi)抗原結(jié)合的最重要決定簇。在一些抗體中，重鏈⑶R3表現(xiàn)出構(gòu)成在抗原和抗體之間接觸的主要區(qū)域。僅改變CDR3的體外選擇方案可用于改變抗體的結(jié)合性質(zhì)或者測定何種殘基有助于抗原的結(jié)合。
[0130]天然存在的抗體通常包括信號序列，其引導(dǎo)抗體進(jìn)入蛋白分泌的細(xì)胞途徑并且其通常不存在于成熟的抗體中。編碼本發(fā)明的抗體的多核苷酸可編碼如下所述的天然存在的信號序列或異源性信號序列。
[0131]在一個實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白是包含一至六種本文所述的示例性CDR的抗體。本發(fā)明的抗體可具有包括IgM、IgG(包括IgGU IgG2、IgG3、IgG4)、IgD、IgA或IgE抗體的任意類型。在具體的實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白為IgG型抗體，例如，IgGl抗體。
[0132]在一些實(shí)施方案中，例如當(dāng)抗原結(jié)合蛋白為具有完整重和輕鏈的抗體時，CDR全部來源于相同種類，例如人?？蛇x擇地，例如在抗原結(jié)合蛋白含有少于六種來自以上示出序列的CDR的實(shí)施方案中，另外的CDR可以來自其它種類或者可以為與在示例性序列中示出那些不同的人⑶R。例如，任選選自可替代種類或不同人抗體序列、或其組合的HCDRl、HCDR2、IXDRl和IXDR2可用于來自本文所識別合適序列的HCDR3和IXDR3區(qū)。例如，本發(fā)明的⑶R可替代市售相關(guān)嵌合或人源化抗體的CDR區(qū)。
[0133]具體實(shí)施方案利用作為人組分的抗原結(jié)合蛋白的支架組分。然而，在一些實(shí)施方案中，支架組分可以為不同種類的混合物。如此，如果抗原結(jié)合蛋白為抗體，這些抗體可以為嵌合抗體和/或人源化抗體。通常，“嵌合抗體”和“人源化抗體”是指結(jié)合超過一個種類的區(qū)的抗體。例如，“嵌合抗體”通常包含來自小鼠(在一些情況下，或大鼠)的可變區(qū)和來自人的恒定區(qū)。
[0134]“人源化抗體”通常是指具有交換在人抗體中發(fā)現(xiàn)序列的可變結(jié)構(gòu)域構(gòu)架區(qū)的非人抗體。通常，在人源化抗體中，除了一個或多個CDR外，全部抗體通過人來源的多核苷酸編碼或者除了一個或多個CDR外，它們與這些抗體相同。將其中一些或者全部通過來源于非人生物體的核酸來編碼的⑶R移植入人抗體可變區(qū)的折疊架構(gòu)內(nèi)以生成抗體,通過植入的⑶R來測定該抗體的特異性。這些抗體的生成描述在例如，W092/11018，Jonesl986，Nature321:522-525, Verhoeyen 等人，1988，Science239:1534-1536 中。使用具有遺傳工程化免疫系統(tǒng)的小鼠也可生成人源化抗體。Roque等人,2004, B1technol.Prog.20:639-654。在本文描述的示例性實(shí)施方案中，經(jīng)識別的CDR為人的CDR，因而在此上下文中人源化和嵌合抗體包括一些非人CDR;例如，可生成包含具有不同種類來源的一種或多種其它⑶R區(qū)的HCDR3和IXDR3區(qū)的人源化抗體。
[0135]在一個實(shí)施方案中，CD27L抗原結(jié)合蛋白為多特異性抗體，尤其為雙特異性抗體，有時也稱為“雙體”。這些為結(jié)合兩個或多個不同抗原或者在單一抗原上不同表位的抗體。在某些實(shí)施方案中，雙特異性抗體結(jié)合在人效應(yīng)細(xì)胞(例如，T細(xì)胞)上的CD27L和抗原。這些抗體用于針對表達(dá)⑶27L的細(xì)胞(例如腫瘤細(xì)胞)靶向效應(yīng)細(xì)胞應(yīng)答。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，人效應(yīng)細(xì)胞抗原為CD3。美國專利N0.7，235，641。制備雙特異性抗體的方法為本領(lǐng)域所已知。這些方法之一包括工程化重鏈的Fe部分以例如生成“隆凸(knob)”和“孔”，當(dāng)在細(xì)胞中共表達(dá)時，其促進(jìn)重鏈的異源二聚體形成。美國專利7，695，963。另一方法也包括工程化重鏈的Fe部分，但使用靜電牽引以促進(jìn)異源二聚體形成，當(dāng)在細(xì)胞中共表達(dá)時，同時抑制重鏈的同源二聚體形成。W009/089，004，其通過引用方式整體并入本文。
[0136]在一個實(shí)施方案中，CD27L抗原結(jié)合蛋白為微抗體。微抗體為最小化抗體樣蛋白，其包含連接至 CH3 結(jié)構(gòu)域的 ScFv0 Hu 等人，1996，Cancer Res.56:3055-3061。
[0137]在一個實(shí)施方案中，CD27L抗原結(jié)合蛋白是結(jié)構(gòu)域抗體；參見例如美國專利N0.6，248，516。結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)為抗體的功能結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其對應(yīng)于人抗體的重(VH)或輕(VL)鏈的可變區(qū)。dAB具有約13kDa的分子量、或者為小于完整抗體大小十分之一。dAB良好地表達(dá)于包括細(xì)菌、酵母和哺乳動物細(xì)胞體系的各種宿主中。此外，即使經(jīng)歷嚴(yán)厲條件下，例如凍干或者熱變性，dAb高度穩(wěn)定和保持活性。參見例如，美國專利6，291，158 ；6，582，915 ;6，593，081 ;6，172，197 ;美國系列 N0.2004/0110941 ;歐洲專利 0368684 ;美國專利 6，696，245 ；W004/058821 ；W004/003019 和 W003/002609。
[0138]在一個實(shí)施方案中，CD27L抗原結(jié)合蛋白為抗體片段，其為保留對CD27L的結(jié)合特異性的任意本文所示抗體的片段。在各個實(shí)施方案中，抗體結(jié)合蛋白包含但不限于F(ab)、Fiah' )、F(ab' ) 2、Fv或單鏈Fv片段。至少，如本文所指的抗體包含可特異性結(jié)合CD27L的多肽，其包含所有或者一部分的輕或重鏈可變區(qū)，例如一個或多個⑶R。
[0139]結(jié)合⑶27L的抗體片段的進(jìn)一步例子包括但不限于:(i)由VL、VH、CL和CHl結(jié)構(gòu)域組成的Fab片段；(ii)由VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；(iii)由單一抗體的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段；(iv) dAb片段(Ward等人，1989,Nature341:544-546),其由單一可變結(jié)構(gòu)域組成；(V)分離的⑶R區(qū)；(vi)F(ab' )2片段，其為包含兩個連接的Fab片段的二價片段；(vii)單鏈Fv分子(scFv),其中VH結(jié)構(gòu)域和VL結(jié)構(gòu)域通過肽接頭連接,該肽接頭使得兩個結(jié)構(gòu)域締合形成抗原結(jié)合位點(diǎn)(Bird等人，1988, Science242:423-426 ；Huston等人，1988，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.85:5879-5883) ； (viii)雙特異性單鏈 Fv 二聚體(PCT/US92/09965)以及(ix)通過基因融合構(gòu)建的“雙體”或者“三鏈抗體”、多價或多特異性片段(Tomlinson 等人，2000, Methods Enzymol.326:461-479 ；W094/13804 ；Holliger等人，1993, Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.90:6444-6448)。可修飾抗體片段。例如，通過并入連接VH和VL結(jié)構(gòu)域的二硫鍵可穩(wěn)定分子(Reiter等人，1996, Nature B1tech.14:1239-1245)。本發(fā)明的一些方面包括這些片段的非-⑶R組件為人序列的實(shí)施方案。
[0140]在一個實(shí)施方案中，CD27L抗原結(jié)合蛋白為完整人抗體。在該實(shí)施方案中，如上所示，特異性結(jié)構(gòu)包含示出的包含CDR區(qū)的完整重和輕鏈。另外的實(shí)施方案利用本發(fā)明的一種或多種CDR以及來自其它人抗體的其它CDR、構(gòu)架區(qū)、J和D區(qū)、恒定區(qū)等。例如，本發(fā)明的CDR可使用任意數(shù)目人抗體特別是市售相關(guān)抗體的CDR替代。
