利用陰離子交換層析去除乙腦疫苗制品中殘留dna的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種利用陰離子交換層析去除乙腦疫苗制品中殘留DNA的方法，其特點是將乙腦疫苗濃縮液凝膠過濾層析所獲得的初步純化液進行陰離子交換層析，使DNA牢固吸附在離子交換介質(zhì)上而乙腦病毒蛋白直接穿透，從而達到去除宿主DNA的目的。本發(fā)明針對現(xiàn)有的濃縮、凝膠過濾層析等提取乙腦疫苗方法只能將一定比例的游離DNA去除，不能去除與抗原蛋白結(jié)合的宿主DNA；臨床不良反應(yīng)現(xiàn)象屢見不鮮的問題，在保證疫苗效價的前提下，提高疫苗產(chǎn)品質(zhì)量，去除大量雜蛋白及宿主DNA，使疫苗制品中殘留DNA含量達到50pg/劑以下，解決目前乙腦疫苗行業(yè)面臨的質(zhì)量問題。
【專利說明】利用陰離子交換層析去除乙腦疫苗制品中殘留DNA的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種在疫苗制品中去除宿主DNA及雜蛋白的方法，特別是涉及一種利用陰離子交換層析去除乙腦疫苗制品中殘留DNA的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]乙腦疫苗是將乙腦病毒接種于適合的動物細胞上，經(jīng)繁殖后病毒釋放到培養(yǎng)液中，與此同時一些殘余的宿主細胞或其碎片也會進入到培養(yǎng)液中，經(jīng)澄清，超濾濃縮，凝膠過濾層析后，提取得到的乙腦疫苗原液中會產(chǎn)生游離的宿主DNA及與抗原蛋白結(jié)合的宿主DNA，原液中還含有大量的宿主蛋白，濃縮、凝膠過濾層析工藝會將一定比例的游離DNA去除，但仍會有殘余DNA存在，特別是與病毒或抗原蛋白結(jié)合的DNA會殘留在原液中，若去除不徹底，這部分DNA會隨著疫苗一起被注入到人體內(nèi)，可能會在人體內(nèi)引起不良反應(yīng),或具有癌癥發(fā)生的可能。
[0003]目前乙腦疫苗普遍采用濃縮、凝膠過濾層析等傳統(tǒng)工藝進行提取，所得到的乙腦疫苗，存在以下缺陷:
[0004]1、病毒疫苗提取后殘留的宿主DNA含量過高。
[0005]2、病毒疫苗提取后仍含有過高的宿主蛋白，雜蛋白去除率不高，導(dǎo)致疫苗在臨床使用后有較大的副作用。
[0006]3、上述缺陷，影響了病毒疫苗產(chǎn)品的質(zhì)量，制約了疫苗產(chǎn)品的生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的就在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，為了實現(xiàn)在處理乙腦疫苗的過程中盡可能不損失抗原，即不影響疫苗制品的藥效，又有效地去除雜蛋白及殘留宿主DNA的目標(biāo)，本發(fā)明提供一種利用陰離子交換層析去除乙腦疫苗制品中殘留DNA的方法，即將濃縮、凝膠過濾層析所獲得的初步純化液加載到陰離子交換介質(zhì)中，在一定的PH、離子強度下，DNA牢固吸附在介質(zhì)上而病毒蛋白直接穿透，從而使成品乙腦疫苗DNA殘留量達到合格標(biāo)準。
[0008]本發(fā)明給出的技術(shù)方案是:利用陰離子交換層析去除乙腦疫苗制品中殘留DNA的方法，其特點是:將凝膠過濾層析所獲得的病毒蛋白溶液進行陰離子交換層析，使DNA牢固吸附在離子交換介質(zhì)上而病毒蛋白穿透，從而達到去除宿主DNA的目的。
[0009]具體步驟為:
[0010]將乙腦疫苗濃縮液經(jīng)過BPG200層析柱，Sepharose 4Fast Flow或Sepharose6Fast Flow凝膠過濾層析,紫外檢測波長280nm,流速為6cm/h,流動相為ρΗ7.4的lOmmol/L PBS (NaCl 0.2-0.6mol/L)，收集第一個吸收峰，即乙腦病毒蛋白初步純化液；
