用于治療陰道感染的陰道應(yīng)用的固體形態(tài)的泡騰組合物的制作方法【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于治療陰道感染的陰道應(yīng)用的固體形態(tài)的泡騰組合物。DSM2277620090723DSM2387820100805DSM2387920100805DSM2388020100805LMGP-2101920011016LMGP-2102320011016LMGP-2102220011016DSM2444120110104DSM2444020110104DSM2451220110125DSM2443820110104DSM2443920110104DSM2451320110125DSM1918720070320DSM1829820060524DSM1918820070320LMGP-2138020020131LMGP-2102120011016LMGP-2102020011016DSM2198020081114DSM2171720080806DSM1660520040720DSM1973920070927DSM2198120081114DSM2171820080806DSM2210620081210DSM2387720100805【專利說明】用于治療陰道感染的陰道應(yīng)用的固體形態(tài)的泡騰組合物【
技術(shù)領(lǐng)域：
】[0001]本發(fā)明涉及一種用于治療陰道感染的陰道應(yīng)用的固體形態(tài)的泡騰組合物。【
背景技術(shù)：
】[0002]眾所周知，腸道和泌尿生殖微生物區(qū)系的組成是個體健康和幸福的關(guān)鍵所在。陰道的生態(tài)體系由以下組成：連接陰道和子宮的上皮細(xì)胞、分泌到所述器官的內(nèi)腔的腺細(xì)胞和由不同種微生物所代表的復(fù)合菌區(qū)系。[0003]這些微生物具有發(fā)酵來源于富養(yǎng)陰道粘膜的副基體細(xì)胞的分解的糖原的能力，并由此產(chǎn)生乳酸，其最終作用是建立并維持了酸性陰道環(huán)境（生理條件下pH值為4-4.5)。[0004]來自乳酸的H+有助于過氧化氫的形成。該分子對于缺乏過氧化氫酶的大量細(xì)菌種類是有毒的。在陰道分泌物的水平，〇.75-5μg/ml的濃度是很容易達(dá)到的，而且此濃度對于顯示毒性作用是非常充分的。[0005]過氧化氫、子宮過氧化物酶（由子宮頸和子宮內(nèi)膜產(chǎn)生）、Cr和廠離子的組合作用還通過直接活化在上皮細(xì)胞間隙中發(fā)揮殺菌作用的多形核細(xì)胞來限制細(xì)菌生長。[0006]在女性中，由于各種外源和內(nèi)源因素，例如抗生素的攝取、緊張狀態(tài)、與懷孕和月經(jīng)周期相關(guān)的激素調(diào)節(jié)或者高濃度雌激素的攝取，在陰道生態(tài)體系中經(jīng)常發(fā)生不平衡。陰道生態(tài)體系平衡的改變導(dǎo)致能引起念珠菌病、陰道炎或陰道?。╲aginosis)形式的所謂"機(jī)會性"微生物（"〇pp〇rtunistic"microorganisms)(如白色念珠菌（Candidaalbicans)和光滑念珠菌（Candidaglabrata))和/或致病微生物（如淋病奈瑟菌（Neisseriagonorrhoeae)和陰道毛滴蟲（Trichomonasvaginalis))的流行。[0007]流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，現(xiàn)今陰道感染每年影響著世界范圍內(nèi)超過十億的女性，從社會經(jīng)濟(jì)學(xué)的觀點帶來嚴(yán)重影響。通常采用的療法是抗菌的和/或抗真菌的療法，其通常會在短期內(nèi)產(chǎn)生良好結(jié)果，但是顯示不能防止由于病原體耐藥性不斷提高所引起的復(fù)發(fā)性感染。此外，并非所有的需要治療的受試者能夠承擔(dān)并忍受抗菌或抗真菌療法。[0008]已知能夠恢復(fù)陰道微生物區(qū)系適當(dāng)組成的微生物的使用。[0009]然而，遞送微生物進(jìn)入陰道環(huán)境的方式代表著非常關(guān)鍵的因素。已知例如軟明膠膠囊（通常稱為軟凝膠）需要益生元組分在油性基質(zhì)中懸浮，該油性基質(zhì)在產(chǎn)品應(yīng)用后趨于構(gòu)成能夠減慢或幾乎全部抑制所述益生元組分定殖于陰道粘膜的物理屏障。此外，油性基質(zhì)對微生物能夠發(fā)揮毒性作用至明顯減少其數(shù)量及生存力的程度。