抗egfl7抗體用于治療的給藥的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及抗EGFL7抗體用于癌癥療法的劑量給藥。
【專利說(shuō)明】抗EGFL7抗體用于治療的給藥
[0001]發(fā)明優(yōu)先權(quán)
[0002]本申請(qǐng)依據(jù)35U.S.C.§ 119 (e)要求2011年2月2日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)Νο.61/438，944、2011年6月2日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)N0.61/492，743、和2012年I月17日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)N0.61/587，382的優(yōu)先權(quán)。
發(fā)明領(lǐng)域 [0003]本發(fā)明涉及癌癥治療。更具體地，本發(fā)明關(guān)注使用抗EGFL7抗體特異性治療對(duì)癌癥易感的或診斷有癌癥的人患者。
[0004]發(fā)明背景
[0005]現(xiàn)在完全確立了涉及自已有的內(nèi)皮形成新血管的血管發(fā)生參與多種病癥的發(fā)病機(jī)理。這些包括實(shí)體瘤和轉(zhuǎn)移、動(dòng)脈粥樣硬化、晶狀體后纖維組織增生、血管瘤、慢性炎癥、眼內(nèi)新血管綜合征諸如增殖性視網(wǎng)膜病例如糖尿病性視網(wǎng)膜病、老年性黃斑變性(AMD)、新生血管性青光眼、移植角膜組織和其它組織的免疫排斥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、和銀屑病。Folkman et al., J.Biol.Chem., 267:10931-10934(1992);Klagsbrun et al., Annu.Rev.Physiol.，53:217-239(1991);及 Garner A.，"Vascular diseases^, In:Pathobiology ofOcular Disease.A Dynamic Approach, Garner A., Klintworth GK, eds., 2nd Edition(Marcel Dekker, NY, 1994)，ppl625_1710。在腫瘤生長(zhǎng)的情況中，血管發(fā)生對(duì)于自增生至瘤形成的轉(zhuǎn)換，及為腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移提供營(yíng)養(yǎng)似乎是至關(guān)重要的。Folkman etal., Nature, 339:58(1989)。新血管形成(neovascularization)讓腫瘤細(xì)胞獲得了與正常細(xì)胞相比的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)和增殖自治。
[0006]血管發(fā)育過(guò)程受到嚴(yán)密調(diào)節(jié)。迄今為止，多種分子，多為由周圍細(xì)胞生成的分泌性因子，已顯示出調(diào)節(jié)EC分化、增殖、遷移和接合成索樣結(jié)構(gòu)。例如，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)已鑒定為涉及刺激血管發(fā)生和誘導(dǎo)血管通透性的關(guān)鍵因子。Ferrara etal., Endocr.Rev.，18:4-25(1997)。還正在闡明其它分子在此過(guò)程中的作用，包括表皮生長(zhǎng)因子樣域7(EGFL7 ;參見(jiàn)例如2005年4月14日提交的W02005/117968)。抑制EGFL7已經(jīng)顯示出有效抑制血管發(fā)生和治療腫瘤(參見(jiàn)例如2007年3月16日提交的W02007/106915和 2010 年 5 月 7 日提交的 US-2010-0285009-A1)。
[0007]鑒于脈管發(fā)生(vasculogenesis)和血管發(fā)生(angiogenesis)在許多疾病和病癥中的作用及EGFL7在此過(guò)程中的作用，希望有降低或抑制一種或多種引起這些過(guò)程的生物學(xué)效應(yīng)的手段。通過(guò)述及完整收錄本文中引用的所有參考文獻(xiàn)，包括專利申請(qǐng)和出版物。
[0008]發(fā)明概述
[0009]靶向EGFL7代表癌癥治療的一種重要且有利的治療模態(tài)，尤其是與其它抗血管發(fā)生劑，例如抗VEGF劑組合。本發(fā)明部分基于抗EGFL7抗體用于治療癌癥的最有效劑量的鑒定和最佳劑量顯著低于最大耐受劑量的令人驚訝的發(fā)現(xiàn)。因而，本發(fā)明提供與之相關(guān)的方法、組合物、試劑盒和制品。
[0010]例如，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種用于治療人患者中的癌癥的方法，包括施用抗EGFL7抗體,該方法包括以介于lmg/kg和15mg/kg之間的劑量施用該抗體。在一些實(shí)施方案中，該劑量介于約5mg/kg和約7.5mg/kg之間。在一些實(shí)施方案中，該劑量為約5mg/kg。在一些實(shí)施方案中，該劑量為約7.5mg/kg。
[0011]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種用于治療人患者中的癌癥的方法，包括施用抗EGFL7抗體,該方法包括以選自下組的固定劑量(flat dose)施用該抗體:(a)每?jī)芍?75-400mg和(b)每三周550_600mg。在一些實(shí)施方案中，該固定劑量為每?jī)芍?75_400mg。在一些實(shí)施方案中，該固定劑量為每三周550-600mg。在一些實(shí)施方案中，該固定劑量為400mg每?jī)芍?。在一些?shí)施方案中，該固定劑量為600mg每三周。
[0012]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種用于治療人患者中的癌癥的方法，包括施用抗EGFL7抗體，該方法包括對(duì)該患者施用第一劑該抗EGFL7抗體和對(duì)該患者施用第二劑該抗EGFL7抗體,其中該第一劑和該第二劑均介于lmg/kg和15mg/kg之間且該第二劑在該第一劑之后1-4周。在一些實(shí)施方案中，該第一劑和該第二劑均介于5mg/kg和7.5mg/kg之間且該第二劑在該第一劑之后2-3周。在一些實(shí)施方案中，該第一劑和該第二劑均為5mg/kg且該第二劑在該第一劑之后2周。在一些實(shí)施方案中，該第一劑和該第二劑均為7.5mg/kg且該第二劑在該第一劑之后3周。
[0013]在一些實(shí)施方案中，該抗EGFL7抗體包含可變域，該可變域包含下述HVR序列:(i) HVR-Ll，其包含 KASQSVDYS⑶SYMS (SEQ ID NO:1) ； (ii)HVR_L2，其包含 GASYRES (SEQID NO:2) ； (iii)HVR-L3,其包含 QQNNEEPYT (SEQ ID NO:3) ； (iv) HVR-Hl,其包含GHTFTTYGMS (SEQID NO:4) ； (v)HVR_H2，其包含 GWINTHSGVPTYADDFKG (SEQ ID NO:5)；和
