治療或預(yù)防膽固醇相關(guān)疾病的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及使用針對(duì)前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9(PCSK9)的抗體來(lái)治療或預(yù)防膽固醇相關(guān)疾病(如高膽固醇血癥、高脂血癥或血脂異常)的方法。還描述了制劑及產(chǎn)生所述制劑的方法。
【專(zhuān)利說(shuō)明】治療或預(yù)防膽固醇相關(guān)疾病的方法
[0001]本申請(qǐng)要求于2012年5月3日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/642，363、于2012年3月22日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/614，417、于2012年2月6日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/595，526、于2011年11月21日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/562，303、于2011年5月10日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/484，610的權(quán)益，以上所有申請(qǐng)以引用方式并入本文。
[0002]參考序列表
[0003]本申請(qǐng)連同序列表以電子格式一同提交。所述序列表以命名為A-1635-W0_PCT_Sequence_Listing.txt、創(chuàng)建于2012年5月10日、大小為315KB的文件來(lái)提供。所述序列表的電子格式中的信息以引用的方式整體并入本文。
發(fā)明領(lǐng)域
[0004]本發(fā)明涉及使用針對(duì)前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9(PCSK9)的抗原結(jié)合蛋白(包括抗體)來(lái)治療或預(yù)防膽固醇相關(guān)疾病(如高膽固醇血癥、高脂血癥或血脂異常)的方法。還描述了藥物制劑及產(chǎn)生所述制劑的方法。
[0005]背景
[0006]“膽固醇相關(guān)疾病”(其包括”血清膽固醇相關(guān)疾病”)包括以下任何一種或多種:高膽固醇血癥、高脂血癥、心臟病、代謝綜合征、糖尿病、冠心病、中風(fēng)、心血管疾病、阿茲海默癥(Alzheimer’s disease)以及(一般來(lái)說(shuō))血脂異常，其可表現(xiàn)為例如總血清膽固醇升高、LDL升高、甘油三酯升高、VLDL升高和/或低HDL。實(shí)際上，高膽固醇血癥為人類(lèi)冠心病(CHD)的一個(gè)已確定的風(fēng)險(xiǎn)因素。降低低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)會(huì)使心血管風(fēng)險(xiǎn)降低并且是針對(duì)CHD的藥物療法的主要目標(biāo)。他汀類(lèi)(Statin)(羥甲基戊二?；o酶A[HMGCoA]還原酶抑制劑)為當(dāng)前用于高膽固醇血癥治療的首選。然而，新出現(xiàn)的數(shù)據(jù)指示更積極的高膽固醇血癥治療伴有更低的CHD事件風(fēng)險(xiǎn)。此外，一部分患者不耐受他汀類(lèi)療法或不對(duì)他汀類(lèi)療法充分起反應(yīng)。因此，可單獨(dú)或與現(xiàn)有藥劑組合使用來(lái)更有效地降低LDL-C的新型療法可能有用。
[0007]充分確定的是肝細(xì)胞表面低密度脂蛋白受體(LDLR)的再循環(huán)通過(guò)調(diào)控血漿LDL-C水平而在維持細(xì)胞和全身膽固醇平衡方面起關(guān)鍵作用。更近來(lái)，已經(jīng)顯示前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9 (PCSK9)在LDLR的再循環(huán)及調(diào)控方面起重要作用。PCSK9為絲氨酸蛋白酶的枯草桿菌蛋白酶家族的成員并且主要在肝臟中表達(dá)。在分泌之后，它通過(guò)涉及直接結(jié)合LDLR的機(jī)制使肝細(xì)胞表面LDLR發(fā)生轉(zhuǎn)譯后下調(diào)。肝LDLR的下調(diào)又致使循環(huán)的LDL-C的水平增加。因此，PCSK9可以代表高膽固醇血癥背景下新型治療劑所抑制的目標(biāo)。所述方法的強(qiáng)有力的理論依據(jù)可以從臨床前模型的研究并且從以下研究結(jié)果獲得:具有PCSK9功能喪失型突變的人的膽固醇水平低于正常且CHD的發(fā)病率降低。
[0008]各種實(shí)施方案的概述
[0009]在本發(fā)明的一些方面，提供了一種穩(wěn)定的制劑，其包含至少一種特異性結(jié)合PCSK9的單克隆抗體，其中PCSK9包含氨基酸SEQ ID N01，所述單克隆抗體的含量為約40mg/ml至約300mg/ml ；以及含量為約.05mM至約40mM的藥學(xué)上可接受的緩沖劑；以及含量為約.01%w/v至約20%w/v的藥學(xué)上可接受的表面活性劑；以及至少一種含量為約0.5%w/v至約10%w/v的藥學(xué)上可接受的穩(wěn)定劑，其中所述穩(wěn)定的制劑具有在約4.0至約6.0之間的pH。在一些實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑包含藥學(xué)上可接受的緩沖劑，其選自由以下組成的組:谷氨酸鹽、磷酸鹽、磷酸鹽緩沖鹽水、乙酸鈉、檸檬酸鈉、以及三羥甲基氨基甲烷緩沖劑。在具體的實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑的藥學(xué)上可接受的緩沖劑以IOmM至20mM的量存在。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的緩沖劑是含量為IOmM至20mM的乙酸鈉。在一些實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的表面活性劑是以約0.004%w/v至約0.01%w/v的量存在。在具體的實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑的藥學(xué)上可接受的表面活性劑是聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20。在其它的實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的表面活性劑是以約0.004%?/ν至約0.01%w/v的量存在的聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20。
[0010]在一些實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑的藥學(xué)上可接受的穩(wěn)定劑是選自由以下組成的組:多羥基烴、二糖、多元醇、脯氨酸、精氨酸、賴(lài)氨酸、蛋氨酸、?；撬嵋约氨郊状肌Ｔ谝恍?shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的穩(wěn)定劑是多羥基烴，其選自由以下組成的組:山梨糖醇、甘露糖醇以及甘油。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑的多羥基烴是山梨糖醇。在一些實(shí)施方案中，所述藥學(xué)上可接受的穩(wěn)定劑是二糖，其選自由以下組成的組:蔗糖、麥芽糖、乳糖、果糖以及海藻糖。在一些實(shí)施方案中，二糖穩(wěn)定劑以約9%W/v的量存在。在一些實(shí)施方案中，所述二糖是蔗糖。在具體的實(shí)施方案中，在上述穩(wěn)定的制劑中的蔗糖以約9%w/v的量存在。在一些實(shí)施方案中，穩(wěn) 定劑是氨基酸，其選自由以下組成的組:脯氨酸、精氨酸、賴(lài)氨酸、蛋氨酸以及?；撬?。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述穩(wěn)定劑是脯氨酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在上述穩(wěn)定的制劑中的脯氨酸以在約2%w/v與3%w/v之間的量存在。在一些實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑的PH是在約5.0至約5.5之間。
[0011]在一些實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑包含單克隆抗體，其包含:包含與SEQ IDNO: 23至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO:49至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；包含與SEQ ID NO: 12至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID N0:67至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；包含與SEQ ID N0:461至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO:459至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；包含與SEQ ID N0:465至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID N0:463至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；或者包含與SEQ ID NO:485至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO:483至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。
[0012]在一些實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑包含單克隆抗體，其包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO: 49的重鏈可變區(qū)；包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID N0:67的重鏈可變區(qū)；包含氨基酸序列SEQ ID NO:461的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:459的重鏈可變區(qū)；包含氨基酸序列SEQ ID NO:465的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID N0:463的重鏈可變區(qū)；或者包含氨基酸序列SEQ ID NO:485的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:483的重鏈可變區(qū)。
[0013]在一些實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑包含單克隆抗體21B12、31H4、8A3、11F1或8A1。[0014]在一些實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑包括在25°C下30cP或更小的粘度。在具體的實(shí)施方案中，在上述穩(wěn)定的制劑中所述單克隆抗體是以約70mg/ml至約150mg/ml存在并且所述穩(wěn)定的制劑包括在25°C下12cP或更小的粘度。在一些實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑包括在約250m0smol/kg至約350m0smol/kg之間的滲透壓。在一些實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑保持穩(wěn)定至少3個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月或24個(gè)月。
[0015]在具體的實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑包含具有與SEQ ID N0:465至少90%相同的可變區(qū)和與SEQ ID N0:463至少90%相同的重鏈可變區(qū)的單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑包含具有包含氨基酸序列SEQ ID NO: 465的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:463的重鏈可變區(qū)的單克隆抗體，并且其中所述單克隆抗體的量為約150。
[0016]在一些實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑包含抗體，其包含與SEQ ID N0:23至少90%相同的輕鏈可變區(qū)和與SEQ ID NO:49至少90%相同的重鏈可變區(qū)。在一些實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑包含具有包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO: 49的重鏈可變區(qū)的單克隆抗體，并且其中所述單克隆抗體的量為約120mg/ml或140mg/ml。
[0017]在具體的實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑包含(a)含量為約70mg/ml至約200mg/ml的單克隆抗體，所述單克隆抗體包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的重鏈可變區(qū)、包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID N0:67的重鏈可變區(qū)、包含氨基酸序列SEQ ID NO:461的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:459的重鏈可變區(qū)、包含氨基酸序列SEQ ID NO:465的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:463的重鏈可變區(qū)、或者包含氨基酸序列SEQ IDNO:485的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:483的重鏈可變區(qū)；以及約IOmM的乙酸鈉；約9.0%w/ν的鹿糖；約0.004%w/v至約0.01%w/v的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80 ；以及約5.2的pH。
[0018]在這方面，所述單克隆抗體可以是21B12、8A3、IlFl。在這方面的具體實(shí)施方案中，所述單克隆抗體為21B12，并且在上述穩(wěn)定的制劑中以約140mg/ml的量存在。在這方面的其它實(shí)施方案中，要求的穩(wěn)定的制劑包含約.004%的聚山梨醇酯20。在這方面的其它具體實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑包含的單克隆抗體是8A3，其以約150mg/ml的量存在。
[0019]在這方面的其它實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑包含的單克隆抗體是11F1，其含量為約 140mg/ml、150mg/ml、160mg/ml、170mg/ml、180mg/ml、190mg/ml 或 200mg/ml。在具體的實(shí)施方案中，包含IlFl的穩(wěn)定的制劑還包含約.01%的聚山梨醇酯80。
[0020]在另一個(gè)實(shí)施方案中，上述穩(wěn)定的制劑包含(a)含量為約70mg/ml至約200mg/ml的單克隆抗體，所述單克隆抗體包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的重鏈可變區(qū)、包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的重鏈可變區(qū)、包含氨基酸序列SEQ ID NO:461的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:459的重鏈可變區(qū)、包含氨基酸序列SEQ ID NO:465的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸SEQ ID NO:463的重鏈可變區(qū)、或包含氨基酸序列SEQ ID NO:485的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO: 483的重鏈可變區(qū)；以及約IOmM的乙酸鈉；在約2.0%w/v至3.0%w/v之間的脯氨酸；約0.01%w/v的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80 ；以及約5.0的pH。在這方面的一些實(shí)施方案中，所述穩(wěn)定的制劑包含的單克隆抗體是21B12、8A3 或 IlFl。
[0021]在本發(fā)明的另一方面,一種穩(wěn)定的制劑,其包含含量為約70mg/ml至約200mg/ml的抗PCSK9單克隆抗體，所述單克隆抗體包含:包含與序列SEQ ID NO: 577有至少90%同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與序列SEQ ID NO: 576有至少90%同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)、包含氨基酸序列SEQ ID NO:577的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ IDNO:576的重鏈可變區(qū)、包含與序列SEQ ID NO:588有至少90%同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與序列SEQ ID NO:589有至少90%同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)、或包含氨基酸序列SEQ ID NO:588的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID N0:589的重鏈可變區(qū)；以及(b)約IOmM的乙酸鈉；(c)約9.0%w/ν的鹿糖；(d)約0.004%w/v至約0.01%w/v的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80 ;以及(e)約5.2的pH。
[0022]在本發(fā)明的另一方面,一種穩(wěn)定的制劑,其包含含量為約70mg/ml至約200mg/ml的抗PCSK9單克隆抗體，所述單克隆抗體包含:包含與序列SEQ ID NO: 577有至少90%同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與序列SEQ ID NO: 576有至少90%同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)、包含氨基酸序列SEQ ID NO:577的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ IDNO:576的重鏈可變區(qū)、包含與序列SEQ ID NO:588有至少90%同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與序列SEQ ID NO:589有至少90%同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)、或包含氨基酸序列SEQ ID NO:588的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID N0:589的重鏈可變區(qū)；以及(b)約IOmM的乙酸鈉；(c)在約2.0%w/ν至3.0%w/ν之間的脯氨酸；(d)約0.01%w/ν的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80 ;以及(e)約5.0的pH。
