專利名稱：一種防治鴨呼腸孤病毒病的精制蛋黃抗體復(fù)合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛋黃抗體復(fù)合物及制備方法，具體是涉及一種含姬松茸多糖的防治鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
鴨呼腸孤病毒病是20世紀(jì)90年代在廣東、福建、河南等地流行開來的一種新型高發(fā)病率、高死亡率的急性烈性鴨傳染病，以腿軟、喘氣為主要癥狀，以肝臟不規(guī)則壞死有白色斑點、脾臟腫大呈黑紫色斑駁樣、腎臟和脾臟出血等為主要病理變化。鴨呼腸孤病毒病主要感染7日齡 45日齡的雛番鴨，發(fā)病率為20% 100%，死亡率為10% 95%以上。目前該病呈世界性分布，涉及的發(fā)病鴨群廣泛，給各養(yǎng)鴨戶造成了重大的經(jīng)濟損失和嚴(yán)重的危害。 對病鴨進行剖檢發(fā)現(xiàn)在發(fā)病初期表現(xiàn)肝臟腫大，肝臟表面有大量白色針尖大小壞死點，脾臟也有白色壞死點；中后期則出現(xiàn)心包炎。目前采用的防治方法是在發(fā)病初期治療時主要以含有黃芪多糖、利巴韋林的抗病毒藥物(如克抗清、鴨泰克等)和保肝護腎藥為主；在中后期治療上添加抗繼發(fā)感染的藥物(如力通、泰力特等)。抗生素治療家禽疾病會產(chǎn)生藥物殘留，食用此類家禽后會對人體造成一定的危害，另外根據(jù)臨床反映，鴨呼腸孤病毒病滅活疫苗、高免血清對該病有很好的改善作用，因此需要一種新的藥物是需要解決的技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種鴨呼腸孤病毒病的精制蛋黃抗體復(fù)合物及其制備方法，以更快捷、安全、低廉的治療鴨呼腸孤病毒病。為實現(xiàn)本發(fā)明的目的所采用的技術(shù)方案是一種防治鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物，其特征在于主要由鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體和姬松茸多糖所組成。所述蛋黃抗體與姬松茸多糖干物質(zhì)的質(zhì)量比是4:1。一種防治鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟( I)蜂膠佐劑滅活苗的制備a.滅活病毒懸液的制備用冷凍保存的鴨呼腸孤病毒解凍稀釋后接種11日齡SPF番鴨鴨胚，24h死亡后采集鴨胚尿囊液，滅活，然后置低溫下冰箱保存?zhèn)溆?；b.蜂膠佐劑的制備將固體蜂膠I份磨碎溶解于4份乙醇中，置室溫下浸潰24h，然后在低溫下冷卻，2500r/min離心lOmin，取上清液，即為純化的蜂膠乙醇浸提液；根據(jù)蜂膠的純度，計算出其中干物質(zhì)的含量，制成蜂膠佐劑；c.蜂膠佐劑滅活苗的制備將步驟a制備的滅活病毒懸液與步驟b制備的蜂膠佐劑按1:1 (V/V)混合，攪拌均勻即可；(2)制備高免雞蛋選擇健康高產(chǎn)蛋雞，將步驟(I)制備的蜂膠佐劑滅活苗免疫健康高產(chǎn)蛋雞，收集免疫后高產(chǎn)蛋雞的雞蛋，即為鴨呼腸孤病毒高免雞蛋；(3)制備精制蛋黃抗體復(fù)合物a.分離蛋清蛋黃
將上述步驟(2)制備的高免雞蛋用清水洗凈，再用乙醇擦洗，晾干，送入蛋清蛋黃分離機進行蛋黃分離；b.制備精制蛋黃抗體取I份步驟(3)_a所分離的蛋黃加2份醋酸緩沖液，用酸調(diào)pH至4. 8 ;按每毫升稀釋腹水加IluL辛酸的比例在室溫攪拌下逐滴加入辛酸，于30min內(nèi)加完，低溫下靜置2h，然后以10000r/min的轉(zhuǎn)速離心30min,棄沉淀；上清液經(jīng)125 μ m尼龍篩過濾后,加入1/10體積的O. 01mol/l的PBS，用堿調(diào)pH至7. 2 ;將40%甲醛溶液與該上清液混合，使甲醛的終濃度達到O. 1% (V/V)，充分?jǐn)嚢杈鶆?；c.制備精制蛋黃抗體復(fù)合物在步驟b所制備的精制蛋黃抗體中加入姬松茸多糖干粉，加入保護劑，分裝凍干，檢驗合格，包裝入庫即可。上述低溫為4°C。上述步驟(I) -b中的蜂膠佐劑的濃度為30mg/mL。上述步驟(I) _b中的乙醇濃度為95%。上述步驟(3) -a中的乙醇濃度為75%。上述步驟(3) -b中的醋酸緩沖液為pH是5. O的O. 06mol/l醋酸緩沖液。本發(fā)明的原理為姬松茸多糖具有抗癌生物功能、增強機體免疫功能，同時對肝腎具有保護作用，可長期服用；將姬松茸多糖與精致蛋黃抗體配伍將大大提升畜禽免疫力，增強對疾病的抵抗力，利于對疾病的防治。