(vi)HVR-H3，其包含LGSYAVDY (SEQ ID NO:6)。在一些實(shí)施方案中，該抗EGFL7抗體包含下述重鏈可變區(qū)序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGHTFTTYGMSWVRQAPGKGLEWVGWINTHSGVPTYADDFKGRFTISLDNSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGSYAVDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:7)。在一些實(shí)施方案中，該抗EGFL7抗體包含下述重鏈可變區(qū)序列:EIQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGHTFTTYGMSWVRQAPGKGLEWMGWINTHSGVPTYADDFKGRFTISLDNSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYFCARLGSYAVDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:8)。在一些實(shí)施方案中，該抗EGFL7抗體包含下述輕鏈可變區(qū)序列:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYS⑶SYMSWYQQKPGKAPKLLIYGASYRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNEEPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:9)。
[0014]在一些實(shí)施方案中，該抗EGFL7抗體包含可變域，該可變域包含下述HVR序列:(i) HVR-Ll，其包含 RTSQSLVHINGITYLH (SEQ ID NO:10) ; (ii) HVR-L2，其包含 RVSNRFS (SEQID NO:11) ； (iii)HVR-L3,其包含 GQSTHVPLT(SEQ ID NO:12) ； (iv)HVR-Hl,其包含GYTFIDYYMN (SEQID NO:13) ; (v) HVR-H2，其包含 GDINLDNGGTHYNQKFKG (SEQ ID NO:14);和(vi) HVR-H3,其包含 AREGVYHDYDDYAMDY (SEQ ID NO: 15)。在一些實(shí)施方案中，該抗 EGFL7抗體包含下述重鏈可變區(qū)序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFIDYYMNWVRQAPGKGLEWVGDINLDNGGTHYNQKFKGRFTISRDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGVYHDYDDYAMDYWGQGTLVTVSS(SEQID NO:16)。在一些實(shí)施方案中，該抗EGFL7抗體包含下述輕鏈可變區(qū)序列:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSLVHINGITYLHWYQQKPGKAPKLLIYRVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCGQSTHVPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:17)。
[0015]在一些實(shí)施方案中，該抗EGFL7抗體包含可變域，該可變域包含下述HVR序列:(i) HVR-Ll，其包含 RTSQSLVHINAITYLH (SEQ ID NO:18) ; (ii) HVR-L2，其包含 RVSNRFS (SEQID NO:11) ； (iii)HVR-L3,其包含 GQSTHVPLT (SEQ ID NO:12) ； (iv) HVR-Hl,其包含GYTFIDYYMN (SEQ ID NO:13) ; (v) HVR-H2，其包含⑶INLDNSGTHYNQKFKG (SEQ ID NO:19);和
(vi)HVR-H3,其包含 AREGVYHDYDDYAMDY (SEQ ID NO: 15)。在一些實(shí)施方案中，該抗 EGFL7抗體包含下述重鏈可變區(qū)序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFIDYYMNWVRQAPGKGLEWVGDINLDNSGTHYNQKFKGRFTISRDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGVYHDYDDYAMDYWGQGTLVTVSS(SEQID NO:20)。在一些實(shí)施方案中，該抗EGFL7抗體包含下述輕鏈可變區(qū)序列:DIQMTQSPSSLSASV⑶RVTITCRTSQSLVHINAITYLHWYQQKPGKAPKLLIYRVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCGQSTHVPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:21)。
[0016]在一些實(shí)施方案中，該抗體在10、20或30分鐘的輸注中施用。
[0017]在一些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括施用另一種抗血管發(fā)生劑的步驟。在一些實(shí)施方案中，該另一種抗血管發(fā)生劑是抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，該抗VEGF拮抗劑是抗VEGF抗體。在一些實(shí)施方案中，該抗VEGF抗體是貝伐單抗。
[0018]在一些實(shí)施方案中，該抗EGFL7抗體是雙特異性抗體。在一些實(shí)施方案中，該雙特異性抗體結(jié)合VEGF。在一些實(shí)施方案中，該雙特異性抗體與貝伐單抗結(jié)合相同VEGF表位。
[0019]在一些實(shí)施方案中，該癌癥選自下組:乳腺癌，白血病，鱗狀細(xì)胞癌，小細(xì)胞肺癌，非小細(xì)胞肺癌，胃腸癌，胰腺癌，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，宮頸癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝瘤，結(jié)腸癌，結(jié)腸直腸癌，子宮內(nèi)膜癌，唾液腺癌，腎癌，肝癌，前列腺癌，外陰癌，甲狀腺癌，肝癌瘤和各種類型的頭和頸癌。在一些實(shí)施方案中，該癌癥是乳腺癌、NSCLC或CRC。
[0020]在一些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括施用有效量的化療劑。
