專(zhuān)利名稱：Gypensapogenin A在抗呼吸道合胞病毒的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及Gypensapogenin A在制備抗呼吸道合胞病毒(RespiratorySyncytial Virus, RSV)的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
RSV主要引起呼吸系統(tǒng)感染，在嬰幼兒、老年以及免疫缺陷人群引起嚴(yán)重肺炎，是人類(lèi)上呼吸道感染的重要病原之一。
本發(fā)明涉及的化合物Gypensapogenin A是ー個(gè)2012年發(fā)表(Li, N. etal.， 2012. Triterpenes possessing an unprecedented skeleton isolated fromhydrolyzate of total saponins from Gynostemma pentaphyllum. European Journalof Medicinal Chemistry 50, 173 - 178.)的新骨架化合物,該化合物擁有全新的骨架類(lèi)型，目前的用途僅僅涉及人腫瘤細(xì)胞株的細(xì)胞毒活性(Li，N. et al., 2012. Triterpenespossessing an unprecedented skeleton isolated irom hydrolyzate of totalsaponins from Gynostemma pentaphyllum. European Journal of Medicinal Chemistry50，173 - 178.)，對(duì)于本發(fā)明涉及的在制備治療呼吸道合胞病毒(RSV)藥物中的用途屬于首次公開(kāi)，由于骨架類(lèi)型屬于全新的骨架類(lèi)型，而且其對(duì)于呼吸道合胞病毒(RSV)抑制活性強(qiáng)得意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，同時(shí)用于呼吸道合胞病毒(RSV)的防治顯然具有顯著的進(jìn)步。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了 Gypensapogenin A在制藥中的新用途Gypensapogenin A在制備抗RSV的藥物中的應(yīng)用。所述化合物Gypensapogenin A結(jié)構(gòu)如式(I )所示
式(I)經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，Gypensapogenin A對(duì)RSV有顯著的抑制作用抑制RSV在HEK293細(xì)胞出現(xiàn) CPE 效應(yīng)(Cytopathic Effect, CPE), IC50 為 2-9.50，TI 為 137. 19。本發(fā)明涉及的Gypensapogenin A在制備治療呼吸道合胞病毒(RSV)藥物中的用途屬于首次公開(kāi)，由于骨架類(lèi)型屬于全新的骨架類(lèi)型，而且其對(duì)于呼吸道合胞病毒(RSV)抑 制活性強(qiáng)得意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，同時(shí)用于呼吸道合胞病毒(RSV)的防治顯然具有顯著的進(jìn)步。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明所涉及化合物Gypensapogenin A的制備方法參見(jiàn)文獻(xiàn)(Li, N. etal.， 2012. Triterpenes possessing an unprecedented skeleton isolated fromhydrolyzate of total saponins from Gynostemma pentaphyllum. European Journal ofMedicinal Chemistry 50，173 - 178.和 Wei，J. X. et al. , 1982. Two new dammaransapogenins from 丄eaves oi Panax notoginseng. Planta Medicaj 45(3): 167-171.)。以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)ー步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。實(shí)施例I :本發(fā)明所涉及化合物Gypensapogenin A片劑的制備取20克化合物Gypensapogenin A，加入制備片劑的常規(guī)輔料180克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成1000片。實(shí)施例2 :本發(fā)明所涉及化合物Gypensapogenin A膠囊劑的制備取20克化合物Gypensapogenin A,加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉180克,混勻，裝膠囊制成1000片。下面通過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)ー步說(shuō)明其藥物活性。實(shí)驗(yàn)例化合物Gypensapogenin A對(duì)呼吸道合胞病毒(RSV)的作用研究
