胃腸外諾如病毒疫苗配制劑的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及包含單價(jià)諾如病毒病毒樣顆粒混合物的單劑胃腸外疫苗組合物。還公開(kāi)了通過(guò)施用此類(lèi)組合物在人受試者中賦予針對(duì)諾如病毒感染的保護(hù)性免疫的方法。
【專(zhuān)利說(shuō)明】胃腸外諾如病毒疫苗配制劑
[0001]對(duì)相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002]本申請(qǐng)要求2011年7月11日提交的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)61/506，447的優(yōu)先權(quán)，其全部?jī)?nèi)容通過(guò)提及并入本文。
發(fā)明領(lǐng)域
[0003]本發(fā)明屬于疫苗，特別是諾如病毒疫苗領(lǐng)域。另外，本發(fā)明涉及制備疫苗組合物的方法及誘導(dǎo)和評(píng)估人中針對(duì)諾如病毒的保護(hù)性免疫應(yīng)答的方法。
[0004]發(fā)明背景[0005]諾如病毒是不可培養(yǎng)的人類(lèi)杯狀病毒，已經(jīng)成為非細(xì)菌性胃腸炎的流行性爆發(fā)的單一最重要起因(Glass等，2000; Hardy等，1999)。在靈敏的分子診斷測(cè)定法的開(kāi)發(fā)之前，對(duì)諾如病毒的臨床意義的重視不夠。原型基因小組I (genogroup I)諾沃克病毒(NV)基因組的克隆和自重組桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)生成病毒樣顆粒(VLP)引起了測(cè)定法的開(kāi)發(fā)，其揭示了分布廣泛的諾如病毒感染(Jiang等1990; 1992)。
[0006]諾如病毒是單鏈、正義RNA病毒，含有不分段的RNA基因組。病毒基因組編碼三個(gè)可讀框，其中后兩個(gè)分別規(guī)定主要衣殼蛋白和次要結(jié)構(gòu)蛋白的生成(Glass等2000)。當(dāng)在真核表達(dá)系統(tǒng)中以高水平表達(dá)時(shí)，NV和某些其它諾如病毒的衣殼蛋白自組裝成在結(jié)構(gòu)上模擬天然諾如病毒病毒體(virion)的VLP。當(dāng)通過(guò)透射電子顯微術(shù)觀(guān)看時(shí)，VLP在形態(tài)上與自人糞樣品分離的感染性病毒體不可區(qū)分。
[0007]針對(duì)諾如病毒的免疫應(yīng)答是復(fù)雜的，而且現(xiàn)在正在闡明保護(hù)的關(guān)聯(lián)(correlate)。用天然病毒實(shí)施的人志愿者研究證明了粘膜衍生的記憶免疫應(yīng)答提供免于感染的短期保護(hù)并提示疫苗介導(dǎo)的保護(hù)是可行的(Lindesmith等2003;Parrino等1997;Wyatt等，1974)。
[0008]雖然由于VLP的可得性和它們被大量生成的能力，諾如病毒不能在體外培養(yǎng)，但是在定義諾如病毒衣殼的抗原拓?fù)鋵W(xué)和結(jié)構(gòu)拓?fù)鋵W(xué)方面已經(jīng)取得了可觀(guān)的進(jìn)步。VLP保留病毒衣殼蛋白的真實(shí)構(gòu)象(authentic confirmation),但是缺乏感染性遺傳物質(zhì)。結(jié)果，VLP模擬病毒與細(xì)胞受體的功能相互作用，由此引發(fā)適宜的宿主免疫應(yīng)答，但是缺乏繁殖或引起感染的能力。與NIH聯(lián)合，貝勒醫(yī)學(xué)院(Baylor College of Medicine)在學(xué)術(shù)性的、調(diào)查人發(fā)起的I期臨床試驗(yàn)中研究了人志愿者中針對(duì)NV VLP的體液、粘膜和細(xì)胞免疫應(yīng)答。口服施用VLP在健康成人中是安全的且有免疫原性的(Ball等1999;Tacket等2003)。但是，需要相對(duì)大量的多劑VLP以觀(guān)察免疫應(yīng)答。在其它學(xué)術(shù)中心，在動(dòng)物模型中進(jìn)行的臨床前實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明了當(dāng)與細(xì)菌外毒素佐劑一起鼻內(nèi)施用時(shí)針對(duì)VLP的免疫應(yīng)答的增強(qiáng)(Guerrero 等 2001; Nicollier-Jamot 等 2004; Periwal 等 2003; Souza 等(2007)Vaccine Vol.25(50):8448-59)。然而，人中針對(duì)諾如病毒的保護(hù)性免疫仍然難以捉摸，因?yàn)槿酥斜Ｗo(hù)性免疫應(yīng)答的指標(biāo)仍然尚未清楚鑒定(Herbst-Kralovetz等(2010) ExpertRev.Vaccines9(3), 299 - 307)。
[0009]發(fā)明概述[0010]本發(fā)明部分基于如下的發(fā)現(xiàn)，即單劑諾如病毒疫苗在胃腸外施用時(shí)在人中引發(fā)快速的、強(qiáng)力的針對(duì)諾如病毒的保護(hù)性免疫應(yīng)答。因而，本發(fā)明提供了一種在人中引發(fā)針對(duì)諾如病毒的保護(hù)性免疫的方法，其包括對(duì)所述人胃腸外施用不超過(guò)單劑疫苗組合物，所述組合物包含原型基因小組I和/或原型基因小組II諾如病毒VLP，其中與施用所述組合物前所述人中的滴度相比，所述組合物至少誘導(dǎo)諾如病毒特異性血清抗體滴度的3倍升高。在某些實(shí)施方案中，在施用所述單劑組合物的7天內(nèi)誘導(dǎo)諾如病毒特異性抗體滴度的升高。在一些實(shí)施方案中，經(jīng)由靜脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、或肌肉內(nèi)施用路徑對(duì)所述人施用所述疫苗組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)肌肉內(nèi)施用路徑對(duì)所述人施用所述疫苗組合物。
