專利名稱：一種發(fā)酵法提高人參果總皂苷含量的制備技術(shù)及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一項用發(fā)酵法提高人參果總皂苷的含量，將人參或西洋參鮮果漿發(fā)酵后，經(jīng)高速離心得發(fā)酵清液，離心渣再經(jīng)沸水動態(tài)攪拌煮燙，離心取清液，二液合并，用混合型大孔樹脂吸附皂苷，用離子交換樹脂去除重金屬的方法。其主要質(zhì)量特征是采用發(fā)酵法得到的人參果總皂苷經(jīng)高效液相色譜法檢測人參果總皂苷大于70.0% HPLC，其中人參皂苷Re 大于 48. 0% HPLC0 收率大于 5. 8%0。
背景技術(shù)：
人參果皂苷來源于五加科植物人參或西洋參成熟鮮果實的提取物，已發(fā)現(xiàn)的人參、西洋參活性成分主要有皂苷、人參多糖、揮發(fā)油、氨基酸和多肽等幾大類。具有提高機體免疫力、抗衰老、促進學(xué)習(xí)與記憶功能、解毒、抗菌等多種生理作用，對心血管疾病、骨質(zhì)疏松、腫瘤、炎癥以及消化道潰瘍等疾病具有良好功效。人參果提取物具有顯著降血糖和減肥作用， 主要成分人參皂苷Re可顯著改善葡萄糖耐量。此外，還可以明顯維持胰島素水平、體重、攝食量和血膽固醇水平。人參皂苷又分人參二醇苷(A型)、人參三醇苷(B型)及齊墩果酸型皂苷(C型)，其中人參皂苷Re屬于人參三醇苷，具有改善學(xué)習(xí)記憶力作用，具有抗休克作用，對腦缺血再灌注和心肌缺血再灌注損傷的保護作用，對帕金森病患者的保護作用，具有體外抗氧化作用，對老年癡呆癥具有治療作用，對烏頭堿所致心肌細胞損傷的保護作用，具有抑制中樞神經(jīng)，促進DNA、RNA、蛋白質(zhì)的合成作用，通過對胰島素的調(diào)節(jié)具有降血糖作用；Rb2具有抑制中樞神經(jīng)，促進DNA、RNA合成作用；降低細胞內(nèi)鈣，抗氧化，清除體內(nèi)自由基和改善心肌缺血再灌注損傷等作用；促進刺激副腎皮質(zhì)荷爾蒙分泌作用；此3可增強心肌功能，保護人體自身免疫系統(tǒng)，可用于治療各種不同原因引起的心肌收縮性衰竭；Re有抑制中樞神經(jīng)，抑制DNA合成作用，促進血清蛋白質(zhì)合成作用；Rd具有促進副腎皮質(zhì)荷爾蒙分泌作用；1^3對腫瘤細胞的抑制，先通過抑制腫瘤新血管生成，此作用在小劑量應(yīng)用時即可產(chǎn)生，最適合預(yù)防腫瘤的發(fā)生、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，并且無其他抗癌藥常見的毒副作用，完全可以長期服用，在較大劑量時還能抑制腫瘤細胞的增殖、浸潤、誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡。因此，Rg3常和放療、化療藥同時使用，可明顯增強放、化療效果，大大減輕其毒副作用，提高患者生活質(zhì)量；Rh2具有抑制癌細胞向其它器官轉(zhuǎn)移，增強機體免疫力，快速恢復(fù)體質(zhì)的作用；對癌細胞具有明顯的抗轉(zhuǎn)移作用，可配合手術(shù)服用增強手術(shù)后傷口的愈合及體力的恢復(fù)。近年來，隨著癌癥發(fā)病率的增高，人參皂苷Rg3的抗腫瘤功效越來越被人們所重視，人們不斷地研究將人參皂苷Rg3應(yīng)用做保健食品及藥品的原料，并用于抗癌藥物的輔助治療。