[0023]在一些方面，所提供的本發(fā)明包括一種降低患者的血清LDL膽固醇的方法，其包括向有需要的患者以約IOmg至約3000mg的劑量施用至少一種抗PCSK9的抗體，由此使所述血清LDL膽固醇水平如與患者的血清LDL膽固醇的給藥前水平相比降低了至少約15%。在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，如與患者的血清LDL膽固醇的給藥前水平相比，所述患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%或至少約90%。
[0024]在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體以約35mg至約3000mg、約 35mg 至約 2800mg、約 35mg 至約 2500mg、約 35mg 至約 2000mg、約 35mg 至約 1800mg、約 35mg至約 1400mg、約 25mg 至約 1200mg、約 35mg 至約 lOOOmg、約 35mg 至約 700mg、約 45mg 至約700mg、約 45mg 至約 600mg、約 45mg 至約 450mg、約 70mg 至約 450mg、約 105mg 至約 420mg、約 120mg 至約 200mg、約 140mg 至約 200mg、約 140mg 至約 180mg、或約 140mg 至約 170mg、約420mg 至約 3000mg、約 700mg 至約 3000mg、約 1000mg 至約 3000mg、約 1200mg 至約 3000mg、約1400mg 至約 3000mg、約 1800mg 至約 3000mg、約 2000mg 至約 3000mg、約 2400mg 至約 3000mg、或約2800mg至約3000mg的劑量施用至患者。在這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體以約 35mg、約 45mg、約 70mg、約 105mg、約 120mg、約 140mg、約 150mg、約 160mg、約 170mg、約 180mg、約 190mg、約 200mg、約 2 IOmg、約 280mg`、約 360mg、約 420mg、約 450mg、約 600mg、約700mg、約 1200mg、約 1400mg、約 1800mg、約 2000mg、約 2500mg、約 2800mg、或約 3000mg 的劑量施用至患者。
[0025]在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體按照日程安排施用至患者，所述日程安排選自由以下組成的組:(1)每周一次；(2)每?jī)芍芤淮危?3)每月一次；(4)每隔一月一次；(5)每三個(gè)月一次；(6)每六個(gè)月一次；以及(7)每十二個(gè)月一次。在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體是以胃腸外方式施用的。在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體是靜脈內(nèi)施用的。在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體是皮下施用的。
[0026]在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體包含:包含與SEQ IDNO: 23至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO:49至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；包含與SEQ ID NO: 12至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID N0:67至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；包含與SEQ ID N0:461至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO:459至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；包含與SEQ ID N0:465至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO:463至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；包含與SEQ ID N0:485至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO:483至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；或包含與SEQ ID N0:582至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO:583至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的重鏈可變區(qū)；包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的重鏈可變區(qū)；包含氨基酸序列SEQ ID N0:461的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:459的重鏈可變區(qū)；包含氨基酸序列SEQ ID NO:465的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:463的重鏈可變區(qū)；包含氨基酸序列SEQ ID NO:485的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:483的重鏈可變區(qū)；或包含氨基酸序列SEQ IDNO:582的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:583的重鏈可變區(qū)。在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體是選自由以下組成的組:21B12、31H4、8A3、IlFl以及8A1。
[0027]在一些方面，本發(fā)明包括一種治療或預(yù)防具有血清LDL膽固醇水平的患者的膽固醇相關(guān)疾病的方法，其包括以約IOmg至約3000mg的劑量向有需要的患者施用至少一種抗PCSK9抗體，由此治療或預(yù)防患者的膽固醇相關(guān)疾病。在這個(gè)實(shí)施方案的一方面，有待治療或預(yù)防的膽固醇相關(guān)疾病是家族性高膽固醇血癥包括雜合子家族性高膽固醇血癥和純合子家族性高膽固醇血癥、非家族性高膽固醇血癥、脂蛋白(a)升高、心臟病、代謝綜合征、糖尿病、冠心病、中風(fēng)、心血管疾病、阿茲海默癥、外周動(dòng)脈疾病、高脂血癥或血脂異常。在這方面的一些實(shí)施方案中，如與所述患者的血清LDL膽固醇的給藥前水平相比，所述患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%或至少約90%。
[0028]在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體以約35mg至約3000mg、約 35mg 至約 2800mg、約 35mg 至約 2500mg、約 35mg 至約 2000mg、約 35mg 至約 1800mg、約 35mg至約 1400mg、約 25mg 至約 1200mg、約 35mg 至約 lOOOmg、約 35mg 至約 700mg、約 45mg 至約700mg、約 45mg 至約 600mg、約 45mg 至約 450mg、約 70mg 至約 450mg、約 105mg 至約 420mg、約 120mg 至約 200mg、約 140mg 至約 200mg、約 140mg 至約 180mg、或約 140mg 至約 170mg、約420mg 至約 3000mg、約 700mg 至約 3000mg、約 lOOOmg 至約 3000mg、約 1200mg 至約 3000mg、約1400mg 至約 3000mg、約 1800mg 至約 3000mg、約 2000mg 至約 3000mg、約 2400mg 至約 3000mg、或約2800mg至約3000mg的劑量施用至患者。在這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體以約 35mg、約 45mg、約 70mg、約 105mg、約 120mg、約 140mg、約 150mg、約 160mg、約 170mg、約 180mg、約 190mg、約 200mg、約 210mg、約 280mg、約 360mg、約 420mg、約 450mg、約 600mg、約700mg、約 1200mg、約 1400mg、約 1800mg、約 2000mg、約 2500mg、約 2800mg、或約 3000mg 的劑量施用至患者。
[0029]在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體按照日程安排施用至患者，所述日程安排選自由以下組成的組:(I)每周一次；(2)每?jī)芍芤淮危?3)每月一次；(4)每隔一月一次；(5)每三個(gè)月一次；(6)每六個(gè)月一次；以及(7)每十二個(gè)月一次。在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體是以胃腸外方式施用的。在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體是靜脈內(nèi)施用的。在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體是皮下施用的。
[0030]在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體包含:包含與SEQ IDNO: 23至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO:49至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；包含與SEQ ID NO: 12至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID N0:67至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；包含與SEQ ID N0:461至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO:459至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；包含與SEQ ID N0:465至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO:463至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；包含與SEQ ID N0:485至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO:483至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；或包含與SEQ ID N0:582至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO:583至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的重鏈可變區(qū)；包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID N0:67的重鏈可變區(qū)；包含氨基酸序列SEQ ID N0:461的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:459的重`鏈可變區(qū)；包含氨基酸序列SEQ ID NO:465的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:463的重鏈可變區(qū)；包含氨基酸序列SEQ ID NO:485的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:483的重鏈可變區(qū)；或包含氨基酸序列SEQ IDNO:582的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:583的重鏈可變區(qū)。在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體是選自由以下組成的組:21B12、31H4、8A3、IlFl以及8A1。
[0031]在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體按照日程安排施用至患者，所述日程安排選自由以下組成的組:(I)每周一次；(2)每?jī)芍芤淮危?3)每月一次；(4)每隔一月一次；(5)每三個(gè)月一次；(6)每六個(gè)月一次；以及(7)每十二個(gè)月一次。在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體是以胃腸外方式施用的。在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體是靜脈內(nèi)施用的。在本發(fā)明的這方面的一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體是皮下施用的。
[0032]在本發(fā)明的具體的實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體是21B12和31H4。在一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體包含:包含與SEQ ID NO: 23至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO: 49至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。在一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID N0:49的重鏈可變區(qū)。在一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體為21B12。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，其中所述抗PCSK9抗體包含與SEQ ID NO: 23至少90%相同的氨基酸序列和包含與SEQ ID N0:49至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的重鏈可變區(qū)；或抗體為21B12,所述抗PCSK9抗體以約21mg至約70mg的劑量每周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約3至10天；以約21mg的劑量每周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約3至10天；以約35mg的劑量每周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約3至10天；以約70mg的劑量每周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約3至10天；以約70mg至約280mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約7至14天；以約70mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約7至14天；以約105mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約7至14天；以約120mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約7至14天；以約140mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約7至14天；以約210mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約7至14天；以約280mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約7至14天；以約280mg至約420mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約21至31天；以約280mg的劑量每四周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固 醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約21至31天；以約350mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約21至31天；以約420mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%，持續(xù)約21至31天。
[0033]在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，其中所述抗PCSK9抗體包含與SEQ ID N0:23至少90%相同的氨基酸序列和包含與SEQ ID N0:49至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID N0:49的重鏈可變區(qū)；或抗體為21B12，所述抗PCSK9抗體以約420mg至約3000mg的劑量每周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%，持續(xù)約3至10天；以約700mg的劑量每周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%,持續(xù)約3至10天；以約1200mg的劑量每周一次靜脈內(nèi)施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%，持續(xù)約3至10天；以大于約1200mg至約3000mg的劑量每周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%，持續(xù)約3至10天；以約420mg至約3000mg的劑量每隔一周一次靜脈內(nèi)施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%，持續(xù)約7至14天；以約700mg的劑量每隔一周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%,持續(xù)約7至14天；以約1200mg的劑量每隔一周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%，持續(xù)約21至31天；以大于約1200mg至約3000mg的劑量每隔一周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%，持續(xù)約7至14天；以約420mg至約3000mg的劑量每四周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%,持續(xù)約21至31天；以約700mg的劑量每四周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%，持續(xù)約21至31天；以約1200mg的劑量每四周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%，持續(xù)約21至31天；以大于約1200mg至約3000mg的劑量每四周一次靜脈內(nèi)施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%，持續(xù)約21至31天。