[0141]通過氨基酸橋(短肽接頭)連接重和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(Fv區(qū))片段可形成單鏈抗體，得到單多肽鏈。通過融合編碼肽接頭的DNA來制備這些單鏈Fv (scFv)，該肽接頭介于編碼兩個可變結(jié)構(gòu)域多肽('和Vh)的DNA之間。取決于介于兩個可變結(jié)構(gòu)域之間撓性接頭的長度，所得多肽可自身向后折疊以形成抗原結(jié)合單體，或者它們可形成多聚體(例如，二聚體、三聚體或四聚體)(Kortt 等人，1997, Prot.Eng.10:423 ；Kortt 等人，2001, B1mol.Eng.18:95-108)。通過結(jié)合不同的包含八和Vh的多肽，人們可形成結(jié)合不同表位的多聚scFv (Kriangkum等人,2001, B1mol.Eng.18:31-40)。開發(fā)生成單鏈抗體的技術(shù)包括在美國專利 N0.4，946，778 ；Bird, 1988，Science242:423 ；Huston 等人，1988，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:5879 ；ffard 等人，1989，Nature334:544 ；de Graaf 等人，2002, Methods MolB1l.178:379-87中描述的那些。通過本發(fā)明涵蓋來源于本文所提供的抗體的單鏈抗體(包括但不限于包含 AblLCv/AblHCv(SEQ ID NO:63/SEQ ID NO: 17)、Ab2LCv/Ab2HCv (SEQID NO:64/SEQ ID NO: 18)、Ab3LCv/Ab3HCv (SEQ ID NO:65/SEQ ID NO: 19)、Ab4LCv/Ab4HCv (SEQ ID NO:66/SEQ ID NO:20)、Ab5LCv/Ab5HCv (SEQ ID NO:67/SEQ ID NO:21)、Ab6LCv/Ab6HCv(SEQ ID NO:68/SEQ ID NO:22)、Ab7LCv/Ab7HCv(SEQ ID NO:69/SEQ ID NO:23)、Ab8LCv/Ab8HCv(SEQ ID NO:70/SEQ ID NO:24 的可變結(jié)構(gòu)域組合的 scFv)、及其組合。
[0142]在一個實(shí)施方案中，CD27L抗原結(jié)合蛋白是抗體融合蛋白(本文有時稱為“抗體綴合物”)。綴合物配偶體(conjugate partner)可以為蛋白質(zhì)或者非蛋白質(zhì)；通常在抗原結(jié)合蛋白上和在綴合物配偶體上使用官能團(tuán)生成后者。在某些實(shí)施方案中，使抗體與非蛋白質(zhì)化學(xué)物質(zhì)(藥物)綴合以形成抗體藥物綴合物。以下描述示例性抗體藥物綴合物和制備這些綴合物的方法。
[0143]在一個實(shí)施方案中，CD27L抗原結(jié)合蛋白為抗體類似物，有時稱為“合成抗體”。例如，各制品利用具有移植的⑶R的可選擇蛋白支架或者人工支架。這些支架包括但不限于引入穩(wěn)定結(jié)合蛋白的三維結(jié)構(gòu)的突變以及由例如生物相容聚合物組成的全部合成支架。參見例如，Korndorfer 等人，2003, Proteins -Structure, Funct1n and B1informatics,第53 卷，第 1:121-129 期.Roque 等人，2004，B1technol.Prog.20:639_654。此外，可使用肽抗體模擬物(“PAM”)以及根據(jù)利用纖維蛋白連接素組分作為支架的抗體模擬物的制品。
[0144]如本文所使用，所謂“蛋白”是指至少兩個共價連接的氨基酸，其包括蛋白、多肽、寡肽和肽。在一些實(shí)施方案中，兩個或多個共價連接的氨基酸通過肽鍵連接。蛋白可由天然存在的氨基酸和肽鍵構(gòu)成，例如使用如下所示的表達(dá)系統(tǒng)和宿主細(xì)胞來重組制備蛋白?？蛇x擇地，蛋白可包括合成氨基酸(例如，高苯丙氨酸、瓜氨酸、鳥氨酸和正亮氨酸)或者肽模擬物結(jié)構(gòu)，即，“肽或蛋白類似物”，例如類肽(參見Simon等人,1992, Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.89:9367，通過引用方式并入本文)，其可耐受蛋白酶或其它生理和/或存儲條件。當(dāng)通過本領(lǐng)域眾所周知的常見方法體外合成抗原結(jié)合蛋白時，可特別地并入這些合成氨基酸。此外，可使用肽模擬物、合成和天然存在的殘基/結(jié)構(gòu)的任意組合?！鞍被帷币舶▉啺被釟埢?，例如脯氨酸和羥脯氨酸。氨基酸“R基團(tuán)”或者“側(cè)鏈”可以為(L)-或者
(S)-構(gòu)象。在具體的實(shí)施方案中，氨基酸為(L)-或(S)-構(gòu)象。
[0145]在某些方面中，本發(fā)明提供結(jié)合CD27L的重組抗原結(jié)合蛋白，以及在一些實(shí)施方案中，提供重組人CD27L或其部分。在本文中，“重組蛋白”是使用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)和方法通過重組技術(shù)(即，通過表達(dá)本文所述的重組核酸)來制備的蛋白。生成重組蛋白的方法和技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知的。本發(fā)明的實(shí)施方案包括結(jié)合野生型CD27L及其變體的重組抗原結(jié)合蛋白。
[0146]“基本上由......組成”是指相對于所引用的SEQ ID NO:序列，氨基酸序列可改變約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15%但如本文所述仍然保留生物活性。
[0147]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白為分離的蛋白或者基本上純的蛋白?！胺蛛x的”蛋白沒有伴隨有在它天然狀態(tài)下通常締合的至少一些材料，例如在給定樣品中構(gòu)成至少約5%或至少約50%重量份的總蛋白。應(yīng)理解，取決于環(huán)境，分離的蛋白可由5至
99.9%重量份的總蛋白含量構(gòu)成。例如，通過使用可誘導(dǎo)啟動子或者高表達(dá)啟動子在顯著較高濃度下可制備蛋白，使得在增高濃度水平下制備蛋白。定義包括在本領(lǐng)域已知的大量生物體和/或宿主細(xì)胞中生成抗原結(jié)合蛋白。
[0148]對于氨基酸序列，通過使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來測定序列同一性和/或相似性，其包括但不限于:Smith和Waterman, 1981, Adv.App1.Math.2:482的局部序列同一性算法；Needleman 和 Wunsch, 1970, J.Mol.B1l.48:443 的序列同一性比對算法；Pearson 和Lipman, 1988, Proc.Nat.Acad.Sc1.U.S.A.85:2444的相似性方法檢索；這些算法的計算機(jī)化實(shí)施(在 Wisconsin Genetics Software Package 中 GAP、BESTFIT、FASTA 和 TFASTA,Genetics Computer Group, 575Science Drive, Madison, ffis.);通過 Devereux 等人，1984，Nucl.Acid Res.12:387-395描述的最佳擬合測序程序，優(yōu)選使用默認(rèn)設(shè)置或者通過檢驗(yàn)。優(yōu)選地，根據(jù)以下參數(shù)通過FastDB來計算同一性％:1的不匹配罰分；1的空位罰分；0.33 的空位大小罰分；和 30 的連接罰分，"Current Methods in Sequence Comparisonand Analysis " , Macromolecule Sequencing and Synthesis, Selected Methods andApplicat1ns,127-149 頁(1988), Alan R.Liss, Inc。
[0149]有用的算法例子為PILEUP。使用漸進(jìn)、成對比對，PILEUP由一組相關(guān)序列生成多序列比對。它也可繪制顯示聚類關(guān)系的樹形圖，它用于生成比對。PILEUP使用Feng&Doolittle，1987，J.Mol.Evol.35 =351-360的漸進(jìn)比對方法的簡化；該方法類似于Higgins 和 Sharp, 1989，CAB10S5:151-153 描述的方法。有用的 PILEUP 參數(shù)包括 3.00 的默認(rèn)缺口權(quán)重、0.10的默認(rèn)缺口長度權(quán)重、和加權(quán)的端缺口。
[0150]有用的算法的另一例子為BLAST算法，其描述在=Altschul等人，1990，J.Mol.B1l.215:403-410 ；Altschul 等人，1997，Nucleic Acids Res.25:3389-3402；和 Karin等人，1993，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.90:5873_5787。特別有用的 BLAST 程序?yàn)閃U-BLAST-2 程序,其由 Altschul 等人，1996, Methods in Enzymology266:460-480 獲得。WU-BLAST-2使用多個檢索的參數(shù)，它們大部分設(shè)置為默認(rèn)值?？烧{(diào)整的參數(shù)設(shè)置為以下值:重疊跨度=I ;重疊分?jǐn)?shù)=0.125 ;單詞閾值(T) = II。HSP S和HSP S2參數(shù)為動態(tài)值，并且取決于針對被檢索目標(biāo)序列的特定數(shù)據(jù)庫的特定序列和組合物，通過程序本身可確定這些參數(shù)；然而，可調(diào)節(jié)值來增加靈敏性。
[0151]另外有用的算法為通過Altschul 等人，1993，Nucl.AcidsRes.25 =3389-3402 報道的空位BLAST (gapped BLAST)?？瘴籅LAST使用BL0SUM-62置換得分；設(shè)置為9的閾值T參數(shù)；觸發(fā)非空位延伸的兩次命中方法(two-hit method);指示k的空位長度、10+k的成本；設(shè)置為16的Xu ;以及數(shù)據(jù)庫檢索階段設(shè)置為40的\和算法輸出階段設(shè)置為67。通過對應(yīng)約22比特的得分來觸發(fā)空位算法。
[0152]通常，在單一可變CDR與本文所示序列之間的氨基酸同源性、相似性或同一性為至少 80%，以及更通常為具有至少 85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%和幾乎100%的優(yōu)選增加的同源性或同一性。以類似的方式，相對于本文所識別結(jié)合蛋白的核酸序列的“核酸序列同一性百分比(％)”定義為與抗原結(jié)合蛋白的編碼序列中核苷酸殘基相同的候選序列中核苷酸殘基的百分比。具體方法利用設(shè)置為默認(rèn)參數(shù)的WU-BLAST-2的BLASTN模塊，其分別具有設(shè)置為I和0.125的重疊跨度和重疊分?jǐn)?shù)。