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是(I)制備的鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物相比一般的精制蛋黃抗體，在純度、安全性和穩(wěn)定性上，二者類似，但是精制蛋黃抗體復(fù)合物較精制蛋黃抗體具有更強的保護效果和治療效果。(2)所加入的姬松茸多糖不僅具有強大的提升免疫力的作用，還具有修復(fù)肝臟損傷，促進肝功能恢復(fù)的作用。(3)本發(fā)明所提供的制備方法安全、價格低廉，適于大規(guī)模生產(chǎn)。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
實施例一種防治鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物，其特征在于主要由鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體和姬松茸多糖所組成。所述蛋黃抗體與姬松茸多糖干物質(zhì)的質(zhì)量比是4:1。一種防治鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟( I)蜂膠佐劑滅活苗的制備a.滅活病毒懸液的制備
用冷凍保存的鴨呼腸孤病毒解凍稀釋后接種11日齡SPF番鴨鴨胚，24h死亡后采集鴨胚尿囊液，滅活，然后置低溫下冰箱保存?zhèn)溆?；b.蜂膠佐劑的制備將固體蜂膠I份磨碎溶解于4份乙醇中，置室溫下浸潰24h，然后在低溫下冷卻，2500r/min離心lOmin，取上清液，即為純化的蜂膠乙醇浸提液；根據(jù)蜂膠的純度，計算出其中干物質(zhì)的含量，制成蜂膠佐劑；c.蜂膠佐劑滅活苗的制備將步驟a制備的滅活病毒懸液與步驟b制備的蜂膠佐劑按I: I (V/V)混合，攪拌均勻即可；(2)制備高免雞蛋選擇健康高產(chǎn)蛋雞，將步驟(I)制備的蜂膠佐劑滅活苗免疫健康高產(chǎn)蛋雞，收集免疫后高產(chǎn)蛋雞的雞蛋，即為鴨呼腸孤病毒高免雞蛋；(3)制備精制蛋黃抗體復(fù)合物a.分離蛋清蛋黃將上述步驟(2)制備的高免雞蛋用清水洗凈，再用乙醇擦洗，晾干，送入蛋清蛋黃分離機進行蛋黃分離；b.制備精制蛋黃抗體取I份步驟(3)_a所分離的蛋黃加2份醋酸緩沖液，用酸調(diào)pH至4. 8 ;按每毫升稀釋腹水加IluL辛酸的比例在室溫攪拌下逐滴加入辛酸，于30min內(nèi)加完，低溫下靜置2h，然后以10000r/min的轉(zhuǎn)速離心30min,棄沉淀；上清液經(jīng)125 μ m尼龍篩過濾后,加入1/10體積的O. 01mol/l的PBS，用堿調(diào)pH至7. 2 ;將40%甲醛溶液與該上清液混合，使甲醛的終濃度達到O. 1% (V/V)，充分?jǐn)嚢杈鶆?；c.制備精制蛋黃抗體復(fù)合物在步驟b所制備的精制蛋黃抗體中加入姬松茸多糖干粉，加入保護劑，分裝凍干，檢驗合格，包裝入庫即可。上述的低溫為4°C。上述步驟(I) -b中的蜂膠佐劑的濃度為30mg/mL。上述步驟(I) _b中的乙醇濃度為95%。上述步驟(3) -a中的乙醇濃度為75%。上述步驟(3) -b中的醋酸緩沖液為pH是5. O的O. 06mol/l醋酸緩沖液。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾 也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。
權(quán)利要求
1.一種防治鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物，其特征在于它主要由鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體和姬松茸多糖組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種防治鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物，其特征在于所述蛋黃抗體與姬松茸多糖干物質(zhì)的質(zhì)量比是4: I。
