用于對(duì)流行性感冒進(jìn)行治療以及診斷的組合物以及方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了使用抗流行性感冒血清凝集素和基質(zhì)2胞外多肽診斷、治療并預(yù)防流行性感冒感染的組合物、疫苗或者方法。
【專利說(shuō)明】用于對(duì)流行性感冒進(jìn)行治療以及診斷的組合物以及方法
[0001]相關(guān)申請(qǐng)
[0002]本申請(qǐng)要求2011年2月14日遞交的臨時(shí)申請(qǐng)第USSN61 / 442，733號(hào)的權(quán)利，上述文獻(xiàn)中的全部?jī)?nèi)容均作為一個(gè)整體在本發(fā)明中被引入作為參考。
[0003]序列表的整合
[0004]2012 年 I 月 6 日創(chuàng)建的、大小為 910KB 的、名為“37418_518001W0_ST25.txt”的文件的內(nèi)容作為一個(gè)整體在本發(fā)明中被引入作為參考
發(fā)明領(lǐng)域
[0005]本發(fā)明主要涉及流行性感冒感染的預(yù)防、診斷、治療和監(jiān)控。更準(zhǔn)確的說(shuō)，本發(fā)明涉及一種組合物，這種組合物包括在抵抗流行性感冒血球凝集素或者基質(zhì)2-蛋白時(shí)產(chǎn)生的人類抗體的結(jié)合物。這種組合物是能夠有效用于預(yù)防或者治療流行性感冒的藥物組合物，并且用于診斷并檢測(cè)流行性感冒感染。
[0006]發(fā)明的【背景技術(shù)】
[0007]在美國(guó)，每年流行性感冒病毒會(huì)感染5-20%的人群并導(dǎo)致30，000-50，000人死亡。由流行性感冒A病毒感染造成的疾病通常具有周期性的特征?？乖云坪臀灰剖姑磕瓿霈F(xiàn)不同的A菌株。不僅如此，高致病性菌株入侵公眾的威脅迫使對(duì)流感新型治療劑的需要越來(lái)越緊迫。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明提供了診斷性、預(yù)防性和治療性組合物，包括抵抗流行性感冒血球凝集素蛋白質(zhì)時(shí)產(chǎn)生的人類抗體和抵抗流行性感冒M2蛋白質(zhì)時(shí)產(chǎn)生的人類單克隆抗體。此外，本發(fā)明提供了診斷性、預(yù)防性和治療性組合物，所述組合物包括抵抗流行性感冒血球凝集素蛋白質(zhì)的一種抗原決定簇時(shí)產(chǎn)生的分離的人類抗體和抵抗流行性感冒M2蛋白質(zhì)的一種抗原決定簇時(shí)產(chǎn)生的分離的人類單克隆抗體。而且，這些組合物是藥物組合物，其中包括一種藥物載體。這些組合物解決了本領(lǐng)域長(zhǎng)時(shí)間以來(lái)對(duì)能夠有力中和流行性感冒病毒感染并識(shí)別流行性感冒菌株中常見(jiàn)的蛋白質(zhì)恒定區(qū)的藥物組合物的需要。
[0009]具體地說(shuō)，本發(fā)明提供了一種組合物，該組合物包括:(a) —種分離的人類抗體，該抗體能夠特異性結(jié)合流行性感冒病毒的血球凝集素(HA)糖蛋白的一種抗原決定簇；和(b) —種分離的人類單克隆抗體，所述單克隆抗體能夠特異性結(jié)合流行性感冒病毒基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽的一種抗原決定簇。在所述組合物的某些實(shí)施方案中，能夠特異性結(jié)合基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽的一種抗原決定簇的分離的人類單克隆抗體是 TCN-032(8I10),21B15, TCN-031(23K12)，3241_G23，3244_110，3243_J07，3259_J21，3245_019，3244_H04，3136_G05,3252_C13,3255_J06,3420_123，3139_P23，3248_P18,3253_P10, 3260_D19, 3362_B11或者3242_P05。而且，能夠特異性結(jié)合血球凝集素(HA)糖蛋白的抗原決定簇的分離的人類抗體可選擇的是TCN-522(3212_I12)，TCN-521 (3280_D18), TCN-523(5248_A17)，TCN-563(5237_B21)，TCN-526 (5084_C17)，TCN-527 (5086_C06) , TCN-528(5087_P17)，TCN-529(5297_H01)，TCN-530(5248_H10)，TCN-531 (5091_H13), TCN-532 (5262_H18)，TCN-533(5256_A17)，TCN-534(5249_B02)，TCN-535(5246_P19) , TCN-536(5095_N01)，TCN-537(3194_D21)，TCN-538(3206_017)，TCN-539 (5056_A08), TCN-540(5060_F05), TCN-541 (5062_M11)，TCN-542(5079_A16)，TCN-543 (5081_G23) , TCN-544(5082_A19)，TCN-545(5082_115)，TCN-546(5089_L08)，TCN-547 (5092_Fll), TCN-548(5092_P01), TCN-5 49 ( 5092_P04), TCN-550(5096_F06), TCN-551 (5243_DOl) , TCN-552(5249_I23)，TCN-553(5261_C18)，TCN-554(5277_M05)，TCN-555 (5246_L16)，TCN-556 (5089_K12)，TCN-557 (5081_A04)，TCN558 (5248_H10b)，TCN-559 (5097_G08)，TCN-560(5084_P10), TCN-504(3251_K17)， SC06-141， SC06-255， SC06-257， SC06-260,SC06-261, SC06-262, SC06-268, SC06-272, SC06-296, SC06-301, SC06-307, SC06-310，SC06-314, SC06-323, SC06-325， SC06-327， SC06-328， SC06-329， SC06-331， SC06-332，SC06-334, SC06-336, SC06-339，SC06-342, SC06-343, SC06-344, CR6141, CR6255, CR6257,CR6260, CR6261，CR6262，CR6268, CR6272, CR6296,CR6301,CR6307,CR6310,CR6314,CR6323,CR6325,CR6327,CR6328,CR6329,CR6331,CR6332,CR6334, CR6336,CR6339,CR6342, CR6343,CR6344, 2k, D7, D8, FlO, G17, H40, A66, D80, E88, E90,或者 H98.[0010]血球凝集素(HA)糖蛋白的抗原決定簇選擇性地是GVTNKVNSIIDK (序列識(shí)別號(hào):198)，GVTNKVNSIINK(序列識(shí)別號(hào):283)，GVTNKENSIIDK(序列識(shí)別號(hào):202)，GVTNKVNRIIDK(序列識(shí)別號(hào):201)，GITNKVNSVIEK(序列識(shí)別號(hào):281)，GITNKENSVIEK(序列識(shí)別號(hào):257) ,GITNKVNSIIDK(序列識(shí)別號(hào):225)和KITSKVNNIVDK(序列識(shí)別號(hào):216).所述流行性感冒血球凝集素(HA)糖蛋白包括HAl和HA2亞基。示范性的血球凝集素(HA)糖蛋白抗原決定簇包括HAl亞基、HA2亞基、或者HAl和HA2亞基。做為選擇，或者另外，基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽的抗原決定簇是一種非連續(xù)的抗原決定簇。例如，基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽的抗原決定簇包括在MSLLTEVETPTRNEWGCRCNDSSD (序列識(shí)別號(hào):1)的位置2、5、6的氨基酸或者SLLTEV(序列識(shí)別號(hào):42)的位置2、5、6的氨基酸。[0011]本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種組合物，包括:(a) —種分離的人抗血球凝集素(HA)抗體，或者其抗原結(jié)合片段，包括重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域，其中，所述重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域分別包含三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)l-3(CDRl-3)，并且每個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)包括下列氨基酸序列:重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)1:序列識(shí)別號(hào):247，571，586，597，603，609，615，627，633，637，643，649，658，664，670，303，251，242、或者222 ;重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 2:序列識(shí)別號(hào):248，572，587，592，598，604，610，616，628，634，638，644，650，655，659，665，671，306，249，307、或者 221 ;重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)3:序列識(shí)別號(hào):568，573，588，593，599，605，611，617，629，635，639，645，651，656，660，666，672，725，246，290、或者 220 ;輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)1:序列識(shí)別號(hào):569，574，577，580，583，589，594，612，618，621，624，640，646，652，661，667，285，289，245，224、或者219 ;輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)2:序列識(shí)別號(hào):570，575，578，581，584，590，595，601，607，613，619，622，625，631，653，662，668，305，223、或者231 ;輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)3:序列識(shí)別號(hào):289，576，579，582，585，591，596，602，608，614，620，623，626，632，636，642，648，654，657，663，669，308，250，227、或者280 ;和(b) —種分離的抗基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體，或者其抗原結(jié)合片段，包括重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域，其中，所述重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域分別包含三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)1-3 (⑶R1-3)，并且每個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)包括下列氨基酸序列:重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)1:序列識(shí)別號(hào):72，103，179，187，203，211，228，252，260，268，284，293、或者301 ;重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 2:序列識(shí)別號(hào):74，105，180，188，204，212，229，237，253，261，269，285、或者 294 ;重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 3:序列識(shí)別號(hào):76,107，181，189，197，205，213，230，238，254，262，270，286、或者295 ;輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)1:序列識(shí)別號(hào):59，92，184，192，208，192，233，241，265、或者273 ;輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 2:序列識(shí)別號(hào):61，94，185，193，209，217，226，234，258，274、或者282;和輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 3:序列識(shí)別號(hào):63,96,186，194，210，218，243，259，267，275，291、或者 300。
[0012]作為選擇，或者另外，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種組合物，包括:(a) —種分離的人抗血球凝集素(HA)抗體，或者其抗原結(jié)合片段，包括重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域，其中，所述重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域分別包含三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)1-3 (⑶R1-3)，并且每個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)包括下列氨基酸序列:重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)1:序列識(shí)別號(hào):247，571，586，597，603，609，615，627，633，637，643，649，658，664，670，303，251，242、或者222 ;重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)2:序列識(shí)別號(hào):248，572，587，592，598，604，610，616，628，634，638，644，650，655，659，665，671，306，249，307、或者221 ;重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)3:序列識(shí)別號(hào):568，573，588，593，599，605，611，617，629，635，639，645，651，656，660，666，672，725，246，290、或者 220 ;輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)1:序列識(shí)別號(hào):569，574，577，580，583，589，594，612，618，621，624，640，646，652，661，667，285，289，245，224、或者 219 ;輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 2:序列識(shí)別號(hào):570，575，578，581，584，590，595，601，607，613，619，622，625，631，653，662，668，305，223、或者231 ;輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)3:序列識(shí)別號(hào)=289,576,579,582，585，591，596，602，608，614，620，623，626，632，636，642，648，654，657，663，669，308，250，227、或者280 ;和(b) —種分離的抗基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體，或者其抗原結(jié)合片段，包括重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域，其中，所述重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域分別包含三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)l-3(CDRl-3)，并且每個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)包括下列氨基酸序列:重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)1:序列識(shí)別號(hào):109，112，182，190，206，214，239，255，263，271，287，296、或者 304 ;重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 2:序列識(shí)別號(hào):110,113，183，191，207，215，232，240，256，264，272，288、或者 297 ;重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 3 序列識(shí)別號(hào):76,107，181，189，197，205，213，230，238，254，262，270，286、或者295 ;輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)1:序列識(shí)別號(hào):59，92，184，192，208，192，233，241，265、或者273 ;輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 2:序列識(shí)別號(hào):61，94，185，193，209，217，226，234，258，274、或者 282 ;和輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 3:序列識(shí)別號(hào):63,96,186，194，210，218，243，259，267，275，291、或者 300。
[0013]本發(fā)明提供可一種組合物，所述組合物包括:(a)分離的人類抗血球凝集素(HA)抗體或其抗原結(jié)合片段，包括一種重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和一種輕鏈可變區(qū)(VL)結(jié)構(gòu)域，其中，所述重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域包括下列氨基酸序列:序列識(shí)別號(hào)309，313，317，321，325，329，333，337，341，345，349，353，357，361，365，369，373，377，381，385，389，393，397，401，405，409，199，417，423，429，435，441，447，453，459，465，471，477，483，489，495，501，507，513，519，525，531，537，543，550，556、或者 562 ;并且所述輕鏈可變區(qū)(VL)結(jié)構(gòu)域包括下列氨基酸序列:序列識(shí)別號(hào)310，314，318，322，326，330，334，338，342，346，350，354，358，362，366，370，374，378，382，386，390，394，398，402，406，410，414，420，426，432，438，444，450，456，462，468，474，480，486，492，498，504，510，516，522，528，534，540，547，553，559、或者565 ;和(b) —種分離的抗基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體或其抗原結(jié)合片段，其中包括一種重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和一種輕鏈可變區(qū)(VL)結(jié)構(gòu)域，其中，所述重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域包括下列氨基酸序列:序列識(shí)別號(hào)44，277，276，50，236，235，116，120，124，128，132，136，140，144，148，152，156，160，164，168，172、或者 176，并且，所述輕鏈可變區(qū)(VL)結(jié)構(gòu)域包括下列氨基酸序列:序列識(shí)別號(hào)46，292，52，118，122，126，130，134，138，142，146，150，154，158，162，166，170、或者 178。
