專利名稱：一種高透明度小核菌葡聚糖的制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種葡聚糖的制備方法，特別是涉及到一種高透明度小核菌葡聚糖的提取方法。
背景技術(shù)：
小核菌多糖是由某些半知菌類,主要是小核菌屬(Sclerotium sp.)的某些種產(chǎn)生的胞外多糖，其結(jié)構(gòu)以β-1，3-糖苷鍵連接的聚葡萄糖為主鏈，每三個葡萄糖由β-1，6_糖苷鍵連結(jié)一個葡萄糖為側(cè)鏈的葡聚糖。它具有優(yōu)良的增稠性、假塑性、耐高溫、高鹽及較廣范圍的PH適應性，可廣泛用于石油、油漆、陶瓷、食品等行業(yè)。小核菌葡聚糖具有較強的免疫調(diào)節(jié)活性，近年來研究發(fā)現(xiàn)，小核菌葡聚糖還具有皮膚保濕功效，同時提升皮膚自體的修復能力，顯著增強和恢復組織彈性等功能，可廣泛用于化妝品、沐浴露等日化產(chǎn)品。目前小核菌葡聚糖主要有兩種提取方法，一、將發(fā)酵液用醇類沉淀，干燥得到的固體粉狀粉末，它含有菌絲體，硬葡聚糖成分約占75% ;二、將發(fā)酵液經(jīng)過過濾，除去菌絲體后再沉淀，干燥得到的粉狀固體。無論上述哪種產(chǎn)品，都含有大量的色素等雜志、透明度差，主要用于石油開采等行業(yè)，達不到化妝品、沐浴露等日化行業(yè)的要求，沒有充分發(fā)揮小核菌葡聚糖的功效。在中國專利(CNl204508)中披露了一種化妝品組合物，該組合物包含Α) —種化妝品上可接受的載體；以及Β)0. 05-3.0%(重量，基于整個組合物的重量)的、具有三維交聯(lián)的三股螺旋結(jié)構(gòu)的并且平均分子量為1Χ106-12Χ106的β — 1，3—小核菌葡聚糖。在中國專利(CNlO 1394898 )中披露了一種化妝品或藥物組合物，該組合物含有小核菌葡聚糖，顯示出有利的效果，例如潤濕皮膚或粘膜，并對皮膚具有抗老化和修復效果適合在化妝品行業(yè)使用。在中國專利(CN101487384)中披露了一種利用小核菌多糖發(fā)酵液進行油井堵水的方法，從油井注入的方式依據(jù)發(fā)酵液堵高不堵低的特性進行選擇性封堵，封堵高滲透層，堵水驅(qū)油效果明顯，降低成本，施工安全，減少對地層的污染，可大幅提高原油的采收率。上述三個專利只是披露了小核菌葡聚糖作為一種活性物質(zhì)可以用在化妝品、采油等行業(yè)，未提到小核菌葡聚糖的分離純化方法，尤其是高透明小核菌葡聚糖的提取生產(chǎn)方法。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)中沒有很好的高透明度的小核菌葡聚糖的提取方法的弊端，以及小核菌葡聚糖越來越多的應用，以及化妝品行業(yè)對于生物活性的要求，本發(fā)明提供了一種高透明度小核菌葡聚糖的提取方法，該方法主要是將小核菌發(fā)酵液升溫至70-100°C，后迅速冷卻至室溫，采用二步酶解方法，第一步采用蛋白酶降解發(fā)酵液和菌絲體中的蛋白質(zhì)，第二步采用破壁酶降解小核菌細胞壁，使胞內(nèi)多糖進一步溶出，將提取的小核菌葡聚糖用水復溶，再用活性炭脫色，離心，清液采用O. 5 μ m-5 μ m的膜過濾，得到高透明度小核菌葡聚糖溶液。本發(fā)明所獲得的小核菌葡聚糖具有皮膚保濕功效，同時提升皮膚自體的修復能力，顯著增強和恢復組織彈性等作用，主要用于輕工、醫(yī)藥、化妝品領域。