[0011]再用 ρΗ7.2-7.8，的 IOmmoI/L PBS (NaCl 0.2-0.6mol/L)平衡陰離子層析柱至紫外、電導(dǎo)平衡，流速3cm/h ；
[0012]然后將初步純化液按2倍柱床體積加載到陰離子層析介質(zhì)中，流速為2cm/h，宿主DNA牢固吸附在陰離子層析介質(zhì)上，而乙腦病毒蛋白與離子交換介質(zhì)的結(jié)合位點被緩沖液中的離子取代，直接穿透，紫外檢測波長280nm，收集吸收峰，當(dāng)樣品全部加載后，繼續(xù)用IOmmoI/L PBS (NaCl 0.2-0.6mol/L)緩沖液洗滌離子柱2倍柱床體積，直到紫外吸收值降到基線，收集的穿透峰為最終純化液。
[0013]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的創(chuàng)新之處在于，在保證疫苗抗原原始結(jié)構(gòu)的前提下，有效去除宿主DNA的含量，突破疫苗制品的質(zhì)量瓶頸，提高產(chǎn)品質(zhì)量及合格率。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]下面結(jié)合實施例及圖譜詳盡說明本發(fā)明。
[0015]圖1是乙腦濃縮液直接進行Sepharose 4Fast Flow凝膠過濾層析的圖譜。
[0016]圖2是乙腦濃縮液進行Sepharose 4Fast Flow凝膠過濾層析后，再進行DEAESepharose Fast Flow陰離子交換層析的圖譜。
[0017]圖3乙腦濃縮液進行Sepharose 4Fast Flow凝膠過濾層析后,再進行QSepharoseFast Flow陰離子交換層析的圖譜。
[0018]圖4乙腦濃縮液進行Sepharose 4Fast Flow凝膠過濾層析后,再進行CaptoQ陰離子交換層析的圖譜。
[0019]圖5乙腦濃縮液直接進行Sepharose 6Fast Flow凝膠過濾層析的圖譜。
[0020]圖6乙腦濃縮液進行Sepharose 6Fast Flow凝膠過濾層析后，再進行QSepharoseFast Flow陰離子交換層析的圖譜。
[0021]圖7乙腦濃縮液進行Sepharose 6Fast Flow凝膠過濾層析后,再進行CaptoQ陰離子交換層析的圖譜。
[0022]圖8是DNA殘留量檢測圖譜。
[0023]其中，凝膠過濾層析圖譜(圖1和圖5)橫坐標(biāo)代表體積(mL)，縱坐標(biāo)代表紫外吸收(mAU);離子交換層析圖譜(圖2、圖3、圖4、圖6、圖7)橫坐標(biāo)代表時間(min)，縱坐標(biāo)代表紫外吸收(mAU)。
【具體實施方式】
[0024]以下實施例詳細說明了本發(fā)明，但不用于限制本發(fā)明的范圍。本實施例采用常規(guī)實驗技術(shù)，這些均是本【技術(shù)領(lǐng)域】人員所熟悉的，可以按照本實施例使用材料廠商所提供的說明書即可進行。
[0025]實施例1:
[0026]使用AKTApilot自動層析設(shè)備將2000mL乙腦疫苗濃縮液(批號SI)經(jīng)過BPG200層析柱，Sepharose 4Fast Flow凝膠過濾層析,紫外檢測波長280nm,流速為6cm/h,流動相為pH7.2的10mmol/L PBS (NaCl 0.2mol/L)，收集第一個吸收峰，即乙腦病毒蛋白初步純化液(批號 S2)。再用 ρΗ7.2 的 10mmol/L PBS (NaCl0.2mol/L)平衡 DEAE Sepharose FastFlow層析柱(柱床體積1000mL)至紫外、電導(dǎo)平衡,流速3cm/h。