[0153]通常，在編碼單獨(dú)可變CDR的核苷酸序列和本文所示核苷酸序列之間的核酸序列同源性、相似性或同一性為至少80%，以及更通常為至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或 99% 和幾乎100%的優(yōu)選增加的同源性或同一性。
[0154]因此，“可變CDR”為與本發(fā)明的親本CDR具有規(guī)定的同源性、相似性或同一性以及共享包括但不限于至少 80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%親本CDR的特異性和/或活性的生物功能的⑶R。
[0155]盡管引入氨基酸序列變異的位點(diǎn)或區(qū)域?yàn)轭A(yù)先決定的，但是突變本身不需要預(yù)先決定。例如，為了優(yōu)化在給定位點(diǎn)處的突變性能，在篩選用于優(yōu)化結(jié)合所需活性的靶密碼子或區(qū)和表達(dá)的抗原結(jié)合蛋白CDR變體處可進(jìn)行隨機(jī)誘變。用于在具有已知序列的DNA中預(yù)定位點(diǎn)處制備置換突變的技術(shù)是眾所周知的，例如，M13引物誘變和PCR誘變。使用抗原結(jié)合蛋白活性(例如CD27L結(jié)合)的分析來進(jìn)行突變體的篩選。
[0156]氨基酸置換通常具有單一殘基；插入通常在約一(I)至約二十(20)個氨基酸殘基的規(guī)則內(nèi)，但是可耐受相對更大的插入。缺失的范圍為約一(I)至約二十(20)個氨基酸殘基，但是在一些情況下，缺失可以遠(yuǎn)遠(yuǎn)更大。
[0157]置換、缺失、插入或其任意組合可用于得到最終衍生物或變體。通常，在少量氨基酸上進(jìn)行這些改變，從而最小化分子的變化，尤其最小化抗原結(jié)合蛋白的免疫原性和特異性。然而，在某些情況下可耐受更大的改變。通常按照如表1所示下表進(jìn)行保守置換。
[0158]表1
【權(quán)利要求】
1.一種⑶27L抗原結(jié)合蛋白，其包含: a)與SEQ ID NO:63,SEQ ID NO:64,SEQ ID NO:65,SEQ ID NO:66,SEQ ID NO:67,SEQID NO:68, SEQ ID N0:69或者SEQ ID NO:70表示的氨基酸序列具有至少90%同一性的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域； b)與SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:21、SEQID NO:22, SEQ ID NO:23或者SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列具有至少90%同一性的重鏈可變結(jié)構(gòu)域；或者 c)a)的所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和b)的所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域。
2.權(quán)利要求1所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與SEQIDNO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ IDNO:69或者SEQ ID NO:70表示的氨基酸序列具有至少95%同一性。
3.權(quán)利要求1或2所述的⑶27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域與SEQIDNO: 17,SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ IDNO: 23或者SEQ ID NO: 24表示的氨基酸序列具有至少95%同一性。
4.一種⑶27L抗原結(jié)合蛋白，其包含: a)與SEQ ID NO:63,SEQ ID NO:64,SEQ ID NO:65,SEQ ID NO:66,SEQ ID NO:67,SEQID NO:68, SEQ ID NO:69或者SEQ ID NO:70表示的氨基酸序列具有不超過十個氨基酸添加、缺失或置換的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；
b)與SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:21、SEQID NO:22, SEQ ID NO:23或者SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列具有不超過十個氨基酸添加、缺失或置換的重鏈可變結(jié)構(gòu)域；或者 c)a)的所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和b)的所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域。
5.權(quán)利要求4所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與SEQIDNO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ IDNO:69或者SEQ ID NO:70表示的氨基酸序列具有不超過五個氨基酸添加、缺失或置換。
6.權(quán)利要求4或5所述的⑶27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域與SEQIDNO: 17,SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ IDNO:23或者SEQ ID NO: 24表示的氨基酸序列具有不超過五個氨基酸添加、缺失或置換。
7.權(quán)利要求1-6所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQIDNO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ IDNO:69或者SEQ ID NO:70表示的氨基酸序列。
8.權(quán)利要求1-7所述的⑶27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQIDNO: 17,SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ IDNO: 23或者SEQ ID NO: 24表示的氨基酸序列。
9.一種CD27L抗原結(jié)合蛋白，其具有包含以下的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域: a)與SEQ ID NO:71表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:79表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 87表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ；b)與SEQID N0:72表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:80表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 88表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ； c)與SEQID NO:73表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:81表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 89表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ； d)與SEQID NO:74表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:82表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 90表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ； e)與SEQID NO:75表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:83表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 91表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ； f)與SEQID NO:76表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID N0:84表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 92表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ； g)與SEQID NO:77表示的LCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:85表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 