本發(fā)明所采用的小核菌菌株為從市場上直接購得的標準菌株，如保藏于中國藥用微生物菌種保藏中心，菌株保藏編號=CPCC 400204，及其他市面可見的小核菌標準菌株。本發(fā)明的具體制備方法主要包括發(fā)酵液預處理、酶解、乙醇醇析、純化四部分構(gòu)成，具體步驟如下(I)發(fā)酵液預處理將小核菌發(fā)酵液升溫至70-100 °C,保溫10min-60min,冷卻至室溫備用；(2)酶解2)酶解采用下述方式中的任意一種進行酶解A.用堿性物質(zhì)調(diào)節(jié)預處理發(fā)酵液pH值為7. 5-9. 0，開啟攪拌，加入w/v為O. 01-0. 2%蛋白酶(也就是根據(jù)發(fā)酵液的體積確定加入蛋白酶的重量)，升溫到50-60°C， 反應2-8h，將所得的酶解溶液冷卻至35 °C，用酸性物質(zhì)調(diào)節(jié)pH6. O,然后加入w/v為O. 01-0. 2%破壁酶，繼續(xù)攪拌l_5h，酶解液加熱至80-100°C，保溫20_60min;B.用酸性物質(zhì)調(diào)節(jié)pH6. 0，然后加入w/v為O. 01-0. 2%破壁酶，35_45°C攪拌l_5h，用堿性物質(zhì)調(diào)節(jié)預處理發(fā)酵液PH值為7. 5-9. O,，加入w/v為O. 01-0. 2%蛋白酶，升溫到50-60°C，反應 2-8h，酶解液加熱至 80-100°C，保溫 20_60min;(3)乙醇醇析將步驟(2)中獲得的酶解液冷卻至4_40°C，固液分離，清液加入乙醇，控制溶液中的乙醇濃度在v/v為40%-80%，混合攪拌30-90min，固液分離得小核菌葡聚糖沉淀；(4)純化小核菌葡聚糖用水復溶，控制小核菌葡聚糖濃度w/v為O. 5-3%，加入w/V為O. 05-2%的活性炭，60-100°C保溫20_60min，冷卻至室溫后，3000_6000r/min離心，清液8000-13000r/min再離心，清液采用O. 2 μ m_2 μ m的膜過濾，得到高透明度的小核菌葡聚糖溶液。步驟(I)發(fā)酵液預處理的目的是既可以殺滅小核菌菌體，保證小核菌葡聚糖的安全性；又可以使胞內(nèi)的小核菌葡聚糖盡可能多的溶出，增加小核菌葡聚糖的收率；且由于加熱使蛋白變性的緣故，小核菌菌體更容易與發(fā)酵液分離，減輕固液分離的難度。為了避免降溫時間過長，一般需要采用外置手段，如熱交換器等實現(xiàn)快速降溫，以免降溫時間過長帶來的小核菌發(fā)酵液易褐變，影響產(chǎn)品品質(zhì)的弊端。采用兩步酶解法，即雙酶法的目的I、采用蛋白酶，將發(fā)酵液的蛋白質(zhì)以及結(jié)合蛋白充分的降解，讓降解的氨基酸、肽等通過酒精醇沉留在乙醇溶液中，達到純化小核菌葡聚糖的目的；2、采用破壁酶，降解小核菌的細胞壁，對小核菌胞內(nèi)物質(zhì)二次提取，提高小核菌葡聚糖的得率。步驟(3)醇析的目的采用40-80v/v%的酒精，這樣既可以將目的產(chǎn)物小核菌葡聚糖醇沉下來，又可以使氨基酸、寡糖等雜質(zhì)保留在液相中。通過30-60min的攪拌，使雜質(zhì)充分的溶出，提高小核菌葡聚糖的純度。步驟(4)小核菌葡聚糖復配成O. 5-3%的溶液，溶液的粘度達到300-1800cp，易于離心；采用活性炭處理小核菌葡聚糖，達到脫色的目的，盡可能的保留小核菌葡聚糖天然構(gòu)像，保持其活性；采用二步離心脫除活性炭，采用低速分離設備，脫去大部分活性炭，然后采用高速離心機，徹底的脫除活性炭，而后通過膜過濾，脫除膠體以及不溶性微粒，得到小核菌葡聚糖的產(chǎn)品，這樣既提高了工作效率，又保護了膜過濾設備。
上述工藝過程中，所述酶解過程，采用的是二步酶解方法也就是前述的雙酶法，第一步采用蛋白酶降解發(fā)酵液中的蛋白質(zhì)，第二部采用破壁酶降解小核菌細胞壁，使胞內(nèi)多糖更多的溶出，使非目的產(chǎn)物更多的留在醇水相中。酶解過程采用的蛋白酶可以是木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶中的一種或幾種混合物，也可以是其他中性蛋白酶或堿性蛋白酶或其混合物；使用的堿性物質(zhì)為lmol/L的氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉中的一種或數(shù)種的混合物；使用的酸性物質(zhì)為lmol/L或IOw/v%的蘋果酸、檸檬酸、乙酸、鹽酸、硫酸中的一種或數(shù)種的混合物，優(yōu)選采用蘋果酸、檸檬酸來調(diào)節(jié)溶液的酸堿性，這樣可以 使蘋果酸鹽、檸檬酸鹽通過醇析過程，留在醇水相中，降低小核菌葡聚糖溶液的鹽含量。