[0011]單劑疫苗組合物可以包含約5μ g至約150 μ g劑量的原型基因小組I諾如病毒VLP、原型基因小組II諾如病毒VLP、或這兩者。在單劑疫苗組合物包含原型基因小組I和原型基因小組II諾如病毒VLP兩者的實(shí)施方案中，每種VLP的劑量可以是相同的或不同的。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含不超過(guò)50 μ g原型基因小組I諾如病毒VLP。在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含不超過(guò)25 μ g原型基因小組I諾如病毒VLP。在又一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含不超過(guò)150 μ g原型基因小組II諾如病毒VLP。在又一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含不超過(guò)50 μ g原型基因小組II諾如病毒VLP。諾如病毒VLP可以是單價(jià)VLP或多價(jià)VLP。
[0012]在本發(fā)明的一些方面，疫苗組合物中的原型基因小組I諾如病毒VLP包含自原型基因小組I病毒株衍生的衣殼蛋白。在一個(gè)實(shí)施方案中，原型基因小組I諾如病毒VLP包含自原型基因小組I，基因型I諾如病毒衍生的衣殼蛋白。在另一個(gè)實(shí)施方案中，原型基因小組I諾如病毒VLP包含來(lái)自諾沃克病毒的衣殼蛋白。在本發(fā)明的其它方面，疫苗組合物中的原型基因小組II諾如病毒VLP包含自原型基因小組II病毒株衍生的衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，原型基因小組II諾如病毒VLP包含來(lái)自原型基因小組II，基因型4諾如病毒的衣殼蛋白。在某些實(shí)施方案中，原型基因小組II諾如病毒VLP是自表達(dá)原型基因小組II諾如病毒共有序列生成的VLP。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，原型基因小組II諾如病毒VLP包含具有序列SEQ ID NO:1的衣 殼蛋白。
[0013]在某些實(shí)施方案中，疫苗組合物進(jìn)一步包含至少一種佐劑。優(yōu)選地，佐劑不是細(xì)菌外毒素佐劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，佐劑是to 11樣受體激動(dòng)劑，諸如單磷酰脂質(zhì)A (MPL)、鞭毛蛋白、或CpG。在另一個(gè)實(shí)施方案中，佐劑是氫氧化鋁(例如明礬)。在某些實(shí)施方案中，疫苗組合物包含兩種佐劑，諸如MPL和氫氧化鋁。在一些實(shí)施方案中，疫苗組合物可以進(jìn)一步包含緩沖劑，諸如L-組氨酸、咪唑、琥珀酸、Tris、和檸檬酸。疫苗組合物可以配制為干粉末或液體。在一個(gè)實(shí)施方案中，疫苗組合物配制為液體(例如水性配制劑)。
[0014]附圖簡(jiǎn)述
[0015]圖1:泛ELISA測(cè)定法的結(jié)果，所述泛ELISA測(cè)定法測(cè)量來(lái)自用安慰劑(鹽水)或含有5，15，50，或150 μ g原型基因小組1.1諾如病毒VLP和原型基因小組I1.4諾如病毒VLP之每種的疫苗配制劑肌肉內(nèi)免疫的人志愿者的組合血清IgG，IgA，和IgM水平。在第一次免疫后7和21天時(shí)及第二次免疫后7和28天時(shí)對(duì)每個(gè)劑量水平顯示抗G1.1 (A)和抗GI1.4(B)抗體的幾何均值滴度。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0016]圖2:泛ELISA測(cè)定法的結(jié)果，所述泛ELISA測(cè)定法測(cè)量來(lái)自用安慰劑(鹽水)或含有5，15，50，或150 μ g原型基因小組1.1諾如病毒VLP和原型基因小組I1.4諾如病毒VLP之每種的疫苗配制劑肌肉內(nèi)免疫的人志愿者的組合的血清IgG，IgA，和IgM水平。在第一次免疫后7和21天時(shí)及第二次免疫后7和28天時(shí)對(duì)每個(gè)劑量水平顯示抗G1.1 (A)和抗GI1.4(B)抗體的幾何均值倍數(shù)升高。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0017]圖3:泛ELISA測(cè)定法的結(jié)果，所述泛ELISA測(cè)定法測(cè)量來(lái)自用安慰劑(鹽水)或含有5，15，50，或150 μ g原型基因小組1.1諾如病毒VLP和原型基因小組I1.4諾如病毒VLP之每種的疫苗配制劑肌肉內(nèi)免疫的人志愿者的組合的血清IgG，IgA，和IgM水平。在第一次免疫后7和21天時(shí)及第二次免疫后7和28天時(shí)對(duì)每個(gè)劑量水平顯示抗G1.1 (A)和抗GI1.4(B)抗體的百分比血清響應(yīng)率(即，與免疫前滴度相比抗體滴度的4倍升高)。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0018]圖4 =ELISA測(cè)定法的結(jié)果，所述ELISA測(cè)定法測(cè)量來(lái)自用安慰劑(鹽水)或含有5，15，或50 μ g原型基因小組1.1諾如病毒VLP和原型基因小組I1.4諾如病毒VLP之每種的疫苗配制劑肌肉內(nèi)免疫的人志愿者的血清IgA。在第一次免疫后7和21天時(shí)及第二次免疫后7和28天時(shí)對(duì)每個(gè)劑量水平顯示抗G1.1 (A)和抗GI1.4 (B)抗體的幾何均值滴度。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0019]圖5 =ELISA測(cè)定法的結(jié)果，所述ELISA測(cè)定法測(cè)量來(lái)自用安慰劑(鹽水)或含有5，15，或50 μ g原型基因小組1.1諾如病毒VLP和原型基因小組I1.4諾如病毒VLP之每種的疫苗配制劑肌肉內(nèi)免疫的人志愿者的血清IgA。