專利名稱：一種中藥蛇床子中總香豆素的提取方法
技術領域：
本發(fā)明屬于中藥有效成分提取技術領域，特別涉及一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的提取方法，該方法分離得到的總香豆素可作為制藥生產(chǎn)的原料。
背景技術：
中藥蛇床子(Fructus Cnidii )為傘形科蛇床屬植物蛇床monnier (L)Cusson的干燥成熟果實，具有溫腎、壯陽、燥濕、祛風、殺蟲之功效。臨床上外用治療外陰濕疹，滴蟲性陰道炎，急性滲出性皮膚病等病癥。內(nèi)服用于陽痿，宮冷，不孕，寒濕帶下，濕鼻腰痛的癥。蛇床子的有效成分可分為香豆素類和揮發(fā)油，其中香豆素成分是蛇床子顯示各種生理活性的主要成分，從蛇床子香豆素中已分離得到的單體主要有六種，包括蛇床子素(osthole),佛手柑內(nèi)酯(bergapten),異虎耳草素(isopimpinellin),花椒毒酹(xanthotoxol),花椒毒素(xanthotoxin),歐療屬素乙(imperatoriu),其中蛇床子素含量最高，一般占總香豆素的90%以上?，F(xiàn)代藥理實驗表明蛇床子總香豆素具有抗炎、抗氧化、抗突變、抗腫瘤、抗凝血、抗菌等多種生物活性，因而蛇床子總香豆素在臨床上有著廣泛的應用前景。有關蛇床子總香豆素的提取已有報道，多采用水提、醇沉、石油醚提取等方法，分離方法多采用柱層析、用不同比例的有機溶劑洗脫，收集洗脫液，回收有機溶劑，檢測等步驟。這些方法均不同程度地存在提取率較低，有機溶劑用量大、處理時間長、環(huán)境污染嚴重、不利于人體健康等。最近有關于CO2超臨界和高速逆流提取分離蛇床子香豆素的報道，但這些方法需要特殊或較為昂貴的設備才能進行，工業(yè)放大受到一定限制。因此研究綠色環(huán)保、簡單方便的中藥成分提取分離方法已成為當今生物醫(yī)藥的前沿課題之一。膜分離技術根據(jù)分子相對分子質(zhì)量的大小，通過膜孔的篩分、吸附等作用，對體系中的不同組分實現(xiàn)選擇性的分離，達到分子水平上的分離和濃縮。雙水相分離技術與水-有機相萃取原理相似，是利用不同物質(zhì)在特定的體系中有不同的分配系數(shù)，當物質(zhì)進入雙水相體系后，在上相和下相間進行選擇性分配，表現(xiàn)出一定的分配系數(shù)，從而達到分離純化的目的，具有活性損失小、分離步驟少、操作條件溫和，易于工藝放大和連續(xù)操作等優(yōu)點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種中藥蛇床子中總香豆素的提取方法，該方法運用膜分離和雙水相萃取即可得到蛇床子總香豆素，該方法使用的乙醇有機溶劑，對環(huán)境和人員安全，具有獲得產(chǎn)品純度高，無溶劑殘留，分離步驟少、操作條件溫和，具有污染小，生產(chǎn)成本低，操作簡單，易于工藝放大和連續(xù)操作，所得產(chǎn)品無溶劑殘留等特點，克服現(xiàn)有技術中的不足，是一種綠色環(huán)保型萃取技術。本發(fā)明所述的一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的方法，按下列步驟進行
a、取蛇床子藥材，粉碎，過20-40目篩得到蛇床子粉；
b、將步驟a得到的蛇床子粉中在室溫下加入8-10倍量濃度為80-95%的乙醇，浸泡提取2-3次，合并提取液，浸泡時間8-12小時；
C、將步驟b得到的提取液過濾，加入超濾膜進行超濾，將超濾后的提取液按體積比1:1加入濃度為80%乙醇溶液透析，收集透過液，再加入納濾膜濃縮，得濃縮液；
d、將步驟c得到的濃縮液采用雙水相萃取，萃取溶劑為乙醇水磷酸氫二鉀，高速離心，萃取后的溶液形成兩相，取上相減壓濃縮，噴霧干燥，即可得到總香豆素。步驟c中超濾膜的截留分子量為3000-9000的中空纖維超濾膜，納濾膜為截留分子量200-300的中空纖維膜。 步驟d萃取溶劑體積比為乙醇水磷酸氫二鉀=4-6 mL:4-6 mL: I. 0-1. 5g。本發(fā)明所述的一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的方法，該方法運用膜分離和雙水相萃取得到蛇床子總香豆素，采用膜分離技術是一種物理分離方法，根據(jù)物質(zhì)分子量選擇不同的孔徑截留，既不破壞物質(zhì)成分，又有選擇性，是一種低能耗，低污染的分離方法。該方法提高了目標成分-總香豆素的含量，去除了大部分無效成分，產(chǎn)品的活性成分得到了有效富集，納濾膜分離系統(tǒng)在截留目標物質(zhì)的同時，也是一種低溫無相變的濃縮過程，減少了有效成分損失和濃縮時間；同時采用乙醇/水/磷酸氫二鉀雙水相體系分離純化蛇床子總香豆素，該方法只使用乙醇這種無害有機溶劑，對環(huán)境和人員安全，具有獲得產(chǎn)品純度高，無溶劑殘留，分離步驟少、操作條件溫和，易于工藝放大和連續(xù)操作等優(yōu)點，是一種綠色環(huán)保型萃取技術。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施方式