[0010]例如，膠囊可能需要相當(dāng)長的時間去溶解，并且任何情況下它們都不能確保活性成分充分分散到整個陰道環(huán)境。[0011]例如，親水懸浮液或者水凝膠需要了既不簡便，也不很舒適的應(yīng)用方式。實際上，受試者必須在使用它們后保持躺下至少20-30分鐘，以防產(chǎn)品露出。[0012]最后，傳統(tǒng)陰道片劑造成在其制造期間微生物高死亡率的問題，而且它們不能確保在陰道環(huán)境中微生物的充分分布。[0013]因此，仍存在對具有能夠遞送益生菌進(jìn)入陰道環(huán)境并確保其完全分散/分布的組合物的需求。[0014]此外，仍存在對可簡便給藥并且切實可用的藥劑的需求。[0015]特別地，仍存在對表現(xiàn)為抗菌和/或抗真菌療法的有效替代和同樣表現(xiàn)為對已知給藥形式的改善的組合物的需求。【
發(fā)明內(nèi)容】[0016]本申請人:出人意料地發(fā)現(xiàn)適當(dāng)制備的固體組合物形態(tài)的益生元配方能夠解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題。[0017]本發(fā)明的主題是如在所附獨立權(quán)利要求中所述的固體形態(tài)的泡騰組合物。[0018]本發(fā)明的其它優(yōu)選實施方案如所附從屬權(quán)利要求所述。[0019]表1顯示申請人:測試的并形成本發(fā)明主題的菌株。[0020]表2顯示根據(jù)本發(fā)明的組合物的實例。[0021]表3顯示根據(jù)施加的不同壓力（pressure)的益生菌的死亡率數(shù)據(jù)和在25°C下儲存2年后的片劑的穩(wěn)定性（以細(xì)菌接種量的半衰期表示）。[0022]表4顯示不根據(jù)本發(fā)明的組合物。[0023]表5顯示不根據(jù)本發(fā)明的片劑形態(tài)的組合物。[0024]為了確定制備本發(fā)明組合物的最佳定性定量組成及其制備的操作條件，本申請人:進(jìn)行了長期深入的實驗研究活動。[0025]本發(fā)明組合物是泡騰組合物。泡騰由當(dāng)包含有機(jī)酸以及碳酸根和/或碳酸氫根陰離子的鹽的酸堿體系與存在于陰道腔中的水/濕氣接觸時產(chǎn)生的二氧化碳的形成所致。酸堿體系能夠維持陰道內(nèi)PH穩(wěn)定在3至5.5,優(yōu)選4至5的區(qū)間。有利地，陰道內(nèi)pH為4.2至4.5。[0026]本發(fā)明的組合物是固體形態(tài)的泡騰組合物。在優(yōu)選實施方案中，有機(jī)酸是固體形態(tài)，優(yōu)選粉末或顆粒，而且碳酸根和/或碳酸氫根陰離子的鹽是固體形態(tài)，優(yōu)選粉末或顆粒?！揪唧w實施方式】[0027]在優(yōu)選實施方案中，固體形態(tài)的泡騰組合物是片劑、溶栓劑（ovule)、錠劑(lozenge)或顆粒劑的形態(tài)。[0028]有機(jī)酸選自由以下組成（或，可選地包含以下）的組：檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、富馬酸、乳酸及其混合物。在優(yōu)選實施方案中，有機(jī)酸是檸檬酸。[0029]申請人:已發(fā)現(xiàn)存在于前述酸堿體系的作為有機(jī)酸的己二酸和/或抗壞血酸的使用引起對微生物的毒性作用，導(dǎo)致在制備固體形態(tài)組合物如粉末或顆粒劑時其死亡。在片劑制備的情況下，所述死亡發(fā)生在混合組分以制成固體形態(tài)組合物（如，粉末或顆粒）后，但在壓縮前。因此，本發(fā)明組合物不含己二酸和/或抗壞血酸。[0030]碳酸根和/或碳酸氫根陰離子的鹽選自由以下組成（或，可選地包含以下）的組：碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸興、碳酸鎂、甘氨酸鈉碳酸鹽（sodiumglycinecarbonate)、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碳酸氫鈣、碳酸氫鎂、乳酸鈉、乳酸鉀、乳酸碳酸鹽（carbonatelactate)及其混合物。優(yōu)選地，所述鹽選自由以下組成（或，可選地包含以下）的組：碳酸氫根陰離子的鹽。在優(yōu)選實施方案中，此鹽是碳酸氫鈉。[0031]在優(yōu)選實施方案中，碳酸根和/或碳酸氫根陰離子的鹽的量相對于組合物總重量為1至15重量％。優(yōu)選地，相對于組合物總重量為3至13重量％;甚至更優(yōu)選地，相對于組合物總重量為4至12重量％。有利地,相對于組合物總重量為5至10重量％。