[0021]本發(fā)明提供一種用于治療人患者中的NSCLC的方法，其包括劑量給藥方案，該劑量給藥方案包含多個(gè)治療周期，其中每個(gè)周期的第I天對(duì)該患者施用200mg/m2帕利他賽、卡鉬(AUC6mg/ml min)、15mg/kg貝伐單抗、和600mg抗EGFL7抗體,每21天重復(fù)每個(gè)周期。在一些實(shí)施方案中，施用帕利他賽和卡鉬直至疾病進(jìn)展或長(zhǎng)達(dá)6個(gè)周期。在一些實(shí)施方案中，施用貝伐單抗和抗EGFL7抗體直至疾病進(jìn)展或長(zhǎng)達(dá)34個(gè)周期。該抗EGFL7抗體可以是本文所述抗EGFL7抗體任一。
[0022]本發(fā)明還提供一種用于治療人患者中的結(jié)腸直腸癌的方法，其包括劑量給藥方案，該劑量給藥方案包含多個(gè)治療周期，其中第一個(gè)周期的第I天對(duì)該患者施用85mg/m2奧沙利鉬、400mg/m25-氟尿卩密唳(5-FU)、400mg/m2亞葉酸、5mg/kg貝伐單抗、和400mg抗EGFL7抗體，且其中每個(gè)后續(xù)周期的第I天對(duì)該患者施用85mg/m2奧沙利鉬、2400mg/m25_FU、400mg/m2亞葉酸、5mg/kg貝伐單抗、和400mg抗EGFL7抗體,每14天重復(fù)每個(gè)周期。在一些實(shí)施方案中，施用奧沙利鉬長(zhǎng)達(dá)8個(gè)周期。在一些實(shí)施方案中，施用5-FU、亞葉酸、貝伐單抗和抗EGFL7抗體直至疾病進(jìn)展或長(zhǎng)達(dá)52個(gè)周期。該抗EGFL7抗體可以是本文所述抗EGFL7抗體任一。
[0023]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種制品，其包括容器、該容器內(nèi)的組合物、和標(biāo)簽或包裝插頁(yè)，該組合物包含抗EGFL7抗體,該標(biāo)簽或包裝插頁(yè)印有以介于lmg/kg和15mg/kg之間的劑量施用該抗體的用法說(shuō)明書(shū)。
[0024]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種制品，其包括容器、該容器內(nèi)的組合物、和標(biāo)簽或包裝插頁(yè)，該組合物包含抗EGFL7抗體,該標(biāo)簽或包裝插頁(yè)印有對(duì)患者施用第一劑抗EGFL7抗體和對(duì)患者施用第二劑抗EGFL7抗體的用法說(shuō)明書(shū)，其中該第一劑和該第二劑均介于lmg/kg和15mg/kg之間且該第二劑在該第一劑之后1_4周。在一些實(shí)施方案中，該第一劑和該第二劑均介于5mg/kg和7.5mg/kg之間且該第二劑在該第一劑之后2_3周。在一些實(shí)施方案中，該第一劑和該第二劑均為5mg/kg且該第二劑在該第一劑之后2周。在一些實(shí)施方案中，該第一劑和該第二劑均為7.5mg/kg且該第二劑在該第一劑之后3周。
[0025]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種制品，其包括容器、該容器內(nèi)的組合物、和標(biāo)簽或包裝插頁(yè)，該組合物包含抗EGFL7抗體,該標(biāo)簽或包裝插頁(yè)印有以選自下組的固定劑量施用該抗體的用法說(shuō)明書(shū):(a)每?jī)芍?75-400mg和(b)每三周550_600mg。在一些實(shí)施方案中，該固定劑量為每?jī)芍?75-400mg。在一些實(shí)施方案中，該固定劑量為每三周550-600mg。在一些實(shí)施方案中，該固定劑量為每?jī)芍?00mg。在一些實(shí)施方案中，該固定劑量為每三周600mg。
[0026]附圖簡(jiǎn)述
[0027]圖1描繪Ia期和Ib期臨床試驗(yàn)的設(shè)計(jì)。
[0028]圖2描繪來(lái)自Ia期的H)生物標(biāo)志物(CPC)。
[0029]圖3描繪來(lái)自Ib期的H)生物標(biāo)志物(CPC)。
[0030]發(fā)明詳述
[0031]本發(fā)明提供涉及抗EGFL7抗體的方法、組合物、試劑盒和制品及癌癥治療。
[0032]本文中提供這些方法、組合物、試劑盒和制品的詳情。
[0033]通用技術(shù)
[0034]本文中描述或提到的技術(shù)和規(guī)程一般得到了本領(lǐng)域技術(shù)人員的充分理解，而且通常利用常規(guī)方法得以采用，諸如例如下列文獻(xiàn)中記載的廣泛應(yīng)用的方法:SambiOOket al., Molecular Cloning:A Laboratory Manual3rd.edition (2001)Cold SpringHarbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y ;CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULARBIOLOGY(F.M.Ausubel, et al.eds., (2003))；叢書(shū) METHODS IN ENZYM0L0GY(AcademicPress, Inc.): PCR2:A PRACTICAL APPROACH (M.J.MacPherson, B.D.Hames and G.R.Tayloreds.(1995)) ；Harlow and Lane, eds.(1988)ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL ;及ANIMALCELL CULTURE (R.1.Freshney, ed.(1987))。
[0035]定義
[0036]術(shù)語(yǔ)“EGFL7”(可互換地稱為“表皮生長(zhǎng)因子樣域7”)，在用于本文時(shí)，除非另有明確說(shuō)明或者上下文另有說(shuō)明，指任何天然的或變異的(無(wú)論是天然的或合成的)EGFL7多肽。術(shù)語(yǔ)“天然序列”明確涵蓋天然存在的截短或分泌形式(例如胞外結(jié)構(gòu)域序列)、天然存在的變異形式(例如可變剪接形式)和天然存在的等位變體。
[0037]術(shù)語(yǔ)“抗EGFL7抗體”或“結(jié)合EGFL7的抗體”指能夠以足夠親和力結(jié)合EGFL7，使得該抗體可用作靶向EGFL7的診斷劑和/或治療劑的抗體。在某些實(shí)施方案中，結(jié)合EGFL7的抗體具有≤I μ M、≤IOOnM, ≤ IOnM, ≤ InM、或≤0.1nM的解離常數(shù)(Kd)?？笶GFL7抗體具體包括2007年3月16日提交的W02007/106915和2010年5月7日提交的US-2010-0285009-A1 中記載的抗 EGFL7 抗體。
[0038]“結(jié)合親和力”通常指分子(例如抗體)的單一結(jié)合位點(diǎn)與其結(jié)合配偶體(例如抗原)之間全部非共價(jià)相互作用總和的強(qiáng)度。除非另有說(shuō)明，在用于本文時(shí)，“結(jié)合親和力”指反映結(jié)合對(duì)的成員(例如抗體與抗原)之間1:1相互作用的內(nèi)在結(jié)合親和力。分子X(jué)對(duì)其配偶體Y的親和力通?？捎媒怆x常數(shù)(Kd)來(lái)表述。親和力可通過(guò)本領(lǐng)域知道的常用方法來(lái)測(cè)量，包括本文中所描述的。低親和力抗體通常緩慢的結(jié)合抗原且趨于容易解離，而高親和力抗體通常更快速的結(jié)合抗原且趨于保持更長(zhǎng)時(shí)間的結(jié)合。本領(lǐng)域知道測(cè)量結(jié)合親和力的多種方法，其中任一種都可用于本發(fā)明的目的。下文描述了具體的示例性實(shí)施方案。