93表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ;或者 h)與SEQID NO:78表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:86表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 94表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ;和 包含以下的重鏈可變結(jié)構(gòu)域: i)與SEQID NO:25表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:33表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO:41表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ； j)與SEQ ID NO:26表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:34表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO: 42表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ； k)與SEQ ID NO:27表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:35表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO: 43表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ； I)與SEQ ID N0:28表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:36表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO: 44表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ； m)與SEQ ID N0:29表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID N0:37表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO:45表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ； η)與SEQ ID Ν0:30表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID Ν0:38表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO: 46表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ； ο)與SEQ ID Ν0:31表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID Ν0:39表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO:47表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ;或者 P)與SEQ ID Ν0:32表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:40表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO:48表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3。
10.權(quán)利要求9所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其包含a)的所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和i)的所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域。
11.權(quán)利要求10所述的⑶27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQIDNO: 71表示的LCDRl ;如SEQ ID NO: 79表示的LCDR2序列；和如SEQ ID NO: 87表示的LCDR3序列；以及所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQ ID NO: 25表示的HCDRl ;如SEQ ID NO: 33表示的HCDR2序列；和如SEQ ID NO:41表示的HCDR3序列。
12.權(quán)利要求9所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其包含b)的所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和j)的所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域。
13.權(quán)利要求12所述的⑶27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQIDNO: 72 表示的 LCDRl JnSEQ ID NO: 80 表示的 LCDR2 序列;和如 SEQ ID NO: 88 表示的 LCDR3序列；以及所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQ ID NO: 26表示的HCDRl ;如SEQ ID NO: 34表示的HCDR2序列；和如SEQ ID NO:42表示的HCDR3序列。
14.權(quán)利要求9所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其包含c)的所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和k)的所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域。
15.權(quán)利要求14所述的⑶27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQIDNO: 73表示的LCDRl ;如SEQ ID NO: 81表示的LCDR2序列;和如SEQ ID NO: 89表示的LCDR3序列；以及所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQ ID NO: 27表示的HCDRl ;如SEQ ID NO: 35表示的HCDR2序列；和如SEQ ID NO:43表示的HCDR3序列。
16.權(quán)利要求9所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其包含d)的所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和I)的所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域。
17.權(quán)利要求16所述的⑶27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQIDNO: 74表示的LCDRl ;如SEQ ID NO: 82表示的LCDR2序列；和如SEQ ID NO: 90表示的LCDR3序列；以及所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQ ID NO: 28表示的HCDRl ;如SEQ ID NO: 36表示的HCDR2序列；和如SEQ ID NO:44表示的HCDR3序列。
18.權(quán)利要求9所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其包含e)的所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和m)的所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域。
19.權(quán)利要求18所述的⑶27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQIDNO: 75 表示的 LCDRl -M SEQ ID NO: 83 表示的 LCDR2 序列;和如 SEQ ID NO: 91 表示的 LCDR3序列；以及所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQ ID NO: 29表示的HCDRl JnSEQ ID NO: 37表示的HCDR2序列；和如SEQ ID NO:45表示的HCDR3序列。
20.權(quán)利要求9所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其包含f)的所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和η)的所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域。
21.權(quán)利要求20所述的⑶27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQIDNO: 76表示的LCDRl ;如SEQ ID NO: 84表示的LCDR2序列;和如SEQ ID NO: 92表示的LCDR3序列；以及所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQ ID NO: 30表示的HCDRl ;如SEQ ID NO: 38表示的HCDR2序列；和如SEQ ID NO:46表示的HCDR3序列。