[0032]在優(yōu)選實施方案中，碳酸氫鈉的量相對于組合物總重量為1至15重量％。優(yōu)選地，相對于組合物總重量為3至13重量％;甚至更優(yōu)選地，相對于組合物總重量為5至10重量％。有利地，相對于組合物總重量其為5至10重量％。[0033]在優(yōu)選實施方案中，酸堿體系由檸檬酸和如上所述重量的碳酸氫鈉組成。[0034]申請人:已發(fā)現(xiàn)，當(dāng)碳酸根和/或碳酸氫根陰離子的鹽如碳酸氫鈉的量相對于組合物總重量為高于15重量％時，導(dǎo)致顯現(xiàn)由滲透作用而對微生物的毒性作用。[0035]-旦確定根據(jù)上述濃度使用的碳酸根和/或碳酸氫根陰離子的鹽的量，就可計算出用于酸堿體系中的有機(jī)酸的量。所用的有機(jī)酸的量是化學(xué)計量的，是所用的鹽的函數(shù)，且僅用于形成二氧化碳。在所述鹽的存在下，有機(jī)酸在陰道腔內(nèi)水合后由于形成二氧化碳而能夠發(fā)生泡騰。[0036]適當(dāng)配制的泡騰片（effervescenttablet)能夠遞送大量的乳酸菌，用于在整個上皮組織和陰道粘膜的快速定殖。由于PH控制和穩(wěn)定的泡騰體系，乳酸菌在能使其生長和繁殖的良好生理條件下被遞送至陰道腔內(nèi)。[0037]有利地，泡騰片形態(tài)的本發(fā)明組合物能確保陰道粘膜上細(xì)菌的最佳分布。另外，由于二氧化碳的形成，所述組合物能夠確保和維持陰道腔內(nèi)的厭氧或微需氧環(huán)境。[0038]申請人:已發(fā)現(xiàn)當(dāng)期望由粉末形態(tài)的組合物獲得片劑時，優(yōu)選包含1:1至3:1重量比的[微晶纖維素：阿拉伯半乳聚糖]或可選地由其組成的混合物能夠保護(hù)微生物細(xì)胞的數(shù)目和生存力。[0039]在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明組合物包含以1:1至3:1的重量比含有[微晶纖維素：阿拉伯半乳聚糖]的混合物。[0040]優(yōu)選地，使用源自植物的阿拉伯半乳聚糖。有利地，使用源自落葉松的阿拉伯半乳聚糖（如：FiberAid?，來自美國LonzaInc.供應(yīng)的Larex?系產(chǎn)品）。[0041]申請人:同樣發(fā)現(xiàn)當(dāng)使用粉末形態(tài)的組合物制備片劑時，在本發(fā)明的組合物中使用玉米淀粉作為聚集物（aggregatingsubstance)提供不滿意的結(jié)果，這是因為壓縮粉末后獲得的片劑是頂裂的（capped)。[0042]相反，包含1:1至1:3重量比的[微晶纖維素：阿拉伯半乳聚糖]或可選地由其組成的混合物允許獲得無頂裂（capping)發(fā)生的片劑。[0043]因此，由本發(fā)明組合物得到的片劑不含玉米淀粉。取代玉米淀粉，以優(yōu)選1:1至3:1的重量比使用含有[微晶纖維素：阿拉伯半乳聚糖]的混合物。[0044]微晶纖維素可以部分或全部用粉末形態(tài)的纖維素代替。微晶纖維素和粉末形態(tài)的纖維素都以E460出現(xiàn)在食品添加劑的列表中。[0045]阿拉伯半乳聚糖是由阿拉伯糖和半乳糖單體組成的生物聚合物。有兩類阿拉伯半乳聚糖：植物源類和微生物源類。[0046]微晶纖維素（粉末形態(tài)的纖維素）以相對于組合物總重量為2至45重量％，優(yōu)選5至25%的量存在。[0047]阿拉伯半乳聚糖以相對于組合物總重量為5至30重量％，更優(yōu)選在10至20%的量存在。[0048]優(yōu)選地，本發(fā)明組合物可進(jìn)一步包含選自包含以下的組的至少一種附加成分：羧甲基纖維素鈉、無水磷酸氫鈣和羥丙基甲基纖維素。[0049]所述至少一種附加成分在本發(fā)明組合物中的存在總量相對于組合物總重量在3至70%w/w，更優(yōu)選6至40%w/w，甚至更優(yōu)選10至25%w/w的范圍內(nèi)。[0050]根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，本發(fā)明組合物進(jìn)一步以相對于組合物總重量為0.5%至7%w/w，優(yōu)選1%至3.5%w/w的量包含硬脂酸鎂。[0051]根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，本發(fā)明組合物可進(jìn)一步以相對于組合物總重量為0.5%至4%w/w，優(yōu)選1%至2%w/w的量包含二氧化娃。