以往以人參鮮果漿為原料，未經(jīng)過發(fā)酵技術(shù)直接采用沸水燙煮方法提取的人參果總皂苷及單體皂苷Re的含量均低，在實驗中發(fā)現(xiàn)將鮮人參果漿經(jīng)發(fā)酵后，取發(fā)酵液與果渣經(jīng)燙煮液合并上混合型大孔樹脂柱，以65— 70%乙醇解析，制得的人參果總皂苷及單體皂苷Re的含量經(jīng)高效液相色譜法檢測與人參鮮果漿未經(jīng)發(fā)酵制得的人參果總皂苷及Re的含量均有很大程度的提高，但必須掌握人參果漿發(fā)酵的程度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是以人參或西洋參鮮果漿為原料，采用發(fā)酵法結(jié)合混合型大孔樹脂吸附皂苷及離子交換樹脂脫色及去重金屬方法來提高人參果總皂苷含量的方法。實用本發(fā)明所采用的技術(shù)方案，其詳細制備工藝如下
取人參鮮果漿(包括人參果肉、果皮及果汁)，裝在復(fù)合袋中，置于陰暗避光處，于27—30°C下密封發(fā)酵至果漿發(fā)出酸、微臭味，果漿微冒出氣泡，果肉沉于底部，果皮浮在上層，果汁于中層，上層微微出現(xiàn)白霜，測其PH值4一6，發(fā)酵時間3 —10天。然后，將發(fā)酵后的果漿充分攪拌，使人參果肉、果皮、果汁均勻分布，取發(fā)酵后的均勻果漿用高速離心機離心，離心機轉(zhuǎn)速不低于3000轉(zhuǎn)/分鐘，取得第一遍發(fā)酵清液，離心渣加入沸水中動態(tài)攪拌下燙煮O. 5-1小時，燙煮液經(jīng)高速離心取清液，合并二液，靜置冷卻，過濾取清液，上大孔樹脂柱，控制濾液流經(jīng)樹脂柱的流速為2 4BV/小時，先用水洗脫至流出液清亮無色，再以65 70%的乙醇解析，收集解析液連續(xù)過陰離子樹脂柱脫色，再過陽離子樹脂柱去重金屬，走柱液經(jīng)O. 2微米濾膜過濾，濾液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度I. 08-1. 12(70°C)，用微波干燥箱減壓 干燥，得干浸膏，粉碎至100目細粉，高效液相色譜法檢測其含量人參果總皂苷大于70. 0%HPLC，其中人參皂苷Re大于48. 0% HPLC?！N發(fā)酵法提高人參果總皂苷含量的制備技術(shù)及方法包括
步驟I、取人參鮮果漿或西洋參鮮果漿，裝在復(fù)合袋中，置于陰暗避光處，于27— 30°C下密封發(fā)酵，發(fā)酵3 —10天。步驟2、將I步發(fā)酵后的人參果漿攪拌均勻，用高速離心機離心得一遍離心清液，離心渣再加至沸水中煮燙O. 5—1小時，離心得二遍離心液。步驟3、將2步兩遍離心液合并，上混合型大孔吸附樹脂柱，流速為2 4BV/小時，先用水洗脫至清亮無色，再用65— 70%的乙醇解析，收集解析液。步驟4、將3步解析液連續(xù)經(jīng)過陰離子樹脂柱進行脫色，在經(jīng)過陽離子樹脂柱去重金屬。步驟5、將4步走柱液過O. 2微米濾膜，濾液回收乙醇，濃縮，干燥，得人參果總皂苷。步驟6、將5步制備的人參果總皂苷用高效液相色譜法檢測含量人參果總皂苷大于70. 0% HPLC，其中人參皂苷Re大于48. 0% HPLC。本發(fā)明是以人參或西洋參新鮮果漿為原料，采用發(fā)酵法結(jié)合DlOl型樹脂和DM130型樹脂組成的混合樹脂進行吸附，采用陰離子交換樹脂脫色、離子交換樹脂去除重金屬制備技術(shù)，提高人參果總皂苷含量。優(yōu)選的，本發(fā)明原料為人參或西洋參鮮果漿(包括果肉、果皮及果汁)。優(yōu)選的，發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵時間為7天。優(yōu)選的，離心渣煮燙時間為O. 5小時。優(yōu)選的，洗脫用的乙醇溶液濃度為70%。優(yōu)選的，混合大孔樹脂為DlOl型樹脂和DM130型樹脂。具體實施方案