[0039]在一個(gè)實(shí)施方案中，依照本發(fā)明的“Kd”或“Kd值”是通過(guò)如下測(cè)定法所述使用Fab型式的感興趣抗體及其抗原進(jìn)行的放射性標(biāo)記抗原結(jié)合測(cè)定法(RIA)來(lái)測(cè)量的:通過(guò)在存在未標(biāo)記抗原的滴定系列的條件下，用最小濃度的1251標(biāo)記抗原平衡，然后用抗Fab抗體包被的平板捕捉結(jié)合的抗原來(lái)測(cè)量Fab對(duì)抗原的溶液結(jié)合親和力(Chen，et al.，(1999)J.Mol Biol293:865-881)。為了確定測(cè)定條件，用50mM碳酸鈉(pH9.6)中的5 μ g/ml捕捉用抗Fab抗體(Cappel Labs)包被微量滴定板(Dynex)過(guò)夜，隨后用PBS中的2%(w/v)牛血清清蛋白在室溫(約23°C)封閉2-5小時(shí)。在非吸附平板(Nunc#269620)中，將IOOpM或26pM[125I]_抗原與連續(xù)稀釋的目的Fab混合(例如與Presta et al., (1997)CancerRes.57:4593-4599中抗VEGF抗體，F(xiàn)ab-12的評(píng)估一致)。然后將目的Fab保溫過(guò)夜；不過(guò)，保溫可持續(xù)更長(zhǎng)時(shí)間(例如65個(gè)小時(shí))以保證達(dá)到平衡。此后，將混合物轉(zhuǎn)移至捕捉板以進(jìn)行室溫保溫(例如I小時(shí))。然后除去溶液，并用含0.l%Tween?-20的PBS洗板8次。平板干燥后，加入150 μ I/孔閃爍液(MicroScint?_20; Packard),然后在TopCount伽馬計(jì)數(shù)器(Packard)上對(duì)平板計(jì)數(shù)10分鐘。選擇各Fab給出小于或等于最大結(jié)合之20%的濃度用于競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法。依照另一實(shí)施方案，Kd或Kd值是通過(guò)表面等離振子共振測(cè)定法使用 BIAcore?-2000 或 BIAcore?-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)在 25 °C 使用固定化抗原CM5芯片在約10個(gè)響應(yīng)單位(RU)測(cè)量的。簡(jiǎn)而言之，依照供應(yīng)商的說(shuō)明書(shū)用鹽酸N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物傳感器芯片(CM5，BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸鈉pH4.8將抗原稀釋至5 μ g/ml (約0.2 μ Μ)，然后以5 μ I/分鐘的流速注入至獲得約10個(gè)響應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)蛋白質(zhì)。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封閉未反應(yīng)基團(tuán)。為了進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測(cè)量，在25°C以約25 μ I/分鐘的流速注入在含0.05%Tween?-20的PBS(PBST)中兩倍連續(xù)稀釋的Fab(0.78nM至 500nM)。使用簡(jiǎn)單一對(duì)一朗格繆爾(Langmuir)結(jié)合模型(BIAcore?EvaluationSoftware version3.2)通過(guò)同時(shí)擬合結(jié)合和解離傳感圖計(jì)算結(jié)合速率(kon)和解離速率(koff)。平衡解離常數(shù)(Kd)以比率koff/kon計(jì)算。參見(jiàn)例如Chen, Y.，et al., (1999)J.Mol.Biol.293:865-881。如果根據(jù)上文表面等離振子共振測(cè)定法，結(jié)合速率超過(guò)106M-1S-1，那么結(jié)合速率可使用熒光淬滅技術(shù)來(lái)測(cè)定，即根據(jù)分光計(jì)諸如配備了斷流裝置的分光光度計(jì)(astop-flow equipped spectrophometer) (Aviv Instruments)或 8000 系列SLM-Aminco分光光度計(jì)(ThermoSpectronic)中用攪拌比色杯的測(cè)量,在存在濃度漸增的抗原的條件下，測(cè)量PBS，pH7.2中的20nM抗抗原抗體(Fab形式)在25°C的熒光發(fā)射強(qiáng)度(激發(fā)=295nm ;發(fā)射=340nm, 16nm帶通)的升高或降低。
[0040]術(shù)語(yǔ)“抗體”和“免疫球蛋白”以最廣義互換使用，包括單克隆抗體(例如全長(zhǎng)或完整單克隆抗體)、多克隆抗體、多價(jià)抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性)，而且還可以包括某些抗體片段(如本文中更為詳細(xì)描述的)?？贵w可以是人的、人源化的和/或親和力成熟的。
[0041]“分離的”抗體指已經(jīng)鑒定且自其天然環(huán)境的一種成分分開(kāi)和/或回收的抗體。其、天然環(huán)境的污染性成分指將會(huì)干擾該抗體的診斷或治療用途的物質(zhì)，可包括酶、激素、和其它蛋白質(zhì)性質(zhì)或非蛋白質(zhì)性質(zhì)的溶質(zhì)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將抗體純化至(I)根據(jù)Lowry法的測(cè)定，抗體重量超過(guò)95%，最優(yōu)選重量超過(guò)99%，(2)足以通過(guò)使用轉(zhuǎn)杯式測(cè)序儀獲得至少15個(gè)殘基的N-末端或內(nèi)部氨基酸序列的程度，或(3)根據(jù)還原性或非還原性條件下的SDS-PAGE及使用考馬斯藍(lán)或優(yōu)選銀染色，達(dá)到同質(zhì)。既然抗體天然環(huán)境的至少一種成分不會(huì)存在，那么分離的抗體包括重組細(xì)胞內(nèi)的原位抗體。然而，分離的抗體通常將通過(guò)至少一個(gè)純化步驟來(lái)制備。