(I)化合物Gypensapogenin A的配置將化合物Gypensapogenin A溶于細(xì)胞維持液(含2%新生牛血清的MEM，GIBICO公司產(chǎn)品)中備用。(2)細(xì)胞株與病毒株人胚腎細(xì)胞(HEK293，RSV病毒敏感細(xì)胞)購(gòu)自美國(guó)Clontech公司；呼吸道合胞病毒(RSV) Long株引自中國(guó)⑶C病毒病研究所。(3)細(xì)胞毒性測(cè)定參照文獻(xiàn)(汪受傳，王霖，陳超等，清肺ロ服液含藥血清對(duì)呼吸道合胞病毒抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究，南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008 ；24 (1):25^27)的方法，將樣品以2倍比做系列稀釋(2°~_5)，然后按稀釋順序橫向接種于96板孔中的HEK293上，每孔IOOuL,每稀釋度縱
向重復(fù)3孔(A、B、C行)，平行設(shè)微孔板D的1飛孔為細(xì)胞對(duì)照，7 12孔不接種細(xì)胞為空白對(duì)照，顯微鏡下每日觀察CPE，連續(xù)觀察7d，中性紅染色，在540nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，將實(shí)驗(yàn)組與細(xì)胞對(duì)照組OD值相比計(jì)算細(xì)胞存活率，用Reed-Muench方法計(jì)算藥物半數(shù)細(xì)胞中毒濃度(TD50)o(4)抑毒試驗(yàn)參照文獻(xiàn)(汪受傳，王霖，陳超等，清肺ロ服液含藥血清對(duì)呼吸道合胞病毒抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究，南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008 ；24 (1):25^27)的方法，將樣品按稀釋順序(2_2~_13)橫向接種于96板孔中的單層細(xì)胞上，每孔IOOuL,每稀釋度縱向重復(fù)4孔，微孔板的A、B、C行加含100個(gè)TCID5tl的病毒IOOuL作為試驗(yàn)組，D行補(bǔ)充等容量細(xì)胞維持液為不同濃度藥物對(duì)照，平行設(shè)F行作為病毒對(duì)照，E行的f 12作為細(xì)胞對(duì)照。37°C、5%C02培養(yǎng)，每日觀察CPE，連續(xù)觀察4d。病毒對(duì)照出現(xiàn)90%以上CPE時(shí)，加1%中性紅染色，用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)540nm波長(zhǎng)讀取A值，各組A值去除病毒對(duì)照組A值，將各試驗(yàn)組與細(xì)胞對(duì)照組A值相比，獲得細(xì)胞存活率，用Reed-Muench方法計(jì)算半數(shù)抑毒濃度(IC50),最終將TD5tl和IC5tl相比獲得抑毒指數(shù)(TI)。(5)結(jié)果①樣品TD5tl的測(cè)定對(duì)照組細(xì)胞顯微鏡下觀察貼壁生長(zhǎng)致密、形態(tài)良好。化合物Gypensapogenin A 對(duì) HEK293 的 TD50 為 2 2.53。②抑毒實(shí)驗(yàn)對(duì)照組細(xì)胞貼壁致密、形態(tài)良好。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，RSV病毒對(duì)照組在第2d出現(xiàn)90%以上的CPE，RSV在HEK293 CPE以折光性增強(qiáng)、變圓、脫落、破碎為主要特征。而抑毒試驗(yàn)各組細(xì)胞，按照樣品稀釋梯度，梯度規(guī)律出現(xiàn)CPE RSV-HEK293試驗(yàn)組細(xì)胞在第9稀釋度之前，細(xì)胞完全被保護(hù)，之后出現(xiàn)CPE，CPE隨樣品濃度減少逐漸加重。將上述實(shí)驗(yàn)板用1%中性紅染色、用酶標(biāo)儀測(cè)450nmA值，各組A值減掉病毒對(duì)照組A值后，各實(shí)驗(yàn)組A值與細(xì)胞對(duì)照組A值相比獲得IC5tl, IC50與TD5tl相比獲得TI :抑制RSV在 HEK293 細(xì)胞發(fā)生 CPE, IC50 為 2-9.50，TI 為 137. 19。結(jié)論Gypensapogenin A具有顯著的抗副粘科病毒呼吸道合胞病毒RSV的作用，可以用來(lái)制備抗副粘科病毒呼吸道合胞病毒RSV藥物。
權(quán)利要求
1.Gypensapogenin A在抗呼吸道合胞病毒的藥物中的應(yīng)用，所述化合物Gypensapogenin A 結(jié)構(gòu)如式(I )所示
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了GypensapogeninA在制備抗呼吸道合胞病毒藥物中的應(yīng)用。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，GypensapogeninA對(duì)呼吸道合胞病毒RSV有顯著的抑制作用，本發(fā)明為GypensapogeninA臨床用于治療呼吸道合胞病毒RSV感染性疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，對(duì)研制抗呼吸道合胞病毒RSV的藥物提供了一定的指導(dǎo)意義，具有重要的參考價(jià)值。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK102861047SQ20121041702
公開(kāi)日2013年1月9日 申請(qǐng)日期2012年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月26日
發(fā)明者俞驍, 王慧, 吳俊華 申請(qǐng)人:吳俊華