專利名稱：桑黃中單體成分-纖孔菌素a及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種屬于藥物領(lǐng)域，尤其涉及提取自桑黃中的一種單體成分纖孔菌素A (inoscavin 及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
癌癥是僅次于心血管疾病的人類第二大致死疾病，嚴(yán)重威脅人類健康。預(yù)計至 2030年，全球新發(fā)病癌癥病人將達(dá)到約2100萬，死亡病人約1320萬。我國腫瘤每年新發(fā)病例約為220萬，死亡人數(shù)約為160萬，因此，對惡性腫瘤的防治與研究已成為全球醫(yī)藥工作者聞度關(guān)注的研究領(lǐng)域。
中藥治療癌癥，因其多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、多效應(yīng)的作用特點(diǎn)，能夠提高機(jī)體免疫力，在延長生存期，提高生活質(zhì)量方面發(fā)揮了重要作用，臨床應(yīng)用已證實中藥輔助治療腫瘤具有確切的療效及獨(dú)特的優(yōu)勢?？鼓[瘤中藥的發(fā)現(xiàn)及深入研究，將為中藥抗腫瘤臨床應(yīng)用提供新的藥物選擇，為提高腫瘤治療效果，促進(jìn)人類健康事業(yè)做貢獻(xiàn)。
桑MiPhellinus spp.)是一類大型真菌，以附生于野生桑樹(ifo/YAs L.)的最為珍貴，桑黃始載于《本草綱目》，中醫(yī)傳統(tǒng)多用于治療痢疾、盜汗、血崩、血淋、臍腹?jié)?、脫肛瀉血、帶下、閉經(jīng)等癥。近年來由于發(fā)現(xiàn)其具有免疫調(diào)節(jié)以及抗腫瘤作用，逐漸成為研究開發(fā)的熱點(diǎn)，日韓等國桑黃應(yīng)用及產(chǎn)品開發(fā)豐富，如采用發(fā)酵罐人工生產(chǎn)桑黃菌絲體，并提取桑黃有效成分，以凍干粉為劑型，作為抗腫瘤藥品；同時將桑黃廣泛應(yīng)用于護(hù)膚和保健產(chǎn)品中。目前我國對桑黃的研究及應(yīng)用尚處于產(chǎn)業(yè)發(fā)展初期。
目前對桑黃的研究主要集中于抗腫瘤，抗炎，抗氧化作用等方面。對桑黃的成分研究多集中在桑黃多糖，已證實桑黃多糖具有確切的免疫調(diào)節(jié)、對多種腫瘤細(xì)胞的體外抑制作用、抗炎、及降血糖作用。對桑黃的其他化學(xué)成分，如黃酮類、三萜類的研究報道較少，而桑黃黃酮類具有抗氧化作用，呋喃酮類具有抗腫瘤作用，為了進(jìn)一步闡述桑黃成分，客觀全面評價其功效作用，進(jìn)而推廣應(yīng)用，有必要對桑黃的非多糖成分進(jìn)行研究。
本發(fā)明采用溶劑提取，高速逆流色譜分離技術(shù)，自桑黃中純化制備得到一種單體成分，結(jié)合波譜解析，確定為呋喃酮類成分纖孔菌素A，經(jīng)體外實驗具有抑制肺癌腫瘤細(xì)胞、 肝癌腫瘤細(xì)胞增殖活性；體內(nèi)活性試驗驗證具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)及腫瘤化療藥物協(xié)同作用； 確定了該單體成分的純化制備方法。應(yīng)用該方法，能夠批量制備桑黃單體成分，為桑黃藥效學(xué)研究及藥材質(zhì)量控制提供物質(zhì)基礎(chǔ)。經(jīng)檢索，未見與本發(fā)明類似的桑黃中單體成分的制備方法的專利公開，未見與本發(fā)明類似的單體成分純化制備方法的文獻(xiàn)報道。發(fā)明內(nèi)容
為了解決目前桑黃尚無法定及商品化標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，單體成分制備研究的不足的技術(shù)問題，本發(fā)明的第一個目的是提供桑黃中單體成分-纖孔菌素A化合物，該化合物經(jīng)體外實驗具有抑制肺癌腫瘤細(xì)胞、肝癌腫瘤細(xì)胞增殖活性；體內(nèi)活性試驗驗證具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)及腫瘤化療藥物協(xié)同作用，為進(jìn)一步開展桑黃的藥效學(xué)研究及藥材質(zhì)量評價與控制提供物質(zhì)基礎(chǔ)，最終為養(yǎng)生保健乃至疾病治療提供新的保健食品或藥物選擇。
本發(fā)明的第二個目的是提供上述的纖孔菌素A化合物的制備方法。
本發(fā)明的第三個目的是提供上述的纖孔菌素A化合物的應(yīng)用。
為了實現(xiàn)上述的第一個目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案纖孔菌素A化合物，該化合物具有以下的結(jié)構(gòu)式
權(quán)利要求
1.纖孔菌素A化合物，其特征在于該化合物具有以下的結(jié)構(gòu)式