而本發(fā)明所采用的破壁酶為溶菌酶、纖維素酶、幾丁質(zhì)酶、半纖維素酶中的一種或多種；其中優(yōu)選采用溶菌酶，或者用溶菌酶與其他酶的搭配。主要由于溶菌酶能有效地水解細胞壁的肽聚糖，其作用位點是N-乙酰胞壁酸(NAM)的I位碳原子和N-乙酰葡萄糖胺(NAG)的4位碳原子間的β-I. 4糖苷鍵。作用的結(jié)果大大增加了細胞壁的通透性。與纖維素酶、幾丁質(zhì)酶、半纖維素酶等每協(xié)同作用的結(jié)果，可使細胞內(nèi)容物大量溶出，提高葡聚糖的提取效果。純化過程采用二步脫除溶液中的活性炭。一步采用普通固液分離設備，脫除大部分活性炭；二步采用高速離心機，徹底脫除殘留活性炭。發(fā)明人通過進一步的調(diào)整工藝條件，獲得了最佳的制備方法如下(I)發(fā)酵液預處理將小核菌發(fā)酵液升溫至80_100°C，保溫30_60min，迅速冷卻至
室溫；(2)酶解調(diào)節(jié)預處理發(fā)酵液pH值為7. 5-8. 5，開啟攪拌，加入O. 01-0. 2% (w/v)蛋白酶，升溫到50-60°C，反應4h-6h，將所得的酶解溶液冷卻至35°C，調(diào)節(jié)pH6. 0，然后加入O. 01-0. 2% (w/v)破壁酶，繼續(xù)攪拌2-3h，酶解液加熱至100°C，保溫30min;(3)乙醇醇析酶解液冷卻至4_40°C，固液分離，清液60°C以下真空減壓濃縮至原體積的1/5-1/10，加入乙醇，控制溶液中的乙醇濃度在40-60% (v/v)，混合攪拌30_60min，固液分離得小核菌葡聚糖沉淀；(4)純化小核菌葡聚糖用水復溶，控制小核菌葡聚糖濃度為l-3w/v%，加入O. 5-lw/v%的活性炭,60-100°C下攪拌30_60min,冷卻至室溫后,4000-6000r/min離心,清液10000-13000r/min再離心，清液采用O. 2 μ m_2 μ m的膜過濾，得到高透明度小核菌葡聚
糖溶液。更進一步優(yōu)選為(I)發(fā)酵液預處理將小核菌發(fā)酵液升溫至100°C，保溫30min，冷卻至室溫；(2)酶解用lmol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)預處理發(fā)酵液pH值為8. 0，開啟攪拌，加入O. l%(w/v)蛋白酶，升溫到50°C，反應4h，將所得的酶解溶液冷卻至35°C，用10%的檸檬酸調(diào)節(jié)pH6. 0，然后加入O. 05% (w/v)溶菌酶，繼續(xù)攪拌2-3h，酶解液加熱至100°C，保溫30min;(3)乙醇醇析酶解液冷卻至40°C以下，固液分離，清液加入乙醇，控制溶液中的乙醇濃度在50% (v/v)，混合攪拌30min，固液分離得小核菌葡聚糖；(4)純化小核菌葡聚糖用水復溶，控制小核菌葡聚糖濃度為2%，加入O. 5%的活性炭，1001^: 60min,冷卻至室溫后,4000r/min離心,清液13000r/min再離心,清液采用O. 22 μ m的陶瓷膜過濾，得到高透明度小核菌葡聚糖溶液。
采用上述方法制備獲得的小核菌葡聚糖溶液的澄清度高，澄清度淺于I號比色管。得到小核菌葡聚糖溶液粘度900-1200cp，重均分子量150-500kD，溶液中小核菌葡聚糖的含量為O. 1-2% (w/v), HPLC法測定為單一峰，純度為90%以上。具有明顯皮膚保濕功效，同時提升皮膚自體的修復能力，顯著增強和恢復組織彈性等作用。綜上所述，本發(fā)明所采用的小核菌葡聚糖的制備方法工藝簡單，收率較高，且獲得的葡聚糖純度高，符合化妝品等特殊行業(yè)的要求。動物實驗表明，所獲得的小核菌葡聚糖具有皮膚保濕功效，同時提升皮膚自體的修復能力，顯著增強和恢復組織彈性等作用，主要用于輕工、醫(yī)藥、化妝品領域。