[0014]而且，本發(fā)明提供了一種多價(jià)疫苗組合物，其中包括本發(fā)明所描述的任意組合物，所述組合物包含一種分離的人類抗-血球凝集素(HA)抗體或其抗原結(jié)合片段以及一種分離的抗基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體或其抗原結(jié)合片段。做為選擇，所述多價(jià)疫苗包括能夠與本發(fā)明抗體結(jié)合的抗原決定簇相結(jié)合的抗體。示例性的本發(fā)明抗體包括，但是不局限于:TCN-032(8I10) ,21B15, TCN-031 (23K12)，3241_G23，3244_110，3243_J07，3259_J21，3245_019，3244_H04，3136_G05,3252_C13,3255_J06,3420_I23,3139_P23,3248_P18，3253_P10，3260_D19，3362_B11，3242_P05， TCN-522(3212_I12)， TCN-521(3280_D18), TCN-523(5248_A17)，TCN-563(5237_B21)，TCN-526 (5084_C17)，TCN-527 (5086_C06), TCN-528(5087_P17)，TCN-529(5297_H01)，TCN-530(5248_H10)，TCN-531 (5091_H13) , TCN-532(5262_H18)，TCN-533(5256_A17)，TCN-534(5249_B02)，TCN-535 (5246_P19), TCN-536(5095_N01), TCN-537(3194_D21)，TCN-538(3206_017), TCN-539(5056_A08), TCN-540(5060_F05), TCN-541 (5062_M11)，TCN-542 (5079_A16), TCN-543 (5081_G23), TCN-544(5082_A19)，TCN-545(5082_115)，TCN-546(5089_L08)，TCN-547(5092_Fll), TCN-548(5092_P01), TCN-549(5092_P04), TCN-550(5096_F06), TCN-551 (5243_D01)，TCN-552 (5249_I23`)，TCN-553 (5261_C18)，TCN-554 (5277_M05)，TCN-555 (5246_L16)，TCN-556(5089_K12)， TCN-557(5081_A04)， TCN 558(5248_H10b)， TCN-559(5097_G08)，TCN-560(5084_P10), TCN-504(3251_K17)， SC06-141， SC06-255， SC06-257, SC06-260,SC06-261, SC06-262, SC06-268， SC06-272， SC06-296， SC06-301， SC06-307， SC06-310，SC06-314， SC06-323， SC06-325， SC06-327， SC06-328， SC06-329， SC06-331， SC06-332，SC06-334, SC06-336, SC06-339，SC06-342, SC06-343, SC06-344, CR6141, CR6255, CR6257,CR6260, CR6261, CR6262, CR6268,CR6272,CR6296,CR6301,CR6307,CR6310,CR6314,CR6323,CR6325,CR6327,CR6328,CR6329,CR6331,CR6332,CR6334,CR6336,CR6339, CR6342, CR6343,CR6344, D7, D8, F10, G17, H40, A66, D80, E88, E90 和 H98。例如，所述多價(jià)疫苗可能包括一個(gè)或者一個(gè)以上下列抗原決定簇:GVTNKVNSIIDK(序列識(shí)別號(hào):198)，GVTNKVNSIINK(序列識(shí)別號(hào):283)，GVTNKENSIIDK(序列識(shí)別號(hào):202)，GVTNKVNRIIDK(序列識(shí)別號(hào):201)，GITNKVNSVIEK(序列識(shí)別號(hào):281)，GITNKENSVIEK(序列識(shí)別號(hào):257)，GITNKVNSIIDK(序列識(shí)別號(hào):225)，KITSKVNNIVDK(序列識(shí)別號(hào):216)，MSLLTEVETPTRNEWGCRCNDSSD(序列識(shí)別號(hào):I)，和MSLLTEVETPTRNEWGCRCNDSSD (序列識(shí)別號(hào):1)以其天然構(gòu)象存在。[0015]所述多價(jià)疫苗還包括一種組合物，該組合物包括:(a) —種分離的人類抗體，該抗體能夠特異性結(jié)合流行性感冒病毒的血球凝集素(HA)糖蛋白的抗原決定簇；和(b) —種分離的人類單克隆抗體，所述單克隆抗體能夠特異性結(jié)合流行性感冒病毒基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽的抗原決定簇。
[0016]本發(fā)明提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包括本發(fā)明所描述的組合物中的任意一個(gè)。此外，所述藥物組合物包括一種藥物載體。
[0017]本發(fā)明提供了一種用于刺激主體免疫反應(yīng)的方法，包括對(duì)主體給藥本發(fā)明所描述的藥物組合物。所述藥物組合物在主體暴露于流行性感冒病毒之前或者之后被給藥。
[0018]本發(fā)明還提供了一種用于治療需要的主體流行性感冒病毒感染的方法，包括對(duì)主體給藥本發(fā)明所描述的藥物組合物所述主體可能已經(jīng)被暴露于流行性感冒病毒中。作為選擇，或者，另外，所述主體沒(méi)有被診斷患有流行性感冒感染。所述藥物組合物在主體暴露于流行性感冒病毒之前或者之后被給藥。優(yōu)選的，所述藥物組合物以足夠促進(jìn)病毒清除或者消除流行性感冒感染的細(xì)胞的劑量被給藥。
[0019]本發(fā)明進(jìn)一步地提供了一種用于預(yù)防需要的主體流行性感冒病毒感染的方法，包括在主體暴露于流行性感冒病毒之間，對(duì)主體給藥本發(fā)明所描述的疫苗組合物。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，所述主體具有感染流行性感冒傳染病的風(fēng)險(xiǎn)。所述藥物組合物在主體暴露于流行性感冒病毒之前或者之后被給藥。優(yōu)選的，所述藥物組合物以足夠促進(jìn)病毒清除或者消除流行性感冒感染的細(xì)胞的劑量被給藥。
[0020]本發(fā)明提供的治療和預(yù)防方法包括給藥一種抗病毒藥物、一種病毒進(jìn)入抑制劑或者病毒附著抑制劑。示范性的抗病毒藥物包括，但是不局限于，一種神經(jīng)氨糖酸苷酶抑制齊?，一種血球凝集素(HA)抑制劑，一種唾液酸抑制劑、或者一種M2離子通道抑制劑。在這些方法的一些方面，所述M2離子通道抑制劑是金剛烷胺或者金剛烷乙胺。在這些方法的其他方面，所述神經(jīng)氨糖酸苷酶抑制劑是扎那米韋，或者奧司他韋磷酸鹽。所述抗病毒藥物在主體暴露于流行性感冒病毒之前或者之后被給藥。
[0021]本發(fā)明提供的治療或者預(yù)防方法進(jìn)一步包括給藥一種第二抗A型流行性感冒抗體。所述第二抗體可以選擇的是一種本發(fā)明所描述的抗體。第二抗體在主體暴露于流行性感冒病毒之前或者之后被給藥。
[0022]本發(fā)明提供了一種在患者體內(nèi)測(cè)定一種流行性感冒病毒感染是否存在的方法，所述的方法包括以下步驟:(a)將一種來(lái)自于所述主體的生物學(xué)樣本與本發(fā)明所描述的任意一種抗體或者藥物組合物進(jìn)行接觸；(b)對(duì)與所述的生物學(xué)樣本發(fā)生結(jié)合的所述抗體的劑量進(jìn)行探測(cè)；并且(C)將與所述的生物學(xué)樣本發(fā)生結(jié)合的所述抗體的所述劑量與一個(gè)對(duì)照值進(jìn)行比較，并且據(jù)此確定主體中是否存在流行性感冒病毒。可選地，通過(guò)將從主體上獲得的參照樣品與本發(fā)明所描述的任意一個(gè)抗體或者藥物組合物相接觸、并檢測(cè)結(jié)合參照樣品的抗體的量，從而確定參照值。
[0023]本發(fā)明還提供了一種診斷試劑盒，所述診斷試劑盒包括本發(fā)明所描述的抗體、組合物或者藥物組合物中的任意一個(gè)。 [0024]本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種預(yù)防試劑盒，所述預(yù)防試劑盒包括本發(fā)明所描述的疫苗組合物。優(yōu)選的，所述疫苗是一種多價(jià)疫苗。術(shù)語(yǔ)“多價(jià)疫苗”描述了能夠引發(fā)針對(duì)一個(gè)以上傳染性試劑(例如，流行性感冒血球凝集素(HA)糖蛋白和流行性感冒基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽)或者一種分子的不同抗原決定簇(例如序列識(shí)別號(hào)198，283，202，201，281，257，225，和216所顯示的血球凝集素(HA)抗原決定簇)免疫反應(yīng)的單個(gè)疫苗。作為選擇，或者另外，術(shù)語(yǔ)“多價(jià)疫苗”指的是給藥一種人類抗體結(jié)合物，所述抗體是由超過(guò)一個(gè)傳染劑(例如，流行性感冒血球凝集素(HA)糖蛋白和流行性感冒基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽)產(chǎn)生的。
[0025]本發(fā)明的其他特征以及優(yōu)點(diǎn)將通過(guò)下面的詳細(xì)描述以及權(quán)利要求而變得顯而易見(jiàn)并且其被涵蓋在下述的詳細(xì)描述以及權(quán)利要求之內(nèi)。
[0026]附圖的簡(jiǎn)要描述
[0027]附圖1表示的是在存在有或者不存在有游離的基質(zhì)2蛋白肽的情況下，本發(fā)明中所述的三種抗體以及對(duì)照的人類14C2抗體與293-人胚腎細(xì)胞(HEK)進(jìn)行的結(jié)合，其中所述的293-人胚腎細(xì)胞使用一種基質(zhì)2蛋白表達(dá)構(gòu)建體或者對(duì)照載體進(jìn)行了轉(zhuǎn)染。
[0028]附圖2A以及B是曲線圖，表示的是與A型流行性感冒/波多黎各/8/32發(fā)生結(jié)合的人類單克隆抗體。
[0029]附圖3A是一個(gè)圖表，表示的是基質(zhì)2蛋白(M2)變體的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列(序列識(shí)別號(hào)分別為:1-3，679&5-40，按照顯示的順序)。
[0030]附圖3B以及C是柱狀圖表，表示的是人類單克隆抗流行性感冒抗體與附圖3A中所示的基質(zhì)2蛋白變體所進(jìn)行的結(jié)合。