本發(fā)明實施例公開了一種發(fā)酵法提高人參果總皂苷含量的制備技術(shù)及方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明當(dāng)中。本發(fā)明的方法已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法進行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案
實施例I :取攪拌均勻的人參果鮮果漿1100ml，用高速離心機離心，取離心清液，離心渣加入8倍量沸水中燙煮O. 5小時，燙煮液冷卻，用高速離心機離心，取離心清液，合并二夜，上DlOl型樹脂和DM130型樹脂的混合樹脂柱，先用水洗脫至清亮無色，再用70%乙醇解析，收集解析液，將解析液過O. 2微米濾膜，濾液減壓濃縮至相對密度I. 08—1. 12 (70°C),濃縮液于80°C真空干燥，真空度-O. 06Mpa,得人參果總皂苷，經(jīng)高效液相色譜法檢測其含量，結(jié)果得出人參果總皂苷35. 88% HPLC，其中人參皂苷Rel9. 09% HPLC，收率4. 8%0。實施例2:取攪拌均勻的人參果鮮果漿，置陰暗避光處，于27°C使之發(fā)酵，果漿發(fā)酵2天，觀察果漿發(fā)酵至有氣泡冒出，發(fā)出酸，果皮和一些輕質(zhì)青果核漂浮在上層，中層為果汁，下層為果肉和一些重質(zhì)青果核，取IlOOml發(fā)酵果漿用高速離心機離心，取離心清液， 離心渣加入8倍量沸水中燙煮O. 5小時，燙煮液冷卻，用高速離心機離心，取離心清液，合并二液，上DlOl型樹脂和DM130型樹脂的混合樹脂柱，先用水洗脫至清亮無色，再用70%乙醇解析，收集解析液，將解析液過O. 2微米濾膜，濾液減壓濃縮至相對密度I. 08 — I. 12(70°C)，濃縮液于80°C真空干燥，真空度-O. 06Mpa，得人參果總皂苷，經(jīng)高效液相色譜法檢測其含量，結(jié)果得出人參果總皂苷=67. 72 % HPLC，其中人參皂苷Re42. 71% HPLC，收率5. 1%0。實施例3 :取攪拌均勻的人參果鮮果漿，置陰暗避光處，于30°C使之發(fā)酵，果漿發(fā)酵7天，待果漿發(fā)酵至有氣泡冒出，發(fā)出酸、微臭味，果皮和一些輕質(zhì)青果核漂浮在上層，中層為果汁，下層為果肉和一些重質(zhì)青果核，取IlOOml發(fā)酵果漿用高速離心機離心，取離心清液，離心渣加入8倍量沸水中燙煮O. 5小時，燙煮液冷卻，用高速離心機離心，取離心清液，合并二液，上DlOl型樹脂和DM130型樹脂的混合樹脂柱，先用水洗脫至清亮無色，再用70%乙醇解析，收集解析液，將解析液過O. 2微米濾膜，濾液減壓濃縮至相對密度I. 08-1. 12 (70°C)，濃縮液于80°C真空干燥，真空度-O. 06Mpa，得人參果總皂苷，經(jīng)高效液相色譜法檢測其含量，結(jié)果得出人參果總皂苷70. 25% HPLC，其中人參皂苷Re48. 71% HPLC，收率