[0052]根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，本發(fā)明組合物可進(jìn)一步以相對于組合物總重量為0·5%至7%w/w，優(yōu)選1%至3.5%w/w的量包含鹿糖棕櫚酸酯（sucrosepalmitate)。[0053]根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，本發(fā)明組合物可進(jìn)一步以相對于組合物總重量為0.5%至10%w/w，優(yōu)選2%至7%w/w的量包含甘油酯（可皂化脂肪）的混合物。[0054]根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，組合物可進(jìn)一步以相對于組合物總重量的百分比表示為0.5%至10%w/w，優(yōu)選1%至5%w/w的量包含鹿糖酯。[0055]本發(fā)明組合物用于治療陰道感染如陰道炎、陰道病、念珠菌病、淋病、皰疹和性病性潰瘍（venerealulcer)的陰道應(yīng)用。[0056]在優(yōu)選實施方案中，組合物是片劑的形態(tài)?？蛇x地，片劑可涂布有一種或多種本領(lǐng)域已知的聚合物材料。[0057]考慮到根據(jù)本發(fā)明配方的微生物種群（population)，單獨或以混合物使用益生元微生物是有利的，即使是由不同的屬或種組成的益生元微生物。[0058]從定義看，益生元微生物是人源普遍細(xì)菌（prevalentlybacteria)的微生物，該微生物如果定期足量和適量時間攝取能夠產(chǎn)生有益效果。[0059]本發(fā)明組合物包含至少一種益生菌菌株，該菌株具有減少和/或消除選自包含以下的組的病原體存在的能力：白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌（Candidaparapsilosis)、克柔念珠菌（Candidakrusei)、熱帶念珠菌（Candidatropicalis)、陰道加德納菌（Gardnerellavaginalis)、陰道毛滴蟲、淋病奈瑟菌、大腸桿菌、單純性皰疫(Herpessimplex)和杜克雷嗜血桿菌（Haemophilusducreyi)。[0060]優(yōu)選地，所述細(xì)菌菌株屬于選自由以下組成的組的至少一個種：植物乳桿菌（Lactobacillusplantarum)、戊糖乳桿菌（Lactobacilluspentosus)、干酪乳桿菌（Lactobacilluscasei)、干酪乳桿菌副干酪亞種（Lactobacilluscaseissp.paracasei)、鼠李糖乳桿菌（Lactobacillusrhamnosus)、嗜酸乳桿菌（Lactobacillusacidophilus)、德氏乳桿菌（Lactobacillusdelbrueckii)、德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillusdelbrueckiissp.bulgaricus)、德氏乳桿菌德氏亞種（Lactobacillusdelbrueckiissp.delbrueckii)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)、力口氏乳桿菌（Lactobacillusgasseri)、羅伊氏乳桿菌（Lactobacillusreuteri)、長雙歧桿菌（BifidobacteriumIongum)、兩歧雙歧桿菌（Bifidobacteriumbifidum)、短雙歧桿菌（Bifidobacteriumbreve)、動物雙歧桿菌乳亞種（Bifidobacteriumanimalisssp.lactis)、青春雙歧桿菌（Bifidobacteriumadolescentis)、假鏈狀雙歧桿菌(Bifidobacteriumpseudocatenulatum)、鏈狀雙歧桿菌（Bifidobacteriumcatenulatum)或嬰兒雙歧桿菌（Bifidobacteriuminfantis)。[0061]在上述的細(xì)菌種中，表1所列的菌株證明是特別優(yōu)選的。[0062]在優(yōu)選實施方案中，細(xì)菌菌株選自：唾液乳桿菌（Lactobacillussalivarius)CRL1328、副干酪乳桿菌（Lactobacillusparacasei)CRL1289、加氏乳桿菌CRL1259、卷曲乳桿菌（Lactobacilluscrispatus)CRL1251、卷曲乳桿菌CRL1266、嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidphilus)CRL1294、副干酪乳桿菌LPC00、植物乳桿菌LP02和發(fā)酵乳桿菌LF10。