3.一種防治鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟 (1)蜂膠佐劑滅活苗的制備 a.滅活病毒懸液的制備 用冷凍保存的鴨呼腸孤病毒解凍稀釋后接種11日齡SPF番鴨鴨胚，24h死亡后采集鴨胚尿囊液，滅活，然后置低溫下冰箱保存?zhèn)溆茫? b.蜂膠佐劑的制備 將固體蜂膠I份磨碎溶解于4份乙醇中，置室溫下浸潰24h，然后在低溫下冷卻，2500r/min離心lOmin，取上清液，即為純化的蜂膠乙醇浸提液；根據(jù)蜂膠的純度，計算出其中干物質(zhì)的含量，制成蜂膠佐劑； c.蜂膠佐劑滅活苗的制備 將步驟a制備的滅活病毒懸液與步驟b制備的蜂膠佐劑按1:1 (V/V)混合，攪拌均勻即可； (2)制備高免雞蛋 選擇健康高產(chǎn)蛋雞，將步驟(I)制備的蜂膠佐劑滅活苗免疫健康高產(chǎn)蛋雞，收集免疫后高產(chǎn)蛋雞的雞蛋，即為鴨呼腸孤病毒高免雞蛋； (3)制備精制蛋黃抗體復(fù)合物 a.分離蛋清蛋黃 將上述步驟(2)制備的高免雞蛋用清水洗凈，再用乙醇擦洗，晾干，送入蛋清蛋黃分離機進行蛋黃分離； b.制備精制蛋黃抗體 取I份步驟(3) -a所分離的蛋黃加2份醋酸緩沖液，用酸調(diào)pH至4. 8 ;按每毫升稀釋腹水加IluL辛酸的比例，在室溫攪拌下逐滴加入辛酸，于30min內(nèi)加完，低溫下靜置2h，然后以10000r/min的轉(zhuǎn)速離心30min,棄沉淀；上清液經(jīng)125 μ m尼龍篩過濾后,加入1/10體積的O. 01mol/l的PBS，用堿調(diào)pH至7. 2 ;將40%甲醛溶液與該上清液混合，使甲醛的終濃度達到O. 1% (V/V)，充分?jǐn)嚢杈鶆颍? c.制備精制蛋黃抗體復(fù)合物 在步驟b所制備的精制蛋黃抗體中加入姬松茸多糖干粉，加入保護劑，分裝凍干，檢驗合格，包裝入庫即可。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種防治鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物的制備方法，其特征在于所述低溫為4°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種防治鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物的制備方法，其特征在于所述步驟(I) -b中的蜂膠佐劑的濃度為30mg/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種防治鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物的制備方法，其特征在于所述步驟(I) -b中的乙醇濃度為95%。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種防治鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物的制備方法，其特征在于所述步驟(3) -a中的乙醇濃度為75%。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種防治鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物的制備方法，其特征在于所述步驟(3) -b中的醋酸緩沖液為pH是5. O的O. 06mol/l醋酸緩沖液。·
全文摘要
本發(fā)明公開了一種防治鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物及其制備方法，所述復(fù)合物主要由鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體和姬松茸多糖所組成；所述蛋黃抗體與姬松茸多糖干物質(zhì)的質(zhì)量比是4:1。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是(1)制備的鴨呼腸孤病毒病精制蛋黃抗體復(fù)合物相比一般的精制蛋黃抗體，在純度、安全性和穩(wěn)定性上，二者類似，但是精制蛋黃抗體復(fù)合物較精制蛋黃抗體具有更強的保護效果和治療效果。(2)所加入的姬松茸多糖不僅具有強大的提升免疫力的作用，還具有修復(fù)肝臟損傷，促進肝功能恢復(fù)的作用。
文檔編號A61P31/14GK102872460SQ201210372350
公開日2013年1月16日 申請日期2012年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月29日
發(fā)明者胡思科, 王建, 王猛, 王勇 申請人:天津市中升挑戰(zhàn)生物工程有限公司