在第一次免疫后7和21天時(shí)及第二次免疫后7和28天時(shí)對(duì)每個(gè)劑量水平顯示抗G1.1(A)和抗GI1.4(B)抗體的幾何均值倍數(shù)增加。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0020]圖6 =ELISA測(cè)定法的結(jié)果，所述ELISA測(cè)定法測(cè)量來(lái)自用安慰劑(鹽水)或含有5，15，或50 μ g原型基因小組1.1諾如病毒VLP和原型基因小組I1.4諾如病毒VLP之每種的疫苗配制劑肌肉內(nèi)免疫的人志愿者的血清IgA。在第一次免疫后7和21天時(shí)及第二次免疫后7和28天時(shí)對(duì)每個(gè)劑量水平顯示抗G1.1 (A)和抗GI1.4(B)抗體的百分比血清響應(yīng)率(即，與免疫前滴度相比抗體滴度的4倍升高)。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0021]圖7 =ELISA測(cè)定法的結(jié)果，所述ELISA測(cè)定法測(cè)量來(lái)自用安慰劑(鹽水)或含有5，15，或50 μ g原型基因小組1.1諾如病毒VLP和原型基因小組I1.4諾如病毒VLP之每種的疫苗配制劑肌肉內(nèi)免疫的人志愿者的血清IgG。在第一次免疫后7和21天時(shí)及第二次免疫后7和28天時(shí)對(duì)每個(gè)劑量水平顯示抗G1.1 (A)和抗GI1.4 (B)抗體的幾何均值滴度。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0022]圖8 =ELISA測(cè)定法的結(jié)果，所述ELISA測(cè)定法測(cè)量來(lái)自用安慰劑(鹽水)或含有5，15，或50 μ g原型基因小組1.1諾如病毒VLP和原型基因小組I1.4諾如病毒VLP之每種的疫苗配制劑肌肉內(nèi)免疫的人志愿者的血清IgG。在第一次免疫后7和21天時(shí)及第二次免疫后7和28天時(shí)對(duì)每個(gè)劑量水平顯示抗G1.1(A)和抗GI1.4(B)抗體的幾何均值倍數(shù)增加。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0023] 圖9 =ELISA測(cè)定法的結(jié)果，所述ELISA測(cè)定法測(cè)量來(lái)自用安慰劑(鹽水)或含有5，15，或50 μ g原型基因小組1.1諾如病毒VLP和原型基因小組I1.4諾如病毒VLP之每種的疫苗配制劑肌肉內(nèi)免疫的人志愿者的血清IgG。在第一次免疫后7和21天時(shí)及第二次免疫后7和28天時(shí)對(duì)每個(gè)劑量水平顯示抗G1.1 (A)和抗GI1.4(B)抗體的百分比血清響應(yīng)率(即，與免疫前滴度相比抗體滴度的4倍升高)。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。志愿者在研究第O天和第28天接受免疫。
[0024]圖10:泛ELISA測(cè)定法的結(jié)果，所述泛ELISA測(cè)定法測(cè)量來(lái)自在指定的時(shí)間點(diǎn)時(shí)用如 El Kamary 等(2010) J Infect Dis, Vol.202 (11): 1649-1658 中描述的鼻內(nèi)單價(jià)諾如病毒疫苗(LV01-103組)或如實(shí)施例1中描述的肌肉內(nèi)二價(jià)諾如病毒疫苗(LV03-104組)免疫的人志愿者的組合的血清IgG，IgA，和IgM水平。人志愿者接受安慰劑或兩劑肌肉內(nèi)或鼻內(nèi)疫苗配制劑。肌肉內(nèi)二價(jià)諾如病毒疫苗含有5μ g原型基因小組1.1諾如病毒VLP和原型基因小組I1.4諾如病毒VLP之每種。鼻內(nèi)單價(jià)疫苗含有100 μ g原型基因小組1.1諾如病毒。在第二次免疫后用活的諾如病毒攻擊接受鼻內(nèi)疫苗或安慰劑的志愿者。
[0025]圖11:對(duì)在用5μ g劑量的肌肉內(nèi)二價(jià)諾如病毒疫苗(A)或安慰劑(B)免疫前第O天和免疫后第7天自人志愿者獲得的外周血單個(gè)核細(xì)胞的FACS分析。CD19+PBMC是粘膜靶向的，如α 4/β 7歸巢受體和趨化因子CCRlO受體表達(dá)證明的。
[0026]發(fā)明詳述
[0027]本發(fā)明涉及在受試者中引發(fā)針對(duì)諾如病毒感染的保護(hù)性免疫的方法。具體而言，本發(fā)明提供了在人中引發(fā)針對(duì)諾如病毒的保護(hù)性免疫的方法，其通過(guò)對(duì)人胃腸外施用不超過(guò)單劑包含諾如病毒VLP和任選地至少一種佐劑的疫苗，其中疫苗賦予保護(hù)免于或改善諾如病毒感染的至少一種癥狀。令人驚訝地，發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了對(duì)人肌肉內(nèi)施用不超過(guò)單劑包含諾如病毒VLP的疫苗組合物誘導(dǎo)快速的(即在免疫的7天內(nèi))血清血清轉(zhuǎn)化(即高于疫苗接種前水平的抗原特異性血清抗體滴度的至少三倍升高)，其指示針對(duì)諾如病毒感染和疾病的保護(hù)性免疫應(yīng)答。由此單劑疫苗組合物誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答在與人攻擊研究中通過(guò)施用活病毒在天然感染的情況中觀(guān)察到的抗體滴度相似的高抗體滴度達(dá)到穩(wěn)定水平。令人感興趣地，加強(qiáng)劑量的疫苗是不需要的，因?yàn)槊庖邞?yīng)答在進(jìn)一步施用額外的疫苗劑量后沒(méi)有升聞。
[0028]本發(fā)明提供了包含一種或多種諾如病毒抗原的疫苗組合物?！爸Z如病毒”、“諾如病毒(NOR) ”及本文中的語(yǔ)法等同物指杯狀病毒科(Caliciviridae)的諾如病毒屬的成員。在一些實(shí)施方案中，諾如病毒可包括一組相關(guān)的、正義單鏈RNA、無(wú)包被病毒，其對(duì)于人類(lèi)或非人哺乳類(lèi)物種可以是感染性的。在一些實(shí)施方案中，諾如病毒能在人類(lèi)中引起急性胃腸炎。諾如病毒也可稱(chēng)作小圓結(jié)構(gòu)病毒(SRSV)，當(dāng)通過(guò)電子顯微術(shù)觀(guān)看時(shí)，其具有限定的表面結(jié)構(gòu)或粗糙的邊緣。