[0034]在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，其中所述抗PCSK9抗體包含與SEQ ID N0:23至少90%相同的氨基酸序列和包含與SEQ ID NO: 49至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID N0:49的重鏈可變區(qū)；或抗體為21B12，所述抗PCSK9抗體以約21mg的劑量每周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約7至10天；以約35mg的劑量每周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約7至10天；以約70mg的劑量每周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約7至10天；以約70mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL`膽固醇水平降低了至少約約30%至50%，持續(xù)約10至14天；以約105mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約10至14天；以約120mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%,持續(xù)約10至14天；以約140mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%,持續(xù)約10至14天；以約210mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約10至14天；以約280mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約10至14天；以約280mg至約420mg的劑量每四周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約24至28天；以約280mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約24至28天；以約350mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約24至28天；以約420mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約24至28天。
[0035]在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，其中所述抗PCSK9抗體包含與SEQ ID N0:23至少90%相同的氨基酸序列和包含與SEQ ID N0:49至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID N0:49的重鏈可變區(qū)；或抗體為21B12，所述抗PCSK9抗體以約420mg至約3000mg的劑量每周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約7至10天；以約700mg的劑量每周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%,持續(xù)約7至10天；以約1200mg的劑量每周一次靜脈內(nèi)施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約7至10天；以大于約1200mg至約3000mg的劑量每周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約7至10天；以約420mg至約3000mg的劑量每隔一周一次靜脈內(nèi)施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約10至14天；以約700mg的劑量每隔一周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約10至14天；以約1200mg的劑量每隔一周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約10至14天；以大于約1200mg至約3000mg的劑量每隔一周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%,持續(xù)約10至14天；以約420mg至約3000mg的劑量每四周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%,持續(xù)約24至28天；以約700mg的劑量每四周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約24至28天；以約1200mg的劑量每四周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約24至28天；以大于約1200mg至約3000mg的劑量每四周一次靜脈內(nèi)施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約24至28天。
[0036] 在本發(fā)明的具體的實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體為8A3U1F1和8A1。在一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體包含:包含與SEQ ID NO:465至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO:463至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。在一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO:465的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID N0:463的重鏈可變區(qū)。在一些實(shí)施方案中，所述抗PCSK9抗體為IlFl。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，其中所述抗PCSK9抗體包含與SEQ ID NO:465至少90%相同的氨基酸序列和包含與SEQ ID N0:463至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:465的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:463的重鏈可變區(qū)；或抗體為11F1,所述抗PCSK9抗體以約45mg的劑量每周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約3至10天；以約150mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約7至14天；以約150mg的劑量每四周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約21至31天；`以大于約150mg至約200mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約21至31天；以約170mg至約180mg的劑量每四周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約21至31天；以約150mg至約170mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約21至31天；以約450mg的劑量每四周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約21至31天；以約150mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約31至42天；以大于約150mg至約200mg的劑量每六周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約31至42天；以約170mg至約180mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約31至42天；以約150mg至約170mg的劑量每六周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約31至42天；以約450mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約31至42天；以約140mg至約200mg的劑量每八周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%，持續(xù)約45至56天；以約170mg至約180mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%，持續(xù)約45至56天；以約150mg至約170mg的劑量每八周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%,持續(xù)約45至56天；以約450mg的劑量每八周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 15%至50%，持續(xù)約45至56天；以約600mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約45至56天；以約700mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約45至56天；以約600mg的劑量每十二周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約74至84天；以約700mg的劑量每十二周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%,持續(xù)約74至84天；以約600mg的劑量每十六周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約100至112天；以約700mg的劑量每十六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約100 至 112 天。
[0037]在本發(fā)明的一個(gè)具體的實(shí)施方案中，其中所述抗PCSK9抗體包含與SEQ ID NO:465至少90%相同的氨基酸序列和包含與SEQ ID NO: 463至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或包含包含氨基酸序列SEQ ID N0:465的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ IDNO: 463的重鏈可變區(qū)；或抗體為11F1，所述抗PCSK9抗體以約45mg的劑量每周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約7至10天；以約150mg的劑量每隔一周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%,持續(xù)約10至14天；以約150mg的劑量每四周一次皮下施用至患者,其中患者的血清 LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約24至28天；以大于約150mg至約200mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%,持續(xù)約24至28天；以約170mg至約180mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約24至28天；以約150mg至約17Omg的劑量每四周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%,持續(xù)約24至28天；以約450mg的劑量每四周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約24至28天；以約150mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%,持續(xù)約40至41天；以大于約150mg至約200mg的劑量每六周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%,持續(xù)約40至41天；以約17Omg至約ISOmg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%,持續(xù)約40至41天；以約150mg至約170mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%,持續(xù)約40至41天；以約450mg的劑量每六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%,持續(xù)約40至41天；以約140mg至約200mg的劑量每八周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約50至56天；以約170mg至約180mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約50至56天；以約150mg至約170mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約50至56天；以約450mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約50至56天；以約600mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約50至56天；以約700mg的劑量每八周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約50至56天；以約600mg的劑量每十二周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約80至84天；以約700mg的劑量每十二周一次皮下施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約80至84天；以約600mg的劑量每十六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約105至112天；以約700mg的劑量每十六周一次皮下施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約105至112天。
[0038]在本發(fā)明的一個(gè)具體的實(shí)施方案中，其中所述抗PCSK9抗體包含與SEQ ID NO:465至少90%相同的氨基酸序列和包含與SEQ ID NO: 463至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或包含包含氨基酸序列SEQ ID N0:465的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ IDNO:463的重鏈可變區(qū)；或抗體為11F1，所述抗PCSK9抗體以約420mg至約3000mg的劑量每周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約7至10天；以約700mg的劑量每周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約7至10天；以約1200mg的劑量每周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約7至10天；以大于約1200mg至約3000mg的劑量每周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%,持續(xù)約7至10天；以約420mg至約3000mg的劑量每隔一周一次靜脈內(nèi)施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約10至14天；以約700mg的劑量每隔一周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約10至14天；以約1200mg的劑量每隔一周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約10至14天；以大于約1200mg至約3000mg的劑量每隔一周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約10至14天；以約420mg至約3000mg的劑量每四周一次靜脈內(nèi)施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約24至28天；以約700mg的劑量每四周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約24至28天；以約1200mg的劑量每四周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%,持續(xù)約24至28天；以大于約1200mg至約3000mg的劑量每四周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了 30%至50%，持續(xù)約24至28天；以約1000mg至約3000mg的劑量每24周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約150至168天；以約1000mg至約3000mg的劑量每24周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約160至168天；以約1000mg至約3000mg的劑量每52周一次靜脈內(nèi)施用至患者,其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%至50%，持續(xù)約350至365天；以約1000mg至約3000mg的劑量每52周一次靜脈內(nèi)施用至患者，其中患者的血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%至50%，持續(xù)約360至365天。
[0039]在本發(fā)明的另一方面，將所述至少一種抗PCSK9抗體在使用至少一種其它膽固醇降低劑之前、之后或同時(shí)施用至患者。膽固醇降低劑包括他汀類(lèi)，包括阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、瑞舒伐他汀、辛伐他??；煙酸(尼克酸)、緩釋煙酸(SL0-NIACIN)、拉羅匹侖(C0RDAPTIVE)、纖維酸(L0PID(吉非羅齊)、TRIC0R(非諾貝特)、膽汁酸螯合劑如消膽胺(QUESTRAN)、考來(lái)維侖(WELCH0L)、考來(lái)替泊(降膽寧)、膽固醇吸收抑制劑(ZETIA(依澤替米貝))、脂質(zhì)改性劑、PPARy激動(dòng)劑、PPARa / y激動(dòng)劑、鯊烯合酶抑制劑、CETP抑制劑、抗高血壓藥、抗糖尿病劑包括磺酰脲、胰島素、GLP-1類(lèi)似物、DDPIV抑制劑；ApoB調(diào)節(jié)劑、MTP抑制劑和/或動(dòng)脈硬化閉塞癥治療、制瘤素M、雌激素、小檗堿以及用于免疫相關(guān)疾病的治療劑。