[0063]在優(yōu)選實施方案中，優(yōu)選為片劑形態(tài)的本發(fā)明組合物包含選自上述組的至少兩種菌株。[0064]在優(yōu)選實施方案中，優(yōu)選為片劑形態(tài)的本發(fā)明組合物包含選自上述組的至少三種菌株。[0065]在優(yōu)選實施方案中，優(yōu)選為片劑形態(tài)的本發(fā)明組合物包含選自上述組的至少四種菌株。[0066]選自：唾液乳桿菌CRL1328、副干酪乳桿菌CRL1289、加氏乳桿菌CRL1259、卷曲乳桿菌CRL1266和發(fā)酵乳桿菌LFlO的菌株已證明是有利的。[0067]在根據(jù)本發(fā)明的片劑中，優(yōu)選以具有活菌數(shù)通常為100億至2000億菌落形成單位(CFU)/克的凍干培養(yǎng)物的形態(tài)的微生物，以相對于片劑總重量為0.5至20%w/w，優(yōu)選1至15%w/w，甚至更優(yōu)選3至10%w/w的量存在。[0068]在一個優(yōu)選實施方案中，為了增強(qiáng)本發(fā)明配方中益生元效果，在粉末混合物中引入特定的益生元組分，由此獲得共生組合物。益生元組分通常是至少部分溶于水或水溶液的糖類的不易消化混合物，其刺激一種或多種上述益生菌菌株的生長和/或活性。在這些益生元劑中，膳食纖維是優(yōu)選的。[0069]優(yōu)選地，所述益生元纖維選自包含以下的組：低聚果糖（FOS)、低聚半乳糖（GOS)、反式低聚半乳糖（T0S)、低聚木糖（X0S)、殼寡糖（COS)、α-半乳糖苷（如棉子糖和水蘇糖）、果膠、樹膠、部分水解的樹膠、菊糖（inulin)、洋車前子（psylIium)、阿拉伯膠(acacia)、角豆（carob)、燕麥或竹纖維、柑橘纖維和通常以彼此可變比例包含溶解部和不溶部的纖維。[0070]有利地，所述益生元纖維選自低聚果糖（FOS)、低聚半乳糖（GOS)和低聚木糖(XOS)。這些纖維不能被念珠菌屬的酵母利用，由此增添了存在于本發(fā)明組合物中的菌株的競爭優(yōu)勢。[0071]優(yōu)選地，益生元組分以相對于組合物總重量為高達(dá)70%w/w，優(yōu)選5至50%w/w，甚至更優(yōu)選10至30%w/w的量存在于組合物中。[0072]在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明組合物可包含另外的活性組分，例如維生素、礦物質(zhì)、植物提取物，或具有與存在于根據(jù)本發(fā)明配方中的微生物種群協(xié)同或補(bǔ)充作用的其它化合物。[0073]優(yōu)選地，所述另外的活性組分以相對于組合物總重量為高達(dá)70%w/w，優(yōu)選0.5至40%w/w，甚至更優(yōu)選1至20%w/w的量存在于組合物中。[0074]根據(jù)本發(fā)明的壓縮和泡騰的工藝賦形劑的組合確保了片劑粉末的適當(dāng)內(nèi)聚性(cohesiveness)，并在其攝取后帶來活性成分的釋放的期望動力學(xué)。[0075]可以通過以下來進(jìn)行通常是粉末形態(tài)的多種組分的混合：以任意順序添加組分，小心添加作為最后組分的優(yōu)選為凍干形態(tài)的微生物培養(yǎng)物，從而防止過長混合時間可引起細(xì)菌細(xì)胞壁的機(jī)械沖擊，而隨后經(jīng)受該沖擊和最終產(chǎn)物穩(wěn)定性降低的可能性。[0076]根據(jù)本發(fā)明方法生產(chǎn)的配方的特征在于優(yōu)良的流動性（flowability)，所述流動性為在壓縮機(jī)中利于模具（即，用于容納特定量待壓縮的粉末的空間）均勻裝載的參數(shù)。所述壓縮機(jī)典型地包含裝載模具的裝置（通常以輸送粉末混合物的漏斗為代表）和適當(dāng)半徑的金屬盤，因該金屬盤厚度而得到模具本身；這些依賴于機(jī)器而以變量存在，且由于被定義為沖頭的所述機(jī)器的兩個運動部的同時協(xié)作運動而在其中發(fā)生壓縮粉末的步驟。[0077]在壓縮步驟期間，下沖頭以其位置限定模具的容量（并由此限定每次裝載的粉末量），然而在其裝載粉末混合物期間位于模具外側(cè)的上沖頭，能在壓縮步驟期間下降并與模具中存在的粉末接觸，由此起因于施加的力量而對組成粉末的顆粒加以或多或少顯著的機(jī)械變形。在壓縮步驟結(jié)束時，上沖頭上升，由此移離模具，隨后下沖頭也上升，從模具中排出新形成的片劑。[0078]所述壓縮機(jī)進(jìn)一步包含控制主要操作參數(shù)（壓縮循環(huán)開始時下沖頭的位置、壓縮循環(huán)期間上沖頭到達(dá)的最低位置，和模具所在盤的轉(zhuǎn)速等等）的多個裝置。