[0031]附圖4A以及B是柱狀圖表 ，表示的是經(jīng)過(guò)丙氨酸分區(qū)突變后，人類單克隆抗流行性感冒抗體與基質(zhì)2蛋白肽所進(jìn)行的結(jié)合。
[0032]附圖5是一系列的柱狀圖表，表示的是單克隆抗體8il0以及23K12與基質(zhì)2蛋白(M2)之間所進(jìn)行的結(jié)合，這代表著流行性感冒菌株A /香港/ 483 / 1997序列在所述的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞系DG44中進(jìn)行了穩(wěn)定的表達(dá)。
[0033]附圖6A是一個(gè)圖表，表示的是抗基質(zhì)2蛋白抗體與變化的基質(zhì)2蛋白肽(序列識(shí)別號(hào)分別為:680-704，按照顯示的順序)之間進(jìn)行的交叉反應(yīng)性結(jié)合。
[0034]附圖6B是一個(gè)圖表，表不的是基質(zhì)2蛋白抗體對(duì)截短型基質(zhì)2蛋白妝(序列識(shí)別號(hào)分別為:680，705-724&19，按照顯示的順序)而言的結(jié)合活性。
[0035]附圖7是一個(gè)曲線圖，表示的是利用人類抗流行性感冒單克隆抗體進(jìn)行治療的感染了流行性感冒的小鼠的存活情況。
[0036]附圖8是一個(gè)圖解，表示的是所述的抗基質(zhì)2蛋白抗體在基質(zhì)2蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)的N-末端(序列識(shí)別號(hào):19)中的一個(gè)高度保守的區(qū)域內(nèi)發(fā)生的結(jié)合。
[0037]附圖9是一個(gè)圖表，表示的是在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)中，克隆于粗上清液中的抗基質(zhì)2蛋白大鼠抗人類單克隆抗體(rHMAb)與流行性感冒的結(jié)合，而所述的對(duì)照抗基質(zhì)2蛋白細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)單克隆抗體14C2并不能容易的與病毒進(jìn)行結(jié)合。
[0038]附圖10是一系列的照片，表示的是抗基質(zhì)2蛋白大鼠抗人類單克隆抗體(rHMAb)與感染了流行性感冒的細(xì)胞所進(jìn)行的結(jié)合。犬腎(MDCK)細(xì)胞經(jīng)過(guò)或者沒(méi)有經(jīng)過(guò)A型流行性感冒/波多黎各/ 8 / 32的感染并且在24小時(shí)之后對(duì)來(lái)自于粗上清液中的抗體結(jié)合進(jìn)行測(cè)試。通過(guò)所述的熒光微量檢測(cè)技術(shù)(FMAT)平板掃描儀對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行收集。
[0039]附圖11是一個(gè)圖表，表示的是克隆于粗上清液中的抗基質(zhì)2蛋白大鼠抗人類單克隆抗體(rHMAb)與細(xì)胞所進(jìn)行的結(jié)合，其中所述的細(xì)胞利用所述的流行性感冒亞型H3N2、HK483、以及VN1203基質(zhì)2蛋白進(jìn)行了轉(zhuǎn)染。將編碼與流行性感冒菌株H3N2、HK483、以及VN1203相應(yīng)的全長(zhǎng)基質(zhì)2蛋白cDNA的質(zhì)粒與一種模擬的質(zhì)粒對(duì)照瞬間轉(zhuǎn)染到293細(xì)胞內(nèi)。測(cè)試所述的14C2、8il0，23K12，以及21B15單克隆抗體與所述轉(zhuǎn)染體之間的結(jié)合，并且使用一種AF647-偶聯(lián)型抗人類免疫球蛋白G次級(jí)抗體進(jìn)行探測(cè)。圖中表示的是熒光激活的細(xì)胞分揀器(FACS)分析后，所述的特異性的單克隆抗體結(jié)合的平均熒光強(qiáng)度。
[0040]附圖12A-B是抗基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)單克隆抗體可變區(qū)的氨基酸序列。顯示了重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)的骨架區(qū)l-4(FRl-4)和互補(bǔ)決定區(qū)1_3(CDR1_3)。使用IMGT數(shù)據(jù)庫(kù)(IMGT?，國(guó)際免疫遺傳信息系S?http://www.1mgt.0rg )中的命名法定義骨架區(qū)、互補(bǔ)決定區(qū)和基因名稱?；疑暮凶语@示了淡藍(lán)色盒子中種系序列的一致性、短橫線表示缺口，并且白色的盒子是種系氨基酸取代突變。
[0041]附圖13是一種圖表，描述了抗-基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)單克隆抗體與TCN-032Fab的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合分析結(jié)果。使用所顯示的抗-基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)單克隆抗體結(jié)合A /香港/ 483 / 97中穩(wěn)定的CHO轉(zhuǎn)染表達(dá)M2，在此之前，其被10微克/毫升TCN-032Fab片段處理或者沒(méi)有處理過(guò)。使用山羊抗-huigg fcalexaf luor488FACS檢測(cè)結(jié)合在細(xì)胞表面的抗基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)單克隆抗體，并用流式細(xì)胞計(jì)進(jìn)行分析。從實(shí)驗(yàn)獲得結(jié)果。
[0042]附圖14a是一種圖表，顯示了抗基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)單克隆抗體TCN-032和TCN-031結(jié)合病毒顆粒和病毒感染細(xì)胞而不是基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)衍生的合成肽的能力。純化的流行性感冒病毒(A /波多黎各/ 8 / 34)被包覆在10微克/毫升的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定小孔中，并且使用HRP-標(biāo)記的山羊-抗-人Fe評(píng)價(jià)抗-基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)單克隆抗體TCN-03 1、TCN-032、chl4C2，和HCMV單克隆抗體2N9的結(jié)合。所得結(jié)果顯示了 3個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
[0043]附圖14B是一種圖表，顯示了抗基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)單克隆抗體TCN-032和TCN-031結(jié)合病毒顆粒和病毒感染細(xì)胞而不是基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)衍生的合成肽的能力。從A / Fort Worth / I / 50中獲得的23mer合成肽以I微克/毫升的量被包覆在酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定小孔中，并且在平板上評(píng)價(jià)單克隆抗體TCN-031、TCN-032、chl4C2和2N9的結(jié)合。所得結(jié)果顯示了 3個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
[0044]附圖14C是一種圖表，顯示了抗基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)單克隆抗體TCN-032和TCN-031結(jié)合病毒顆粒和病毒感染細(xì)胞而不是基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)衍生的合成肽的能力。使用A /波多黎各/ 8 / 34(PR8)感染MDCK細(xì)胞，隨后用單克隆抗體TCN-031、TCN-032、chl4C2和HCMV單克隆抗體染色。使用Alexafluor647_共軛的山羊抗-人-1gGH和L抗體檢測(cè)抗體結(jié)合并使用流式細(xì)胞計(jì)定量。所得結(jié)果顯示了 3個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
[0045]附圖14D是一系列照片，描述了使用A / Fort Worth/1 / 50 (D20)的基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞，所述細(xì)胞被含有單克隆抗體TCN-031、TCN-032或者參照chl4C2的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染上清液染色，并使用FMAT分析存在或者不存在5微克/毫升基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)肽時(shí)與M2的結(jié)合。模擬轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是使用載體單獨(dú)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞。所得結(jié)果顯示了一個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
[0046]附圖15A-D是圖表，描述了老鼠中抗M2單克隆抗體TCN-031和TCN-032。使用產(chǎn)期內(nèi)接種5x LD50A /越南/ 1203 / 04(H5N1)感染老鼠(n=10)(組A-B)或者，使用5xLD50A /波多黎各/ 8 / 34(HlNl)感染老鼠(n=5)(組C-D)，然后使用單克隆抗體在感染后第24、72和120小時(shí)進(jìn)行3次腹膜內(nèi)注射(ip)(每個(gè)老鼠總共注射3個(gè)單克隆抗體)并每天承重，持續(xù)14天。a和c顯示了殘余物百分比，而老鼠的重量百分比變化顯示在B和D中。結(jié)果顯示了為了對(duì)感染A /越南/ 1203 / 04H5N1)的老鼠進(jìn)行治療研究的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0047]附圖16是一系列圖表，描述了使用抗基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)單克隆抗體TCN-031和TCN-032處理之后再用H5N1A /越南/ 1203 / 04激發(fā)處理的老鼠的肺、肝、和腦中的病毒滴定度。通過(guò)靜脈注射400微克/ 200微升劑量的TCN-031、TCN-032、對(duì)照人類單克隆抗體2N9、對(duì)照嵌合單克隆抗體chl4C2、PBS處理BALB / C老鼠或者不對(duì)老鼠進(jìn)行處理(n=19)。在感染后3天和6天中，每組3個(gè)老鼠，對(duì)老鼠的肺(作為局部復(fù)制指示劑)、肝和腦(作為H5N1傳染病全身傳播特點(diǎn)的指示劑)進(jìn)行組織病毒滴定度確定。