22.權(quán)利要求9所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其包含g)的所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和ο)的所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域。
23.權(quán)利要求22所述的⑶27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQIDNO: 77表示的LCDRl ;如SEQ ID NO: 85表示的LCDR2序列;和如SEQ ID NO: 93表示的LCDR3序列；以及所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQ ID Ν0:31表示的HCDRl ;如SEQ ID Ν0:39表示的HCDR2序列；和如SEQ ID NO:47表示的HCDR3序列。
24.權(quán)利要求9所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其包含h)的所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和P)的所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域。
25.權(quán)利要求24所述的⑶27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQIDNO: 78 表示的 LCDRl JnSEQ ID NO: 86 表示的 LCDR2 序列;和如 SEQ ID NO: 94 表示的 LCDR3序列；以及所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含如SEQ ID NO: 32表示的HCDRl ;如SEQ ID NO: 40表示的HCDR2序列；和如SEQ ID NO:48表示的HCDR3序列。
26.權(quán)利要求1-25中任一項所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白以小于或等于2 X 10—11 M的親和力特異性結(jié)合人⑶27L。
27.權(quán)利要求1-26中任一項所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白抑制⑶27L與⑶27的結(jié)合。
28.權(quán)利要求1-27中任一項所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白為抗體。
29.權(quán)利要求28所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗體為人抗體。
30.權(quán)利要求29所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其包含輕鏈和重鏈，其中所述輕鏈包含SEQ ID:56表示的氨基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 10表示的氨基酸序列。
31.權(quán)利要求29所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其包含輕鏈和重鏈，其中所述輕鏈包含SEQ ID:57表示的氨基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 11表示的氨基酸序列。
32.權(quán)利要求29所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其包含輕鏈和重鏈，其中所述輕鏈包含SEQ ID:58表示的氨基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 12表示的氨基酸序列。
33.權(quán)利要求29所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其包含輕鏈和重鏈，其中所述輕鏈包含SEQ ID:59表示的氨基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 13表示的氨基酸序列。
34.權(quán)利要求29所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其包含輕鏈和重鏈，其中所述輕鏈包含SEQ ID:60表示的氨基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 14表示的氨基酸序列。
35.權(quán)利要求29所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其包含輕鏈和重鏈，其中所述輕鏈包含SEQ ID:61表示的氨基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 15表示的氨基酸序列。
36.權(quán)利要求29所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其包含輕鏈和重鏈，其中所述輕鏈包含SEQ ID:62表示的氨基酸序列和所述重鏈包含SEQ ID NO: 16表示的氨基酸序列。
37.權(quán)利要求1-36中任一項所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述CD27L抗原結(jié)合蛋白與化療劑綴合。
38.權(quán)利要求37所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其中接頭使所述化療劑與所述CD27L抗原結(jié)合蛋白綴合。
39.權(quán)利要求38所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述接頭為不可裂解的接頭。
40.權(quán)利要求39所述的⑶27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述接頭包含MCC。
41.權(quán)利要求38-40中任一項所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述化療劑與所述CD27L抗原結(jié)合蛋白的多肽含有的一個或多個賴氨酸綴合。
42.權(quán)利要求37-41中任一項所述的⑶27L抗原結(jié)合蛋白，其中所述化療劑為DMl。
43.一種權(quán)利要求42所述CD27L抗原結(jié)合蛋白的組合物，其中每個CD27L抗原結(jié)合蛋白的DMl分子的平均數(shù)介于I和10之間。
44.權(quán)利要求43所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白的組合物，其中每個CD27L抗原結(jié)合蛋白的DMl分子的平均數(shù)介于3和7之間。
45.權(quán)利要求44所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白的組合物，其中每個CD27L抗原結(jié)合蛋白的DMl分子的平均數(shù)介于4和6之間。
46.權(quán)利要求44所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白的組合物，其中每個CD27L抗原結(jié)合蛋白的DMl分子的平均數(shù)為約4.0、約4.1、約4.2、約4.3、約4.4、約4.5、約4.6、約4.7、約4.8、約 4.9、約 5.0、約 5.1、約 5.2、約 5.3、約 5.4、約 5.5、約 5.6、約 5.7、約 5.8、約 5.9 或約 6.0。
47.權(quán)利要求43-46中任一項所述的⑶27L抗原結(jié)合蛋白的組合物，其中所述組合物為包含治療有效量的所述CD27L抗原結(jié)合蛋白的藥物組合物。
48.權(quán)利要求47所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白的組合物，其中所述藥物組合物被凍干。
49.一種編碼多肽的分離的核酸，所述多肽包含:
a)與SEQ ID NO:63,SEQ ID NO:64,SEQ ID NO:65,SEQ ID NO:66,SEQ ID NO:67,SEQID NO:68, SEQ ID NO:69或者SEQ ID NO:70表示的氨基酸序列具有至少95%同一性的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；
b)與SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:21、SEQID NO:22, SEQ ID N0:23或者SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列具有至少95%同一性的重鏈可變結(jié)構(gòu)域；
c)與SEQ ID NO:63,SEQ ID NO:64,SEQ ID NO:65,SEQ ID NO:66,SEQ ID NO:67,SEQID NO:68, SEQ ID N0:69或者SEQ ID NO:70表示的氨基酸序列具有不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；