[0029]諾如病毒內(nèi)包括至少5種原型基因小組(GI，GII, GUI, GIV，和GV)。GI, GII,和GIV諾如病毒在人中是感染性的，而GIII諾如病毒主要感染牛物種。最近已經(jīng)從小鼠分離出 GV(Zheng 等(2006)Virology, Vol346:312-323)。代表性 GIII 是耶拿(Jena)和紐布利(Newbury)株，而Alphatron,勞德代爾堡(Fort Lauderdale),和圣克勞德(Saint Cloud)株代表GIV。GI和GII組可以基于遺傳分類(lèi)進(jìn)一步分成遺傳簇或基因型(Ando 等(2000)J.1nfectious Diseases, Vol.181(Supp2):S336-S348;Lindell 等(2005) J.Clin.Microbiol., Vol.43(3):1086 - 1092)。如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)遺傳簇與術(shù)語(yǔ)基因型可互換使用。在原型基因小組I內(nèi)，存在有至今已知的8種GI簇(及原型病毒株名稱(chēng)):G1.1(諾沃克(NV-USA93)) ;G1.2(南安普頓(Southhampton) (S0V-GBR93))；G1.3 (沙原(Desert Shield) (DSV-USA93)) ;G1.4(旅游客船病毒(Cruise Ship virus)/千葉(Chiba)(千葉-JPN00)) ;G1.5(318/Musgrove(Musgrov-GBR00)) ;G1.6(海塞(Hesse)(海塞-DEU98)) ；G1.7 (Wnchest-GBROO)；和 G1.8(拳師(Boxer) -USA02)。在原型基因小組II內(nèi)，存在有至今已知的19種GII簇(及原型病毒株名稱(chēng)):GI1.1(夏威夷(夏威夷-USA94)) ;GI1.2(雪山病毒 /Melksham(Msham_GBR95)) ；GI1.3(多倫多(多倫多-CAN93)) ；GI1.4(布里斯托爾(Bristol)/Lordsdale (Bristol-GBR93))；GI1.5 (290/Hillingdon(Hilingd-GBROO)) ；GI1.6 (269/Seacroft (Seacrof-GBROO))；GI1.7(273/利茲(Leeds)(利茲-GBR00)) ;GI1.8 (539/阿姆斯特丹(Amsterdam)(阿姆斯特丹-NLD")) ；GI1.9 (378 (VABeach-USAOl)), GI1.10(愛(ài)爾福特(Erfurt)-DEUOl)；GI1.11 (SW9180JPN01) ；GI1.12 (ffor11ey-GBROO) ；GI1.13 (Faytvi1-USA02)；GI1.14(M7-USA03) ；GI1.15(J23-USA02) ；GI1.16 (Tiffin-USA03) ；GI1.17(CSE1-USA03)；GI1.18(QW101/2003/US)和 GI1.19(QW170/2003/US)。
[0030]“諾如病毒”在本文中還指重組諾如病毒病毒樣顆粒(rNOR VLP)。在一些實(shí)施方案中，在細(xì)胞中至少重組表達(dá)由0RF2編碼的諾如病毒衣殼蛋白(例如在Sf9細(xì)胞中自桿狀病毒載體)可以導(dǎo)致衣殼蛋白自發(fā)的自組裝成VLP。在一些實(shí)施方案中，在細(xì)胞中至少重組表達(dá)由ORFl和0RF2編碼的諾如病毒蛋白(例如在Sf9細(xì)胞中自桿狀病毒載體)可以導(dǎo)致衣殼蛋白自發(fā)的自組裝成VLP。VLP在結(jié)構(gòu)上類(lèi)似于諾如病毒，但是缺乏病毒RNA基因組，并且因此不是感染性的。因而，“諾如病毒”包括可以為感染性的病毒體或非感染性顆粒，其包括有缺陷的顆粒。
[0031]諾如病毒的非限制性例子包括諾如病毒原型基因小組I株Hu/NoV/西切斯特(West Chester)/2001/USA, GenBank 登錄號(hào) AY502016 ;千葉病毒(CHV, GenBankAB042808);諾如病毒原型基因小組2株Hu/NoV/布拉多克高地(Braddock Heights)/1999/USA, GenBank登錄號(hào)AY502015 ;諾如病毒原型基因小組2株Hu/NoV/費(fèi)耶特(Fayette)/1999/USA, GenBank登錄號(hào)AY502014 ;諾如病毒原型基因小組2株Hu/NoV/費(fèi)爾菲爾德(Fairfield)/1999/USA，GenBank登錄號(hào)AY502013 ;諾如病毒原型基因小組2株Hu/NoV/桑達(dá)斯基(Sandusk`y)/1999/USA，GenBank登錄號(hào)AY502012 ;諾如病毒原型基因小組2株Hu/NoV/坎頓(Canton)/1999/USA，GenBank登錄號(hào)AY502011 ;諾如病毒原型基因小組2株Hu/NoV/蒂芬(Tiffin)/1999/USA, GenBank登錄號(hào)AY502010 ;諾如病毒原型基因小組2株!111/^0￥/^341/2002/^34，661^&1^登錄號(hào)4￥50200 ;諾如病毒原型基因小組I株Hu/NoV/威斯康星(Wisconsin)/2001/USA，GenBank登錄號(hào)AY502008 ;諾如病毒原型基因小組I株Hu/NoV/CS-841/2001/USA，GenBank登錄號(hào)AY502007 ;諾如病毒原型基因小組2株Hu/NoV/海勒姆(Hiram) /2000/USA, GenBank登錄號(hào)AY502006 ;諾如病毒原型基因小組2株Hu/NoV/通托加尼(Tontogany)/1999/USA，GenBank登錄號(hào)AY502005 ;諾沃克病毒，完整基因組，GenBank 登錄號(hào) NC.sub.