[0048]附圖17是一種圖表，描述了 TCN-031和TCN-032通過(guò)NK細(xì)胞強(qiáng)化細(xì)胞溶解的能力。使用A /所羅門島/ 3 / 2006 (HINl)病毒感染MDCK細(xì)胞，然后用單克隆抗體TCN-031、TCN-032或者亞類-相配的陰性對(duì)照單克隆抗體2N9進(jìn)行處理。然后，使用純化的人類NK細(xì)胞激發(fā)細(xì)胞，并使用吸光率測(cè)定作為細(xì)胞溶解結(jié)果釋放的乳酸脫氫酶。結(jié)果表示對(duì)兩個(gè)不同的正常人類供體進(jìn)行的分離試驗(yàn)。
[0049]附圖18是一種圖表，描述了與抗M2單克隆抗體結(jié)合的、表達(dá)M2的細(xì)胞的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞溶解(⑶C)。使用指明的單克隆抗體處理穩(wěn)定表達(dá)轉(zhuǎn)染子的A/香港/ 483 / 97和模擬對(duì)照物，隨后用人類補(bǔ)體激發(fā)。通過(guò)碘化丙啶染色溶解的細(xì)胞隨后用FACS分析。數(shù)據(jù)表示了 2個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0050]附圖19A-C是圖表，描述了抗基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)單克隆抗體TCN-031和TCN-032與M2突變株的結(jié)合，這種結(jié)合表明抗原決定簇位于基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)的高保守性N-末端。使用M2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域上每個(gè)位置都用丙氨酸取代的A / Fort Worth /I / 50 (D20) (A)突變株或者包括A /越南/ 1203 / 04 (越南)和A /香港/ 483 / 97 (香港)的四十個(gè)野生M2突變株(B)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染進(jìn)入293細(xì)胞中。表6中列出了各個(gè)野生型M2突變株的同一性。用單克隆抗體TCN-031、TCN-032或者對(duì)照chl4C2對(duì)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞染色，并在轉(zhuǎn)染24小時(shí)后使用FACS分析細(xì)胞對(duì)M2的結(jié)合。單克隆抗體TCN-031和TCN-032不結(jié)合在基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)的1、4或者5位置存在氨基酸取代作用的變體。(C)TCN_031和TCN-032中推定的抗原決定簇存在于基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)的高保守性區(qū)域中，并且與chl4C2中所發(fā)現(xiàn)的抗原決定簇所不同。(A)和(B)的結(jié)果代表3個(gè)實(shí)驗(yàn)。
[0051 ] 附圖20是一種圖表，描述了單克隆抗體TCN-031和TCN-032能夠識(shí)別基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)上相同的區(qū)域。A /香港/ 483 / 97中穩(wěn)定表達(dá)CHO轉(zhuǎn)染子的M2被10微升/毫升TCN-031、TCN-032或者2N9染色，然后使用Alexafluor647_標(biāo)記的TCN-031(TCN-031AF647)或者TCN-032 (TCN-032AF647)檢測(cè)，并通過(guò)流式細(xì)胞計(jì)分析。結(jié)果代表三個(gè)實(shí)驗(yàn)。
[0052]附圖21是一種圖表，描述了抗基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)單克隆抗體TCN-031和TCN-032結(jié)合已經(jīng)被HlNlA /加利福尼亞/ 4 / 9感染的細(xì)胞。使用流行性感冒A菌株HlNlA /孟菲斯/ 14 / 96、HlNlA /加利福尼亞/4/09感染MDCK細(xì)胞，或者進(jìn)行模擬感染。在感染24小時(shí)之后，用單克隆抗體TCN-031、TCN-032或者參照chl4C2染色細(xì)胞，并用FACS分析細(xì)胞與M2的結(jié)合。結(jié)果顯示的是一個(gè)實(shí)驗(yàn)。
具體實(shí)施方案
[0053]流行性感冒病毒由三個(gè)類型(A、B和C)組成。A型流行性感冒病毒感染各式各樣的禽類和哺乳動(dòng)物，包括人類、馬、海洋哺乳動(dòng)物、豬、白鼬和雞。在動(dòng)物中，大多數(shù)A型流行性感冒病毒產(chǎn)生輕微的呼吸道和腸道局部感染。然而，高致病性流行性感冒A菌株，例如H5N1，存在于家禽中的話，會(huì)引起全身感染，這種感染的死亡率可以達(dá)到100%。感染上流行性感冒A的動(dòng)物經(jīng)常起到流行性感冒病毒儲(chǔ)蓄器的作用，并且某些亞類已經(jīng)顯示能夠穿過(guò)種族壁壘感染人類。
[0054]可以根據(jù)編碼表面糖蛋白的兩個(gè)基因抗原區(qū)內(nèi)的等位基因變化將A型流行性感冒病毒分為幾個(gè)亞類，所述表面糖蛋白是血球凝集素(HA)和神經(jīng)氨糖酸苷酶(NA)，是病毒附著和細(xì)胞釋放所需要的。其他主要的病毒蛋白質(zhì)包括核蛋白、核蛋白殼結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)、膜蛋白質(zhì)(Ml和M2)、聚合酶(PA、PB和PB2)和非結(jié)構(gòu)性蛋白質(zhì)(NSl和NS2)。目前，血球凝集素(HA)的十六個(gè)亞類(H1-H16)和九個(gè)神經(jīng)氨糖酸苷酶(NA)亞類(N1-N9)抗原性變體在A型流行性感冒病毒中都是已知的。以前，只有三個(gè)亞類已知會(huì)在人類中傳播(H1N1、H1N2、和 H3N2)。
[0055]然而，近年來(lái)，家禽A型流行性感冒的致病性H5N1亞類已經(jīng)被報(bào)道能夠穿過(guò)種族壁壘并感染人類，如香港在1997年和2003年的記載，導(dǎo)致了一些病人的死亡。在人類中，家禽流行性感冒病毒感染呼吸道以及腸道、肝、脾、腎及其他器官的細(xì)胞。家禽流行性感冒感染的癥狀包括發(fā)燒、呼吸困難，包括呼吸淺短和咳嗽、淋巴細(xì)胞減少、腹瀉和血糖水平調(diào)節(jié)困難。與季節(jié)性流行性感冒不同，最具有患病風(fēng)險(xiǎn)的是成年人，成年人構(gòu)成了患病群體的大部分。由于某些A型家禽流行性感冒的高致病性，尤其是H5N1，以及他們感染人類的能力，這里存在與這些致病株有關(guān)重要的經(jīng)濟(jì)和公共衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)，包括流行病和大范圍流行的危險(xiǎn)。這種危險(xiǎn)的規(guī)?？梢杂?918年流感肆虐來(lái)說(shuō)明，當(dāng)時(shí)造成超過(guò)5千萬(wàn)人死亡。
[0056]目前，沒(méi)有對(duì)H5N1感染有效的疫`苗，所以使用免疫球蛋白進(jìn)行被動(dòng)的免疫療法可能是一種可選擇的策略。在1918年大流行之前使用被動(dòng)免疫接種的方法據(jù)報(bào)道使死亡率減半。鑒于他們對(duì)人類的治療性效益，對(duì)抗體存在一種需要，尤其是能夠中和流行性感冒感染，包括H5N1感染的人類抗體。
[0057]本發(fā)明提供了一種包括由抵抗兩種流行性感冒蛋白質(zhì)產(chǎn)生的人類抗體的組合物，所述兩種流行性感冒蛋白質(zhì)是血球凝集素(HA)和基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)，并且，本發(fā)明顯示這些組合物可以被用于藥物，尤其是用于診斷、預(yù)防和治療流行性感冒感染，包括H5N1感染的藥物。
[0058]人某質(zhì)2細(xì)朐外結(jié)構(gòu)域(HuM2e)杭體
[0059]本發(fā)明提供了特異性針對(duì)基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)的全人類單克隆抗體。可選地，所述抗體是一種來(lái)自人類供體的分離形式的B細(xì)胞。示范性的單克隆抗體包括TCN-032(8I10),21B15, TCN-031(23K12),3241_G23,3244_I10,3243_J07,3259_J21,3245_019，3244_H04,3136_G05,3252_C13,3255_J06,3420_I23,3139_P23,3248_P18,3253_P10,3260_D19，3362_B11，和3242_P05，如這里所述。做為選擇，所述單克隆抗體是能夠與下列抗原決定簇相結(jié)合的抗體:TCN-032 (8110)，21B15, TCN-031 (23K12)，3241_G23, 3244_110，3243_J07,3259_J21，3245_019，3244_H04,3136_G05,3252_C13,3255_J06,3420_I23,3139_P23, 3248_P18, 3253_P10, 3260_D19, 3362_B11，和 3242_P05。所述抗體分別在這里被叫做huM2e抗體。所述人基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(HuM2e)抗體具有下列一個(gè)或多個(gè)特征:a)與流行性感冒病毒基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域抗原決定簇相結(jié)合；b)與A型流行性感冒感染細(xì)胞相結(jié)合；或者(c)與A型流行性感冒病毒相結(jié)合。