[0079]根據(jù)壓縮機(jī)的整個操作模式和其由此能在給定的單位時間內(nèi)生產(chǎn)的片劑數(shù)量，存在代替和旋轉(zhuǎn)的壓縮機(jī)。因此使用本領(lǐng)域已知的壓縮機(jī)和各種類型的沖頭，優(yōu)選雙半徑圓凸和橢圓沖頭可生產(chǎn)片劑。[0080]通過使用硬度測定儀來量化破壞片劑所需要的力來評價在制造過程中所施加的壓縮力（compressionforce)。以Kp(千克力），1Κρ=9·807牛頓（N))測量上述力。當(dāng)所施加的力高，例如片劑的硬度為1〇-12Κρ時，和當(dāng)其低，例如片劑的硬度為5-6Κρ時，均證明壓縮對微生物的種群具有負(fù)作用。使用高壓力的缺點是大大降低微生物的數(shù)量，然而使用低壓力，通常獲得內(nèi)聚力降低的片劑。有利地，根據(jù)所期望得到的片劑類型，本發(fā)明的片劑顯示5至12Κρ的壓縮力。[0081]對含副干酪乳桿菌LPC00、嗜酸乳桿菌LA02和唾液乳桿菌CRL1328(表2)的片劑的制造試驗中，申請人:獲得了存活方面和后期穩(wěn)定性方面的非常積極的結(jié)果。[0082]特別地，當(dāng)所施加的壓縮力為獲得5至6Κρ硬度的片劑時，觀察到死亡率在4至15%的范圍；當(dāng)所施加的壓縮力為獲得10至12Κρ硬度的片劑時，觀察到死亡率在10至25%的范圍。根據(jù)本發(fā)明的方法的另一優(yōu)勢是，即便是在低壓縮力下，也能生產(chǎn)足夠內(nèi)聚的片齊U，如硬度為5-6Κρ的片劑。[0083]為了依照歐洲藥典第十版，代；1^2.9.1出111'(^6311?1131'1]^(3(^06丨33(1·X，ref.2.9.1)評價崩解時間，測試根據(jù)本發(fā)明制備的片劑。依照ref.2.9.7,測試未涂布的片劑的脆碎度（friability),依照ref.2.9.8,測試耐碾壓性（resistancetocrushing)。[0084]表2顯示根據(jù)本發(fā)明組合物的實例。[0085]表3顯示根據(jù)施加的不同壓力的益生菌（表2所示的組合物）的死亡率數(shù)據(jù)和在25°C下儲存2年后的片劑的穩(wěn)定性（以細(xì)菌接種量的半衰期表示）。根據(jù)本發(fā)明配方獲得的片劑，在具有高硬度的片劑的情況下厚度約為7.7_，在具有低硬度的片劑的情況下厚度約為8.4mm。[0086]在表3中，穩(wěn)定性以配方的益生元組分的半衰期（S卩，初始活細(xì)胞計數(shù)減半前所經(jīng)過的時間）表示。[0087]還測量了以下：[0088](1)在計時零點預(yù)期的粉末的活細(xì)胞數(shù)IX109CFU/g[0089](2)在計時零點發(fā)現(xiàn)的粉末的活細(xì)胞數(shù)IX109CFU/g[0090](3)壓縮引起的死亡率％[0091](4)在25°C下2年后的活細(xì)胞數(shù)IXIO9CFU/片[0092](5)半衰期的天數(shù)[0093]根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，通過使用平板活菌計數(shù)法來評價存在于粉末組合物以及經(jīng)過壓縮后的組合物中的益生菌數(shù)量，獲得上述數(shù)據(jù)。[0094]在粉末組合物的情況下，將1至4克量的樣品重懸于適當(dāng)體積的無菌液體培養(yǎng)基，通常為0.85%氯化鈉鹽溶液，其中添加有1克/升細(xì)菌學(xué)蛋白胨。[0095]用適當(dāng)?shù)幕钊?qū)動式儀器（piston-driveninstrument)將粉末溶解及隨后均質(zhì)化后，通過隨后堿10倍系列稀釋來減少細(xì)胞/ml的數(shù)量。[0096]實際上，每次用無菌移液管將Iml最濃稀釋液轉(zhuǎn)移到9ml稀釋劑中；執(zhí)行此操作多次，以致足以使每ml稀釋劑中存在的微生物的量在10至300數(shù)量之間，從而它們在轉(zhuǎn)移至有蓋培養(yǎng)皿并加入適當(dāng)?shù)沫傊囵B(yǎng)基之后，形成分離的并因此可計數(shù)的菌落。[0097]在片劑的情況下，按照以下方案（protocol)，首先碾壓3至5個片劑，接著對粉末組合物進(jìn)行如上所述的分析。[0098]實驗數(shù)據(jù)證實在具有高硬度的片劑中的死亡率（接近初始種群的16.4%)和在低硬度片劑中的死亡率（接近初始種群的8.2%)均低。