[0040]在一些方面，本發(fā)明包括一種降低患者的血清LDL膽固醇水平的方法。所述方法包括以約IOmg至約3000mg的劑量向有需要的患者施用至少一種如本文描述的抗PCSK9抗體。在一些實(shí)施方案中，劑量為約IOmg至約70mg的至少一種抗PCSK9抗體，每周施用一次(QW)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約14mg至約45mg的至少一種抗PCSK9抗體，每周施用一次。在一些實(shí)施方案中，劑量為約14mg至約35mg的至少一種抗PCSK9抗體，每周施用一次。在一些實(shí)施方案中，劑量為約70mg至約420mg的至少一種抗PCSK9抗體，每2周施用一次(Q2W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約70mg至約350mg的至少一種抗PCSK9抗體，每2周施用一次(Q2W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約105mg至約350mg的至少一種抗PCSK9抗體，每2周施用一次(Q2W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約140mg至約280mg的至少一種抗PCSK9抗體，每2周施用一次(Q2W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約250mg至約480mg的至少一種抗PCSK9抗體，每4周施用一次(Q4W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約280mg至約420mg的至少一種抗PCSK9抗體，每4周施用一次(Q4W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約350mg至約420mg的至少一種抗`PCSK9抗體,每4周施用一次(Q4W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約420mg至約3000mg的至少一種抗PCSK9抗體，每周施用一次(QW)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約1000mg至約3000mg的至少一種抗PCSK9抗體，每周施用一次(QW)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約2000mg至約3000mg的至少一種抗PCSK9抗體，每周施用一次(QW)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約420mg至約3000mg的至少一種抗PCSK9抗體，每隔一周施用一次(Q2W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約1000mg至約3000mg的至少一種抗PCSK9抗體，每隔一周施用一次(Q2W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約2000mg至約3000mg的至少一種抗PCSK9抗體，每隔一周施用一次(Q2W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約420mg至約3000mg的至少一種抗PCSK9抗體，每個(gè)月施用一次(Q4W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約1000mg至約3000mg的至少一種抗PCSK9抗體，每個(gè)月施用一次(Q4W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約2000mg至約3000mg的至少一種抗PCSK9抗體，每個(gè)月施用一次(Q4W)。在一些實(shí)施方案中，如與給藥前血清LDL膽固醇水平相比，血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%。在一些實(shí)施方案中,血清LDL膽固醇水平降低了至少約20%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約25%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約35%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約40%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約45%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約50%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約55%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約60%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約75%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約70%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約75%在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約80%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約85%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約90%。
[0041]在一些方面，本發(fā)明包括降低患者的血清LDL膽固醇水平的方法，所述方法包括向有需要的患者施用一定劑量的至少一種抗PCSK9抗體，并且其中所述劑量的抗PCSK9抗體是按照選自由以下組成的組的日程安排施用:(1)每周(QW)至少約14mg ;(2)每周(QW)至少約35mg的量；⑶每周(QW)至少約45mg的量；⑷每隔一周(Q2W)至少約70mg的量；(5)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約105mg的量；(6)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約140mg的量；(7)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約150mg的量；(8)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約280mg的量；(9)每四周(Q4W)至少約150mg的量；(10)每四周(Q4W)至少約160mg的量；(11)每四周(Q4W)至少約170mg的量；(12)每四周(Q4W)至少約180mg的量；(13)每四周(Q4W)至少約190mg的量；(14)每四周(Q4W)至少約200mg的量；(15)每四周(Q4W)至少約280mg的量；(16)每四周(Q4W)至少約350mg的量；(17)每四周(Q4W)至少約420mg的量；(18)每四周(Q4W)至少約1000mg的量；(19)每四周(Q4W)至少約2000mg的量；以及(20)每四周(Q4W)至少約3000mg的量。在一些實(shí)施方案中，如與給藥前血清LDL膽固醇水平相比，血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約20%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約25%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約35%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約40%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約45%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約50%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約55%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約60%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約65%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約70%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約75%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約80%。在一些`實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約85%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約90%。
[0042]在一些方面，本發(fā)明包括一種降低患者的PCSK9值的方法，所述方法包括向有需要的患者施用一定劑量的至少一種抗PCSK9抗體，并且其中所述劑量的抗PCSK9抗體是根據(jù)選自由以下組成的組的日程安排施用:(I)每周(QW)至少約14mg ； (2)每周(QW)至少約35mg的量；(3)每周(QW)至少約45mg的量；⑷每隔一周(Q2W)至少約70mg的量；(5)每隔一周(Q2W)至少約105mg的量；(6)每隔一周(Q2W)至少約140mg的量；(7)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約150mg的量；(8)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約280mg的量；(9)每四周(Q4W)至少約150mg的量；(10)每四周(Q4W)至少約160mg的量；(11)每四周(Q4W)至少約170mg的量；(12)每四周(Q4W)至少約180mg的量；(13)每四周(Q4W)至少約190mg的量；(14)每四周(Q4W)至少約200mg的量；(15)每四周(Q4W)至少約280mg的量；(16)每四周(Q4W)至少約350mg的量；(17)每四周(Q4W)至少約420mg的量；(18)每四周(Q4W)至少約1000mg的量；(19)每四周(Q4W)至少約2000mg的量；以及(20)每四周(Q4W)至少約3000mg的量。在一些實(shí)施方案中，如與給藥前血清PCSK9值相比，所述血清PCSK9值降低了至少約60%。在一些實(shí)施方案中，血清PCSK9值降低了至少約65%。在一些實(shí)施方案中，血清PCSK9值降低了至少約70%。在一些實(shí)施方案中，血清PCSK9值降低了至少約75%。在一些實(shí)施方案中，血清PCSK9值降低了至少約80%。在一些實(shí)施方案中，血清PCSK9值降低了至少約85%。在一些實(shí)施方案中，血清PCSK9值降低了至少約90%。
[0043]在一些方面，本發(fā)明包括一種降低患者的總膽固醇水平的方法，所述方法包括向有需要的患者施用一定劑量的至少一種抗PCSK9抗體，并且其中所述劑量的抗PCSK9抗體是根據(jù)選自由以下組成的組的日程安排施用:(I)每周(QW)至少約14mg ;⑵每周(QW)至少約35mg的量；(3)每周(QW)至少約45mg的量；⑷每隔一周(Q2W)至少約70mg的量；(5)每?jī)芍?Q2W)至少約105mg的量；(6)每隔一周(Q2W)至少約140mg的量；(7)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約150mg的量；(8)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約280mg的量；(9)每四周(Q4W)至少約150mg的量；(10)每四周(Q4W)至少約160mg的量；(11)每四周(Q4W)至少約170mg的量；(12)每四周(Q4W)至少約180mg的量；(13)每四周(Q4W)至少約190mg的量；(14)每四周(Q4W)至少約200mg的量；(15)每四周(Q4W)至少約280mg的量；(16)每四周(Q4W)至少約350mg的量；(17)每四周(Q4W)至少約420mg的量；(18)每四周(Q4W)至少約1000mg的量；(19)每四周(Q4W)至少約2000mg的量；以及(20)每四周(Q4W)至少約3000mg的量。在一些實(shí)施方案中，如與給藥前總膽固醇水平相比，所述總膽固醇水平降低了至少約20%。在一些實(shí)施方案中，總膽固醇水平降低了至少約25%。在一些實(shí)施方案中，總膽固醇水平降低了至少約30%。在一些實(shí)施方案中，總膽固醇水平降低了至少約35%。在一些實(shí)施方案中，總膽固醇水平降低了至少約40%。在一些實(shí)施方案中，總膽固醇水平降低了至少約45%。在一些實(shí)施方案中，總膽固醇水平降低了至少約50%。在一些實(shí)施方案中，總膽固醇水平降低了至少約55%。在一些實(shí)施方案中，總膽固醇水平降低了至少約 60%。
[0044]在一些方面，本發(fā)明包括一種降低患者的非HDL膽固醇水平的方法，所述方法包括向有需要的患者施用一定劑量的至少一種抗PCSK9抗體，并且其中所述劑量的抗PCSK9抗體是根據(jù)選自由以下組成的組的日程安排施用:(1)每周(QW)至少約14mg;(2)每周(QW)至少約35mg的量；⑶每周(QW)至少約45mg的量；⑷每隔一周(Q2W)至少約70mg的量；(5)每?jī)芍?Q2W)至少約105mg的量；(6)每隔一周(Q2W)至少約140mg的量；(7)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約150mg的量；(8)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約280mg的量；(9)每四周(Q4W)至少約150mg的量；(10)每四周(Q4W)至少約160mg的量；(11)每四周(Q4W)至少約170mg的量；(12)每四周(Q4W)至少約180mg的量；(13)每四周(Q4W)至少約190mg的量；(14)每四周(Q4W)至少約200mg的量；(15)每四周(Q4W)至少約280mg的量；(16)每四周(Q4W)至少約350mg的量；(17)每四周(Q4W)至少約420mg的量；(18)每四周(Q4W)至少約1000mg的量；(19)每四周(Q4W)至少約2000mg的量；以及(20)每四周(Q4W)至少約3000mg的量。在一些實(shí)施方案中，如與給藥前非HDL膽固醇水平相比，所述非HDL膽固醇水平降低了至少約30%。在一些實(shí)施方案中，非HDL膽固醇水平降低了至少約35%。在一些實(shí)施方案中，非HDL膽固醇水平降低了至少約40%。在一些實(shí)施方案中，非HDL膽固醇水平降低了至少約45%。在一些實(shí)施方案中，非HDL膽固醇水平降低了至少約50%。在一些實(shí)施方案中，非HDL膽固醇水平降低了至少約55%。在一些實(shí)施方案中，非HDL膽固醇水平降低了至少約60%。在一些實(shí)施方案中，非HDL膽固醇水平降低了至少約65%。在一些實(shí)施方案中，非HDL膽固醇水平降低了至少約70%。在一些實(shí)施方案中，非HDL膽固醇水平降低了至少約75%。在一些實(shí)施方案中，非HDL膽固醇水平降低了至少約80%。在一些實(shí)施方案中，非HDL膽固醇水平降低了至少約85%。
[0045]在一些方面，本發(fā)明包括一種降低患者的ApoB水平的方法，所述方法包括向有需要的患者施用一定劑量的至少一種抗PCSK9抗體，并且其中所述劑量的抗PCSK9抗體是根據(jù)選自由以下組成的組的日程安排施用:(I)每周(QW)至少約14mg ； (2)每周(QW)至少約35mg的量；(3)每周(QW)至少約45mg的量；⑷每隔一周(Q2W)至少約70mg的量；(5)每?jī)芍?Q2W)至少約105mg的量；(6)每隔一周(Q2W)至少約140mg的量；(7)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約150mg的量；(8)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約280mg的量；(9)每四周(Q4W)至少約150mg的量；(10)每四周(Q4W)至少約160mg的量；(11)每四周(Q4W)至少約170mg的量；(12)每四周(Q4W)至少約180mg的量；(13)每四周(Q4W)至少約190mg的量；(14)每四周(Q4W)至少約200mg的量；(15)每四周(Q4W)至少約280mg的量；(16)每四周(Q4W)至少約350的量；(17)每四周(Q4W)至少約420mg的量。在一些實(shí)施方案中，如與給藥前ApoB水平相比，所述ApoB水平降低了至少約20%。在一些實(shí)施方案中，ApoB水平降低了至少約25%。在一些實(shí)施方案中，ApoB水平降低了至少約30%。在一些實(shí)施方案中，ApoB水平降低了至少約35%。在一些實(shí)施方案中，ApoB水平降低了至少約40%。在一些實(shí)施方案中，ApoB水平降低了至少約45%。在一些實(shí)施方案中，ApoB水平降低了至少約50%。在一些實(shí)施方案中，ApoB水平降低了至少約55%。在一些實(shí)施方案中，ApoB水平降低了至少約60%。在一些實(shí)施方案中，ApoB水平降低了至少約65%。在一些實(shí)施方案中，ApoB水平降低了至少約70%。在一些實(shí)施方案中，ApoB水平降低了至少約75%。
[0046]在一些方面，本發(fā)明包括一種降低患者的脂蛋白A( “Lp(a)”)水平的方法，所述方法包括向有需要的患者施用一定劑量的至少一種抗PCSK9抗體，并且其中所述劑量的抗PCSK9抗體是根據(jù)選自由以下組成的組的日程安排施用:⑴每周(QW)至少約14mg ； (2)每周(QW)至少約35mg的量；(3)每周(Q`W)至少約45mg的量；(4)每隔一周(Q2W)至少約70mg的量；(5)每?jī)芍?Q2W)至少約105mg的量；(6)每隔一周(Q2W)至少約140mg的量；(7)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約150mg的量；(8)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約280mg的量；(9)每四周(Q4W)至少約150mg的量；(10)每四周(Q4W)至少約160mg的量；(11)每四周(Q4W)至少約170mg的量；(12)每四周(Q4W)至少約180mg的量；(13)每四周(Q4W)至少約190mg的量；(14)每四周(Q4W)至少約200mg的量；(15)每四周(Q4W)至少約280mg的量；(16)每四周(Q4W)至少約350的量；(17)每四周(Q4W)至少約420mg的量；
(18)每四周(Q4W)至少約1000mg的量；(19)每四周(Q4W)至少約2000mg的量；以及(20)每四周(Q4W)至少約3000mg的量。在一些實(shí)施方案中，如與給藥前Lp (a)水平相比，所述Lp (a)水平降低了至少約10%。在一些實(shí)施方案中，Lp (a)水平降低了至少約15%。在一些實(shí)施方案中，Lp(a)水平降低了至少約20%。在一些實(shí)施方案中，Lp(a)水平降低了至少約25%。在一些實(shí)施方案中，Lp (a)水平降低了至少約30%。在一些實(shí)施方案中，Lp (a)水平降低了至少約35%。在一些實(shí)施方案中，Lp (a)水平降低了至少約40%。在一些實(shí)施方案中，Lp (a)水平降低了至少約45%。在一些實(shí)施方案中，Lp(a)水平降低了至少約50%。在一些實(shí)施方案中，Lp(a)水平降低了至少約55%。在一些實(shí)施方案中，Lp(a)水平降低了至少約60%。在一些實(shí)施方案中，Lp (a)水平降低了至少約65%。