一001959 ;諾如病毒 Hu/GI/ 小樽(Otofuke)/1979/JP 基因組RNA，完整基因組，GenBank登錄號(hào)AB187514 ;諾如病毒Hu/北海道(Hokkaido)/133/2003/JP, GenBank 登錄號(hào) AB212306 ;諾如病毒悉尼(Sydney) 2212，GenBank 登錄號(hào) AY588132 ；諾沃克病毒株SN2000JA，GenBank登錄號(hào)AB190457 ；Lordsdale病毒完整基因組，GenBank登錄號(hào)X86557 ;諾沃克樣病毒基因組RNA，Gifu’ 96，GenBank登錄號(hào)AB045603 ;諾沃克病毒株越南026，完整基因組，GenBank登錄號(hào)AF504671 ;諾如病毒Hu/GI1.4/2004/N/L,GenBank 登錄號(hào) AY883096 ;諾如病毒 Hu/GII/ 北辰(Hokushin)/03/JP，GenBank 登錄號(hào)AB195227 ;諾如病毒 Hu/GII/ 賀茂(Kamo)/03/JP，GenBank 登錄號(hào) AB195228 ;諾如病毒 Hu/GII/Sinsiro/97/JP,GenBank登錄號(hào)AB195226 ;諾如病毒Hu/GII/Ina/02/JP，GenBank登錄號(hào) AB195225 ;諾如病毒 Hu/NLV/GII/Neustrelitz260/2000/DE，GenBank 登錄號(hào) AY772730 ；諾如病毒 Hu/NLV/Dresdenl74/pUS-NorII/1997/GE，GenBank 登錄號(hào) AY741811 ;諾如病毒 Hu/NLV/ 牛津 /B2S16/2002/UK，GenBank 登錄號(hào) AY587989 ;諾如病毒 Hu/NLV/ 牛津 /B4S7/2002/UK, GenBank 登錄號(hào) AY587987 ;諾如病毒 Hu/NLV/ 威特尼(Witney) /B7S2/2003/UK, GenBank 登錄號(hào) AY588030 ;諾如病毒 Hu/NLV/ 班伯里(Banbury) /B9S23/2003/UK,GenBank 登錄號(hào) AY588029 ;諾如病毒 Hu/NLV/ 奇平諾頓(ChippingNorton)/2003/UK，GenBank 登錄號(hào) AY588028 ;諾如病毒 Hu/NLV/ 迪考特(Didcot)/B9S2/2003/UK，GenBank登錄號(hào) AY588027 ;諾如病毒 Hu/NLV/ 牛津 /B8S5/2002/UK，GenBank 登錄號(hào) AY588026 ;諾如病毒 Hu/NLV/ 牛津 /B6S4/2003/UK，GenBank 登錄號(hào) AY588025 ;諾如病毒 Hu/NLV/ 牛津 /B6S5/2003/UK, GenBank 登錄號(hào) AY588024 ;諾如病毒 Hu/NLV/ 牛津 /B5S23/2003/UK, GenBank 登錄號(hào) AY588023 ;諾如病毒 Hu/NLV/ 牛津 /B6S2/2003/UK，GenBank 登錄號(hào)AY588022 ;諾如病毒 Hu/NLV/ 牛津 /B6S6/2003/UK，GenBank 登錄號(hào) AY588021 ;諾沃克樣病毒隔離群Bo/ThirsklO/OO/UK，GenBank登錄號(hào)AY126468 ;諾沃克樣病毒隔離群Bo/Penrith55/00/UK, GenBank 登錄號(hào) AY126476 ;諾沃克樣病毒隔離群 Bo/Aberystwyth24/00/UK, GenBank 登錄號(hào) AY126475 ;諾沃克樣病毒隔離群 Bo/Dumfries/94/UK，GenBank 登錄號(hào)AY126474 ;諾如病毒NLV/IF2036/2003/伊拉克，GenBank登錄號(hào)AY675555 ;諾如病毒 NLV/IF1998/2003/ 伊拉克，GenBank 登錄號(hào) AY675554 ;諾如病毒 NLV/BUDS/2002/USA，GenBank 登錄號(hào) AY660568 ;諾如病毒 NLV/ 巴黎島(Paris Island)/2003/USA, GenBank 登錄號(hào)AY652979 ;雪山病毒，完整基因組，GenBank登錄號(hào)AY134748 ;諾沃克樣病毒NLV/勞德代爾堡(Fort Lauderdale) /560/1998/US, GenBank 登錄號(hào) AF414426 ；Hu/ 諾如病毒 / 廣島 /1999/JP(9912-02F) ,GenBank 登錄號(hào) AB044366 ;諾沃克樣病毒株 11MSU-MW, GenBank 登錄號(hào)AY274820 ;諾沃克樣病毒株B-1SVD，GenBank登錄號(hào)AY274819 ;諾如病毒原型基因小組 2 株 Hu/NoV/法明頓山(Farmington Hills)/2002/USA, GenBank 登錄號(hào) AY502023 ;諾如病毒原型基因小組2株Hu/NoV/CS-G4/2002/USA，GenBank登錄號(hào)AY502022 ;諾如病毒原型基因小組2株Hu/NoV/CS-G2/2002/USA，GenBank登錄號(hào)AY502021 ;諾如病毒原型基因小組2株Hu/NoV/CS-G12002/USA，GenBank登錄號(hào)AY502020 ;諾如病毒原型基因小組2株Hu/NoV/安克雷奇(Anchorage)/2002/USA，GenBank登錄號(hào)AY502019 ;諾如病毒原型基因小組2株Hu/NoV/CS-Dl/2002/CAN，GenBank登錄號(hào)AY502018 ;諾如病毒原型基因小組2 株 Hu/NoV/Germanton/2002/USA，GenBank 登錄號(hào) AY502017 ;人杯狀病毒(calicivirus)NLV/GII/Langenl061/2002/DE，完整基因組，GenBank登錄號(hào)AY485642 ;鼠諾如病毒I多蛋白，GenBank登錄號(hào)AY228235 ;諾沃克病毒，GenBank登錄號(hào)AB067536 ;人杯狀病毒NLV/Mex7076/1999，GenBank登錄號(hào)AF542090 ;人杯狀病毒NLV/奧伯豪森(Oberhausen)455/01/DE, GenBank 登錄號(hào) AF539440 ;人杯狀病毒 NLV/ 赫茨伯格(Herzberg) 385/01/DE，GenBank登錄號(hào)AF539439 ;人杯狀病毒NLV/Boxer/2001/US，GenBank登錄號(hào)AF538679 ;諾沃克樣病毒基因組RNA，完整基因組，GenBank登錄號(hào)AB081723 ;諾沃克樣病毒基因組RNA，完整基因組，隔離群=Saitama U201, GenBank登錄號(hào)AB039782 ;諾沃克樣病毒基因組RNA，完整基因組，隔離群=Saitama U18，GenBank登錄號(hào)AB039781 ;諾沃克樣病毒基因組RNA，完整基因組，隔離群:Saitama U25, GenBank登錄號(hào)AB039780 ;諾沃克病毒株:U25GII, GenBank登錄號(hào)AB067543 ;諾沃克病毒株:U201GII，GenBank登錄號(hào)AB067542 ;諾沃克樣病毒株416/97003156/1996/LA, GenBank 登錄號(hào) AF080559 ;諾沃克樣病毒株 408/97003012/1996/FL, GenBank 登錄號(hào) AR)80558 ;諾沃克樣病毒 NLV/Burwash Landing/331/1995/US, GenBank登錄號(hào) AF414425 ;諾沃克樣病毒 NLV/邁阿密海灘(Miami Beach)/326/1995/US, GenBank登錄號(hào) AF414424 ;諾沃克樣病毒 NLV/ 懷特河(White River)/290/1994/US, GenBank 登錄號(hào) AF414423 ;諾沃克樣病毒 NLV/ 新奧爾良(New Orleans) /306/1994/US, GenBank登錄號(hào)AF414422 ;諾沃克樣病毒LV/卡納維拉爾港(Port Canaveral)/301/1994/US,GenBank 登錄號(hào) AF414421 ;諾沃克樣病毒 NLV/檀香山(Honolulu)/314/1994/US，GenBank登錄號(hào) AF414420 ;諾沃克樣病毒 NLV/ 里士滿(mǎn)(Richmond) /283/1994/US，GenBank 登錄號(hào) AF414419 ;諾沃克樣病毒 NLV/威斯多佛(Westover)/302/1994/US，GenBank 登錄號(hào)AF414418 ;諾沃克樣病毒 NLV/UK3-17/12700/1992/GB，GenBank 登錄號(hào) AF414417 ；諾沃克樣病毒NLV/邁阿密/81/1986/US，GenBank登錄號(hào)AF414416 ;雪山株，GenBank登錄號(hào)U70059 ;沙原病毒(Desert Shield virus)DSV395, GenBank 登錄號(hào) U04469 ;諾沃克病毒，完整基因組，GenBank登錄號(hào)AF093797 ;夏威夷杯狀病毒，GenBank登錄號(hào)U07611 ;南安普敦病毒(Southampton virus), GenBank 登錄號(hào) L07418 ;諾沃克病毒(SRSV-KY-89/89/J)，GenBank 登錄號(hào) L23828 ;諾沃克病毒(SRSV-SMA/76/US)，GenBank 登錄號(hào) L23831 ；坎伯威爾病毒(Camberwell virus), GenBank登錄號(hào)U46500 ;人杯狀病毒株Melksham,GenBank 登錄號(hào) X81879 ;人杯狀病毒(calicivirus)株 MX，GenBank 登錄號(hào) U22498 ;小呼腸孤病毒(Minireovirus) TV24，GenBank登錄號(hào)U02030 ;及諾沃克樣病毒NLV/格溫內(nèi)思(Gwynedd)/273/1994/US，GenBank登錄號(hào)AF414409 ;通過(guò)提及將所有病毒的序列(如到本申請(qǐng)的提交日進(jìn)入的)收入本文。別的諾如病毒序列披露于下列專(zhuān)利公開(kāi)文本中:W02005/030806, W02000/79280, JP2002020399, US2003129588,美國(guó)專(zhuān)利 N0.6，572，862，W01994/05700,和W005/032457，通過(guò)提及將它們?nèi)客暾杖氡疚摹ｊP(guān)于諾如病毒的序列比較和遺傳多樣 性和種系發(fā)生分析的討論，還可見(jiàn)Green等(2000) J.1nfect.Dis.,Vol.181(增刊 2):S322-330 ;Wang 等(1994) J.Virol., Vol.68:5982-5990 ；Chen 等(2004)J.Virol.，Vol.78:6469-6479 ；Chakravarty 等(2005)J.Virol.，Vol.79:554-568 ；Hansman 等(2006)J.Gen.ViroI.，Vo I.87:909-9 19 ;Bu11 等(2006)J.Cl in.Micr0., Vol.44(2):327-333 ；Siebenga 等(2007)J.Virol., Vol.81 (18):9932-9941,及Fankhauser 等(1998) J.1nfect.Dis., Vol.178:1571-1578。將每種的核酸和相應(yīng)的氨基酸序列全部通過(guò)提及完整收錄。在一些實(shí)施方案中，可以將密文用于鑒定目的并且構(gòu)造:分離病毒的宿主物種/屬縮寫(xiě)/種縮寫(xiě)/株名稱(chēng)/發(fā)生的年份/起源國(guó)家。(Green等，Human Caliciviruses, in Fields Virology Vol.1841-874 (Knipe 和 Howley 主編，第4 版，Lippincott Williams&Wilkins2001))。原型基因小組 II，基因型 4 (GI1.4)病毒株(例如休斯頓，密涅瓦(Minerva)(又稱(chēng)為Den Haag),和勞倫斯(Laurens)(又稱(chēng)為Yerseke)株)在一些實(shí)施方案中是優(yōu)選的。由于鑒定了新的毒株并且其遺傳序列是可用的，本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)能夠使用普通技術(shù)在本發(fā)明的組合物和方法中采用使用這些當(dāng)代毒株得到的VLP。如此，本發(fā)明涵蓋自此類(lèi)毒株制成的作為合適的抗原的VLP，用于本文中描述的組合物和方法。