相比于現(xiàn)有技術(shù)配方的典型穩(wěn)定性，本發(fā)明組合物的進(jìn)一步有利方面是其中存在益生元微生物（益生元組分）隨時間的穩(wěn)定性改善。該優(yōu)勢由以優(yōu)選1:1至3:1的重量比含有[微晶纖維素：阿拉伯半乳聚糖]的混合物的使用所致。該混合物能夠大大限制由壓縮步驟對益生菌細(xì)胞引起的機(jī)械損傷并使得在無頂裂發(fā)生的情況下獲得片劑。[0099]申請人:已經(jīng)發(fā)現(xiàn)粉末組合物以及用根據(jù)本發(fā)明配方制備的不同硬度的片劑中的益生元組分的半衰期非常相似，證實了所使用的工藝組分能使由壓縮步驟引起的機(jī)械損傷最小化的事實。[0100]有利地，根據(jù)本發(fā)明的片劑甚至在壓縮步驟后也顯示益生元微生物的存活率高。[0101]進(jìn)一步的有利方面是隨著片劑的崩解而釋放二氧化碳的能力，導(dǎo)致厭氧或微需氧的環(huán)境的生成，這對于所用益生菌的陰道定殖是特別有利的。[0102]通過增加定殖作用，泡騰更能夠確保益生元活性成分在陰道環(huán)境中充分和均勻的分布。[0103]本發(fā)明組合物使得可以獲得甚至在非冷藏溫度（non-refrigeratedtemperature)下也隨時間有效且穩(wěn)定的含有益生元微生物的片劑，這是因為以在不損害粉末內(nèi)聚的情況下降低由混合導(dǎo)致的死亡率和由壓縮導(dǎo)致的死亡率為目的來選擇和選定形成組合物的組分。因此，優(yōu)選為片劑形態(tài)的本發(fā)明組合物，既不包含己二酸也不包括抗壞血酸；碳酸根和/或碳酸氫根陰離子的鹽的存在量相對于該組合物的總重量小于15重量％，以及使用微晶纖維素和阿拉伯半乳聚糖的混合物來取代玉米淀粉。[0104]申請人:從顯示不適當(dāng)?shù)慕M合物（表4)開始得出這些結(jié)果。[0105]表4的組合物顯示：由混合導(dǎo)致的80.8%的死亡率，由壓縮導(dǎo)致的40.5%的死亡率和總死亡率（混合+壓縮）88.6%。[0106]表4的組合物顯示在壓縮前的粉末水平的顯著死亡率。溶解（以1:10比例于鹽水中）時的PH不成問題，這是因為它在第一配方的情況下等于5.22,第二配方為5.53。[0107]發(fā)現(xiàn)己二酸是有毒的。但是該毒性僅占所觀察死亡率的一部分（總死亡率的約60%)。發(fā)現(xiàn)抗壞血酸是有毒的。但是該毒性占死亡率的另一部分。從表4的配方中除去抗壞血酸，將死亡率由73.8%降至26.7%。己二酸其本身在任何情況下均為毒性的（pH4.24下45.8%);其毒性在抗壞血酸存在時似乎增加。因此抗壞血酸似乎顯示與己二酸協(xié)同的毒性。[0108]然而，重要的是注意，由己二酸和抗壞血酸導(dǎo)致的毒性總和不能解釋為所觀察的總死亡率。[0109]為此，以證實表4組合物所觀察的總死亡率為目的，申請人:研究能具有毒性作用的其它組分的存在。[0110]因此，必須以與己二酸和抗壞血酸相同的方式來證實某些其它組分（除了已經(jīng)考慮的pH)的殘余毒性。[0111]已確定一定的死亡率是由存在的過量碳酸氫根所致的滲透壓引起的。己揭示該死亡率等于約20%。己二酸、抗壞血酸和碳酸氫根介導(dǎo)的滲透作用是所觀察的毒性的原因。碳酸氫根本身并不是毒性的：僅因為滲透作用而使其變成這樣。[0112]因此，制備不含己二酸和抗壞血酸以及碳酸氫根陰離子（例如碳酸氫鈉）量相對于組合物總重量為小于15重量％的組合物（表5)。[0113]例如，84mg的碳酸氫鈉構(gòu)成1毫摩爾（millimole)且釋放的0)2在37°C的大氣壓下占據(jù)25.4毫升（ml)的總體積。用確保在片劑溶解后觀察的pH值下CO2自碳酸氫鈉完全釋放的方式來選擇檸檬酸的量。[0114]表5的組合物顯示為制備片劑進(jìn)行壓縮步驟時的問題。[0115]粉末（表5)顯示由在低含水量配方中玉米淀粉的使用導(dǎo)致內(nèi)聚性差。甚至在通過除塵器之前，壓縮機(jī)產(chǎn)出的所有片劑均頂裂。[0116]該壓縮試驗后，申請人:繼續(xù)用優(yōu)選以重量比1:1至3:1含有[微晶纖維素：阿拉伯半乳聚糖]的混合物替代玉米淀粉。[0117]表1[0118]【權(quán)利要求】1.一種固體形態(tài)的泡騰組合物，其包含：包含有機(jī)酸以及碳酸根和/或碳酸氫根陰離子的鹽的酸堿體系；所述鹽以相對于所述組合物總重量為1至15重量％的量存在，包含微晶纖維素和阿拉伯半乳聚糖的混合物，至少一種益生菌菌株，其具有減少和/或消除選自包含以下的組的病原體存在的能力：白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、熱帶念珠菌、陰道加德納菌、陰道毛滴蟲、淋病奈瑟菌、大腸桿菌、單純性皰疹和杜克雷嗜血桿菌，所述組合物用于治療陰道感染的陰道應(yīng)用中。