[0060]與人基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(HuM2e)抗體結(jié)合的抗原決定簇是一種M2多肽的非線性抗原決定簇。優(yōu)選的，所述抗原決定簇包括基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽的氨基末端區(qū)域。更優(yōu)選的，所述抗原決定簇整體地或者部分地包括氨基酸序列SLLTEV(序列識(shí)別號(hào):42)。最優(yōu)選的，當(dāng)按照與序列識(shí)別號(hào):1 一致的順序編號(hào)時(shí)，所述抗原決定簇包括在基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽的2、5、6位置的氨基酸。在位置2上的氨基酸是絲氨酸；在位置5上的氨基酸是蘇氨酸；以及在位置6上的氨基酸是谷氨酸。
[0061]人基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(HuM2e)抗體包括一種重鏈可變區(qū)和一種輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)具有以下序列識(shí)別號(hào)所示的氨基酸序列:44，277，276，50，236，235，116，120，124，128，132，136，140，144，148，152，156，160，164，168，172、或者 176 ;并且，所述輕鏈可變區(qū)具有以下序列識(shí)別號(hào)所示的氨基酸序列=46,52,118，122，126，130，134，138，142，146，150，154，158，162，166，170，174、或者178。優(yōu)選的，三個(gè)重鏈CDR包括的氨基酸序列與由以下序列識(shí)別號(hào)所示的氨基酸序列具有至少90 %，92 %，95 %，97 % 98 %，99 %或者更多一致性的氨基酸序列:72,74,76,103，105，107，179，180，181，187，188，189，197,203,204,205，21，212，213，228，229，230，237，238，252，253，254，260，261，262，268，269，270，284，285，286，293，294，295，和301 (由Kabat方法所確定的)或者序列識(shí)別號(hào)=109,110,76,112，113，107，182，183，181，190，191，189，，197，206，207，205，214，215，213，232，230，239，240，238，255，256，254，263，264，262，271，272，270，287，288，286，296，297，295 和 304(由Chothia方法所確定的)；并且三個(gè)輕鏈CDR包括的氨基酸序列與由以下序列識(shí)別號(hào)所示的氨基酸序列具有至少90%，9`2%，95%，97% 98%，99%或者更多一致性的氨基酸序列:59，60，61，92，94，96，184，185，186，192，193，194，208，209，210，，217，218，226，223，234，241，243，258，259，265，267，273，274，275，282，291，和 300 (由 Kabat 方法所確定的)或者序列識(shí)別號(hào):59,60,61,92,94,96,184，185，186，192，193，194，208，209，210，，217，218，226，223，234，241，243，258，259，265，267，273，274，275，282，291，和 300 (由 Chothia 方法所確定的)。這些抗體結(jié)合M2e。
[0062]基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體的重鏈來(lái)源于種系V(可變)基因，比如，舉例來(lái)說(shuō)，IgHV4或者IgHV3種系基因。
[0063]本發(fā)明的基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體包括重鏈可變區(qū)(VH)，所述重鏈可變區(qū)(VH)是由人類IgHV4或者IgHV3種系基因序列編碼的。IgHV4種系基因序列被顯示在，例如，登錄號(hào)L10088、M29812、M95114、X56360和M95117中。IgHV3種系基因序列被顯示在，例如，登錄號(hào)X92218、X70208、Z27504、M99679和AB019437中。本發(fā)明的基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體包括重鏈可變區(qū)(VH)，所述重鏈可變區(qū)(VH)是由與人類IgHV4或者IgHV3種系基因序列具有至少80%同源性的核酸序列編碼的。優(yōu)選的，所述核苷酸序列與IgHV4或者IgHV3種系基因序列具有至少90%、95%、96%、97%的同源性，并且更優(yōu)選的，與IgHV4或者IgHV3種系基因序列具有至少98%、99%的同源性。基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體的重鏈可變區(qū)(VH)與由與IgHV4或者IgHV3重鏈可變區(qū)(VH)種系基因序列編碼的重鏈可變區(qū)(VH)氨基酸序列具有至少80%同源性。優(yōu)選的，所述基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體的重鏈可變區(qū)(VH)氨基酸序列與由IgHV4或者IgHV3種系基因序列所編碼的氨基酸序列具有至少90%、95%、96%、97%的同源性，并且更優(yōu)選的，與18!^4或者IgHV3種系基因序列所編碼的序列具有至少98 %、99 %的同源性。
[0064]本發(fā)明的基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體還包括輕鏈可變區(qū)(VH)，所述輕鏈可變區(qū)(VH)是由人類IgKVl種系基因序列編碼的。人類IgKVl輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域種系基因序列被顯示在，例如，登錄號(hào)X59315、X59312、X59318、J00248、和Y14865中。做為選擇，基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體包括輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域是由與IgKVl種系基因序列具有至少80%同源性的核酸序列編碼的。優(yōu)選的，所述核苷酸序列與IgKVl種系基因序列具有至少90%、95%、96%、97%的同源性，并且更優(yōu)選的，與IgKVl種系基因序列具有至少98^^99%的同源性?；|(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體的輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域與由IgKVl種系基因序列編碼的輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列具有至少80%同源性。優(yōu)選的，所述基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體的輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域氨基酸序列與由IgKVl種系基因序列所編碼的氨基酸序列具有至少90%、95%、96%、97%的同源性，并且更優(yōu)選的，與IgKVl種系基因序列所編碼的序列具有至少98%、99%的同源性。
[0065]本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了一種組合物，所述組合物包括本發(fā)明的人基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(HuM2e)抗體。在各種各樣的方面，所述組合物進(jìn)一步包括一種抗病毒藥物、一種病毒進(jìn)入抑制劑或者病毒附著抑制劑。所述抗病毒藥物是，例如，一種神經(jīng)氨糖酸苷酶抑制劑、血球凝集素(HA)抑制劑、一種唾液酸抑制劑或者一種M2離子通道抑制劑。所述M2離子通道抑制劑是，例如，金剛烷胺或者金剛烷乙胺。所述神經(jīng)氨糖酸苷酶抑制劑是，例如，扎那米韋，或者奧司他韋 磷酸鹽。在進(jìn)一步的方面，所述組合物進(jìn)一步包括一種第二抗A型流行性感冒抗體。
[0066]在進(jìn)一步方面，本發(fā)明的人基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(HuM2e)抗體可操作的與一種治療劑或者可檢測(cè)的標(biāo)記物相連。
[0067]另外，本發(fā)明提供了通過(guò)向主體給藥人基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(HuM2e)抗體來(lái)刺激免疫反應(yīng)，治療、預(yù)防或者緩解流行性感冒病毒感染癥狀的方法。
[0068]選擇性地，所述主體進(jìn)一步被給藥一種第二試劑，例如，但是不局限于，流行性感冒病毒抗體、抗病毒藥物，比如神經(jīng)氨糖酸苷酶抑制劑、血球凝集素(HA)抑制劑、唾液酸抑制劑或者M(jìn)2離子通道抑制劑、病毒進(jìn)入抑制劑或者病毒附著抑制劑。所述M2離子通道抑制劑是，例如，金剛烷胺或者金剛烷乙胺。所述神經(jīng)氨糖酸苷酶抑制劑是，例如，扎那米韋，或者奧司他韋磷酸鹽。所述主體患有，或者預(yù)計(jì)會(huì)發(fā)展成流行性感冒病毒感染，比如，舉例來(lái)說(shuō)，自家免疫性疾病或者炎癥性異常。
[0069]在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了在主體暴露到一種流行性感冒病毒之前和/或之后，對(duì)主體給藥本發(fā)明人基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(HuM2e)抗體的方法。例如，本發(fā)明的人基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(HuM2e)抗體被用于治療或者預(yù)防流行性病毒感染。優(yōu)選的，所述人基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(HuM2e)抗體以足夠促進(jìn)病毒清除或者消除流行性感冒感染的細(xì)胞的劑量被給藥。
[0070]本發(fā)明還包括一種用于確定病人體內(nèi)是否存在流行性感冒病毒感染的方法，通過(guò)將病人體內(nèi)獲得的生物樣品與一種huM2e抗體相接觸；檢測(cè)與生物學(xué)樣品結(jié)合的抗體的量；并且將與生物學(xué)樣品結(jié)合的抗體的量和一種參照值相比較。