然后將初步純化液按2倍柱床體積(2000mL)加載到DEAE Sepharose Fast Flow層析介質(zhì)中，流速為2cm/h,宿主DNA牢固吸附在DEAESepharose Fast Flow層析介質(zhì)上,而乙腦病毒蛋白與離子交換介質(zhì)的結(jié)合位點被緩沖液中的離子取代，直接穿透，紫外檢測波長280nm，收集吸收峰，當(dāng)樣品全部加載后，繼續(xù)用PH7.2的lOmmol/L PBS(NaCl 0.2mol/L)緩沖液洗滌離子柱2000mL (2倍柱床體積)，直到紫外吸收值降到基線，收集的穿透峰為最終純化液(批號S3)。收集結(jié)束后，用lmol/L NaCl沖洗離子柱3000mL(3柱床體積)進行再生處理，流速3cm/h。
[0027]實施例2
[0028]使用AKTApilot自動層析設(shè)備將2000mL乙腦疫苗濃縮液經(jīng)過BPG200層析柱，Sepharose 4Fast Flow凝膠過濾層析,紫外檢測波長280nm,流速為6cm/h,流動相為ρΗ7.4的lOmmol/L PBS (NaCl 0.3mol/L)，收集第一個吸收峰，即乙腦病毒蛋白初步純化液。再用ρΗ7.4 的 10mmol /T, PBS (NaCl 0.3mol/L)平衡 QSepharose Fast Flow 層析柱至紫外、電導(dǎo)平衡，流速3cm/h。然后將初步純化液按2倍柱床體積(2000mL)加載到Q Sepharose FastFlow層析介質(zhì)中，流速為2cm/h,宿主DNA牢固吸附在Q Sepharose Fast Flow層析介質(zhì)上，而乙腦病毒蛋白與離子交換介質(zhì)的結(jié)合位點被緩沖液中的離子取代，直接穿透，紫外檢測波長280nm，收集吸收峰，當(dāng)樣品全部加載后，繼續(xù)用ρΗ7.4的lOmmol/LPBS (NaCl 0.3mol/L)緩沖液洗滌離子柱2000mL(2倍柱床體積)，直到紫外吸收值降到基線，收集的穿透峰為最終純化液(批號S4)。收集結(jié)束后，用lmol/L NaCl沖洗離子柱3000mL(3柱床體積)進行再生處理，流速3cm/h。
[0029]實施例3
[0030]使用AKTApilot自動層析設(shè)備將2000mL乙腦疫苗濃縮液經(jīng)過BPG200層析柱，Sepharose 4Fast Flow凝膠過濾層析,紫外檢測波長280nm,流速為6cm/h,流動相為ρΗ7.4的lOmmol/L PBS (NaCl 0.4mol/L)，收集第一個吸收峰，即乙腦病毒蛋白初步純化液。再用pH7.4的10mmol/L PBS (NaCl 0.4mol/L)平衡CaptoQ層析柱至紫外、電導(dǎo)平衡,流速3cm/h。然后將初步純化液按2倍柱床體積(2000mL)加載到Capto Q層析介質(zhì)中，流速為2cm/h，宿主DNA牢固吸附在Capto Q層析介質(zhì)上,而乙腦病毒蛋白與離子交換介質(zhì)的結(jié)合位點被緩沖液中的離子取代，直接穿透，紫外檢測波長280nm，收集吸收峰，當(dāng)樣品全部加載后，繼續(xù)用ρΗ7.4的lOmmol/L PBS (`NaCl 0.4mol/L)緩沖液洗滌離子柱2000mL(2倍柱床體積)，直到紫外吸收值降到基線，收集的穿透峰為最終純化液(批號S5)。收集結(jié)束后，用lmol/LNaCl沖洗離子柱3000mL(3柱床體積)進行再生處理，流速3cm/h。
[0031]實施例4
[0032]使用AKTApilot自動層析設(shè)備將2000mL乙腦疫苗濃縮液經(jīng)過BPG200層析柱，Sepharose 6Fast Flow凝膠過濾層析,紫外檢測波長280nm,流速為6cm/h,流動相為ρΗ7.6的lOmmol/L PBS (NaCl 0.5mol/L)，收集第一個吸收峰，即乙腦病毒蛋白初步純化液(批號 S6)。再用 ρΗ7.6 的 10mmol /T, PBS (NaCl 0.5mol/L)平衡 Q Sepharose Fast Flow 層析柱至紫外、電導(dǎo)平衡，流速3cm/h。