[0032]諾如病毒抗原可以是肽、蛋白質(zhì)、或病毒樣顆粒(VLP)的形式。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，諾如病毒抗原包含VLP。如本文中所使用的，“病毒樣顆?；騐LP”指自諾如病毒的衣殼蛋白編碼序列生成的且包含與感染性諾如病毒顆粒相似的抗原特征的病毒樣顆粒、其碎片、聚集物、或部分。諾如病毒抗原也可以是VLP的衣殼單體、衣殼多聚體、蛋白質(zhì)或肽片段、或其聚集物或混合物的形式。諾如病毒抗原性蛋白質(zhì)或肽也可以是使用本領(lǐng)域已知方法生成的變性形式。
[0033]本發(fā)明的VLP可以使用本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)自全長(zhǎng)諾如病毒衣殼蛋白諸如VPl和/或VP2蛋白或者某些VPl或VP2衍生物形成?；蛘?，用于形成VLP的衣殼蛋白是截短的衣殼蛋白。在一些實(shí)施方案中，例如，至少一個(gè)VLP包含截短的VPl蛋白。在其它實(shí)施方案中，所有VLP包含截短的VPl蛋白。截短可以是N端或C端截短。截短的衣殼蛋白是合適地功能性衣殼蛋白衍生物。功能性衣殼蛋白衍生物能夠以與由全長(zhǎng)衣殼蛋白組成的VLP引起免疫應(yīng)答的方式相同的方式引起免疫應(yīng)答(如果必要，當(dāng)有合適的佐劑時(shí))。[0034]VLP可含有主要VPl蛋白和/或次要VP2蛋白。在一些實(shí)施方案中，每個(gè)VLP含有只來(lái)自一個(gè)諾如病毒基因小組的VPl和/或VP2蛋白，產(chǎn)生單價(jià)VLP。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“單價(jià)”指抗原性蛋白質(zhì)衍生自單一諾如病毒基因小組。例如，VLP含有來(lái)自基因小組I病毒株的VPl和/或VP2 (例如來(lái)自諾沃克病毒的VPl和VP2)。優(yōu)選的是，VLP主要由VPl蛋白構(gòu)成。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，抗原是單價(jià)VLP的混合物，其中所述組合物包括由來(lái)自單一諾如病毒基因小組的VPl和VP2構(gòu)成的VLP并混有由來(lái)自取自多種病毒株的不同諾如病毒基因小組(例如諾沃克病毒和休斯頓病毒)的VPl和VP2構(gòu)成的VLP。純粹舉例來(lái)說(shuō)，所述組合物可含有來(lái)自諾如病毒基因小組I 一種或多種株的單價(jià)VLP以及來(lái)自諾如病毒基因小組II 一種或多種株的單價(jià)VLP。毒株可以基于其在給定時(shí)間的流行優(yōu)勢(shì)而選擇。在某些實(shí)施方案中，諾如病毒VLP混合物由G1.1和GI1.4病毒株構(gòu)成。更優(yōu)選地，諾如病毒VLP混合物由諾沃克毒株和自原型基因小組II諾如病毒衍生的共有衣殼序列構(gòu)成。自流行諾如病毒序列衍生的共有衣殼序列和用此類(lèi)序列生成的VLP記載于W02010/017542，通過(guò)提及將其完整收入本文。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，自原型基因小組II，基因型4(GI1.4)病毒株衍生的共有衣殼序列包含SEQ ID N0:1的序列。如此，在一些實(shí)施方案中，疫苗組合物包含單價(jià)VLP的混合物，其中一種單價(jià)VLP包含來(lái)自原型基因小組I諾如病毒(例如諾沃克)的衣殼蛋白，且另一種單價(jià)VLP包含包含序列SEQ ID NO:1的共有衣殼蛋白。
【權(quán)利要求】
1.一種在人中引發(fā)針對(duì)諾如病毒(Norovirus)的保護(hù)性免疫的方法，其包括對(duì)所述人胃腸外施用不超過(guò)單劑疫苗組合物，所述組合物包含原型基因小組I諾如病毒病毒樣顆粒(VLP)，其中與施用所述組合物前所述人中的滴度相比，所述組合物至少誘導(dǎo)諾如病毒特異性血清抗體滴度的3倍升高，且其中所述原型基因小組I諾如病毒VLP包含自原型基因小組I病毒株衍生的衣殼蛋白。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)150μ g所述原型基因小組I諾如病毒 VLP。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)50μ g所述原型基因小組I諾如病毒 VLP。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)25μ g所述原型基因小組I諾如病毒 VLP。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)15μ g所述原型基因小組I諾如病毒 VLP。
6.權(quán)利要求1的方法，其中與施用所述組合物前所述人中的滴度相比，所述組合物至少誘導(dǎo)諾如病毒特異性血清抗體滴度的6倍升高。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述諾如病毒VLP是單價(jià)VLP或多價(jià)VLP。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含原型基因小組II諾如病毒VLP，所述原型基因小組II諾如病毒VLP包含自原型基因小組II病毒株衍生的衣殼蛋白。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)150μ g原型基因小組II諾如病毒VLP。`