[0042]“可變的”指可變域中的某些部分在抗體序列間差異廣泛且用于每種特定抗體對(duì)其特定抗原的結(jié)合和特異性的實(shí)情。然而，變異性并非均勻分布于抗體的整個(gè)可變域。它集中于輕鏈和重鏈可變域中稱作互補(bǔ)決定區(qū)或高變區(qū)(CDR或HVR，在本文中可互換使用)的三個(gè)區(qū)段。可變域中較保守的部分稱作框架區(qū)(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變域各自包含四個(gè)FR，它們大多采取β_折疊片構(gòu)象，通過(guò)形成環(huán)狀連接且在有些情況中形成β_折疊片結(jié)構(gòu)一部分的三個(gè)HVR連接。每條鏈中的HVR通過(guò)FR非常接近的保持在一起，并與另一條鏈的HVR —起促成抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的形成(參見(jiàn)Kabat et al.，序列of Proteinsof Immunological Interest,第 5 版，National Institute of Health, Bethesda, MD.(1991))。恒定域不直接參與抗體與抗原的結(jié)合，但展現(xiàn)出多種效應(yīng)器功能，諸如抗體依賴性細(xì)胞的(細(xì)胞)毒性中抗體的參與。
[0043]用木瓜蛋白酶消化抗體產(chǎn)生兩個(gè)相同的抗原結(jié)合片段，稱為“Fab”片段，各自具有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，及一個(gè)剩余的“Fe”片段，其名稱反映了它易于結(jié)晶的能力。胃蛋白酶處理產(chǎn)生一個(gè)F (ab’)2片段，它具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)且仍能夠交聯(lián)抗原。
[0044]“Fv”是包含完整抗原識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)的最小抗體片段。在雙鏈Fv種類中，此區(qū)由緊密、非共價(jià)結(jié)合的一個(gè)重鏈可變域和一個(gè)輕鏈可變域的二聚體組成。在單鏈Fv種類中，一個(gè)重鏈可變域和一個(gè)輕鏈可變域可以通過(guò)柔性肽接頭共價(jià)相連，使得輕鏈和重鏈在與雙鏈Fv種類類似的“二聚體”結(jié)構(gòu)中相結(jié)合。正是在這種構(gòu)造中，各可變域的三個(gè)HVR相互作用而在VH-VL 二聚體表面上確定了抗原結(jié)合位點(diǎn)。六個(gè)HVR共同賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，即使是單個(gè)可變域(或只包含對(duì)抗原特異的三個(gè)HVR的半個(gè)Fv)也具有識(shí)別和結(jié)合抗原的能力，只是親和力低于完整結(jié)合位點(diǎn)。
[0045]Fab片段還包含輕鏈的恒定域和重鏈的第一恒定域(CHl)。Fab’片段與Fab片段的不同之處在于重鏈CHl結(jié)構(gòu)域的羧基末端增加了少數(shù)殘基，包括來(lái)自抗體鉸鏈區(qū)的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸。Fab’ -SH是本文中對(duì)其中恒定域半胱氨酸殘基攜帶游離硫醇基的Fab’的稱謂。F (ab’)2抗體片段最初是作為在Fab’片段之間有鉸鏈半胱氨酸的成對(duì)Fab’片段生成的。還知道抗體片段的其它化學(xué)偶聯(lián)。
[0046]根據(jù)其恒定域的氨基酸序列，來(lái)自任何脊椎動(dòng)物物種的抗體(免疫球蛋白)的“輕鏈”可歸入兩種截然不同的型中的一種，稱作卡帕(K)和拉姆達(dá)(λ)。
[0047]根據(jù)其重鏈恒定域的氨基酸序列，免疫球蛋白可歸入不同的類。免疫球蛋白有五大類:IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中有些可進(jìn)一步分為亞類(同種型)，例如IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。將與不同類的免疫球蛋白對(duì)應(yīng)的重鏈恒定域分別稱作α、δ、ε、Y和μ。不同類的免疫球蛋白的亞基結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)造是眾所周知的。
[0048]“抗體片段”只包含完整抗體的一部分，其中所述部分優(yōu)選保留該部分存在于完整抗體中時(shí)通常與之有關(guān)的至少一項(xiàng)、優(yōu)選大多數(shù)或所有功能?？贵w片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；及由抗體片段形成的多特異性抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體片段包含完整抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)，如此保留結(jié)合抗原的能力。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體片段，例如包含F(xiàn)e區(qū)的抗體片段，保留通常與Fe區(qū)存在于完整抗體中時(shí)通常與之有關(guān)的至少一項(xiàng)生物學(xué)功能，諸如FcRn結(jié)合、抗體半衰期調(diào)控、ADCC功能和補(bǔ)體結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體片段是體內(nèi)半衰期與完整抗體基本上相似的單價(jià)抗體。例如，這樣的抗體片段可包含一個(gè)抗原結(jié)合臂且其與能夠賦予該片段以體內(nèi)穩(wěn)定性的Fe序列相連。
[0049]術(shù)語(yǔ)“高變區(qū)”、“HVR”或“HV”在用于本文時(shí)指抗體可變域中序列上高度可變和/或形成結(jié)構(gòu)上定義的環(huán)的區(qū)域。通常，抗體包含六個(gè)HVR:三個(gè)在VH中(H1、H2、H3)，三個(gè)在VL中(L1、L2、L3)。在天然抗體中，H3和L3展示這六個(gè)HVR的最大多樣性，而且認(rèn)為特別是H3在賦予抗體以精密特異性中發(fā)揮獨(dú)特作用。參見(jiàn)例如Xu et al.,Immunityl3:37-45(2000);Johnson and Wu, in Methods in Molecular Biology248:1-25(Lo, ed., HumanPress, Totowa, NJ, 2003)。事實(shí)上，僅由重鏈組成的天然存在camelid抗體在缺乏輕鏈時(shí)是有功能的且穩(wěn)定的。參見(jiàn)例如Hamers-Casterman et al., Nature363:446-448(1993);Sheriff et al., Nature Struct.Biol.3:733-736 (1996)。