然后將初步純化液按2倍柱床體積(2000mL)加載到QSepharose Fast Flow層析介質(zhì)中，流速為2cm/h,宿主DNA牢固吸附在Q Sepharose FastFlow層析介質(zhì)上，而乙腦病毒蛋白與離子交換介質(zhì)的結(jié)合位點被緩沖液中的離子取代，直接穿透，紫外檢測波長280nm,收集吸收峰，當(dāng)樣品全部加載后,繼續(xù)用pH7.6的IOmmol/LPBS(NaCl 0.5mol/L)緩沖液洗滌離子柱2000mL(2倍柱床體積)，直到紫外吸收值降到基線，收集的穿透峰為最終純化液(批號S7)。收集結(jié)束后，用lmol/L NaCl沖洗離子柱3000mL(3柱床體積)進行再生處理，流速3cm/h。
[0033]實施例5[0034]使用AKTApilot自動層析設(shè)備將2000mL乙腦疫苗濃縮液經(jīng)過BPG200層析柱，Sepharose 6Fast Flow凝膠過濾層析,紫外檢測波長280nm,流速為6cm/h,流動相為ρΗ7.8的lOmmol/L PBS (NaCl 0.6mol/L)，收集第一個吸收峰，即乙腦病毒蛋白初步純化液。再用ρΗ7.8的10mmol/L PBS (NaCl 0.6mol/L)平衡CaptoQ層析柱至紫外、電導(dǎo)平衡,流速3cm/h。然后將初步純化液按2倍柱床體積(2000mL)加載到Capto Q層析介質(zhì)中，流速為2cm/h，宿主DNA牢固吸附在Capto Q層析介質(zhì)上,而乙腦病毒蛋白與離子交換介質(zhì)的結(jié)合位點被緩沖液中的離子取代，直接穿透，紫外檢測波長280nm，收集吸收峰，當(dāng)樣品全部加載后，繼續(xù)用ρΗ7.8的lOmmol/L PBS (NaCl 0.6mol/L)緩沖液洗滌離子柱2000mL(2倍柱床體積)，直到紫外吸收值降到基線，收集的穿透峰為最終純化液(批號S8)。收集結(jié)束后，用lmol/LNaCl沖洗離子柱3000mL(3柱床體積)進行再生處理，流速3cm/h。
[0035]將S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、S8分別進行抗原含量、DNA殘留量檢測。檢測數(shù)據(jù)見表1，DNA雜交膜見附圖4，層析圖譜見附圖1。
[0036]表1:S1~S8抗原含量、DNA殘留量檢測結(jié)果
[0037]
【權(quán)利要求】
1.一種利用陰離子交換層析去除乙腦疫苗制品中殘留DNA的方法，其特征在于:將乙腦疫苗濃縮液凝膠過濾層析所獲得的初步純化液進行陰離子交換層析，使DNA牢固吸附在離子交換介質(zhì)上而乙腦病毒蛋白直接穿透，從而達到去除宿主DNA的目的，具體步驟為: 將乙腦疫苗濃縮液經(jīng)過BPG200層析柱，Sepharose 4Fast Flow或Sepharose6FastFlow凝膠過濾層析，紫外檢測波長280nm,流速為6cm/h,流動相為pH7.4的10mmol/LPBS (NaCl 0.2-0.6mol/L)，收集第一個吸收峰，即乙腦病毒蛋白初步純化液； 再用ρΗ7.2-7.8，的IOmmoI/L PBS (NaCl 0.2-0.6mol/L)平衡陰離子層析柱至紫外、電導(dǎo)平衡，流速3cm/h ； 然后將初步純化液按2倍柱床體積加載到陰離子層析介質(zhì)中，流速為2cm/h，宿主DNA牢固吸附在陰離子層析介質(zhì)上，而乙腦病毒蛋白與離子交換介質(zhì)的結(jié)合位點被緩沖液中的離子取代，直接穿透，紫外檢測波長280nm，收集吸收峰，當(dāng)樣品全部加載后，繼續(xù)用IOmmoI/L PBS (NaCl 0.2-0.6mol/L)緩沖液洗滌離子柱2倍柱床體積，直到紫外吸收值降到基線，收集的穿透峰為最終純化液。