d)與SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:21、SEQID NO:22, SEQ ID NO:23或者SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列具有不超過五個氨基酸添加、缺失或置換的重鏈可變結(jié)構(gòu)域； e)輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包含: i)與SEQID NO:71表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:79表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 87表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ； ii)與SEQID NO:72表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:80表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 88表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ； iii)與SEQID NO:73表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO: 81表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 89表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ； iv)與SEQID NO:74表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:82表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 90表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ； V)與SEQ ID NO:75表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:83表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 91表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ； vi)與SEQID NO:76表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:84表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 92表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ； vii)與SEQID NO:77表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:85表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 93表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ;或者 viii)與SEQID NO:78表示的IXDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDRl ;與SEQ ID NO:86表示的IXDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的IXDR2;以及與SEQ ID NO: 94表示的IXDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的LCDR3 ;或者 f)重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包含: i)與SEQID N0:25表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:33表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO: 41表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ； ii)與SEQID NO:26表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID N0:34序列表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO: 42表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ； iii)與SEQID NO:27表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:35表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO: 43表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ； iv)與SEQID N0:28表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:36表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO: 44表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ； v)與SEQID N 0:29表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID N0:37表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID N0:45表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ； vi)與SEQID N0:30表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:38表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO:46表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ； vii)與SEQID N0:31表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:39表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO: 47表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3 ;或者 viii)與SEQID NO:32表示的HCDRl序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDRl ;與SEQ ID NO:40表示的HCDR2序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR2;以及與SEQ ID NO: 48表示的HCDR3序列具有不超過三個氨基酸添加、缺失或置換的HCDR3。
50.權(quán)利要求49所述的分離的核酸，其中所述多肽包含抗體輕鏈。
51.權(quán)利要求50所述的分離的核酸，其中所述輕鏈通過包含與SEQID NO:49,SEQ IDNO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54 或者 SEQ ID NO: 55 表示的核苷酸序列具有至少80%同一性的核苷酸序列的核酸來編碼。
52.權(quán)利要求51所述的分離的核酸，其中所述輕鏈通過包含與SEQID NO:49,SEQ IDNO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54 或者 SEQ ID NO: 55 表不的核苷酸序列具有至少90%同一'丨生的核苷酸序列的核酸來編碼。
53.權(quán)利要求52所述的分離的核酸，其中所述輕鏈通過包含與SEQID NO:49,SEQ IDNO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54 或者 SEQ ID NO: 55 表不的核苷酸序列具有至少95%同一'丨生的核苷酸序列的核酸來編碼。
54.權(quán)利要求53所述的分離的核酸，其中所述輕鏈通過包含SEQID NO:49、SEQ IDNO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54 或者 SEQ ID NO: 55 表示的核苷酸序列的核酸來編碼。
55.權(quán)利要求49所述的分離的核酸，其中所述多肽包含抗體重鏈。
56.權(quán)利要求55所述的分離的核酸，其中所述重鏈通過包含與SEQID NO:3, SEQ IDNO:4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO:8 或者 SEQ ID NO:9 表示的核苷酸序列具有至少80%同一'丨生的核苷酸序列的核酸來編碼。
57.權(quán)利要求56所述的分離的核酸，其中所述重鏈通過包含與SEQID NO:3, SEQ IDNO:4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO:8 或者 SEQ ID NO:9 表示的核苷酸序列具有至少90%同一'丨生的核苷酸序列的核酸來編碼。
58.權(quán)利要求57所述的分離的核酸，其中所述重鏈通過包含與SEQID NO:3, SEQ IDNO:4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO:8 或者 SEQ ID NO:9 表示的核苷酸序列具有至少95% 同一'丨生的核苷酸序列的核酸來編碼。