[0050]本文中使用且涵蓋許多HVR的敘述。Kabat互補(bǔ)決定區(qū)(OTR)是以序列變異性為基礎(chǔ)的，而且是最常用的(Kabat et al.，序列 of Proteins of Immunological Interest, 5thEd.Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.(1991))。Chothia 改為指結(jié)構(gòu)環(huán)的位置(Chothia and Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbMHVR代表Kabat HVR與Chothia結(jié)構(gòu)環(huán)之間的折衷，而且得到Oxford Molecular的AbM抗體建模軟件的使用?！敖佑|(contact)” HVR是以對(duì)可獲得的復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)的分析為基礎(chǔ)的。下文記錄了這些HVR中每一個(gè)的殘基。
[0051]
【權(quán)利要求】
1.一種用于治療人患者中的癌癥的方法，包括施用抗EGFL7抗體，該方法包括以介于lmg/kg和15mg/kg之間的劑量施用該抗體。
2.一種用于治療人患者中的癌癥的方法，包括施用抗EGFL7抗體，該方法包括以選自下組的固定劑量施用該抗體:(a)每?jī)芍?75-400mg和(b)每三周550_600mg。
3.權(quán)利要求2的方法，其中該固定劑量為每?jī)芍?75-400mg。
4.權(quán)利要求2的方法，其中該固定劑量為每三周550-600mg。
5.一種用于治療人患者中的癌癥的方法，包括施用抗EGFL7抗體，該方法包括對(duì)該患者施用第一劑抗EGFL7抗體和對(duì)該患者施用第二劑抗EGFL7抗體，其中該第一劑和該第二劑均介于lmg/kg和15mg/kg之間且該第二劑在該第一劑之后1_4周。
6.權(quán)利要求5的方法,其中該第一劑和該第二劑均介于5mg/kg和7.5mg/kg之間且該第二劑在該第一劑之后2-3周。
7.權(quán)利要求6的方法,其中該第一劑和該第二劑均為5mg/kg且該第二劑在該第一劑之后2周。
8.權(quán)利要求6的方法,其中該第一劑和該第二劑均為7.5mg/kg且該第二劑在該第一劑之后3周。
9.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含可變域，該可變域包含下述HVR序列:
(i)HVR-Ll，其包含 KASQSVDYS ⑶ SYMS (SEQ ID NO:1)；
(ii)HVR-L2，其包含GASYRES (SEQ ID NO:2)；
(iii)HVR-L3，其包含 QQNNEEPYT (SEQ ID NO:3)；
(iv)HVR-Hl，其包含 GHTFTTYGMS (SEQ ID NO:4)；
(V) HVR-H2，其包含 GWINTHSGVPTYADDFKG (SEQ ID NO:5);和
(vi) HVR-H3，其包含 LGSYAVDY (SEQ ID NO:6)。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含下述重鏈可變區(qū)序列: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGHTFTTYGMSWVRQAPGKGLEWVGWINTHSGVPTYADDFKGRFTISLDNSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGSYAVDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7)。
11.權(quán)利要求9的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含下述重鏈可變區(qū)序列: EIQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGHTFTTYGMSWVRQAPGKGLEWMGWINTHSGVPTYADDFKGRFTISLDNSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYFCARLGSYAVDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:8)。
12.權(quán)利要求9-11任一項(xiàng)的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含下述輕鏈可變區(qū)序列: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYS⑶SYMSWYQQKPGKAPKLLIYGASYRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNEEPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:9)。
13.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含可變域，該可 變域包含下述HVR序列:
(i)HVR-Ll，其包含 RTSQSLVHINGITYLH (SEQ ID NO: 10)；
(ii)HVR-L2，其包含RVSNRFS (SEQ ID NO:11)；
(iii)HVR-L3，其包含GQSTHVPLT(SEQ ID NO:12)；
(iv)HVR-Hl，其包含 GYTFIDYYMN (SEQ ID NO:13)；
(v)HVR-H2，其包含⑶INLDNGGTHYNQKFKG(SEQID NO:14)；和
(vi)HVR-H3，其包含 AREGVYHDYDDYAMDY(SEQ ID NO:15)。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含下述重鏈可變區(qū)序列: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFIDYYMNWVRQAPGKGLEWV⑶INLDNGGTHYNQKFKGRFTISRDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGVYHDYDDYAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:16)。
15.權(quán)利要求13或14的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含下述輕鏈可變區(qū)序列: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSLVHINGITYLHWYQQKPGKAPKLLIYRVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCGQSTHVPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:17)。
16.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含可變域，該可 變域包含下述HVR序列:
(i)HVR-Ll，其包含 RTSQSLVHINAITYLH (SEQ ID NO: 18)；
(ii)HVR-L2，其包含RVSNRFS (SEQ ID NO:11)；
(iii)HVR-L3，其包含GQSTHVPLT(SEQ ID NO:12)；