5.8%0。實施例4 :取攪拌均勻的人參果鮮果漿，置陰暗避光處，于30°C使之發(fā)酵，果漿發(fā)酵至7天，待果漿發(fā)酵至有氣泡冒出，發(fā)出酸、微臭味，果皮和一些輕質(zhì)青果核漂浮在上層，中層為果汁，下層為果肉和一些重質(zhì)青果核，取IlOOml發(fā)酵果漿用高速離心機離心，取離心清液，離心渣加入8倍量沸水中燙煮O. 5小時，燙煮液冷卻，用高速離心機離心，取離心清液，合并二液，上DlOl型樹脂柱，先用水洗脫至清亮無色，再用65%乙醇解析，收集解析液，將解析液過O. 2微米濾膜，濾液減壓濃縮至相對密度I. 08—1. 12(70°C)，濃縮液于80°C真空干燥，真空度-O. 06Mpa，得人參果總皂苷，經(jīng)高效液相色譜法檢測其含量，結(jié)果得出人參果總皂苷51. 31 % HPLC，其中人參皂苷Re24. 36% HPLC，收率5. 0%0。實施例5 :取攪拌均勻的人參果鮮果漿，置陰暗避光處，于30°C使之發(fā)酵，果漿發(fā)酵至7天，待果漿發(fā)酵至有氣泡冒出，發(fā)出酸、微臭味，果皮和一些輕質(zhì)青果核漂浮在上層，中層為果汁，下層為果肉和一些重質(zhì)青果核，取IlOOml發(fā)酵果漿用高速離心機離心，取離心清液，離心渣加入8倍量沸水中燙煮O. 5小時，燙煮液冷卻，用高速離心機離心，取離心清液，合并二液，上DlOl型樹脂和DM130型樹脂的混合樹脂柱，先用水洗脫至清亮無色，再用65%乙醇解析，收集解析液，將解析液過O. 2微米濾膜，濾液減壓濃縮至相對密度I. 08—I. 12 (70°C)，濃縮液于80°C真空干燥，真空度_0.06Mpa，得人參果總皂苷，經(jīng)高效液相色譜法檢測其含量，結(jié)果得出人參果總皂苷52. 57 % HPLC，其中人參皂苷Re24. 91% HPLC，收率5. 2%οο實施例6 :取攪拌均勻的人參果鮮果漿，置陰暗避光處，于30°C使之發(fā)酵，果漿發(fā)酵10天，待果漿發(fā)酵至有氣泡冒出，發(fā)出酸、微臭味，果皮和一些輕質(zhì)青果核漂浮在上層，中層為果汁，下層為果肉和一些重質(zhì)青果核，取IlOOml發(fā)酵果漿用高速離心機離心，取離心清液，離心渣加入8倍量沸水中燙煮O. 5小時，燙煮液冷卻，用高速離心機離心，取離心清液，合并二液，上DlOl型樹脂和DM130型樹脂的混合樹脂柱，先用水洗脫至清亮無色，再用70%乙醇解析，收集解析液，將解析液過O. 2微米濾膜，濾液減壓濃縮至相對密度I. 08-
1.12 (70°C)，濃縮液于80°C真空干燥，真空度-O. 06Mpa，得人參果總皂苷，經(jīng)高效液相色譜法檢測其含量，結(jié)果得出人參果總皂苷68. 50% HPLC，其中人參皂苷Re35. 34% HPLC，收率5. 4%0。
以上實施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對本發(fā)明進行若干改進和修飾，這些改進和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種發(fā)酵法提高人參果總皂苷含量的制備技術(shù)及方法 取人參或西洋參鮮果漿(包括人參果肉、果皮及果汁)，裝在復(fù)合袋中，置于陰暗避光處，于27— 30°C下密封發(fā)酵至果漿發(fā)出酸、微臭味，果漿微冒出氣泡，果肉和一些重質(zhì)青果核沉于底部，果皮和一些輕質(zhì)青果核浮在上層，中層為果汁層，上層微微出現(xiàn)白霜，測其PH值4一6，發(fā)酵時間3 —10天，然后，將發(fā)酵后的果漿充分攪拌，使人參果肉、果皮、果汁均勻分布，取發(fā)酵后的均勻果漿用高速離心機離心，離心機轉(zhuǎn)速不低于3000轉(zhuǎn)/分鐘，取得第一遍發(fā)酵清液，離心渣加入沸水中動態(tài)攪拌下燙煮0. 