[0047]在一些方面，本發(fā)明包括一種治療或預(yù)防患者的膽固醇相關(guān)疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用約IOmg至約3000mg劑量的至少一種本文所述的抗PCSK9抗體。在一些實(shí)施方案中，劑量為約IOmg至約70mg的至少一種抗PCSK9抗體，每周施用一次(QW)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約14mg至約45mg的至少一種抗PCSK9抗體，每周施用一次。在一些實(shí)施方案中，劑量為約14mg至約35mg的至少一種抗PCSK9抗體，每周施用一次。在一些實(shí)施方案中，劑量為約70mg至約420mg的至少一種抗PCSK9抗體，每2周施用一次(Q2W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約70mg至約350mg的至少一種抗PCSK9抗體，每2周施用一次(Q2W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約105mg至約350mg的至少一種抗PCSK9抗體，每2周施用一次(Q2W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約140mg至約280mg的至少一種抗PCSK9抗體，每2周施用一次(Q2W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約150mg至約280mg的至少一種抗PCSK9抗體，每?jī)芍苁┯靡淮?Q2W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約150mg至約200mg的至少一種抗PCSK9抗體，每?jī)芍苁┯靡淮?Q2W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約150mg至約480mg的至少一種抗PCSK9抗體，每四周施用一次(Q4W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約150mg至約200mg的至少一種抗PCSK9抗體，每四周施用一次(Q4W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約200mg至約480mg的至少一種抗PCSK9抗體，每四周施用一次(Q4W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約250mg至約480mg的至少一種抗PCSK9抗體，每四周施用一次(Q4W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約280mg至約420mg的至少一種抗PCSK9抗體，每四周施用一次(Q4W)。在一些實(shí)施方案中，劑量為約350mg至約420mg的至少一種抗PCSK9抗體，每四周施用一次。在一些實(shí)施方案中，劑量為每四周(Q4W)約lOOOmg。在一些實(shí)施方案中，劑量為每四周(Q4W)約2000mg。在一些實(shí)施方案中，劑量為每四周(Q4W)約3000mg。在一些實(shí)施方案中，如與給藥前血清LDL膽固醇水平相比，所述血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%。在一些實(shí)施方案中，所述血清LDL膽固醇水平降低了至少約20%。在一些實(shí)施方案中，所述血清LDL膽固醇水平降低了至少`約25%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約35%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約40%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約45%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約50%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約55%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約60%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約65%。在一些實(shí)施方案中,血清LDL膽固醇水平降低了至少約70%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約75%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約80%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約85%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約90%。在一些實(shí)施方案中，膽固醇相關(guān)疾病是雜合子家族性高膽固醇血癥、純合子家族性高膽固醇血癥、非家族性高膽固醇血癥、高脂血癥或血脂異常。
[0048]在一些方面，本發(fā)明包括一種治療或預(yù)防患者的膽固醇相關(guān)疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用一定劑量的至少一種抗PCSK9抗體，并且其中所述劑量的抗PCSK9抗體是根據(jù)選自由以下組成的組的日程安排施用:(I)每周(QW)至少約14mg ； (2)每周(QW)至少約35mg的量；(3)每周(QW)至少約45mg的量；⑷每隔一周(Q2W)至少約70mg的量；(5)每?jī)芍?Q2W)至少約105mg的量；(6)每隔一周(Q2W)至少約140mg的量；(7)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約150mg的量；(8)每?jī)芍芑蛎扛粢恢?Q2W)至少約280的量；(9)每四周(Q4W)至少約150mg的量；(10)每四周(Q4W)至少約160mg的量；(11)每四周(Q4W)至少約170mg的量；(12)每四周(Q4W)至少約180mg的量；(13)每四周(Q4W)至少約190mg的量；(14)每四周(Q4W)至少約200mg的量；(15)每四周(Q4W)至少約280mg的量；(16)每四周(Q4W)至少約350的量；(17)每四周(Q4W)至少約420mg的量；(18)每四周(Q4W)至少約1000mg的量；(19)每四周(Q4W)至少約2000mg的量；以及(20)每四周(Q4W)至少約3000mg的量。在一些實(shí)施方案中，如與給藥前血清LDL膽固醇水平相比，所述血清LDL膽固醇水平降低了至少約15%。在一些實(shí)施方案中，所述血清LDL膽固醇水平降低了至少約20%。在一些實(shí)施方案中，所述血清LDL膽固醇水平降低了至少約25%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約30%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約35%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約40%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約45%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約50%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約55%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約60%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約65%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約70%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約75%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約80%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約85%。在一些實(shí)施方案中，血清LDL膽固醇水平降低了至少約90%。
[0049]在一些實(shí)施方案中，抗PCSK9 抗體為 21B12、26H5、31H4、8A3、11F1 和 / 或 8A1。
[0050]在一些實(shí)施方案中，所述膽固醇相關(guān)疾病是雜合子家族性高膽固醇血癥、純合子家族性高膽固醇血癥、非家族性高膽固醇血癥、高脂血癥或血脂異常。
[0051]在一些方面，本發(fā)明包括藥物制劑，其包含至少一種選自由21B12、26H5、31H4、8A3U1F1及8A1組成的組的抗PCSK9抗體。
[0052]本發(fā)明的其它實(shí)施方案將易于根據(jù)本文提供的公開(kāi)顯而易知。
[0053]附圖簡(jiǎn)述
[0054]圖1A描述PCSK9的成熟形式的氨基酸序列，其中前結(jié)構(gòu)域加下劃線。
[0055]圖1B1-1B4描述PCSK9的氨基酸和核酸序列，其中前結(jié)構(gòu)域加下劃線且信號(hào)序列用粗體表示。
[0056]圖2A-2D為不同抗原結(jié)合蛋白的各種輕鏈的序列比較表。圖2C接續(xù)圖2A中開(kāi)始的序列。圖2D接續(xù)圖2B上開(kāi)始的序列。
[0057]圖3A-3D為不同抗原結(jié)合蛋白的各種重鏈的序列比較表。圖3C接續(xù)圖3A中開(kāi)始的序列。圖3D接續(xù)圖3B上開(kāi)始的序列。
[0058]圖3E-3JJ描述抗原結(jié)合蛋白的一些實(shí)施方案的可變域的氨基酸和核酸序列。
[0059]圖3KK描述各種恒定域的氨基酸序列。
[0060]圖3LL-3BBB描述抗原結(jié)合蛋白的一些實(shí)施方案的可變域的氨基酸和核酸序列。
[0061]圖3CCC-3JJJ為抗原結(jié)合蛋白的一些實(shí)施方案的各種重鏈及輕鏈的序列比較表。
[0062]圖4A為抗原結(jié)合蛋白與人類(lèi)PCSK9的結(jié)合曲線。[0063]圖4B為抗原結(jié)合蛋白與人類(lèi)PCSK9的結(jié)合曲線。
[0064]圖4C為抗原結(jié)合蛋白與食蟹獼猴PCSK9的結(jié)合曲線。
[0065]圖4D為抗原結(jié)合蛋白與食蟹獼猴PCSK9的結(jié)合曲線。
[0066]圖4E為抗原結(jié)合蛋白與小鼠PCSK9的結(jié)合曲線。
[0067]圖4F為抗原結(jié)合蛋白與小鼠PCSK9的結(jié)合曲線。
[0068]圖5A描述涉及PCSK9及不同抗原結(jié)合蛋白的SDSPAGE實(shí)驗(yàn)的顯示蛋白質(zhì)的相對(duì)純度和濃度的結(jié)果。
[0069]圖5B和5C描述21B12的來(lái)自Biacore溶液平衡測(cè)定的圖。
[0070]圖描述來(lái)自Biacore捕捉測(cè)定的動(dòng)力學(xué)的圖。
[0071]圖5E描述描繪3種ABP的分級(jí)(binning)結(jié)果的柱狀圖。
[0072]圖6A為體外PCSK9:LDLR結(jié)合測(cè)定中針對(duì)PCSK9的抗原結(jié)合蛋白31H4IgG2的抑制曲線。
[0073]圖6B為體外PCSK9:LDLR結(jié)合測(cè)定中針對(duì)PCSK9的抗原結(jié)合蛋白31H4IgG4的抑制曲線。
[0074]圖6C為體外PCSK9:LDLR結(jié)合測(cè)定中針對(duì)PCSK9的抗原結(jié)合蛋白21B12IgG2的抑制曲線。
[0075]圖6D為體外PCSK9:LDLR結(jié)合測(cè)定中針對(duì)PCSK9的抗原結(jié)合蛋白21B12IgG4的抑制曲線。
[0076]圖7A為細(xì)胞LDL攝取測(cè)定中抗原結(jié)合蛋白31H4IgG2的抑制曲線，其顯示ABP降低PCSK9的LDL攝取阻斷效應(yīng)的作用。
[0077]圖7B為細(xì)胞LDL攝取測(cè)定中抗原結(jié)合蛋白31H4IgG4的抑制曲線，其顯示ABP降低PCSK9的LDL攝取阻斷效應(yīng)的作用。
[0078]圖7C為細(xì)胞LDL攝取測(cè)定中抗原結(jié)合蛋白21B12IgG2的抑制曲線，其顯示ABP降低PCSK9的LDL攝取阻斷效應(yīng)的作用。
[0079]圖7D為細(xì)胞LDL攝取測(cè)定中抗原結(jié)合蛋白21B12IgG4的抑制曲線，其顯示ABP降低PCSK9的LDL攝取阻斷效應(yīng)的作用。
[0080]圖8A為描述ABP31H4在小鼠中降低血清膽固醇的能力的圖，其中變化是相對(duì)于IgG對(duì)照治療的小鼠(*p〈0.01)。
[0081]圖8B為描述ABP31H4在小鼠中降低血清膽固醇的能力的圖，其中變化是相對(duì)于時(shí)間=0 小時(shí)(#p,0.05)。
[0082]圖8C為描述ABP31H4對(duì)C57B1/6小鼠的HDL膽固醇水平的影響的圖(*p〈0.01)。
[0083]圖8D為描述ABP31H4對(duì)C57B1/6小鼠的HDL膽固醇水平的影響的圖(#p〈0.05)。
[0084]圖9描述在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)之后ABP31H4增加存在的肝臟LDLR蛋白的量的能力的蛋白質(zhì)印跡分析。
[0085]圖1OA為描述抗原結(jié)合蛋白31H4降低野生型小鼠的總血清膽固醇的能力(相對(duì)值)的圖。
[0086]圖1OB為描述抗原結(jié)合蛋白31H4降低野生型小鼠的HDL的能力的圖。
[0087]圖1OC為描述不同抗原結(jié)合蛋白31H4和16F12降低血清膽固醇的能力的圖。
[0088]圖1lA描述用于測(cè)試抗原結(jié)合蛋白降低血清膽固醇的持續(xù)時(shí)間及能力的注射方案。
[0089]圖1lB為描述圖1lA中的方案的結(jié)果的圖。
[0090]圖12A描述H印G2細(xì)胞中響應(yīng)于他汀類(lèi)與ABP21B12的組合的LDLR水平。
[0091]圖12B描述H印G2細(xì)胞中響應(yīng)于他汀類(lèi)與ABP31H4的組合的LDLR水平。
[0092]圖12C描述HepG2細(xì)胞中響應(yīng)于他汀類(lèi)與ABP25A7.1 (—種非中和性抗體)(與中和性抗體“25A7”不同)的組合的LDLR水平。
[0093]圖12D描述過(guò)度表達(dá)PCSK9的H印G2細(xì)胞中響應(yīng)于他汀類(lèi)與ABP21B12的組合的LDLR水平。
[0094]圖12E描述過(guò)度表達(dá)PCSK9的H印G2細(xì)胞中響應(yīng)于他汀類(lèi)與ABP31H4的組合的LDLR水平。
[0095]圖12F描述過(guò)度表達(dá)PCSK9的!fepG2細(xì)胞中響應(yīng)于他汀類(lèi)與ABP25A7.1 ( 一種非中和性抗體)(與中和性抗體“25A7”不同)的組合的LDLR水平。
[0096]圖13A描述針對(duì)PCSK9的不同ABP的各種輕鏈氨基酸序列。點(diǎn)(.)指示無(wú)氨基酸。
[0097]圖13B描述針對(duì)PCSK9的不同ABP的輕鏈支序圖。
[0098]圖13C描述針對(duì)PCSK9的不同ABP的各種重鏈氨基酸序列。點(diǎn)(.)指示無(wú)氨基酸。
[0099]圖13D描述針對(duì)PCSK9的不同ABP的重鏈樹(shù)狀圖。
[0100]圖13E描述輕鏈⑶R和重鏈⑶R的比較以及對(duì)產(chǎn)生共有序列的群組的指定。
[0101]圖13F描述群組I和2的共有序列。
[0102]圖13G描述群組3和4的共有序列。
[0103]圖13H描述群組I和2的共有序列。點(diǎn)(.)指示一致殘基。
[0104]圖131描述群組2的共有序列。點(diǎn)(.)指示一致殘基。
[0105]圖13J描述群組3和4的共有序列。點(diǎn)(.)指示一致殘基。
[0106]圖14為展示接受多劑量的抗PCSK9抗體(21B12)的患者的LDL_c水平降低的圖。
[0107]圖15為展示接受多劑量的抗PCSK9抗體(21B12)的服用低至中等及高劑量他汀類(lèi)的患者的LDL-c水平降低的圖。
[0108]圖16為展示接受多劑量的抗PCSK9抗體(21B12)的患者的ApoB水平降低的圖。
[0109]圖17為展示接受多劑量的抗PCSK9抗體(21B12)的服用低至中等及高劑量他汀類(lèi)的患者的脂蛋白a( “Lp(a)”)水平降低的柱狀圖。
[0110]圖18為展示接受多劑量的抗PCSK9抗體(21B12)的患有雜合子家族性高膽固醇血癥(“Hem”)的患者的LDL-c水平降低的圖。
[0111]圖19為展示接受多劑量的抗PCSK9抗體(21B12)的患有雜合子家族性高膽固醇血癥(“HeHl”)的患者的PCSK9水平降低的圖。
[0112]圖20為展示接受多劑量的抗PCSK9抗體(21B12)的患有雜合子家族性高膽固醇血癥(“ΗeFH)的患者的總膽固醇水平降低的圖。
[0113]圖21為展示接受多劑量的抗PCSK9抗體(21B12)的患有雜合子家族性高膽固醇血癥(“ HeHl” )的患者的非HDL膽固醇水平降低的圖。
[0114]圖22為展示接受多劑量的抗PCSK9抗體(21B12)的患有雜合子家族性高膽固醇血癥(“ΗθFH)的患者的ApoB水平降低的圖。
[0115]圖23為展示接受多劑量的抗PCSK9抗體(21B12)的患有雜合子家族性高膽固醇血癥(“Hem”)的患者的脂蛋白a( “Lp(a)”)降低的柱狀圖。
[0116]圖24A為展示與患者的LDL-C降低相關(guān)的集合數(shù)據(jù)的圖，所述患者來(lái)自實(shí)施例22-25中所述的四個(gè)研究且歷經(jīng)12周每隔一周(Q2W)接受不同劑量的抗PCSK9抗體(21B12)。
[0117]圖24B為展示與患者的LDL-C降低相關(guān)的集合數(shù)據(jù)的圖，所述患者來(lái)自實(shí)施例22-25中所述的四個(gè)研究且歷經(jīng)12周每四周(Q4W)接受不同劑量的抗PCSK9抗體(21B12)。
[0118]圖25A為展示與患者的Lp (a)降低相關(guān)的集合數(shù)據(jù)的柱狀圖，所述患者來(lái)自實(shí)施例22-25中所述的四個(gè)研究且歷經(jīng)12周每隔一周(Q2W)或每4周(Q4W)接受不同劑量的抗 PCSK9 抗體(2IB12)。
[0119]圖25B為展示與患者的HDL-C降低相關(guān)的集合數(shù)據(jù)的柱狀圖，所述患者來(lái)自實(shí)施例22-25中所述的四個(gè)研究且歷經(jīng)12周每隔一周(Q2W)或每4周(Q4W)接受不同劑量的抗 PCSK9 抗體(2IB12)。
[0120]圖25C為展示與患者的甘油三酯降低相關(guān)的集合數(shù)據(jù)的柱狀圖，所述患者來(lái)自實(shí)施例22-25中所述的四個(gè)研究且歷經(jīng)12周每隔一周(Q2W)或每4周(Q4W)接受不同劑量的抗 PCSK9 抗體(2IB12)。
[0121]圖2邪為展示與患者的VLDL-C降低相關(guān)的集合數(shù)據(jù)的柱狀圖，所述患者來(lái)自實(shí)施例22-25中所述的四個(gè)研究且歷經(jīng)12周每隔一周(Q2W)或每4周(Q4W)接受不同劑量的抗 PCSK9 抗體(2IB12)。
[0122]圖26為展示含有不同穩(wěn)定劑/賦形劑的抗PCSK9抗體(21B12)制劑的粘度的柱狀圖。
[0123]圖27為展示穩(wěn)定劑/賦形劑脯氨酸能夠降低具有高蛋白質(zhì)濃度的抗PCSK9抗體(2IB12)制劑的粘度的圖。`
[0124]圖28A為展示不同濃度的抗PCSK9抗體21B12在包含IOmM乙酸鈉及9%蔗糖(pH5.2)的制劑中在25°C及40°C下的粘度的圖。
[0125]圖28B為展示不同濃度的抗PCSK9抗體21B12在包含IOmM乙酸鈉及9%蔗糖(pH5.2)的制劑中在25°C及40°C下，相較于在包含IOmM乙酸鈉、125mM精氨酸及3%蔗糖(pH5.0)的制劑中在25°C及40°C下的粘度的圖。
[0126]圖28C為展示不同濃度的抗PCSK9抗體21B12在包含IOmM乙酸鈉及9%蔗糖(pH5.2)的制劑中在25°C及40°C下，相較于在包含IOmM乙酸鈉、IOOmM蛋氨酸及4%蔗糖(pH5.0)的制劑中在25°C及40°C下的粘度的圖。
[0127]圖28D為展示不同濃度的抗PCSK9抗體21B12在包含IOmM乙酸鈉及9%蔗糖(pH5.2)的制劑中在25°C及40°C下，相較于在包含IOmM乙酸鈉及250mM脯氨酸(pH5.0)的制劑中在25°C及40°C下的粘度的圖。
[0128]圖29A為展示歷經(jīng)6個(gè)月10 μ m粒子在抗PCSK9抗體(即21B12)制劑的不同制劑中的數(shù)目的柱狀圖。
[0129]圖29B為展示歷經(jīng)6個(gè)月25 μ m粒子在抗PCSK9抗體(即21B12)制劑的不同制劑中的數(shù)目的柱狀圖。
[0130]圖30A為展示歷經(jīng)4個(gè)月1(^111粒子在抗？051(9抗體(即11F1)制劑的不同制劑中的數(shù)目的柱狀圖。[0131]圖30B為展示歷經(jīng)4個(gè)月25 4 111粒子在抗？051(9抗體(即11F1)制劑的不同制劑中的數(shù)目的柱狀圖。
[0132]圖31為說(shuō)明競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定中IlFl與PCSKP、PCSK2、PCSKU PCSK7及弗林蛋白酶的結(jié)合特異性的圖，其中OD45tl繪制在垂直軸上且PCSK9的濃度(ug/ml)繪制在水平軸上。
[0133]圖32為展示競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定中IlFl抑制LDLR:D374YPCSK9結(jié)合的劑量反應(yīng)曲線的圖，其中OD45tl繪制在垂直軸上且Log[llFl] (pM)繪制在水平軸上。
[0134]圖33為描述競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定中IlFl抑制LDLR:WTPCSK9結(jié)合的劑量反應(yīng)曲線的圖，其中OD45tl繪制在垂直軸上且Log [11F1] (pM)繪制在水平軸上。