(iv)HVR-Hl，其包含 GYTFIDYYMN (SEQ ID NO:13)；
(V) HVR-H2，其包含⑶INLDNSGTHYNQKFKG (SEQ ID NO:19)； 和
(vi)HVR-H3，其包含 AREGVYHDYDDYAMDY(SEQ ID NO:15)。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含下述重鏈可變區(qū)序列: VQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFIDYYMNWVRQAPGKGLEWV⑶INLDNSGTHYNQKFKGRFTISRDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGVYHDYDDYAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:20)。
18.權(quán)利要求16或17的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含下述輕鏈可變區(qū)序列: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSLVHINAITYLHWYQQKPGKAPKLLIYRVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCGQSTHVPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:21)。
19.權(quán)利要求1-18任一項(xiàng)的方法，其中該抗體在10、20或30分鐘的輸注中施用。
20.權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括施用另一種抗血管發(fā)生劑的步驟。
21.權(quán)利要求20的方法，其中該另一種抗血管發(fā)生劑是抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)拮抗劑。
22.權(quán)利要求21的方法，其中所述抗VEGF拮抗劑是抗VEGF抗體。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述抗VEGF抗體是貝伐單抗。
24.權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)的方法，其中所述抗EGFL7抗體是雙特異性抗體。
25.權(quán)利要求24的方法，其中所述雙特異性抗體結(jié)合VEGF。
26.權(quán)利要求24的方法，其中所述雙特異性抗體與貝伐單抗結(jié)合相同VEGF表位。
27.權(quán)利要求1-26任一項(xiàng)的方法，其中所述癌癥選自下組:乳腺癌，白血病，鱗狀細(xì)胞癌，小細(xì)胞肺癌，非小細(xì)胞肺癌，胃腸癌，胰腺癌，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，宮頸癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝瘤，結(jié)腸癌，結(jié)腸直腸癌，子宮內(nèi)膜癌，唾液腺癌，腎癌，肝癌，前列腺癌，外陰癌，甲狀腺癌，肝癌瘤和各種類型的頭和頸癌。
28.權(quán)利要求27的方法，其中所述癌癥是乳腺癌、NSCLC或CRC。
29.權(quán)利要求1-28任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括施用有效量的化療劑。
30.一種制品，其包括容器、該容器內(nèi)的組合物、和標(biāo)簽或包裝插頁(yè)，該組合物包含抗EGFL7抗體,該標(biāo)簽或包裝插頁(yè)印有以介于lmg/kg和15mg/kg之間的劑量施用該抗體的用法說(shuō)明書(shū)。
31.一種制品，其包括容器、該容器內(nèi)的組合物、和標(biāo)簽或包裝插頁(yè)，該組合物包含抗EGFL7抗體，該標(biāo)簽或包裝插頁(yè)印有對(duì)患者施用第一劑抗EGFL7抗體和對(duì)患者施用第二劑抗EGFL7抗體的用法說(shuō)明書(shū),其中該第一劑和該第二劑均介于lmg/kg和15mg/kg之間，且該第二劑在該第一劑之后1-4周。
32.權(quán)利要求31的制品,其中該第一劑和該第二劑均介于5mg/kg和7.5mg/kg之間且該第二劑在該第一劑之后2-3周。
33.權(quán)利要求32的制品，其中該第一劑和該第二劑均為5mg/kg且該第二劑在該第一劑之后2周。
34.權(quán)利要求32的制品，其中該第一劑和該第二劑均為7.5mg/kg且該第二劑在該第一劑之后3周。
35.一種制品，其包括容器、該容器內(nèi)的組合物、和標(biāo)簽或包裝插頁(yè)，該組合物包含抗EGFL7抗體，該標(biāo)簽或包裝插頁(yè)印有以選自下組的固定劑量施用該抗體的用法說(shuō)明書(shū):(a)每?jī)芍?375_400mg 和(b)每三周 550_600mg。
36.權(quán)利要求35的 制品，其中該固定劑量為每?jī)芍?75-400mg。
37.權(quán)利要求35的制品，其中該固定劑量為每三周550-600mg。
38.一種用于治療人患者中的NSCLC的方法，其包括劑量給藥方案，該劑量給藥方案包含多個(gè)治療周期，其中每個(gè)周期的第I天對(duì)該患者施用200mg/m2帕利他賽、卡鉬(AUC6mg/ml min)、15mg/kg貝伐單抗、和600mg抗EGFL7抗體,每21天重復(fù)每個(gè)周期。
39.權(quán)利要求38的方法，其中施用帕利他賽和卡鉬直至疾病進(jìn)展或長(zhǎng)達(dá)6個(gè)周期。
40.權(quán)利要求38的方法，其中施用貝伐單抗和抗EGFL7抗體直至疾病進(jìn)展或長(zhǎng)達(dá)34個(gè)周期。
41.一種用于治療人患者中的結(jié)腸直腸癌的方法，其包括劑量給藥方案，該劑量給藥方案包含多個(gè)治療周期，其中第一個(gè)周期的第I天對(duì)該患者施用85mg/m2奧沙利鉬、400mg/m25-氟尿卩密唳(5-FU)、400mg/m2亞葉酸、5mg/kg貝伐單抗、和400mg抗EGFL7抗體,且其中每個(gè)后續(xù)周期的第I天對(duì)該患者施用85mg/m2奧沙利鉬、2400mg/m25-FU、400mg/m2亞葉酸、5mg/kg貝伐單抗、和400mg抗EGFL7抗體,每14天重復(fù)每個(gè)周期。
42.權(quán)利要求41的方法，其中施用奧沙利鉬長(zhǎng)達(dá)8個(gè)周期。
43.權(quán)利要求41的方法，其中施用5-FU、亞葉酸、貝伐單抗和抗EGFL7抗體直至疾病進(jìn)展或長(zhǎng)達(dá)52個(gè)周期。
44.權(quán)利要求38-43任一項(xiàng)的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含可變域，該可變域包含下述HVR序列:
(i)HVR-Ll，其包含 KASQSVDYSGDSYMS (SEQ ID NO:1)；
(ii)HVR-L2，其包含GASYRES (SEQ ID NO:2)；