2.按照權(quán)利要求1所述的利用陰離子交換層析去除乙腦疫苗制品中殘留DNA的方法，其特征在于優(yōu)選的具體步驟為: 使用AKTApilot自動層析設(shè)備將2000mL乙腦疫苗濃縮液(批號SI)經(jīng)過BPG200層析柱，Sepharose 4Fast Flow凝膠過濾層析,紫外檢測波長280nm,流速為6cm/h,流動相為PH7.2的10mmol/L PBS (NaCl 0.2mol/L)，收集第一個吸收峰，即乙腦病毒蛋白初步純化液(批號S2)；
再用 pH7.2 的 10mmol /T, PBS (NaCl 0.2mol/L)平衡 DEAE Sepharose Fast Flow 層析柱(柱床體積1000mL)至紫外、電導(dǎo)平衡,流速3cm/h ； 然后將初步純化液按2倍柱床體積(200`0mL)加載到DEAE Sepharose Fast Flow層析介質(zhì)中，流速為2cm/h,宿主DNA牢固吸附在DEAE Sepharose Fast Flow層析介質(zhì)上,而乙腦病毒蛋白與離子交換介質(zhì)的結(jié)合位點被緩沖液中的離子取代，直接穿透，紫外檢測波長280nm，收集吸收峰，當(dāng)樣品全部加載后，繼續(xù)用ρΗ7.2的lOmmol/L PBS (NaCl 0.2mol/L)緩沖液洗滌離子柱2000mL(2倍柱床體積)，直到紫外吸收值降到基線，收集的穿透峰為最終純化液(批號S3)； 收集結(jié)束后，用lmol/L NaCl沖洗離子柱3000mL(3柱床體積)進行再生處理，流速3cm/h。
3.按照權(quán)利要求1所述的利用陰離子交換層析去除乙腦疫苗制品中殘留DNA的方法，其特征在于優(yōu)選的具體步驟為: 使用AKTApilot自動層析設(shè)備將2000mL乙腦疫苗濃縮液經(jīng)過BPG200層析柱，Sepharose 4Fast Flow凝膠過濾層析,紫外檢測波長280nm,流速為6cm/h,流動相為ρΗ7.4的IOmmoI/L PBS (NaCl 0.3mol/L)，收集第一個吸收峰，即乙腦病毒蛋白初步純化液；
再用 ρΗ7.4 的 10mmol/L PBS (NaCl 0.3mol/L)平衡 Q Sepharose Fast Flow 層析柱至紫外、電導(dǎo)平衡，流速3cm/h ； 然后將初步純化液按2倍柱床體積(2000mL)加載到Q Sepharose Fast Flow層析介質(zhì)中，流速為2cm/h,宿主DNA牢固吸附在Q Sepharose Fast Flow層析介質(zhì)上,而乙腦病毒蛋白與離子交換介質(zhì)的結(jié)合位點被緩沖液中的離子取代，直接穿透，紫外檢測波長280nm，收集吸收峰，當(dāng)樣品全部加載后，繼續(xù)用PH7.4的lOmmol/L PBS (NaCl 0.3mol/L)緩沖液洗滌離子柱2000mL(2倍柱床體積)，直到紫外吸收值降到基線，收集的穿透峰為最終純化液(批號S4)； 收集結(jié)束后，用lmol/L NaCl沖洗離子柱3000mL(3柱床體積)進行再生處理，流速3cm/h。
4.按照權(quán)利要求1所述的利用陰離子交換層析去除乙腦疫苗制品中殘留DNA的方法，其特征在于優(yōu)選的具體步驟為: 使用AKTApilot自動層析設(shè)備將2000mL乙腦疫苗濃縮液經(jīng)過BPG200層析柱，Sepharose 4Fast Flow凝膠過濾層析,紫外檢測波長280nm,流速為6cm/h,流動相為ρΗ7.4的IOmmoI/L PBS (NaCl 0.4mol/L)，收集第一個吸收峰，即乙腦病毒蛋白初步純化液； 再用ρΗ7.4的10mmol/L PBS (NaCl 0.4mol/L)平衡Capto Q層析柱至紫外、電導(dǎo)平衡，流速3cm/h ； 然后將初步純化液按2倍柱床體積(2000mL)加載到Capto Q層析介質(zhì)中，流速為2cm/h，宿主DNA牢固吸附在Capto Q層析介質(zhì)上,而乙腦病毒蛋白與離子交換介質(zhì)的結(jié)合位點被緩沖液中的離子取代，直 接穿透，紫外檢測波長280nm，收集吸收峰，當(dāng)樣品全部加載后，繼續(xù)用ρΗ7.4的lOmmol/L PBS (NaCl0.4mol/L)緩沖液洗滌離子柱2000mL (2倍柱床體積)，直到紫外吸收值降到基線，收集的穿透峰為最終純化液(批號S5)； 收集結(jié)束后，用lmol/L NaCl沖洗離子柱3000mL(3柱床體積)進行再生處理，流速3cm/h。