[0135]圖34為描述IlFl阻斷H印G2細(xì)胞中由人類(lèi)D374YPCSK9介導(dǎo)的LDL攝取降低的能力的劑量反應(yīng)曲線的圖，其中相對(duì)熒光單位(X104)繪制在垂直軸上且Log[llFl](nM)繪制在水平軸上。
[0136]圖35為描述IlFl阻斷H印G2細(xì)胞中由人類(lèi)WTPCSK9介導(dǎo)的LDL攝取降低的能力的劑量反應(yīng)曲線的圖，其中相對(duì)熒光單位繪制(X104)在垂直軸上且Log[llFl](nM)繪制在水平軸上。
[0137]圖36為描述IlFl和8A3對(duì)由AAV表達(dá)人類(lèi)PCSK9的小鼠的血清非HDL膽固醇的影響的柱狀圖，其中非HDL-C血清濃度(mg/ml)繪制在垂直軸上且注射后時(shí)間(天)繪制在水平軸上。
[0138]圖37為描述IlFl和8A3對(duì)由AAV表達(dá)人類(lèi)PCSK9的小鼠的血清總膽固醇的影響的柱狀圖，其中血清總膽固醇(mg/ml)繪制在垂直軸上且注射后時(shí)間(天)繪制在水平軸上。
[0139]圖38為描述IlFl和8A3對(duì)由AAV表達(dá)人類(lèi)PCSK9的小鼠的血清HDL膽固醇(HDL-C)的影響的柱狀圖，其中HDL-C`(mg/ml)繪制在垂直軸上且注射后時(shí)間(天)繪制在水平軸上。
[0140]圖39為描述由AAV表達(dá)人類(lèi)PCSK9的小鼠的IgG2、8A3及IlFl抗體濃度概況的圖，其中血清抗體濃度(ng/mL)繪制在垂直軸上且以天計(jì)的注射后時(shí)間繪制在水平軸上。
[0141]圖40為概述由AAV表達(dá)人類(lèi)PCSK9的小鼠的IgG2、llFl及8A3的PK參數(shù)的表。
[0142]圖41為描述單次皮下施用抗KLH抗體(對(duì)照)、21B12、8A3及IlFl對(duì)食蟹獼猴的血清LDL濃度(LDL-C)的影響的圖，其中LDL-C(mg/dl)繪制在垂直軸上且以天計(jì)的施用后時(shí)間在水平軸上。
[0143]圖42為描述單次皮下施用抗KLH抗體(對(duì)照)、21B12、8A3及IlFl對(duì)食蟹獼猴的血清總膽固醇的影響的圖，其中總膽固醇濃度(mg/dl)繪制在垂直軸上且以天計(jì)的施用后時(shí)間在水平軸上。
[0144]圖43為描述單次皮下施用抗KLH抗體(對(duì)照)、21B12、8A3及IlFl對(duì)食蟹獼猴的血清HDL膽固醇的影響的圖，其中HDL-C(mg/dl)繪制在垂直軸上且以天計(jì)的施用后時(shí)間在水平軸上。
[0145]圖44為描述單次皮下施用抗KLH抗體(對(duì)照)、21B12、8A3及IlFl對(duì)食蟹獼猴的血清甘油三酯的影響的圖，其中血清甘油三酯濃度(mg/dl)繪制在垂直軸上且以天計(jì)的施用后時(shí)間在水平軸上。
[0146]圖45為描述單次皮下施用抗KLH抗體(對(duì)照)、21B12、8A3及IlFl對(duì)食蟹獼猴的載脂蛋白B(ApoB)的影響的圖，其中APOB濃度(mg/dl)繪制在垂直軸上且以天計(jì)的施用后時(shí)間在水平軸上。
[0147]圖46為描述抗KLH抗體(對(duì)照)、21B12、8A3及IlFl在食蟹獼猴中的平均藥物動(dòng)力學(xué)概況的圖，其中抗體濃度(ng/ml)繪制在垂直軸上且以天計(jì)的施用后時(shí)間在水平軸上。
[0148]圖47為概述抗KLH抗體(對(duì)照)、21B12、8A3及IlFl在食蟹獼猴中的PK參數(shù)的表。
[0149]圖48A描述了 8A1、8A3及IlFl的輕鏈氨基酸序列的比較，以及來(lái)源于所述比較的共有序列。CDR序列加下劃線。
[0150]圖48B描述了 8A1、8A3及IlFl的重鏈氨基酸序列的比較，以及來(lái)源于所述比較的共有序列。CDR序列加下劃線。
[0151]某些示例性實(shí)施方案的詳述
[0152]本文公開(kāi)了結(jié)合PCSK9的抗原結(jié)合蛋白(如抗體及其功能性結(jié)合片段)。在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白以不同方式結(jié)合PCSK9并阻止PCSK9起作用。在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白阻斷或降低PCSK9與其它物質(zhì)相互作用的能力。舉例來(lái)說(shuō)，在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白以防止或降低PCSK9將結(jié)合LDLR的可能性的方式結(jié)合PCSK9。在其它實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白結(jié)合PCSK9但不阻斷PCSK9與LDLR相互作用的能力。在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白為人類(lèi)單克隆抗體。
[0153]如本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，根據(jù)本公開(kāi)，改變PCSK9與LDLR之間的相互作用可增加可用于結(jié)合LDL的LDLR的量，這又會(huì)降低受試者的血清LDL的量，從而使受試者的血清膽固醇水平降低。因而，針對(duì)PCSK9的抗原結(jié)合蛋白可用于治療血清膽固醇水平升高、處于血清膽固醇水平升高的風(fēng)險(xiǎn)中或可能受益于其血清膽固醇水平降低的受試者的各種方法和制劑中。因此，本文還描述了用于降低血清膽固醇、維持血清膽固醇或防止血清膽固醇增加的各種方法和技術(shù)。在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白允許PCSK9與LDLR之間的結(jié)合，但抗原結(jié)合蛋白防止或降低PCSK9對(duì)LDLR的不利活性。在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合蛋白防止或降低PCSK9與LDLR的結(jié)合。
[0154]為了方便起見(jiàn)，以下章節(jié)總體上概述本文所用術(shù)語(yǔ)的各種含義。根據(jù)此論述，論述關(guān)于抗原結(jié)合蛋白的總體方面，之后為顯示抗原結(jié)合蛋白的各種實(shí)施方案的性質(zhì)及其可如何采用的具體實(shí)施例。
[0155]定義和實(shí)施方案
[0156]應(yīng)了解上文一般描述與下文詳細(xì)描述均僅具有示例性和說(shuō)明性而不限制所要求的本發(fā)明。在本申請(qǐng)中，除非另外明確陳述，否則使用單數(shù)包括復(fù)數(shù)。在本申請(qǐng)中，除非另外陳述，否則使用“或”意指“和/或”。此外，使用術(shù)語(yǔ)“包括(including) ”以及其它形式，如“包括(includes)”及“包括(included) ”不具有限制性。此外，除非另外明確陳述，否則如“要素”或“組分 ”的術(shù)語(yǔ)涵蓋構(gòu)成一個(gè)單元的要素和組分以及構(gòu)成一個(gè)以上亞單位的要素和組分。此外，使用術(shù)語(yǔ)“部分”可包括某一部分的一部分或整個(gè)部分。
[0157]本文中使用的章節(jié)標(biāo)題僅出于組織目的且不應(yīng)解釋為限制所述主題。本申請(qǐng)中引用的所有文獻(xiàn)或文獻(xiàn)的部分，包括(但不限于)專(zhuān)利、專(zhuān)利申請(qǐng)、文章、書(shū)籍及論文，皆據(jù)此出于任何目的以引用的方式明確整體并入本文。如根據(jù)本公開(kāi)所使用，除非另外指示，否則以下術(shù)語(yǔ)應(yīng)理解為具有以下含義:
[0158]術(shù)語(yǔ)“前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶kexin型9”或“PCSK9”是指如SEQIDN0:1和/或3所示的多肽或其片段、以及相關(guān)多肽，包括(但不限于)等位基因變體、剪接變體、衍生變體、取代變體、缺失變體和/或插入變體，包括添加N端蛋氨酸、融合多肽及種間同源物。在某些實(shí)施方案中，PCSK9多肽包括末端殘基，如(但不限于)前導(dǎo)序列殘基、靶向殘基、氣基端蛋氣酸殘基、賴(lài)氣酸殘基、標(biāo)簽殘基和/或融合蛋白殘基?！癙CSK9”還被稱(chēng)為FH3、NARCU HCH0LA3、前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin型9及神經(jīng)細(xì)胞凋亡調(diào)控的轉(zhuǎn)化酶I。PCSK9基因編碼屬于分泌性枯草桿菌酶(subtilase)家族的蛋白酶K次家族的前蛋白轉(zhuǎn)化酶蛋白。術(shù)語(yǔ)“PCSK9”表示前蛋白與在前蛋白的自催化之后生成的產(chǎn)物兩者。當(dāng)僅提及自催化的產(chǎn)物(如對(duì)于選擇性結(jié)合裂解的PCSK9的抗原結(jié)合蛋白)時(shí)，所述蛋白可被稱(chēng)為“成熟”、“裂解的”、“加工的”或“活性”P(pán)CSK9。當(dāng)僅提及非活性形式時(shí)，所述蛋白可被稱(chēng)為“非活性”、“原形式”或“未加工的”形式的PCSK9。如本文所用的術(shù)語(yǔ)PCSK9還包括天然存在的等位基因，如突變D374Y、S127R及F216L。術(shù)語(yǔ)PCSK9還涵蓋并有PCSK9氨基酸序列的轉(zhuǎn)譯后修飾的PCSK9分子，如已經(jīng)糖基化、聚乙二醇化的PCSK9序列、信號(hào)序列已經(jīng)裂解的PCSK9序列、前結(jié)構(gòu)域已從催化域裂解但未與催化域分離的PCSK9序列(例如圖1A和1B)。
[0159]術(shù)語(yǔ)“PCSK9活性”包括PCSK9的任何生物效應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，PCSK9活性包括PCSK9與底物或受體相互作用或結(jié)合的能力。在一些實(shí)施方案中，PCSK9活性由PCSK9結(jié)合LDL受體(LDLR)的能力表示。在一些實(shí)施方案中，PCSK9結(jié)合LDLR并催化涉及LDLR的反應(yīng)。在一些實(shí)施方案中，PCSK9活性包括PCSK9改變(例如降低)LDLR的可用性的能力。在一些實(shí)施方案中，PCSK9活性包括PCSK9增加受試者的LDL的量的能力。在一些實(shí)施方案中，PCSK9活性包括PCSK9降低可用于結(jié)合LDL的LDLR的量的能力。在一些實(shí)施方案中，“PCSK9活性”包括由PCSK9信號(hào)傳導(dǎo)所引起的任何生物活性。示例性活性包括(但不限于)PCSK9結(jié)合LDLR、裂解LDLR或其它蛋白質(zhì)的PCSK9酶活性、PCSK9結(jié)合除LDLR以外的促進(jìn)PCSK9作用的蛋白質(zhì)、PCSK9改變APOB分泌(SunX-Μ等，“Evidence for effectof mutant PCSK9on apolip`rotein B secretion as the cause of unusually severedominant hypercholesterolemia”，Human Molecular Geneticsl4:1161-1169，2005及 OuguerramK 等，“Apolipoprotein BlOOmetabolism in autosoma1-dominanthypercholesterolemia related to mutations in PCSK9，，，Arterioscler thrombVasc Biol.24:1448-1453，2004)、PCSK9在肝臟再生及神經(jīng)元細(xì)胞分化中的作用(Seidah NG 等，“The secretory proprotein convertase neural apoptosis-regulatedconvertaseI(NARC-1): Liver regeneration and neuronal differentiationT3NASlOO:928-933, 2003)、以及PCSK9在肝葡萄糖代謝中的作用(Costet 等,“H印atic PCSK9expressionis regulated by nutritional status via insulin and sterol regulatoryelement-binding protein lc” T.Biol.Chem.281(10):6211-18, 2006)。
[0160]如本文所用的術(shù)語(yǔ)“高膽固醇血癥”是指膽固醇水平升高到所要水平以上的病狀。在一些實(shí)施方案中，這表示血清膽固醇水平升高。在一些實(shí)施方案中，所要水平慮及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知(且在本文中描述或提及)的各種“風(fēng)險(xiǎn)因素”。
[0161]術(shù)語(yǔ)“聚核苷酸”或“核酸”包括單鏈核苷酸聚合物與雙鏈核苷酸聚合物兩者。構(gòu)成聚核苷酸的核苷酸可為核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸或任一類(lèi)型的核苷酸的修飾的形式。所述修飾包括堿基修飾，如溴尿苷及肌苷衍生物；核糖修飾，如2’，3’ - 二脫氧核糖；及核苷酸間鍵修飾，如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺硫代磷酸酯、苯胺磷酸酯及磷酰氨酸酯。
[0162]術(shù)語(yǔ)“寡核苷酸”意指包含200個(gè)或200個(gè)以下核苷酸的聚核苷酸。在一些實(shí)施方案中，寡核苷酸的長(zhǎng)度為10至60個(gè)堿基。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸的長(zhǎng)度為12、13、
14、15、16、17、18、19或20至40個(gè)核苷酸。寡核苷酸可為例如用于構(gòu)建突變基因的單鏈或雙鏈寡核苷酸。寡核苷酸可為有義或反義寡核苷酸。寡核苷酸可包括標(biāo)記，包括放射性標(biāo)記、熒光標(biāo)記、半抗原或抗原標(biāo)記，以用于檢測(cè)測(cè)定。寡核苷酸可例如用作PCR引物、克隆引物或雜交探針。
[0163]“分離的核酸分子”意指基因組、mRNA、cDNA或合成來(lái)源的DNA或RNA或其某種組合，其不與在自然界中發(fā)現(xiàn)分離的聚核苷酸的聚核苷酸的全部或一部分締合，或其連接于其在自然界中不連接的聚核苷酸。出于本公開(kāi)的目的，應(yīng)了解“包含具體的核苷酸序列的核酸分子”不包括完整的染色體。除指定序列之外，“包含”指定核酸序列的分離的核酸分子還可包括多達(dá)10種或甚至多達(dá)20種其它蛋白質(zhì)或其部分的編碼序列，或可包括控制所述核酸序列的編碼區(qū)的表達(dá)的可操作地連接的調(diào)控序列，和/或可包括載體序列。
[0164]除非另外指定，否則本文論述的任何單鏈聚核苷酸序列的左手端為5’端；雙鏈聚核苷酸序列的左手方向稱(chēng)為5’方向。5’至3’添加初生RNA轉(zhuǎn)錄物的方向被稱(chēng)為轉(zhuǎn)錄方向；在具有與RNA轉(zhuǎn)錄物相同的序列的DNA鏈上5’至RNA轉(zhuǎn)錄物的5’端的序列區(qū)域被稱(chēng)為“上游序列”;在具有與RNA轉(zhuǎn)錄物相同的序列的DNA鏈上3’至RNA轉(zhuǎn)錄物的3’端的序列區(qū)域被稱(chēng)為“下游序列”。
[0165]術(shù)語(yǔ)“控制序列”是指可影響其所連接的編碼序列的表達(dá)和加工的聚核苷酸序列。所述控制序列的性質(zhì)可取決于宿主生物體。在具體的實(shí)施方案中，原核生物的控制序列可包括啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)及轉(zhuǎn)錄終止序列。`舉例來(lái)說(shuō)，真核生物的控制序列可包括包含一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子的識(shí)別位點(diǎn)的啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子序列及轉(zhuǎn)錄終止序列?！翱刂菩蛄小笨砂ㄇ皩?dǎo)序列和/或融合配偶體序列。
[0166]術(shù)語(yǔ)“載體”意指用于將蛋白質(zhì)編碼信息轉(zhuǎn)移至宿主細(xì)胞中的任何分子或?qū)嶓w(例如核酸、質(zhì)粒、噬菌體或病毒)。
[0167]術(shù)語(yǔ)“表達(dá)載體”或“表達(dá)構(gòu)建體”是指適于轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞且含有指導(dǎo)和/或控制(連同宿主細(xì)胞一起)與其可操作地連接的一個(gè)或多個(gè)異源編碼區(qū)的表達(dá)的核酸序列的載體。表達(dá)構(gòu)建體可包括(但不限于)影響或控制與其可操作地連接的編碼區(qū)的轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯且如果存在內(nèi)含子，則影響所述編碼區(qū)的RNA剪接的序列。
[0168]如本文所用，“可操作地連接”意指所述術(shù)語(yǔ)所應(yīng)用的組分呈允許其在適合條件下執(zhí)行其固有功能的關(guān)系。舉例來(lái)說(shuō)，載體中“可操作地連接”于蛋白質(zhì)編碼序列的控制序列與其連接以便在與控制序列的轉(zhuǎn)錄活性相容的條件下達(dá)成蛋白質(zhì)編碼序列的表達(dá)。
[0169]術(shù)語(yǔ)“宿主細(xì)胞”意指已用或能夠用核酸序列轉(zhuǎn)化并且進(jìn)而表達(dá)目標(biāo)基因的細(xì)胞。所述術(shù)語(yǔ)包括親本細(xì)胞的子代，不管子代在形態(tài)或基因組成方面是否與原始親本細(xì)胞一致，只要存在相關(guān)基因即可。
[0170]術(shù)語(yǔ)“轉(zhuǎn)染”意指細(xì)胞攝取外來(lái)或外源DNA，并且當(dāng)外源DNA已引入細(xì)胞膜內(nèi)部時(shí)，細(xì)胞已被“轉(zhuǎn)染”。許多轉(zhuǎn)染技術(shù)在本領(lǐng)域中為熟知的且在本文中加以公開(kāi)。參見(jiàn)例如Graham 等，1973, Virology52:456:Sambrook 等，2001，Molecular Cloning:A LaboratoryManual,同上；Davis 等，1986，Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier ;Chu 等，1981，Genel3:197。所述技術(shù)可用于將一個(gè)或多個(gè)外源DNA部分引入適合的宿主細(xì)胞中。
[0171]術(shù)語(yǔ)“轉(zhuǎn)化”是指細(xì)胞遺傳特征的變化，并且當(dāng)細(xì)胞已被修飾成含有新的DNA或RNA時(shí)，細(xì)胞已被轉(zhuǎn)化。舉例來(lái)說(shuō)，當(dāng)細(xì)胞通過(guò)經(jīng)由轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導(dǎo)或其它技術(shù)引入新的遺傳物質(zhì)而自其天然狀態(tài)被遺傳修飾時(shí)，所述細(xì)胞被轉(zhuǎn)化。在轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)之后，轉(zhuǎn)化的DNA可通過(guò)物理整合至細(xì)胞的染色體中來(lái)與細(xì)胞的DNA重組，或可以游離型元件形式短暫維持而不復(fù)制，或可以質(zhì)粒形式獨(dú)立復(fù)制。當(dāng)轉(zhuǎn)化的DNA隨細(xì)胞分裂復(fù)制時(shí)，細(xì)胞被視為已經(jīng)“穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的”。