(iii)HVR-L3，其包含 QQNNEEPYT (SEQ ID NO:3)；
(iv)HVR-Hl，其包含 GHTFTTYGMS (SEQ ID NO:4)；
(V) HVR-H2，其包含 GWINTHSGVPTYADDFKG (SEQ ID NO:5);和
(vi) HVR-H3，其包含 LGSYAVDY (SEQ ID NO:6)。
45.權(quán)利要求44的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含下述重鏈可變區(qū)序列: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGHTFTTYGMSWVRQAPGKGLEWVGWINTHSGVPTYADDFKGRFTISLDNSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGSYAVDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7)。
46.權(quán)利要求44的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含下述重鏈可變區(qū)序列: EIQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGHTFTTYGMSWVRQAPGKGLEWMGWINTHSGVPTYADDFKGRFTISLDNSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYFCARLGSYAVDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:8)。
47.權(quán)利要求44-46任一項(xiàng)的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含下述輕鏈可變區(qū)序列: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYS⑶SYMSWYQQKPGKAPKLLIYGASYRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNEEPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:9)。
48.權(quán)利要求38-43任一項(xiàng)的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含可變域，該可變域包含下述HVR序列:
(i)HVR-Ll，其包含 RTSQSLVHINGITYLH (SEQ ID NO:10)；
(ii)HVR-L2，其包含RVSNRFS (SEQ ID NO:11)；
(iii)HVR-L3，其包含GQSTHVPLT(SEQ ID NO:12)；
(iv)HVR-Hl，其包含 GYTFIDYYMN (SEQ ID NO:13)；
(v)HVR-H2，其包含⑶INLDNGGTHYNQKFKG(SEQID NO:14)； 和
(vi)HVR-H3，其包含 AREGVYHDYDDYAMDY (SEQ ID NO: 15)。
49.權(quán)利要求48的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含下述重鏈可變區(qū)序列: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFIDYYMNWVRQAPGKGLEWV⑶INLDNGGTHYNQKFKGRFTISRDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGVYHDYDDYAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:16)。
50.權(quán)利要求48或49的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含下述輕鏈可變區(qū)序列: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSLVHINGITYLHWYQQKPGKAPKLLIYRVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCGQSTHVPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:17)。
51.權(quán)利要求38-43任一項(xiàng)的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含可變域，該可變域包含下述HVR序列:
(i)HVR-Ll，其包含 RTSQSLVHINAITYLH (SEQ ID NO:18)；
(ii)HVR-L2，其包含RVSNRFS (SEQ ID NO:11)；
(iii)HVR-L3，其包含GQSTHVPLT(SEQ ID NO:12)；
(iv)HVR-Hl，其包含 GYTFIDYYMN (SEQ ID NO:13)；
(V) HVR-H2，其包含⑶INLDNSGTHYNQKFKG (SEQ ID NO:19)； 和
(vi)HVR-H3，其包含 AREGVYHDYDDYAMDY (SEQ ID NO:15)。
52.權(quán)利要求51的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含下述重鏈可變區(qū)序列: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFIDYYMNWVRQAPGKGLEWVGDINLDNSGTHYNQKFKGRFTISRDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGVYHDYDDYAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:20)。
53.權(quán)利要求51或52的方法，其中所述抗EGFL7抗體包含下述輕鏈可變區(qū)序列: DIQMTQSPSSLSASV⑶RVTITCRTSQSLVHINAITYLHWYQQKPGKAPKLLIYRVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCGQSTHVPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:21)。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK103476430SQ201280015110
【公開(kāi)日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2012年2月1日 優(yōu)先權(quán)日:2011年2月2日
【發(fā)明者】S.白, D.S.陳, R.方克, P.赫格德, L.瑙莫夫斯基 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司