[0071]本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種診斷試劑盒，所述診斷試劑盒包括一種人基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(HuM2e)抗體。
[0072]從下面的詳細(xì)說(shuō)明和權(quán)利要求書中，本發(fā)明的其他特征和優(yōu)勢(shì)將變的顯而易見(jiàn)，并被包括在其中。
[0073]本發(fā)明提供了完全人類單克隆抗體，其中所述的單克隆抗體能夠特異性的作用于所述的基質(zhì)2蛋白(M2)多肽的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。所述的抗體在本發(fā)明中分別被稱為人類基質(zhì)2蛋白細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(huM2e)抗體。
[0074]基質(zhì)2蛋白(M2)是一個(gè)有96個(gè)氨基酸的跨膜蛋白，其以一種同型四聚體的形式存在于流行性感冒病毒以及病毒感染性細(xì)胞的表面之上。基質(zhì)2蛋白含有一個(gè)有23個(gè)氨基酸的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e),所述的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域高度保守的穿過(guò)(across) A型流行性感冒菌株。自從1918年在全國(guó)流行的菌株之后，僅有幾個(gè)氨基酸發(fā)生了改變，因此基質(zhì)2蛋白細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域?qū)τ诹餍行愿忻暗闹委煻允且粋€(gè)有吸引力的目標(biāo)。在先前的研究中，對(duì)于所述的基質(zhì)2蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)具有特異性的單克隆抗體是通過(guò)一種肽的免疫作用而得到的，其中所述的肽與所述的基質(zhì)2蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)的線性序列相對(duì)應(yīng)。與之形成對(duì)照的是，本發(fā)明提供了一種新的方法，其中在細(xì)胞系內(nèi)表達(dá)完全長(zhǎng)度的基質(zhì)2蛋白(M2)，這樣一來(lái)能夠?qū)εc這種細(xì)胞表達(dá)的基質(zhì)2蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)發(fā)生結(jié)合的人類抗體進(jìn)行識(shí)別。已經(jīng)表明，所述的人類基質(zhì)2蛋白細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(huM2e)抗體能夠與存在于所述的基質(zhì)2蛋白-轉(zhuǎn)染細(xì)胞以及天然基質(zhì)2蛋白上的構(gòu)象抗原決定簇進(jìn)行結(jié)合，可以與感染了流行性感冒的細(xì)胞進(jìn)行結(jié)合，或者可以與所述的病毒自身進(jìn)行結(jié)合。所述的人類基質(zhì)2蛋白的細(xì)胞外結(jié) 構(gòu)域(huM2e)抗體不與所述的線性基質(zhì)2蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)肽進(jìn)行結(jié)合，但是它們的確能夠與幾種天然的基質(zhì)2蛋白變體進(jìn)行結(jié)合，也能夠經(jīng)由cDNA的轉(zhuǎn)染作用在細(xì)胞系內(nèi)進(jìn)行表達(dá)。因此，本發(fā)明能夠?qū)θ祟悊慰寺】贵w進(jìn)行識(shí)別以及制備，其中所述的人類單克隆抗體對(duì)于非常寬范圍的A型流行性感冒病毒菌株表現(xiàn)出新的特異性。這些抗體可以進(jìn)行診斷性的應(yīng)用，用于對(duì)A型流行性感冒的感染進(jìn)行識(shí)別，并且可以進(jìn)行治療性的應(yīng)用，用于對(duì)A型流行性感冒的感染進(jìn)行治療。
[0075]本發(fā)明所述的人類基質(zhì)2蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(huM2e)抗體具有下述性質(zhì)中的一種或者多種:所述的人類基質(zhì)2蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(huM2e)抗體結(jié)合于a)存在于一種流行性感冒病毒的基質(zhì)2蛋白(M2)多肽的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域內(nèi)的一個(gè)表位；b)結(jié)合于感染了 A型流行性感冒的細(xì)胞；和/或c)結(jié)合于A型流行性感冒病毒(即，病毒粒子)。本發(fā)明所述的人類基質(zhì)2蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(huM2e)抗體經(jīng)由免疫效應(yīng)器機(jī)制對(duì)感染了流行性感冒的細(xì)胞進(jìn)行消除并且通過(guò)與流行性感冒病毒粒子的結(jié)合促進(jìn)了病毒的直接清除，其中所述的免疫效應(yīng)器機(jī)制是例如抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用(ADCC)。本發(fā)明所述的人類基質(zhì)2蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(huM2e)抗體與所述的基質(zhì)2蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽的氨基末端區(qū)域進(jìn)行結(jié)合。優(yōu)選的，本發(fā)明所述的人類基質(zhì)2蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(huM2e)抗體與所述的基質(zhì)2蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽的氨基末端進(jìn)行結(jié)合，其中所述的N-末端的蛋氨酸殘基是空鍵。示例性的基質(zhì)2蛋白的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)序列包括在下面的表格I中列出的那些序列:
【權(quán)利要求】
1.一種組合物，該組合物包括:(a) —種分離的人類抗體，該抗體能夠特異性結(jié)合流行性感冒病毒的血球凝集素(HA)糖蛋白的一種抗原決定簇；和(b) —種分離的人類單克隆抗體，所述單克隆抗體能夠特異性結(jié)合流行性感冒病毒基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽的一種抗原決定簇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，能夠特異性結(jié)合基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽的一種抗原決定簇的分離的人類單克隆抗體是TCN-032(8I10)，21B15，TCN-031 (23K12)，3241_G23，3244_110，3243_J07,3259_J21，3245_019，3244_H04,3136_G05,3252_C13,3255_J06, 3420_I23, 3139_P23, 3248_P18, 3253_P10, 3260_D19, 3362_B11、或者 3242_P05.
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，能夠特異性結(jié)合血球凝集素(HA)糖蛋白的抗原決定簇的分離的人類抗體是 TCN-522 (3212_I12)，TCN-521 (3280_D18)，TCN-523 (5248_A17) , TCN-563(5237_B21)，TCN-526(5084_C17)，TCN-527 (5086_C06)，TCN-528 (5087_P17), TCN-529 (5297_H01), TCN-530(5248_H10), TCN-531 (5091_H13)，TCN-532(5262_H18), TCN-533(5256_A17)，TCN-534(5249_B02)，TCN-535(5246_P19)，TCN-536(5095_NOl), TCN-537(3194_D21)，TCN-538(3206_017)，TCN-539 (5056_A08)，TCN-540(5060_F05), TCN-541 (5062_M11)，TCN-542 (5079_A16)，TCN-543(5081_G23)，TCN-544(5082_A19) , TCN-545(5082_I15)，TCN-546(5089_L08)，TCN-547(5092_F11)，TCN-548(5092_P01), TCN-549(5092_P04), TCN-550(5096_F06), TCN-551 (5243_D01), TCN-552 (5249_123)， TCN-553(5261_C18)， TCN-554(5277_M05)， TCN-555(5246_L16)， TCN-556(5089_K12)，TCN-557(5081_A04)，TCN558(5248_H10b)，TCN-559(5097_G08)，TCN-560(5084_P10)，TCN-504(3251_K17), SC06-141, SC06-255, SC06-257, SC06-260, SC06-261, SC06-262,SC06-268， SC06-272， SC06-296， SC06-301， SC06-307， SC06-310， SC06-314， SC06-323，SC06-325, SC06-327, SC06-328， SC06-329， SC06-331， SC06-332， SC06-334, SC06-336，SC06-339, SC06-342, SC06-343, SC06-344, CR6141, CR6255, CR6257, CR6260, CR6261,CR6262, CR6268, CR6272,CR6296,CR6301,CR6307,CR6310,CR6314,CR6323,CR6325, CR6327,CR6328, CR6329, CR6331, CR6332, CR6334, CR6336, CR6339, CR6342, CR6343, CR6344, 2k, D7,D8, F10, G17, H40, A66, D80, E88, E90、或者 H98.