進一步說明本發(fā)明，但并不局限于下列實施方式。實施例I
取蛇床子藥材，粉碎，過20目篩，得到蛇床子粉；
取5kg蛇床子粉，在室溫下加入按重量比為10倍量的濃度為80%乙醇溶液浸泡12小時提取2次，合并提取液；
將提取液過濾，加入截留分子量為3000的中空纖維素膜進行超濾，將超濾后的提取液按體積比I: I加入濃度為80%乙醇溶液透析，收集透過液，再加入截留分子量為200的納濾膜濃縮，得到濃縮液；
將濃縮液采用雙水相萃取，萃取溶劑為體積比乙醇水磷酸氫二鉀=6 mL:4 mL:1.0g，高速離心，萃取后的溶液形成兩相，取上相減壓濃縮，噴霧干燥得蛇床子總香豆素327g，含量檢測91. 4% (采用高效液相色譜儀分析，以蛇床子素為基準測定總香豆素的含量，詳細操作參見《中華人民共和國藥典》2010版一部P295)。實施例2
取蛇床子藥材，粉碎，過30目篩得到蛇床子粉；
取5kg蛇床子粉，在室溫下加入按重量比為8倍量的濃度為90%乙醇溶液浸泡10小時，提取3次，合并提取液；
取提取液過濾，加入截留分子量為6000的中空纖維素膜進行超濾，將超濾后的提取液按體積比I: I加入濃度為80%乙醇溶液透析，收集透過液，再加入截留分子量為300的納濾膜濃縮，得到濃縮液；
濃縮液采用雙水相萃取，萃取溶劑為體積比乙醇水磷酸氫二鉀=5 mL:5 mL:1.2g，高速離心，溶液形成兩相，取上相減壓濃縮，噴霧干燥得蛇床子總香豆素361g，含量檢測93. 7% (采用高效液相色譜儀分析，以蛇床子素為基準測定總香豆素的含量，詳細操作參見《中華人民共和國藥典》2010版一部P295)。實施例3
取蛇床子藥材，粉碎，過40目篩得到蛇床子粉；
取5kg蛇床子粉，在室溫下加入按重量比為9倍量的濃度為95%乙醇溶液浸泡8小時，提取3次，合并提取液；
將提取液濾過，加入截留分子量為9000的中空纖維素膜進行超濾，將超濾后的提取液按體積比I: I加入濃度為80%乙醇溶液透析，收集透過液，再加入截留分子量為200的納濾膜濃縮，得到濃縮液；
濃縮液采用雙水相萃取，萃取溶劑為體積比乙醇(無水)水磷酸氫二鉀=4 mL:6mL:1.5 g，高速離心，溶液形成兩相，取上相減壓濃縮，噴霧干燥得蛇床子總香豆素368g，含量檢測93. 5% (采用高效液相色譜儀分析，以蛇床子素為基準測定總香豆素的含量，詳細操作參見《中華人民共和國藥典》2010版一部P295)。
權利要求
1.一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的方法，其特征在于按下列步驟進行 a、取蛇床子藥材，粉碎，過20-40目篩得到蛇床子粉； b、將步驟a得到的蛇床子粉中在室溫下加入8-10倍量濃度為80-95%的乙醇，浸泡提取2-3次，合并提取液，浸泡時間8-12小時； C、將步驟b得到的提取液過濾，加入超濾膜進行超濾，將超濾后的提取液按體積比1:1加入濃度為80%乙醇溶液透析，收集透過液，再加入納濾膜濃縮，得濃縮液； d、將步驟c得到的濃縮液采用雙水相萃取，萃取溶劑為乙醇水磷酸氫二鉀，高速離心，萃取后的溶液形成兩相，取上相減壓濃縮，噴霧干燥，即可得到蛇床子總香豆素。
2.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于步驟c中超濾膜的截留分子量為3000-9000的中空纖維超濾膜，納濾膜為截留分子量200-300的中空纖維膜。
3.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于步驟d萃取溶劑體積比為乙醇水磷酸氫二鉀=4-6 ml,:4-6 mL: I. 0-1. 5 g。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥蛇床子中總香豆素的提取方法，該方法運用膜分離和雙水相萃取即可得到蛇床子總香豆素，該方法使用的乙醇有機溶劑，對環(huán)境和人員安全，具有獲得產(chǎn)品純度高，無溶劑殘留，分離步驟少、操作條件溫和，具有污染小，生產(chǎn)成本低，操作簡單，易于工藝放大和連續(xù)操作等特點，克服現(xiàn)有技術中的不足，是一種綠色環(huán)保型萃取技術。
文檔編號A61P31/04GK102908373SQ20121046263
公開日2013年2月6日 申請日期2012年11月16日 優(yōu)先權日2012年11月16日
發(fā)明者周軍, 孫江兵, 張瓊, 曾平 申請人:中國人民解放軍蘭州軍區(qū)烏魯木齊總醫(yī)院