[0172]術(shù)語(yǔ)“多肽”或“蛋白質(zhì)”意指具有天然蛋白質(zhì)(即，由天然存在及非重組細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì))的氨基酸序列的大分子；或其由遺傳改造或重組細(xì)胞產(chǎn)生，并且包含具有天然蛋白質(zhì)的氨基酸序列的分子、或缺失天然序列的一個(gè)或多個(gè)氨基酸、在天然序列中添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸和/或取代天然序列的一個(gè)或多個(gè)氨基酸的分子。所述術(shù)語(yǔ)還包括一個(gè)或多個(gè)氨基酸為相應(yīng)的天然存在的氨基酸及聚合物的化學(xué)類(lèi)似物的氨基酸聚合物。術(shù)語(yǔ)“多肽”及“蛋白質(zhì)”明確涵蓋PCSK9抗原結(jié)合蛋白、抗體或缺失抗原結(jié)合蛋白的一個(gè)或多個(gè)氨基酸、在抗原結(jié)合蛋白中添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸和/或取代抗原結(jié)合蛋白的一個(gè)或多個(gè)氨基酸的序列。術(shù)語(yǔ)“多肽片段”是指相較于全長(zhǎng)天然蛋白質(zhì)，具有氨基端缺失、羧基端缺失和/或內(nèi)部缺失的多肽。相較于天然蛋白質(zhì)，所述片段還可含有修飾的氨基酸。在某些實(shí)施方案中，片段的長(zhǎng)度為約5個(gè)至500個(gè)氨基酸。舉例來(lái)說(shuō)，片段的長(zhǎng)度可為至少5個(gè)、6個(gè)、8 個(gè)、10 個(gè)、14 個(gè)、20 個(gè)、50 個(gè)、70 個(gè)、100 個(gè)、110 個(gè)、150 個(gè)、200 個(gè)、250 個(gè)、300 個(gè)、350個(gè)、400個(gè)或450個(gè)氨基酸。適用的多肽片段包括抗體的免疫功能性片段，包括結(jié)合域。在PCSK9結(jié)合抗體的情況下，適用的片段包括(但不限于)CDR區(qū)、重鏈和/或輕鏈的可變域、抗體鏈的一部分或其僅包括兩個(gè)CDR的可變區(qū)及其類(lèi)似物。
[0173]所提及的術(shù)語(yǔ)“分離的蛋白質(zhì)”意指主題蛋白質(zhì)(I)不含至少一些通常將與其一起存在的其它蛋白質(zhì)，(2)基本上不含來(lái)自同一來(lái)源，例如來(lái)自同一物種的其它蛋白質(zhì)，(3)由來(lái)自不同物種的細(xì)胞表達(dá)，(4)已與至少約50%的在自然界中與其締合的聚核苷酸、月旨質(zhì)、碳水化合物或其它物質(zhì)分離，(5)可操作地與在自然界中不與其締合的多肽締合(通過(guò)共價(jià)或非共價(jià)相互作用)，或(6)不存在于自然界中。通常，“分離的蛋白質(zhì)”構(gòu)成給定樣品的至少約5%、至少約10%、至少約25%或至少約50%。合成來(lái)源的基因組DNA、cDNA、mRNA或其它RNA或其任何組合可編碼所述分離的蛋白質(zhì)。優(yōu)選地，分離的蛋白質(zhì)實(shí)質(zhì)上不含見(jiàn)于其自然環(huán)境中的會(huì)干擾其治療、診斷、防治、研究或其它用途的蛋白質(zhì)或多肽或其它污染物。
[0174]術(shù)語(yǔ)“氨基酸”包括其在本領(lǐng)域中的通常含義。
[0175]多肽(例如抗原結(jié)合蛋白或抗體)的“變體”包含以下氨基酸序列:其中相對(duì)于另一多肽序列，在所述氨基酸序列中插入、缺失和/或取代有一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。變體包括融合蛋白。
[0176]術(shù)語(yǔ)“同一性”是指兩個(gè)或更多個(gè)多肽分子或兩個(gè)或更多個(gè)核酸分子的序列之間的關(guān)系，如通過(guò)比對(duì)和比較序列所確定?！巴恍园俜直取币庵杆容^的分子中的氨基酸或核苷酸之間的相同殘基的百分比并且是基于所比較的分子中最小分子的大小來(lái)計(jì)算。對(duì)于這些計(jì)算，優(yōu)選通過(guò)具體的數(shù)學(xué)模型或計(jì)算機(jī)程序(即“算法”)處理比對(duì)中的空位(如果存在的話)?？捎糜谟?jì)算所比對(duì)的核酸或多肽的同一性的方法包括以下文獻(xiàn)中所述的方法:Computational Molecular Biology, (Lesk, A.M.編)，1988, New York:Oxford UniversityPress ；Biocomputing Informatics and Genome Projects, (Smith, D.ff.編),1993, NewYork:Academic Press ；Computer Analysis of Sequence Data, Part I, (Griffin, A.M.和Griffin, H.G.編),1994, New Jersey:Humana Press ；von Heinje, G.，1987，SequenceAnalysis in Molecular Biology, New York:Academic Press ；Sequence AnalysisPrimer, (Gribskov, M.和 Devereux, J.編)，1991, New York:M.Stockton Press ；以及Carillo 等，1988，SIAM J.Applied Math.M: 1073。
[0177]在計(jì)算同一性百分比時(shí)，通常以產(chǎn)生序列間最大匹配的方式比對(duì)所比較的序列?？捎糜跍y(cè)定同一性百分比的計(jì)算機(jī)程序的一個(gè)實(shí)例為包括GAP的GCG程序包(Devereux 等，1984，Nucl.Acid Res.12:387 ；Genetics Computer Group, University ofWisconsin, Madison, WI)。計(jì)算機(jī)算法GAP是用于比對(duì)有待測(cè)定序列同一'I"生百分比的兩個(gè)多肽或聚核苷酸。將序列進(jìn)行比對(duì)以實(shí)現(xiàn)其各自的氨基酸或核苷酸的最佳匹配(如通過(guò)算法所測(cè)定的“匹配跨度”)。算法聯(lián)合使用空位開(kāi)放罰分(其根據(jù)3X平均對(duì)角線來(lái)計(jì)算，其中“平均對(duì)角線”為所用判斷矩陣的對(duì)角線的平均值；“對(duì)角線”為由具體判斷矩陣指定給各完全氨基酸匹配的分值或數(shù)值)；及空位擴(kuò)展罰分(通常為1/10X空位開(kāi)放罰分)以及判斷矩陣(如PAM250或BL0Sum62)。在某些實(shí)施方案中，算法還使用標(biāo)準(zhǔn)判斷矩陣(對(duì)于 PAM250 判斷矩陣，參見(jiàn) Dayhoff 等，1978，Atlas of Protein Sequence andStructure5:345-352 ;對(duì)于 BL0Sum62 判斷矩陣，參見(jiàn) Henikoff 等，1992，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.89:10915-10919)。
[0178]可用于使用GAP程序測(cè)定多肽或核苷酸序列的同一性百分比的參數(shù)的實(shí)例為以下參數(shù):
[0179].算法:Needleman 等，1970, J.Mol.Biol.48:443-453
[0180].判斷矩陣:BL0Sum62，來(lái)自 Henikoff 等，1992，同上
[0181].空位罰分:12(但無(wú)末端空位罰分)
[0182].空位長(zhǎng)度罰分:4
[0183]?類(lèi)似性閾值:0
[0184]用于比對(duì)兩個(gè)氨基酸序列的某些比對(duì)方案僅可使兩個(gè)序列的較短區(qū)域匹配，并且這個(gè)小比對(duì)區(qū)域可具有極高序列同一性，即使兩個(gè)全長(zhǎng)序列之間不存在顯著關(guān)系。因此，如果需要產(chǎn)生跨越目標(biāo)多肽的至少50個(gè)或其它數(shù)目的連續(xù)的氨基酸的比對(duì)，那么可調(diào)整所選的比對(duì)方法(GAP程序)。
[0185]如本文所用，20種常規(guī)(例如天然存在)的氨基酸及其縮寫(xiě)遵循常規(guī)用法。參見(jiàn) Immunology—A Synthesis (第 2 版，E.S.Golub 和 D.R.Gren 編，SinauerAssociates, Sunderland,` Mass.(1991))，其出于任何目的以引用的方式并入本文。20種常規(guī)氨基酸的立體異構(gòu)體(例如D-氨基酸)、非天然氨基酸(如α，α -雙取代的氨基酸)、N-烷基氨基酸、乳酸及其它非常規(guī)的氨基酸也可為本發(fā)明多肽的適合組分。非常規(guī)的氨基酸的實(shí)例包括:4_羥基脯氨酸、Y -羧基谷氨酸、ε -N, N, N-三甲基賴(lài)氨酸、ε -N-乙酰賴(lài)氨酸、O-磷酸絲氨酸、N-乙酰絲氨酸、N-甲酰蛋氨酸、3-甲基組氨酸、5-羥基賴(lài)氨酸、σ -N-甲基精氨酸及其它類(lèi)似氨基酸及亞氨基酸(例如4-羥基脯氨酸)。在本文所用的多肽記法中，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)用法及慣例，左手方向?yàn)榘被朔较蚨沂址较驗(yàn)轸然朔较颉?br> [0186]類(lèi)似地，除非另外指定，否則單鏈聚核苷酸序列的左手端為5’端；雙鏈聚核苷酸序列的左手方向稱(chēng)為5’方向。5’至3’添加初生RNA轉(zhuǎn)錄物的方向稱(chēng)為轉(zhuǎn)錄方向；在具有與RNA相同的序列的DNA鏈上5’至RNA轉(zhuǎn)錄物的5’端的序列區(qū)域被稱(chēng)為“上游序列”;在具有與RNA相同的序列的DNA鏈上3’至RNA轉(zhuǎn)錄物的3’端的序列區(qū)域被稱(chēng)為“下游序列”。
[0187]保守性氨基酸取代可涵蓋非天然存在的氨基酸殘基，其通常通過(guò)化學(xué)肽合成而非通過(guò)于生物系統(tǒng)中合成而并入。這些包括肽模擬物及氨基酸部分的其它逆向或反向形式。
[0188]天然存在的殘基可基于共同側(cè)鏈性質(zhì)進(jìn)行分類(lèi):
[0189]I)疏水性:正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、lie ；
[0190]2)中性親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln ;
[0191]3)酸性:Asp、Glu ;
[0192]4)堿性:His> Lys> Arg ；
[0193]5)影響鏈定向的殘基:Gly、Pro ;以及
[0194]6)芳族:Trp、Tyr、Phe。
[0195]舉例來(lái)說(shuō)，非保守性取代可涉及這些類(lèi)別中的一類(lèi)的成員交換成另一類(lèi)的成員。所述取代的殘基可例如引入人類(lèi)抗體的與非人類(lèi)抗體同源的區(qū)域中或引入分子的非同源區(qū)域中。
[0196]在根據(jù)某些實(shí)施方案對(duì)抗原結(jié)合蛋`白或PCSK9蛋白作出變化時(shí)，可考慮氨基酸的親水指數(shù)。已基于各氨基酸的疏水性及電荷特征對(duì)其指定親水指數(shù)。它們?yōu)?異亮氨酸(+4.5);纈氨酸(+4.2);亮氨酸(+3.8);苯丙氨酸(+2.8);半胱氨酸/胱氨酸(+2.5);蛋氨酸(+1.9);丙氨酸(+1.8);甘氨酸(-0.4);蘇氨酸(-0.7);絲氨酸(-0.8);色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3);脯氨酸(-1.6);組氨酸(-3.2);谷氨酸(-3.5);谷氨酰胺(-3.5);天冬氨酸(-3.5);天冬酰胺(-3.5);賴(lài)氨酸(-3.9);以及精氨酸(-4.5)。
[0197]本領(lǐng)域中了解親水氨基酸指數(shù)在對(duì)蛋白質(zhì)賦予相互作用性生物功能方面的重要性。Kyte等，J.Mol.Biol.，157:105-131 (1982)。已知某些氨基酸可被取代成具有類(lèi)似親水指數(shù)或分值的其它氨基酸且仍然保留類(lèi)似的生物活性。在某些實(shí)施方案中，在基于親水指數(shù)作出變化時(shí)，包括親水指數(shù)在±2內(nèi)的氨基酸的取代。在某些實(shí)施方案中，包括親水指數(shù)在±1內(nèi)的氨基酸的取代，并且在某些實(shí)施方案中，包括親水指數(shù)在±0.5內(nèi)的氨基酸的取代。
[0198]本領(lǐng)域中還應(yīng)了解，類(lèi)似氨基酸的取代可基于親水性有效地進(jìn)行，尤其在由此產(chǎn)生的生物功能性蛋白質(zhì)或肽旨在用于免疫學(xué)實(shí)施方案中時(shí)，如在本發(fā)明的情況下。在某些實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)的如受其鄰近氨基酸的親水性管控的最大局部平均親水性與其免疫原性及抗原性相關(guān)，即與蛋白質(zhì)的生物性質(zhì)相關(guān)。
[0199]以下親水性值已指定給這些氨基酸殘基:精氨酸(+3.0);賴(lài)氨酸(+3.0);天冬氨酸(+3.0±1);谷氨酸(+3.0±1);絲氨酸(+0.3);天冬酰胺(+0.2);谷氨酰胺(+0.2);甘氨酸(O);蘇氨酸(-0.4);脯氨酸(_0.5±1);丙氨酸(-0.5);組氨酸(-0.5);半胱氨酸(-1.0);蛋氨酸(-1.3);纈氨酸(-1.5);亮氨酸(-1.8);異亮氨酸(-1.8);酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)以及色氨酸(-3.4)。在基于類(lèi)似親水性值作出變化時(shí)，在某些實(shí)施方案中，包括親水性值在±2內(nèi)的氨基酸的取代，在某些實(shí)施方案中，包括親水性值在±1內(nèi)的氨基酸的取代，并且在某些實(shí)施方案中，包括親水性值在±0.5內(nèi)的氨基酸的取代。還可基于親水性從一級(jí)氨基酸序列鑒定表位。這些區(qū)域又被稱(chēng)為“表位核心區(qū)”。
[0200]示例性氨基酸取代列舉于表1中。
[0201]表1
[0202]氨基酸取代
【權(quán)利要求】
1.一種穩(wěn)定的制劑，其包含至少一種特異性結(jié)合PCSK9的單克隆抗體，其中PCSK9包含SEQ ID NO I的氨基酸，所述單克隆抗體的量為約40 mg/ml至約300 mg/ml ;及含量為約.05 mM至約40 mM的藥學(xué)上可接受的緩沖劑；及含量為約.01% w/v至約20% w/v的藥學(xué)上可接受的表面活性劑；及約0.5% w/v至約10% w/v的至少一種藥學(xué)上可接受的穩(wěn)定劑，其中所述穩(wěn)定的制劑的PH在約4.0至約6.0之間。
2.如權(quán)利要求1中任一項(xiàng)所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述單克隆抗體包含: a)包含與SEQID NO:23至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ IDNO: 49至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)， b)包含與SEQID NO:465至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ IDNO:463至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)， c)包含與SEQID N0:461至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ IDNO: 459至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)， d)包含與SEQID NO:485至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ IDNO: 483至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；或 e)包含與SEQID NO:582至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ IDNO: 583至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。
3.如權(quán)利要求2所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述單克隆抗體包含: a)包含氨基酸序列SEQID NO:23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的重鏈可變區(qū)， b)包含氨基酸序列SEQID NO:465的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸SEQ ID NO:463的重鏈可變區(qū)， c)包含氨基酸序列SEQID NO: 12的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的重鏈可變區(qū)， d)包含氨基酸序列SEQID NO:461的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:459的重鏈可變區(qū)， e)包含氨基酸序列SEQID NO:485的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:483的重鏈可變區(qū)，或 f)包含氨基酸序列SEQID NO:582的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:583的重鏈可變區(qū)。
4.如權(quán)利要求2所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述單克隆抗體選自由以下組成的組:21B12、11F1、31H4、8A3 以及 8A1。
5.如權(quán)利要求2所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述藥學(xué)上可接受的緩沖劑選自由以下組成的組:谷氨酸鹽、磷酸鹽、磷酸鹽緩沖鹽水、乙酸鈉、檸檬酸鈉、以及三羥甲基氨基甲烷緩沖劑(Tris buffer)。
6.如權(quán)利要求5所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述藥學(xué)上可接受的緩沖劑為乙酸鈉。
7.如權(quán)利要求6所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述藥學(xué)上可接受的緩沖劑以10-20mM的量存在。
8.如權(quán)利要求2所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述藥學(xué)上可接受的表面活性劑為聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20。
9.如權(quán)利要求7所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述藥學(xué)上可接受的表面活性劑為聚山梨醇酯80。
10.如權(quán)利要求7所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述藥學(xué)上可接受的表面活性劑為聚山梨醇酯20。
11.如權(quán)利要求8、9或10中任一項(xiàng)所述的穩(wěn)定的制劑，其中藥學(xué)上可接受的表面活性劑以約0.004% w/v至約0.01% w/v的量存在。
12.如權(quán)利要求2中任一項(xiàng)所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述藥學(xué)上可接受的穩(wěn)定劑選自由以下組成的組:多羥基烴、二糖、多元醇、脯氨酸、精氨酸、賴(lài)氨酸、蛋氨酸、牛磺酸以及苯甲醇。
13.如權(quán)利要求12所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述穩(wěn)定劑為選自由山梨糖醇、甘露糖醇及甘油組成的組的多羥基烴。
14.如權(quán)利要求11所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述穩(wěn)定劑為山梨糖醇。
15.如權(quán)利要求12所述的穩(wěn)定的制劑,其中所述穩(wěn)定劑為選自由鹿糖、麥芽糖、乳糖、果糖及海藻糖組成的組的二糖。