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的使用的組合物，其中所述組合物是片劑、溶栓劑、錠劑或者顆粒劑的形態(tài)。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的使用的組合物，其中所述有機(jī)酸選自由以下組成的組：檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、富馬酸、乳酸及其混合物；優(yōu)選地，有機(jī)酸為檸檬酸。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項所述的使用的組合物，其中所述碳酸根和/或碳酸氫根陰離子的鹽選自由以下組成的組：碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鈣、碳酸鎂、甘氨酸鈉碳酸鹽、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碳酸氫鈣、碳酸氫鎂、乳酸鈉、乳酸鉀、乳酸碳酸鹽及其混合物；優(yōu)選地，其為碳酸氫根陰離子的鹽。5.根據(jù)權(quán)利要求5所述的使用的組合物，其中碳酸根和/或碳酸氫根陰離子的鹽以相對于所述組合物總重量為3至13重量％的量；優(yōu)選相對于所述組合物總重量為4至12重量％的量；甚至更優(yōu)選相對于所述組合物總重量為5至10重量％的量存在。6.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項所述的使用的組合物，其中所述酸堿體系由碳酸氫鈉和檸檬酸組成，和其中所述碳酸氫鈉以相對于所述組合物總重量為3至13重量％的量；優(yōu)選相對于所述組合物總重量為4至12重量％的量；甚至更優(yōu)選相對于所述組合物總重量為5至10重量％的量存在。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的使用的組合物，其中所述微晶纖維素和阿拉伯半乳聚糖以1:1至3:1的重量比存在。8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項所述的使用的組合物，其中所述至少一種益生菌菌株屬于選自由以下組成的組的至少一個種：植物乳桿菌、戊糖乳桿菌、干酪乳桿菌、干酪乳桿菌副干酪亞種、鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌、德氏乳桿菌、德氏乳桿菌保加利亞亞種、德氏乳桿菌德氏亞種、發(fā)酵乳桿菌、加氏乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、長雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、短雙歧桿菌、動物雙歧桿菌乳亞種、青春雙歧桿菌、假鏈狀雙歧桿菌、鏈狀雙歧桿菌或嬰兒雙歧桿菌；所述至少一種菌株優(yōu)選選自：唾液乳桿菌CRL1328、副干酪乳桿菌CRL1289、加氏乳桿菌CRL1259、卷曲乳桿菌CRL1251、卷曲乳桿菌CRL1266、嗜酸乳桿菌CRL1294、副干酪乳桿菌LPCOO、植物乳桿菌LP02、發(fā)酵乳桿菌LFlO。9.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項所述的使用的組合物，其中所述組合物用于治療陰道炎、陰道病、念珠菌病、淋病、皰疹和性病性潰瘍。10.-種固體形態(tài)的泡騰片，其包含：包含碳酸氫鈉和檸檬酸的酸堿體系；所述碳酸氫鹽以相對于所述組合物總重量為1至15重量％的量存在，含有微晶纖維素和阿拉伯半乳聚糖的混合物，所述微晶纖維素和阿拉伯半乳聚糖的重量比為1:1至3:1，至少一種益生菌菌株，其具有減少和/或消除選自包含以下的組的病原體存在的能力：白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、熱帶念珠菌、陰道加德納菌、陰道毛滴蟲、淋病奈瑟菌、大腸桿菌、單純性皰疹和杜克雷嗜血桿菌，所述組合物用于治療陰道感染的陰道應(yīng)用中?！疚臋n編號】A61K9/00GK104519866SQ201280015994【公開日】2015年4月15日申請日期:2012年1月24日優(yōu)先權(quán)日:2011年1月28日【發(fā)明者】G·莫格納,G·P·斯特羅茲,盧卡·蒙加申請人:益生菌股份公司