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的纖孔菌素A化合物的制備方法，其特征在于該方法提取化合物的原料藥材為桑黃。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的纖孔菌素A化合物的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟 1)桑黃藥材粉碎，采用乙醇回流提取； 2)乙醇提取物經(jīng)石油醚萃取，棄去石油醚； 3)提取物經(jīng)二氯甲烷萃取，取二氯甲烷層，干燥得二氯甲烷萃取物； 4)萃取物溶于流動相，經(jīng)高速逆流色譜分離，接收、合并流分后回收溶劑，得到干粉。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的纖孔菌素A化合物的制備方法，其特征在于步驟I)中取桑黃藥材,粉碎成蠶豆大顆粒,加入相當(dāng)于8倍藥材質(zhì)量的質(zhì)量濃度為75%的乙醇水溶液，浸泡3h，80°C溫浸提取2h，濾過；濾渣再加6倍藥材質(zhì)量的質(zhì)量濃度為75%的乙醇水溶液，80°C溫浸提取lh，濾過；濾渣再次加4倍藥材質(zhì)量的質(zhì)量濃度為75%的乙醇水溶液，80°C溫浸提取O. 5h，濾過；合并3次濾液，減壓濃縮至稠液，備用。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的纖孔菌素A化合物的制備方法，其特征在于步驟2)中取步驟I)的稠液，精密計量體積，加20倍量的熱水溶散，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，放冷；加入與熱水相同體積的石油醚，振搖萃取；靜置分層；分取下層水液，上層石油醚層棄去；下層水液采用同樣的萃取過程，重復(fù)萃取I次；棄去石油醚層，得石油醚萃取去雜后的水液，備用。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的纖孔菌素A化合物的制備方法，其特征在于步驟3)中取步驟2)的水液，加入等體積的二氯甲烷，振搖萃取；靜置分層；分取下層二氯甲烷萃取層，上層水液采用同樣的萃取過程，重復(fù)萃取2次；合并3次的二氯甲烷萃取液；50°C水浴蒸干，殘渣冷藏備用。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的纖孔菌素A化合物的制備方法，其特征在于步驟4)中流動相采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，精密計量體積，配制成體積比為1:1.5:1:1.5的混合溶液，充分振搖后靜置3h，上下兩層完全分層澄清，分離上下層，得到上相溶液與下相溶液，分別超聲脫氣，備用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的纖孔菌素A化合物的制備方法，其特征在于步驟4)中取步驟3)的殘渣，精密稱重，取下相溶液，體積相當(dāng)于殘渣質(zhì)量數(shù)的10倍量，溶解殘渣，用O. 45Mffl孔徑的微孔濾膜濾過，濾液備用；取上相溶液，泵入高速逆流色譜儀分離管，待固定相充滿整個分離管后，調(diào)節(jié)主機(jī)為正轉(zhuǎn)，至800r/min轉(zhuǎn)速，同時將下相溶液泵入，待流動相從柱口流出且固定相不流出，兩相溶劑在分離管中達(dá)到動態(tài)平衡后，取濾液10mL，注入進(jìn)樣閥進(jìn)樣，流速3mL/min的條件下,395nm波長下檢測,分離樣品，總分析時間200min,每15min收集I個流分；合并其中90-160min時間段內(nèi)所收集流分，減壓回收溶劑，得到干粉。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的纖孔菌素A化合物的制備方法，其特征在于該方法還包括精制步驟取制備的干粉，加乙腈溶解成質(zhì)量濃度為lmg/mL的溶液，備用；采用C18制備色譜柱，在流動相乙腈-水體積比為25:75，流速5mL/min條件下，精密吸取步驟7)的溶液，進(jìn)樣3mL,分離精制,395nm波長檢測，總運(yùn)行時間45min,收集31_36min的洗脫液,減壓干燥，得到淡黃色無定形粉末，即纖孔菌素A精制品。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的纖孔菌素A化合物用于制備抑制肺癌腫瘤細(xì)胞、肝癌腫瘤細(xì)胞增殖活性以及抗炎、免疫調(diào)節(jié)或與腫瘤化療藥物協(xié)同作用的藥物或保健食品中的應(yīng)用；或者，該化合物用于作為桑黃藥材的質(zhì)量評價與質(zhì)量控制的指標(biāo)成分。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種屬于藥物領(lǐng)域，尤其涉及提取自桑黃中的一種單體成分纖孔菌素A(inoscavinA)及其制備方法和應(yīng)用。纖孔菌素A的制備方法包括以下步驟1)桑黃藥材粉碎,采用乙醇回流提??；2)乙醇提取物經(jīng)石油醚萃取，棄去石油醚；3)提取物經(jīng)二氯甲烷萃取，取二氯甲烷層，干燥得二氯甲烷萃取物；4)萃取物溶于流動相，經(jīng)高速逆流色譜分離，接收、合并流分后回收溶劑,得到干粉。本發(fā)明由于采用了上述的技術(shù)方案可以實現(xiàn)桑黃中單體成分纖孔菌素A化合物的批量制備，該化合物經(jīng)體外實驗具有抑制肺癌腫瘤細(xì)胞、肝癌腫瘤細(xì)胞增殖活性；體內(nèi)活性試驗驗證具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)及腫瘤化療藥物協(xié)同作用進(jìn)一步研究其體內(nèi)外藥效作用。
文檔編號A61P37/02GK102977114SQ20121047713
公開日2013年3月20日 申請日期2012年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月20日
發(fā)明者董宇, 壽旦, 李洪玉, 俞忠明, 陳平華, 王緒平, 陳莉君, 黃孝聞, 章建民, 張揚(yáng), 吳人杰 申請人:浙江省中醫(yī)藥研究院