5—1小時，燙煮液經(jīng)高速離心取清液，合并二液，靜置冷卻，過濾取清液，上大孔樹脂柱，控制濾液流經(jīng)樹脂柱的流速為2 4BV/小時，先用水洗脫至流出液清亮無色，再以65 70%的乙醇解析，收集解析液連續(xù)過陰離子樹脂柱脫色，再過陽離子樹脂柱去重金屬，走柱液經(jīng)0. 2微米濾膜過濾，濾液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度I. 08 — I. 12 (70°C)，用微波干燥箱減壓干燥，得干浸膏，粉碎至100目細粉，高效液相色譜法檢測其含量人參果總皂苷大于70. 0% HPLC,其中人參皂苷Re大于48.0% HPLC。
2.權(quán)利要求I所述的以人參或西洋參鮮果漿為原料，經(jīng)過微生物發(fā)酵后可以提高人參果皂苷的總含量。
3.權(quán)利要求I所述的發(fā)酵溫度27—30°C，發(fā)酵時間3—10天，發(fā)酵標準密封狀態(tài)下發(fā)酵果漿發(fā)出酸、微臭味，果漿微冒出氣泡，果肉和一些重質(zhì)青果核沉于底部，果皮和一些輕質(zhì)青果核浮在上層，中層為果汁層，上層微微出現(xiàn)白霜，發(fā)酵后的PH值4一6。
4.權(quán)利要求I所述的取得第一遍發(fā)酵清液必須經(jīng)過攪拌后的均勻果漿經(jīng)高速離心所得，離心機轉(zhuǎn)速3000— 5000轉(zhuǎn)/分鐘，二遍清液為沸水煮燙一遍離心渣0. 5—1小時后經(jīng)高速離心所得。
5.權(quán)利要求I所述的樹脂為含有苯乙烯或二乙烯苯或其類似物之一種或幾種有機高分子聚合物制成的，如DlOl和DM130混合樹脂及陰陽離子交換樹脂。
6.權(quán)利要求I所述的樹脂為DlOl型大孔樹脂和DM130型大孔樹脂的混合樹脂，其混合比例按體積比為1: 1，上柱流速為2 4BV/小時，吸附量為樹脂體積的f 50倍量。
7.權(quán)利要求I所述的洗脫液為65 70%乙醇液，其含水量為30 35%。
8.權(quán)利要求I所述的人參果皂苷用高效液相色譜法檢測其總皂苷含量人參果總皂苷大于70. 0% HPLC，其中人參皂苷Re大于48. 0% HPLC。
全文摘要
本發(fā)明涉及一項以人參果漿或西洋參果漿為原料，采用發(fā)酵技術(shù)結(jié)合混合型大孔樹脂吸附法吸附皂苷及陰離子交換樹脂脫色和陽離子交換樹脂去重金屬的技術(shù)，提高人參果總皂苷含量。其主要質(zhì)量特征是經(jīng)高效液相色譜法檢測含量，結(jié)果得出人參果總皂苷大于70.0%HPLC，其中人參皂苷Re大于48.0%HPLC。收率大于5.8‰。
文檔編號A61K36/258GK102846685SQ20121036030
公開日2013年1月2日 申請日期2012年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月25日
發(fā)明者馮濤, 金愛玉, 白鳳英 申請人:吉林省宏久生物科技股份有限公司