59.權(quán)利要求58所述的分離的核酸，其中所述重鏈通過包含SEQID NO:49、SEQ IDNO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54 或者 SEQ ID NO:55 表示的核苷酸序列的核酸來編碼。
60.—種表達(dá)載體,其包含權(quán)利要求49-59中任一項所述分離的核酸。
61.權(quán)利要求60所述的表達(dá)載體，其中所述分離的核酸編碼抗體輕鏈。
62.權(quán)利要求60所述的表達(dá)載體，其中所述分離的核酸編碼抗體重鏈。
63.權(quán)利要求61所述的表達(dá)載體，其還包含編碼抗體重鏈的分離的核酸。
64.一種重組宿主細(xì)胞，其包含可操作連接啟動子的權(quán)利要求49-59中任一項所述分離的核酸。
65.—種重組宿主細(xì)胞,其包含權(quán)利要求61或62所述的表達(dá)載體。
66.權(quán)利要求65所述的重組宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞包含權(quán)利要求61和62所述的表達(dá)載體。
67.權(quán)利要求66所述的重組宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞分泌結(jié)合⑶27L的抗體。
68.權(quán)利要求64-67中任一項所述的重組宿主細(xì)胞，其中所述細(xì)胞具有哺乳動物來源。
69.權(quán)利要求68所述的重組宿主細(xì)胞，其中所述細(xì)胞為中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞系。
70.一種制備CD27L抗體藥物綴合物的方法，所述方法包括以下步驟: a)提供權(quán)利要求1-36中任一項所述CD27L抗原結(jié)合蛋白； b)使所述CD27L抗原結(jié)合蛋白與接頭綴合；以及 c)使藥物與所述接頭綴合。
71.一種制備CD27L抗體藥物綴合物的方法，所述方法包括以下步驟: a)提供權(quán)利要求1-36中任一項所述CD27L抗原結(jié)合蛋白；以及 b)使共價結(jié)合藥物的接頭與所述CD27L抗原結(jié)合蛋白綴合。
72.權(quán)利要求70或71所述的方法，其中所述CD27L抗原結(jié)合蛋白為抗體。
73.權(quán)利要求72所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:63表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO: 17表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
74.權(quán)利要求73所述的方法，其中所述抗體為Abl。
75.權(quán)利要求72所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:64表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO: 18表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
76.權(quán)利要求75所述的方法，其中所述抗體為Ab2。
77.權(quán)利要求72所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:65表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO: 19表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
78.權(quán)利要求77所述的方法，其中所述抗體為Ab3。
79.權(quán)利要求72所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:66表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:20表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
80.權(quán)利要求79所述的方法，其中所述抗體為Ab4。
81.權(quán)利要求72所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:67表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:21表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
82.權(quán)利要求81所述的方法，其中所述抗體為Ab5。
83.權(quán)利要求72所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:68表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:22表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
84.權(quán)利要求83所述的方法，其中所述抗體為Ab6。
85.權(quán)利要求72所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:69表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:23表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
86.權(quán)利要求85所述的方法，其中所述抗體為Ab7。
87.權(quán)利要求72所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:70表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:24表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
88.權(quán)利要求87所述的方法，其中所述抗體為Ab8。
89.權(quán)利要求70-88中任一項所述的方法，其中所述接頭包含MCC。
90.權(quán)利要求70-89中任一項所述的方法，其中所述藥物包含DMl。
91.一種治療癌癥的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治療有效量的權(quán)利要求1-36中任一項所述的⑶27L抗原結(jié)合蛋白。
92.權(quán)利要求91所述的方法，其中所述CD27L抗原結(jié)合蛋白為抗體。
93.權(quán)利要求92所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:63表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO: 17表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
94.權(quán)利要求93所述的方法，其中所述抗體為Abl。
95.權(quán)利要求92所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:64表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO: 18表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
96.權(quán)利要求95所述的方法，其中所述抗體為Ab2。
97.權(quán)利要求92所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:65表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO: 19表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
98.權(quán)利要求97所述的方法，其中所述抗體為Ab3。
99.權(quán)利要求92所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:66表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:20表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
100.權(quán)利要求99所述的方法，其中所述抗體為Ab4。
101.權(quán)利要求92所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO: 67表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:21表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
102.權(quán)利要求101所述的方法，其中所述抗體為Ab5。
103.權(quán)利要求92所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO: 68表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:22表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
104.權(quán)利要求103所述的方法，其中所述抗體為Ab6。