16.如權(quán)利要求11所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述穩(wěn)定劑為蔗糖。
17.如權(quán)利要求16所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述穩(wěn)定劑以約9%w/v的量存在。
18.如權(quán)利要求11所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述穩(wěn)定劑為脯氨酸。
19.如權(quán)利要求18所 述的穩(wěn)定的制劑，其中所述脯氨酸以介于約2%至3%w/v之間的量存在。
20.如權(quán)利要求17所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述制劑的pH介于約5.0至約5.5之間。
21.如權(quán)利要求19所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述制劑的pH介于約5.0至約5.5之間。
22.如權(quán)利要求17所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述穩(wěn)定的制劑包括在25°C下30cP或更小的粘度。
23.如權(quán)利要求19所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述穩(wěn)定的制劑包括在25°C下30cP或更小的粘度。
24.如權(quán)利要求19所述的穩(wěn)定的制劑，其中單克隆抗體的量為約70mg/ml至約150mg/ml且所述穩(wěn)定的制劑包括在25°C下12 cP或更小的粘度。
25.如權(quán)利要求20所述的穩(wěn)定的制劑,其包括介于約250mOsmol/kg至約350 mOsmol/kg之間。
26.如權(quán)利要求21所述的穩(wěn)定的制劑,其包括介于約250mOsmol/kg至約350 mOsmol/kg之間。
27.如權(quán)利要求20所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述穩(wěn)定的制劑保持穩(wěn)定持續(xù)至少3、6、12或24個(gè)月。
28.如權(quán)利要求21所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述穩(wěn)定的制劑保持穩(wěn)定持續(xù)至少3、6、12或24個(gè)月。
29.如權(quán)利要求27所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述單克隆抗體包含與氨基酸序列SEQIDNO: 23至少90%相同的輕鏈可變區(qū)和與氨基酸序列SEQ ID NO: 49至少90%相同的重鏈可變區(qū)。
30.如權(quán)利要求27所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述單克隆抗體包含:包含氨基酸序列SEQID NO: 23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO: 49的重鏈可變區(qū)，并且其中所述單克隆抗體的量為約70 mg/ml。
31.如權(quán)利要求28所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述單克隆抗體包含與氨基酸序列SEQIDNO: 23至少90%相同的輕鏈可變區(qū)和與氨基酸序列SEQ ID NO: 49至少90%相同的重鏈可變區(qū)。
32.如權(quán)利要求28所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述單克隆抗體包含：包含氨基酸序列SEQID NO: 23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO: 49的重鏈可變區(qū)，并且其中所述單克隆抗體的量為約140 mg/ml。
33.如權(quán)利要求27所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述單克隆抗體包含與序列SEQIDNO:465至少90%相同的輕鏈可變區(qū)及與序列SEQ ID NO:463至少90%相同的重鏈可變區(qū)。
34.如權(quán)利要求28所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述單克隆抗體包含與序列SEQIDNO: 465至少90%相同的輕鏈可變區(qū)及與序列SEQ ID NO: 463至少90%相同的重鏈可變區(qū)。
35.如權(quán)利要求27所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述單克隆抗體包含：包含氨基酸序列SEQID NO:465的輕鏈可變區(qū)及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 463的重鏈可變區(qū)，并且其中所述單克隆抗體的量為約150 mg/ml ο
36.如權(quán)利要求27所述的穩(wěn)定的制劑，其中所述單克隆抗體包含：包含氨基酸序列SEQID NO:465的輕鏈可變區(qū)及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 463的重鏈可變區(qū)，并且其中所述單克隆抗體的量為約150 mg/ml ο
37.一種穩(wěn)定的制劑 ，其包含 a.含量為約70 mg/ml至約200 mg/ml的單克隆抗體,所述單克隆抗體包含： i)包含與序列SEQID NO:577有至少90%同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)及包含與序列SEQ ID NO:576有至少90%同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)； ii)包含氨基酸序列SEQID NO: 577的輕鏈可變區(qū)及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 576的重鏈可變區(qū)； iii)包含與序列SEQID NO:588有至少90%同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)及包含與序列SEQ ID NO:599有至少90%同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；或 iv)包含氨基酸序列SEQID NO:588的輕鏈可變區(qū)及包含氨基酸序列SEQ ID NO:589的重鏈可變區(qū)； (b)約10mM乙酸鈉； (c)約9.0%w/v 鹿糖； (d)約O.004%至約0.01% w/v聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80 ；以及
(e)約5. 2 的 pH。
38.一種穩(wěn)定的制劑,其包含：含量為約70 mg/ml至約200 mg/ml的單克隆抗體,所述單克隆抗體包含： i)包含與序列SEQID NO:577有至少90%同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)及包含與序列SEQ ID NO:576有至少90%同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)； ii)包含氨基酸序列SEQID NO: 577的輕鏈可變區(qū)及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 576的重鏈可變區(qū)；iii)包含與序列SEQID NO:588有至少90%同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)及包含與序列SEQ ID NO:589有至少90%同一性的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；或 iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:588的輕鏈可變區(qū)及包含氨基酸序列SEQ ID NO:589的重鏈可變區(qū)； (b)約10mM乙酸鈉； (c)介于約2.0%至3. 0% w/v之間的脯氨酸； (d)約O.01% w/v聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，以及
(e)約5. O 的 pH。
39.一種降低患者的血清LDL膽固醇的方法,其包括以約10 mg至約3000 mg的劑量向有需要的患者施用至少一種抗PCSK9抗體，由此使所述血清LDL膽固醇水平降低至少約15%。
40.一種治療或預(yù)防具有血清LDL膽固醇水平的患者的膽固醇相關(guān)疾病的方法，其包括以約10 mg至約3000 mg的劑量向有需要的患者施用至少一種抗PCSK9抗體，由此治療或預(yù)防所述患者的膽固醇相關(guān)疾病。
41.如權(quán)利要求40所述的方法，其中所述膽固醇相關(guān)疾病選自由以下組成的組：家族性高膽固醇血癥包括雜合子家族性高膽固醇血癥和純合子家族性高膽固醇血癥、非家族性高膽固醇血癥、脂蛋白（a)升高、心臟病、代謝綜合征、糖尿病、冠心病、中風(fēng)、心血管疾病、阿茲海默癥、外周動(dòng)脈疾病、高脂血癥以及血脂異常。
42.如權(quán)利要求3 9所述 的方法，其中所述患者的所述血清LDL膽固醇水平降低的量選自由以下組成的組：a)至少約15%、b)至少約30%、c)至少約40%、d)至少約50%、以及e)至少約60%。
43.如權(quán)利要求42所述的方法，其中所述抗PCSK9抗體包含： (a)包含與SEQID NO:23至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ IDNO: 49至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)； (b)包含與SEQID NO: 12至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ IDNO:67至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)； (c)包含與SEQID NO :461至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ IDNO: 459至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)； (d)包含與SEQID NO :465至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ IDNO: 463至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)； (e)包含與SEQID NO :485至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ IDNO: 483至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；或 (f)包含與SEQID NO: 582至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ IDNO: 583至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。
44.如權(quán)利要求42所述的方法，其中所述抗PCSK9抗體包含： (a)包含氨基酸序列SEQID NO:23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID N0:49的重鏈可變區(qū) (b)包含氨基酸序列SEQID NO: 12的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的重鏈可變區(qū)； (c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:461的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:459的重鏈可變區(qū)； (d)包含氨基酸序列SEQID NO:465的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:463的重鏈可變區(qū)；或 (e)包含氨基酸序列SEQID NO:485的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:483的重鏈可變區(qū)；或 (f)包含氨基酸序列SEQID NO:582的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:583的重鏈可變區(qū)。
45.如權(quán)利要求42所述的方法，其中所述至少一種抗PCSK9抗體選自由以下組成的組：21B12、11F1、31H4、8A3 以及 8A1。
46.如權(quán)利要求43所述的方法，其中所述抗PCSK9抗體以選自由以下組成的組的劑量向患者施用：a)約45 mg至約450 mg ；b)約140 mg至約200 mg ；c)約140 mg至約180mg ；d)約 140 mg 至約 170 mg ；e)約 140 mg ；f)約 150 mg ；g)約 420 mg ；h)約 450 mg ；i)約 600 mg ； j)約 700 mg ；k)約 1400 mg ；1)約 1200 mg ；m)約 420 mg 至約 3000 mg ；n)約1000 mg 至約 3000 mg ；o)約 3000 mg。
47.如權(quán)利要求46所述的方法，其中所述抗PCSK9抗體以選自由以下組成的組的日程安排向患者施用：（I)每周一次；（2)每?jī)芍芤淮危?3)每月一次；(4)每隔一月一次；(5)每三個(gè)月一次；(6)每六個(gè)月一次以及（7)每十二個(gè)月一次。
48.如權(quán)利要求46所述的方法，其中所述施用步驟包括以胃腸外方式施用所述至少一種抗PCSK9抗體。
49.如權(quán)利要求48所述的方 法，其中所述施用步驟包括靜脈內(nèi)施用所述至少一種抗PCSK9抗體。
50.如權(quán)利要求48所述的方法，其中所述施用步驟包括皮下施用所述至少一種抗PCSK9抗體。
51.如權(quán)利要求50所述的方法，其中所述至少一種抗PCSK9抗體包含：包含與SEQIDNO: 23至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO: 49至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。
52.如權(quán)利要求50所述的方法，其中所述至少一種抗PCSK9抗體包含：包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的重鏈可變區(qū)。
53.如權(quán)利要求50所述的方法，其中所述至少一種抗PCSK9抗體是21B12。
54.如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述抗PCSK9抗體以約35mg至約70 mg的劑量每周一次向患者皮下施用，并且其中所述患者的所述血清LDL膽固醇水平降低至少約30%-50%，持續(xù)約 7-10 天。
55.如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述抗PCSK9抗體以約105mg至約280 mg的劑量每?jī)芍芤淮蜗蚧颊咂は率┯?，并且其中所述患者的所述血清LDL膽固醇水平降低至少約30%-50%，持續(xù)約 7-14 天。
56.如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述抗PCSK9抗體以約280mg至約450 mg的劑量每月一次向患者皮下施用，并且其中所述患者的所述血清LDL膽固醇水平降低至少約30%-50%，持續(xù)約21至31天。
57.如權(quán)利要求55所述的方法，其中所述抗PCSK9抗體以約120mg的劑量向患者施用。
58.如權(quán)利要求55所述的方法，其中所述抗PCSK9抗體以約140mg的劑量向患者施用。
59.如權(quán)利要求56所述的方法，其中所述抗PCSK9抗體以約420mg的劑量向患者施用。
60.如權(quán)利要求50所述的方法，其中所述至少一種抗PCSK9抗體選自由以下組成的組：8A3U1F1 以及 8A1。
61.如權(quán)利要求50所述的方法，其中所述至少一種抗PCSK9抗體包含：包含與SEQIDNO: 465至少90%相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含與SEQ ID NO: 463至少90%相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。
62.如權(quán)利要求50所述的方法，其中所述至少一種抗PCSK9抗體包含：包含氨基酸序列SEQ ID NO:465的輕鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列SEQ ID NO:463的重鏈可變區(qū)。
63.如權(quán)利要求50所述的方法，其中所述至少一種抗PCSK9抗體是11F1。
64.如權(quán)利要求61所述的方法，其中所述抗PCSK9抗體以約150mg的劑量每隔一周一次向患者皮下施用，其中所述患者的所述血清LDL膽固醇水平降低至少約30%-50%，持續(xù)約7-14 天。
65.如權(quán)利要求62所述的方法，其中所述抗PCSK9抗體以約150mg的劑量每四周一次向患者皮下施用，其中 所述 患者的所述血清LDL膽固醇水平降低至少約30%-50%，持續(xù)約21-31 天。
66.如權(quán)利要求62所述的方法，其中所述抗PCSK9抗體以大于約150mg至約200 mg的劑量每四周一次向患者皮下施用，其中所述患者的所述血清LDL膽固醇水平降低至少約30%-50%，持續(xù)約 21-31 天。
67.如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述至少一種抗PCSK9抗體在使用至少一種其它膽固醇降低劑之前、之后或同時(shí)向患者施用。
68.如權(quán)利要求67所述的方法，其中所述至少一種其它膽固醇降低劑選自由以下組成的>組：他汀類(lèi)包括阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、瑞舒伐他汀、辛伐他汀；煙酸、纖維酸、膽汁酸螯合劑、膽固醇吸收抑制劑、脂質(zhì)改性劑、PPAR Y激動(dòng)劑、PPAR α/激動(dòng)劑、鯊烯合酶抑制劑、CETP抑制劑、抗高血壓藥、抗糖尿病劑包括磺酰脲、胰島素、GLP-I類(lèi)似物、DDPIV抑制劑；ΑροΒ調(diào)節(jié)劑、MTP抑制劑和/或動(dòng)脈硬化閉塞癥治療、制瘤素Μ、雌激素、小檗堿以及用于免疫相關(guān)疾病的治療劑。
69.如權(quán)利要求62所述的方法，其中所述至少一種抗PCSK9抗體在使用至少一種其它膽固醇降低劑之前、之后或同時(shí)向患者施用。
70.如權(quán)利要求69所述的方法，其中所述至少一種其它膽固醇降低劑選自由以下組成的組：他汀類(lèi)包括，阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、瑞舒伐他汀、辛伐他??；煙酸、纖維酸、膽汁酸螯合劑、膽固醇吸收抑制劑、脂質(zhì)改性劑、PPAR Y激動(dòng)劑、PPAR α/激動(dòng)劑、鯊烯合酶抑制劑、CETP抑制劑、抗高血壓藥、抗糖尿病劑包括磺酰脲、胰島素 、GLP-I類(lèi)似物、DDPIV抑制劑；ΑροΒ調(diào)節(jié)劑、MTP抑制劑和/或動(dòng)脈硬化閉塞癥治療、制瘤素Μ、雌激素、小檗堿以及用于免疫相關(guān)疾病的治療劑。
【文檔編號(hào)】A61K39/395GK103841992SQ201280034417
【公開(kāi)日】2014年6月4日 申請(qǐng)日期:2012年5月10日 優(yōu)先權(quán)日:2011年5月10日
【發(fā)明者】J.C.Y.陳, J.P.吉布斯, C.S.迪亞斯, S.瓦澤爾曼, R.A.D.斯科特, C.L.克羅斯頓, T.D.奧斯倫德, E.A.斯坦 申請(qǐng)人:安姆根有限公司