專利名稱：少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a及其基因和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a及其基因和應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
鉀通道是細(xì)胞膜上的一種重要的跨膜蛋白，具有非常重要的生理意義。鉀通道廣泛的分布于骨骼肌、神經(jīng)、心臟、血管、腺體等細(xì)胞。是目前發(fā)現(xiàn)種類最多，作用最為復(fù)雜的一種離子通道。鉀離子種類繁多分布也十分廣泛，其中鉀離子通道亞型Kvl. 3主要分布于T細(xì)胞的表面，是效應(yīng)T細(xì)胞持續(xù)活化的關(guān)鍵。T細(xì)胞是由胸腺內(nèi)的淋巴干細(xì)胞分化而成，是淋巴細(xì)胞中數(shù)量最多，功能最復(fù)雜的一類細(xì)胞。T細(xì)胞是淋巴細(xì)胞的主要組分，它具有多種生物學(xué)功能，如直接殺傷靶細(xì)胞，輔助 或抑制B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，對(duì)特異性抗原和促有絲分裂原的應(yīng)答反應(yīng)以及產(chǎn)生細(xì)胞因子，抵御身體中疾病感染以及腫瘤形成。銀屑病俗稱“牛皮癬”是一種與T細(xì)胞密切相關(guān)的自身免疫性疾病，改善自身免疫力是治療銀屑病的一種重要方法。Kvl. 3作為T細(xì)胞持續(xù)性活化的一個(gè)重要因素，在T細(xì)胞的生理功能上扮演重要作用，目前已經(jīng)證實(shí)Kvl. 3與許多疾病密切相關(guān)，Kvl. 3也已經(jīng)成為藥物開發(fā)的熱門靶點(diǎn)。Kvl. 3介導(dǎo)的自身免疫疾病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、肝炎、多發(fā)性硬化、肥胖癥、移植排斥和炎癥性神經(jīng)病密切相關(guān)。Kvl. 3的抑制劑中類黃酮可以用來治療紅斑狼瘡、相關(guān)風(fēng)濕疾病；Shk毒素類似物用于預(yù)防肥胖和II型糖尿病。蜈蚣是一種傳統(tǒng)中藥，性溫，味辛，有毒。具有息風(fēng)鎮(zhèn)痙、攻毒散結(jié)、通絡(luò)止痛之功能。蜈蚣毒腺中含有豐富的多肽成分，目前已經(jīng)證實(shí)了這些多肽成分多為神經(jīng)毒素。多肽能夠選擇性的抑制鈉通道，鉀通道或是鈣離子通道，因此蜈蚣毒液中的成分具有廣泛的應(yīng)用前途，如開發(fā)成為鎮(zhèn)痛藥物、及治療自身免疫疾病藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種少棘蜈蟻多肽毒素kappa-SLPTX_Ssm4a及其基因和應(yīng)用。本發(fā)明提供的少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX_Ssm4a，是從少棘蜈蚣粗毒中通過分子篩和反向高效液相色譜分離純化得到，其氨基酸序列(SEQ ID N0:1)為TDDESSNKCAKTKRRENVCRVCGNRSGNDEYYSECCESDYRYERCLDLLR N,該多肽包括51個(gè)氨基酸殘基分子量為6042. 57Da，等電點(diǎn)為5. 3，分子內(nèi)含有三對(duì)二硫鍵其配對(duì)方式為1_5，2-4, 3_6。少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a的基因克隆包括少棘蜈蚣毒腺總RNA提取，mRNA純化，mRNA反轉(zhuǎn)錄及cDNA文庫(kù)構(gòu)建，設(shè)計(jì)引物，利用PCR方法篩選少棘蜈蚣鈣離子通道激活劑多肽基因。擴(kuò)增引物長(zhǎng)度為17個(gè)核苷酸，其序列為5 ’ -GCGAAAAATGGAAATCT-3 ’，PCR另一擴(kuò)增引物為CL0NTECH公司SMART TM cDNA Library Construction Kit 中的 3’ PCR Primer 引物，其序列為 5 'ATTCTACAGGCCGAGGCGGCCGACATG 3 '。所獲陽(yáng)性單克隆進(jìn)行基因核苷酸序列測(cè)定?；驕y(cè)序結(jié)果表明編碼少棘蜈蚣鈣離子通道激活劑的基因(SEQ ID N0:2)由563個(gè)核苷酸組成，自5’端至3’端序列基因序列包括了信號(hào)肽、前體肽和成熟肽，其中下劃線部分為成熟肽。
權(quán)利要求
1.少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a，其特征在于由SEQID NO:1所示的氨基酸序列組成。
2.編碼少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a的基因，其特征在于由SEQID NO:1所示的核苷酸序列組成。
3.權(quán)利要求1所示的多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a是一種T細(xì)胞上鉀通道Kvl.3的專一性抑制劑，在制備自身性免疫疾病藥物中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求3中的自身性免疫疾病包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、肝炎、多發(fā)性硬化、肥胖癥、移植排斥以及炎癥性神經(jīng)病。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a及其基因和應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a，由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列組成。編碼少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a的基因，由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列組成。少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a選擇性的抑制T細(xì)胞上的鉀離子通道亞型Kv1.3，是一種專一性的鉀通道抑制劑。少棘蜈蚣多肽毒素kappa-SLPTX-Ssm4a在制備治療或是預(yù)防與T細(xì)胞相關(guān)的自身性免疫疾病的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P17/06GK102993289SQ201210509418
公開日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2012年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月4日
發(fā)明者賴刃, 容明強(qiáng), 楊仕隆, 肖瑤, 康迪 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所