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，血球凝集素(HA)糖蛋白的抗原決定簇是GVTNKVNSIIDK(序列識(shí)別號(hào):198)，GVTNKVNSIINK(序列識(shí)別號(hào):283)，GVTNKENSIIDK(序列識(shí)別號(hào):202)，GVTNKVNRIIDK(序列識(shí)別號(hào):201)，GITNKVNSVIEK (序列識(shí)別號(hào):281)，GITNKENSVIEK(序列識(shí)別號(hào):257)，GITNKVNSIIDK(序列識(shí)別號(hào):225)，andKITSKVNNIVDK(序列識(shí)別號(hào):216)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽的抗原決定簇是一種非連續(xù)的抗原決定簇。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)多肽的抗原決定簇包括: a)在MSLLTEVETPTRNEWGCRCNDSSD(序列識(shí)別號(hào):1)的位置2、5、6的氨基酸；或者 b)SLLTEV (序列識(shí)別號(hào):42)的位置2、5、6的氨基酸
7.一種組合物,包括: (a)一種分離的人抗血球凝集素(HA)抗體，或者其抗原結(jié)合片段，包括重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域，其中，所述重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域分別包含三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)1-3 (⑶R1-3)，并且每個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)包括下列氨基酸序列: 重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)1:序列識(shí)別號(hào):247，571，586，597，603，609，615，627，633，637，643，649，658，664，670，303，251，242、或者 222 ； 重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)2:序列識(shí)別號(hào):248，572，587，592，598，604，610，616，628，634，638，644，650，655，659，665，671，306，249，307 或者 221 ； 重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)3:序列識(shí)別號(hào):568，573，588，593，599，605，611，617，629，635，639，645，651，656，660，666，672，725，246，290 或者 220 ； 輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)1:序列識(shí)別號(hào):569，574，577，580，583，589，594，612，618，621，624，640，646，652，661，667，285，289，245，224 或者 219 ； 輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 2:序列識(shí)別號(hào):570，575，578，581，584，590，595，601,607,613,619,622,625,631,653,662,668,305,223 或者 231 ； 輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 3:序列識(shí)別號(hào):289，576，579，582，585，591，596，602，608，614，620，623，626，632，636，642，648，654，657，663，669，308，250，227 或者 280 ;以及 (b)一種分離的抗基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體，或者其抗原結(jié)合片段，包括重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域，其中，所述重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域分別包含三 個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)1-3 (⑶R1-3)，并且每個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)包括下列氨基酸序列: 重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)1:序列識(shí)別號(hào):72,103,179,187,203,211,228,252，260，268，284，293、或者 301 ； 重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)2:序列識(shí)別號(hào):74，105，180，188，204，212，229，237，253，261，269，285、或者 294 ； 重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)3:序列識(shí)別號(hào):76，107，181，189，197，205，213，230，238，254，262，270，286、或者 295 ； 輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)1:序列識(shí)別號(hào):59，92，184，192，208，192，233，241，265、或者 273 ； 輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 2:序列識(shí)別號(hào):61，94，185，193，209，217，226，234，258，274、或者282 ;以及 輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 3:序列識(shí)別號(hào):63，96，186，194，210，218，243，259，267，275，291、或者 300。
8.一種組合物,包括: (a) 一種分離的人抗血球凝集素(HA)抗體，或者其抗原結(jié)合片段，包括重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域，其中，所述重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域分別包含三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)1-3 (⑶R1-3)，并且每個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)包括下列氨基酸序列: 重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)1:序列識(shí)別號(hào):247,571,586,597,603,609,615,627，633，637，643，649，658，664，670，303，251，242、或者 222 ；重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)2:序列識(shí)別號(hào):248，572，587，592，598，604，610，.616，628，634，638，644，650，655，659，665，671，306，249，307、或者 221 ； 重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)3:序列識(shí)別號(hào):568，573，588，593，599，605，611，.617，629，635，639，645，651，656，660，666，672，725，246，290、或者 220 ； 輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)1:序列識(shí)別號(hào):569，574，577，580，583，589，594，.612，618，621，624，640，646，652，661，667，285，289，245，224、或者 219 ； 輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 2:序列識(shí)別號(hào):570，575，578，581，584，590，595，.601，607，613，619，622，625，631，653，662，668，305，223、或者 231 ； 輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)3:序列識(shí)別號(hào):289，576，579，582，585，591，596，.602，608，614，620，623，626，632，636，642，648，654，657，663，669，308，250，227、或者 280 ;以及 (b) 一種分離的抗基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體，或者其抗原結(jié)合片段，包括重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域，其中，所述重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變(VL)結(jié)構(gòu)域各自包含三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)1-3 (⑶R1-3)，并且每個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)包括下列氨基酸序列: 重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)1:序列識(shí)別號(hào):109,112,182,190,206,214,239,.255，263，271，287，296、或者 304 ； 重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)2:序列識(shí)別號(hào):110，113，183，191，207，215，232，.240，256，264，272，288、或者 297 ； 重鏈可變區(qū)(VH)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 3序列識(shí)別號(hào):76，107，181，189，197，205，213，230，.238，254，262，270，286、或者 295 ； 輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)1:序列識(shí)別號(hào):59，92，184，192，208，192，223，241，.265、或者 273 ； 輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 2:序列識(shí)別號(hào):61，94，185，193，209，217，226，234，.258，274、或者282 ;以及 輕鏈可變區(qū)(VL)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 3:序列識(shí)別號(hào):63，96，186，194，210，218，243，259，.267，275，291、或者 300.
9.一種組合物，所述組合物包括:(a)分離的人類抗血球凝集素(HA)抗體或其抗原結(jié)合片段，包括一種重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和一種輕鏈可變區(qū)(VL)結(jié)構(gòu)域，其中，所述重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域包括下列氨基酸序列:序列識(shí)別號(hào)309，313，317，321，325，329，333，.337，341，345，349，353，357，361，365，369，373，377，381，385，389，393，397，401，405，409，.199，417，423，429，435，441，447，453，459，465，471，477，483，489，495，501，507，513，519，.525，531，537，543，550，556、或者562 ;并且所述輕鏈可變區(qū)(VL)結(jié)構(gòu)域包括下列氨基酸序列:序列識(shí)別號(hào) 310，314，318，322，326，330，334，338，342，346，350，354，358，362，366，.370，374，378，382，386，390，394，398，402，406，410，414，420，426，432，438，444，450，456，.462，468，474，480，486，492，498，504，510，516，522，528，534，540，547，553，559、或者 565 ；和(b) —種分離的抗基質(zhì)2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)抗體或其抗原結(jié)合片段，其中包括一種重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域和一種輕鏈可變區(qū)(VL)結(jié)構(gòu)域，其中，所述重鏈可變區(qū)(VH)結(jié)構(gòu)域包括下列氨基酸序列:序列識(shí)別號(hào) 44，277，276，50，236，235，116，120，124，128，132，136，.140，144，148，152，156，160，164，168，172、或者 176，并且，所述輕鏈可變區(qū)(VL)結(jié)構(gòu)域包括下列氨基酸序列:序列識(shí)別號(hào) 46，292，52，118，122，126，130，134，138，142，146，150，154，158，162，166，170、或者 178。
10.一種多價(jià)疫苗組合物,其中包括權(quán)利要求7、8或者9所述的組合物。
11.一種 多價(jià)疫苗組合物，其中包括權(quán)利要求1所述的組合物。
12.一種藥物組合物,所述藥物組合物包括權(quán)利要求1、7、8或者9中任意一項(xiàng)所述的組合物以及一種藥物載體。
13.一種用于刺激主體免疫反應(yīng)的方法，包括對(duì)主體給藥權(quán)利要求12所述的藥物組合物。
14.一種用于治療需要的主體流行性感冒病毒感染的方法,包括對(duì)主體給藥權(quán)利要求12所述的藥物組合物。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述主體可能已經(jīng)被暴露于流行性感冒病毒中。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述主體沒(méi)有被診斷出患有流行性感冒感染。
17.一種用于預(yù)防需要的主體流行性感冒病毒感染的方法，包括在主體暴露于流行性感冒病毒之間，對(duì)主體給藥權(quán)利要求10或11所述的疫苗組合物。
18.根據(jù)權(quán)利要求14或者17所述的方法，其中，該方法進(jìn)一步包括給藥一種抗病毒藥物、一種病毒進(jìn)入抑制劑或者病毒附著抑制劑。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中抗病毒藥物是一種神經(jīng)氨糖酸苷酶抑制劑，一種血球凝集素(HA)抑制劑，一種唾液酸抑制劑、或者一種M2離子通道抑制劑。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述M2離子通道抑制劑是金剛烷胺或者金剛烷乙胺。
21.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述神經(jīng)氨糖酸苷酶抑制劑是扎那米韋，或者奧司他韋磷酸鹽。
22.根據(jù)權(quán)利要求14或者17所述的方法，其中進(jìn)一步包括給藥一種第二抗A型流行性感冒抗體。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中，所述第二抗體在主體暴露于流行性感冒病毒之前或者之后被給藥。
24.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述主體具有感染流行性感冒傳染病的風(fēng)險(xiǎn)。
25.根據(jù)權(quán)利要求14或者17所述的方法，其中，所述組合物以足夠促進(jìn)病毒清除或者消除流行性感冒感染細(xì)胞的劑量進(jìn)行給藥。
26.—種在患者體內(nèi)測(cè)定流行性感冒病毒感染是否存在的方法，所述的方法包括以下步驟:(a)將一種來(lái)自于所述主體的生物學(xué)樣本與權(quán)利要求1、7-9中任意一項(xiàng)所述的抗體或者藥物組合物進(jìn)行接觸；(b)對(duì)與所述的生物學(xué)樣本發(fā)生結(jié)合的所述抗體的劑量進(jìn)行探測(cè)；并且(C)將與所述的生物學(xué)樣本發(fā)生結(jié)合的所述抗體的所述劑量與對(duì)照值進(jìn)行比較，并且據(jù)此確定主體中是否存在流行性感冒病毒。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，通過(guò)將從主體上獲得的參照樣品與權(quán)利要求1、7-9中任意一項(xiàng)所述的抗體相接觸、并檢測(cè)結(jié)合參照樣品的抗體的量，從而確定參照值。
28.—種診斷試劑盒，所述診斷試劑盒包括權(quán)利要求1，7，8、或者9中任意一項(xiàng)所述的抗體。
29.一種預(yù)防試劑盒，所述預(yù)防試劑盒包`括權(quán)利要求10或者11所述的疫苗組合物。
【文檔編號(hào)】A61K38/16GK103687619SQ201280018154
【公開(kāi)日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2012年2月14日 優(yōu)先權(quán)日:2011年2月14日
【發(fā)明者】A·G·格蘭德, G·金, T·C·考克斯, O·奧爾森, J·米特查姆, M·摩勒, P·哈蒙德 申請(qǐng)人:特羅科隆科學(xué)有限公司