105.權(quán)利要求92所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO: 69表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:23表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
106.權(quán)利要求105所述的方法，其中所述抗體為Ab7。
107.權(quán)利要求92 所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO: 70表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:24表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
108.權(quán)利要求107所述的方法，其中所述抗體為Ab8。
109.權(quán)利要求92-108中任一項所述的方法，其中藥物組合物包含所述抗體。
110.權(quán)利要求109所述的方法，其中所述抗體包含增強(qiáng)的效應(yīng)子功能。
111.權(quán)利要求109所述的方法，其中所述藥物組合物包含抗體藥物綴合物群。
112.權(quán)利要求111所述的方法，其中所述抗體藥物綴合物包含MCC接頭。
113.權(quán)利要求111或112所述的方法，其中所述抗體藥物綴合物包含DMl。
114.權(quán)利要求113所述的方法，其中每個抗體的DMl分子的平均數(shù)介于I和10之間。
115.權(quán)利要求114所述的方法，其中每個抗體的DMl分子的平均數(shù)介于3和7之間。
116.權(quán)利要求115所述的方法，其中每個抗體的DMl分子的平均數(shù)介于4和6之間。
117.權(quán)利要求116所述的方法，其中每個抗體的DMl分子的平均數(shù)為約4.0、約4.1、約 4.2、約 4.3、約 4.4、約 4.5、約 4.6、約 4.7、約 4.8、約 4.9、約 5.0、約 5.1、約 5.2、約 5.3、約 5.4、約 5.5、約 5.6、約 5.7、約 5.8、約 5.9 或約 6.0。
118.權(quán)利要求91-117中任一項所述的方法，其中將來自所述患者的樣品用于測試⑶27L表達(dá)。
119.權(quán)利要求118所述的方法，其中將所述樣品用于測試⑶27LmRNA表達(dá)。
120.權(quán)利要求118所述的方法，其中將所述樣品用于測試⑶27L蛋白表達(dá)。
121.權(quán)利要求118-120中任一項所述的方法，其中所述樣品為血液樣品。
122.權(quán)利要求118-120中任一項所述的方法，其中所述樣品為活組織檢查。
123.權(quán)利要求91-122中任一項所述的方法，其中所述癌癥為腎細(xì)胞癌(RCC)、透明細(xì)胞RCC、頭頸癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、乳腺癌、腦腫瘤、鼻咽癌、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、伯基特氏淋巴瘤、間變性大細(xì)胞淋巴瘤(ALCL)、多發(fā)性骨髓瘤、皮膚T-細(xì)胞淋巴瘤、結(jié)節(jié)性小卵裂細(xì)胞淋巴瘤、淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、外周T-細(xì)胞淋巴瘤、倫南德氏淋巴瘤、免疫母細(xì)胞性淋巴瘤、T-細(xì)胞白血病/淋巴瘤(ATLL)、成人T-細(xì)胞白血病(T-ALL)、中心母細(xì)胞/中心細(xì)胞(cb/cc)濾泡性淋巴瘤癌、B系彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤、血管免疫母細(xì)胞性淋巴結(jié)病(AILD)樣T細(xì)胞淋巴瘤、HIV相關(guān)體腔型淋巴瘤、胚胎癌、未分化鼻咽癌、卡斯?fàn)柭喜?、卡波西氏肉瘤、多發(fā)性骨髓瘤、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥或者其它B-細(xì)胞淋巴瘤。
124.權(quán)利要求123所述的方法，其中所述癌癥為RCC。
125.權(quán)利要求123所述的方法，其中所述癌癥為NHL。
126.權(quán)利要求123所述的方法，其中所述癌癥為CLL。
127.—種治療自身免疫或炎性疾患的方法,所述方法包括向需要其的患者施用治療有效量的權(quán)利要求1-36中任一項所述的CD27L抗原結(jié)合蛋白。
128.權(quán)利要求127所述的方法，其中所述CD27L抗原結(jié)合蛋白為抗體。
129.權(quán)利要求128所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID N0:63表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO: 17表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
130.權(quán)利要求129所述的方法，其中所述抗體為Abl。
131.權(quán)利要求128所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID N0:64表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO: 18表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
132.權(quán)利要求131 所述的方法，其中所述抗體為Ab2。
133.權(quán)利要求128所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:65表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO: 19表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
134.權(quán)利要求133所述的方法，其中所述抗體為Ab3。
135.權(quán)利要求128所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:66表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:20表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
136.權(quán)利要求135所述的方法，其中所述抗體為Ab4。
137.權(quán)利要求128所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:67表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:21表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
138.權(quán)利要求137所述的方法，其中所述抗體為Ab5。
139.權(quán)利要求128所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:68表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:22表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
140.權(quán)利要求139所述的方法，其中所述抗體為Ab6。
141.權(quán)利要求128所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID NO:69表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:23表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
142.權(quán)利要求141所述的方法，其中所述抗體為Ab7。
143.權(quán)利要求128所述的方法，其中所述抗體包含如SEQID N0:70表示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列和如SEQ ID NO:24表示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
144.權(quán)利要求143所述的方法，其中所述抗體為Ab8。
145.權(quán)利要求127所述的方法，其中所述抗原結(jié)合蛋白抑制CD27與CD27L的結(jié)合。
146.權(quán)利要求127-145中任一項所述的方法，其中所述自身免疫或炎性疾患為全身性紅斑狼瘡(SLE)、胰島素依賴型糖尿病(IDDM)、炎性腸道疾病(IBD)、多發(fā)性硬化(MS)、牛皮癬、自身免疫性甲狀腺炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)或者腎小球性腎炎。
147.權(quán)利要求127-145中任一項所述的方法，其中所述治療抑制或者預(yù)防所述患者中的移植排斥。
148.權(quán)利要求127-145中任一項所述的方法，其中所述治療抑制或者預(yù)防移植物抗宿主病(GVHD )。
【文檔編號】A61P37/00GK104136461SQ201280057377
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2012年9月20日 優(yōu)先權(quán)日:2011年9月22日
【發(fā)明者】J.M.德拉尼, W.C.范斯洛夫三世, C.T.金 申請人:安姆根有限公司