10.權(quán)利要求8的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)50μ g原型基因小組II諾如病毒VLP。
11.權(quán)利要求8的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)25μ g原型基因小組II諾如病毒VLP。
12.權(quán)利要求8的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)15μ g原型基因小組II諾如病毒VLP。
13.權(quán)利要求8的方法，其中所述原型基因小組I諾如病毒VLP是諾沃克(Norwalk)病毒VLP，且所述原型基因小組II諾如病毒VLP是自表達(dá)原型基因小組II諾如病毒的共有序列生成的VLP。
14.一種在人中引發(fā)針對(duì)諾如病毒的保護(hù)性免疫的方法，其包括對(duì)所述人胃腸外施用不超過(guò)單劑疫苗組合物，所述組合物包含原型基因小組II諾如病毒病毒樣顆粒(VLP)，其中與施用所述組合物前所述人中的滴度相比，所述組合物至少誘導(dǎo)諾如病毒特異性血清抗體滴度的3倍升高，且其中所述原型基因小組II諾如病毒VLP包含自原型基因小組II病毒株衍生的衣殼蛋白。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)150μ g所述原型基因小組II諾如病毒VLP。
16.權(quán)利要求14的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)50μ g所述原型基因小組II諾如病毒VLP。
17.權(quán)利要求14的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)25μ g所述原型基因小組II諾如病毒VLP。
18.權(quán)利要求14的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)15μ g所述原型基因小組II諾如病毒VLP。
19.權(quán)利要求14的方法，其中所述原型基因小組II諾如病毒VLP包含自原型基因小組II，基因型4病毒株衍生的衣殼蛋白。
20.權(quán)利要求14的方法，其中與施用所述組合物前所述人中的滴度相比，所述組合物至少誘導(dǎo)諾如病毒特異性血清抗體滴度的6倍升高。
21.權(quán)利要求14的方法，其中所述諾如病毒VLP是單價(jià)VLP或多價(jià)VLP。
22.權(quán)利要求14的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含原型基因小組I諾如病毒VLP，所述原型基因小組I諾如病毒VLP包含自原型基因小組I病毒株衍生的衣殼蛋白。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)150μ g原型基因小組I諾如病毒VLP。
24.權(quán)利要求22的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)50μ g原型基因小組I諾如病毒VLP。
25.權(quán)利要求22的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)25μ g原型基因小組I諾如病毒VLP。`
26.權(quán)利要求22的方法，其中所述組合物包含不超過(guò)15μ g原型基因小組I諾如病毒VLP。
27.權(quán)利要求14的方法，其中所述原型基因小組II諾如病毒VLP是自表達(dá)原型基因小組II諾如病毒的共有序列生成的VLP。
28.權(quán)利要求1至27中任一項(xiàng)的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含至少一種佐劑。
29.權(quán)利要求28的方法，其中所述至少一種佐劑是Toll樣受體激動(dòng)劑。
30.權(quán)利要求1至27中任一項(xiàng)的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含兩種佐劑。
31.權(quán)利要求30的方法，其中所述兩種佐劑是單磷酰脂質(zhì)A和氫氧化鋁。
32.權(quán)利要求1至31中任一項(xiàng)的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含緩沖劑。
33.權(quán)利要求32的方法，其中所述緩沖劑選自下組:L-組氨酸、咪唑、琥珀酸、TrisjP檸檬酸。
34.權(quán)利要求1至33中任一項(xiàng)的方法，其中通過(guò)靜脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、或肌肉內(nèi)施用路徑對(duì)所述人施用所述疫苗組合物。
35.權(quán)利要求34的方法，其中通過(guò)肌肉內(nèi)施用路徑對(duì)所述人施用所述疫苗組合物。
36.權(quán)利要求1至35中任一項(xiàng)的方法，其中所述疫苗組合物配制為液體。
37.權(quán)利要求1至35中任一項(xiàng)的方法，其中在施用所述單劑組合物的7天內(nèi)誘導(dǎo)諾如病毒特異性抗體滴度的升高。
38.權(quán)利要求1至35中任一項(xiàng)的方法，其中所述疫苗組合物賦予保護(hù)免于諾如病毒感染的一種或多種癥狀。
【文檔編號(hào)】A61K39/125GK103874507SQ201280043691
【公開(kāi)日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2012年7月11日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月11日
【發(fā)明者】C.理查德森, R.F.巴加特茲, P.M.門(mén)德?tīng)柭? 申請(qǐng)人:武田疫苗股份有限公司