5.按照權(quán)利要求1所述的利用陰離子交換層析去除乙腦疫苗制品中殘留DNA的方法，其特征在于優(yōu)選的具體步驟為: 使用AKTApilot自動層析設(shè)備將2000mL乙腦疫苗濃縮液經(jīng)過BPG200層析柱，Sepharose 6Fast Flow凝膠過濾層析,紫外檢測波長280nm,流速為6cm/h,流動相為ρΗ7.6的lOmmol/L PBS (NaCl 0.5mol/L)，收集第一個吸收峰，即乙腦病毒蛋白初步純化液(批號S6)；
再用 ρΗ7.6 的 10mmol/L PBS (NaCl 0.5mol/L)平衡 Q Sepharose Fast Flow 層析柱至紫外、電導(dǎo)平衡，流速3cm/h ； 然后將初步純化液按2倍柱床體積(2000mL)加載到Q Sepharose Fast Flow層析介質(zhì)中，流速為2cm/h,宿主DNA牢固吸附在Q Sepharose Fast Flow層析介質(zhì)上,而乙腦病毒蛋白與離子交換介質(zhì)的結(jié)合位點被緩沖液中的離子取代，直接穿透，紫外檢測波長280nm，收集吸收峰，當(dāng)樣品全部加載后，繼續(xù)用PH7.6的lOmmol/L PBS (NaCl 0.5mol/L)緩沖液洗滌離子柱2000mL(2倍柱床體積)，直到紫外吸收值降到基線，收集的穿透峰為最終純化液(批號S7)； 收集結(jié)束后，用lmol/L NaCl沖洗離子柱3000mL(3柱床體積)進行再生處理，流速3cm/h。
6.按照權(quán)利要求1所述的利用陰離子交換層析去除乙腦疫苗制品中殘留DNA的方法，其特征在于優(yōu)選的具體步驟為: 使用AKTApilot自動層析設(shè)備將2000mL乙腦疫苗濃縮液經(jīng)過BPG200層析柱，Sepharose 6Fast Flow凝膠過濾層析,紫外檢測波長280nm,流速為6cm/h,流動相為ρΗ7.8的lOmmol/L PBS(NaCl 0.6mol/L)，收集第一個吸收峰，即乙腦病毒蛋白初步純化液； 再用ρΗ7.8的IOmmoI/L PBS (NaCl 0.6mol/L)平衡Capto Q層析柱至紫外、電導(dǎo)平衡，流速3cm/h ； 然后將初步純化液按2倍柱床體積(2000mL)加載到Capto Q層析介質(zhì)中，流速為2cm/h，宿主DNA牢固吸附在Capto Q層析介質(zhì)上,而乙腦病毒蛋白與離子交換介質(zhì)的結(jié)合位點被緩沖液中的離子取代，直接穿透，紫外檢測波長280nm，收集吸收峰，當(dāng)樣品全部加載后，繼續(xù)用PH7.8的lOmmol/L PBS (NaCl0.6mol/L)緩沖液洗滌離子柱2000mL (2倍柱床體積)，直到紫外吸收值降到基線，收集的穿透峰為最終純化液(批號S8)； 收集結(jié)束后，用lmol/L NaCl沖洗離子柱3000mL(3柱床體積)進行再生處理，流速3cm/h。
【文檔編號】A61K39/12GK103768590SQ201210398685
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2012年10月18日 優(yōu)先權(quán)日:2012年10月18日
【發(fā)明者】高軍, 白珠穆, 李旭, 李慶岸, 杜鵬, 于海 申請人:遼寧成大生物股份有限公司