圖I為本發(fā)明獲得的小核菌葡聚糖溶液的紫外吸收譜圖，從小核菌葡聚糖溶液的紫外吸收譜圖可以發(fā)現(xiàn)，溶液在260nm、280nm沒有明顯的吸收峰，證明溶液中不含蛋白質(zhì)、核酸；圖2為本發(fā)明獲得的小核菌葡聚糖溶液的HPLC譜圖，從小核菌葡聚糖溶液的HPLC譜圖可以發(fā)現(xiàn)，溶液在13. 36min有明顯的峰，為小核菌葡聚糖，峰面積在90%以上，其他兩個峰為雜質(zhì)峰，可見溶液中小核菌葡聚糖含量在90% 以上；圖3為本發(fā)明獲得的小核菌葡聚糖溶液的紅外吸收譜圖；從小核菌葡聚糖溶液的紅外吸收譜圖可以發(fā)現(xiàn)，溶液在895cm-l波數(shù)附近有弱的特征吸收峰，表明本品為葡聚糖。
具體實施例方式以下通過實施例進一步詳細說明本發(fā)明高透明度小核菌葡聚糖溶液的制備方法。實施例I取小核菌發(fā)酵液10L，升溫至100°C并攪拌，保溫30min，然后冷卻至室溫。用Imol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)預處理發(fā)酵液pH值為8. O,開啟攪拌，加入O. 1% (w/v)木瓜蛋白酶，升溫到50°C，反應4h，將所得的酶解溶液冷卻至35°C，用10% (w/v)檸檬酸調(diào)節(jié)pH6. O,然后加入O. 05% (w/v)溶菌酶，繼續(xù)攪拌處理2h，酶解液加熱至100°C，保溫30min，冷卻至20°C，4000r/min離心,清液緩緩加入乙醇,控制溶液中的乙醇濃度至50%(v/v),混合攪拌30min,采用三足式離心機離心分離，獲得小核菌葡聚糖沉淀。小核菌葡聚糖沉淀用純凈水復溶，控制小核菌葡聚糖濃度為2% (w/v)，加入O. 5% (w/v)的粉末狀活性炭，100°C保溫60min，冷卻至室溫，采用4000r/min離心,離心清液采用高速離心機13000r/min離心,離心清液采用2μπι的陶瓷膜過濾，得到高透明小核菌葡聚糖溶液4. 2L。所得到小核菌葡聚糖溶液粘度llOOcp，重均分子量326kD，小核菌葡聚糖在溶液中的含量為1% (w/v)。實施例2取小核菌發(fā)酵液10L，升溫至80°C并攪拌，保溫60min用lmol//L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)預處理發(fā)酵液pH值為9. 0，加入O. 1% (w/v)胰蛋白酶，升溫到50°C，反應4h，將所得的酶解溶液冷卻至45°C，用10% (w/v)檸檬酸調(diào)節(jié)pH6.0，然后加入O. 05% (w/v)溶菌酶和纖維素酶的混合酶(w/w=2:1 )，繼續(xù)攪拌處理2h，酶解液加熱至100°C，保溫30min，冷卻至4_20°C，4000r/min離心，清液緩緩加入乙醇，控制溶液中的乙醇濃度至40% (v/v)，混合攪拌30分鐘，采用三足離心機離心分離，獲得小核菌葡聚糖沉淀。小核菌葡聚糖沉淀用純凈水復溶，控制小核菌葡聚糖濃度為1% (w/v)，加入O. 5% (w/v)的粉末狀活性炭，100°C保溫30min，冷卻至室溫，采用4000r/min離心,離心清液采用高速管式離心機13000r/min離心,離心清液采用O. 22 μ m的陶瓷膜過濾，得到高透明小核菌葡聚糖3. 5L溶液。得到小核菌葡聚糖溶液粘度1098cp，重均分子量212kD，小核菌葡聚糖在溶液中的含量為O. 86% (w/v)。實施例3取小核菌發(fā)酵液1L，升溫至100°C并攪拌，保溫30min，然后冷卻至室溫。用10%(w/v)朽1檬酸調(diào)節(jié)pH6. O,然后加入O. 05% (w/v)溶菌酶、幾丁質(zhì)酶、半纖維素酶的混合酶(w/w=2:l 1)，45°C攪拌處理4h，用lmol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)預處理發(fā)酵液pH值為8.0，加Λ O. 1% (w/v)木瓜蛋白酶，升溫到55°C，反應4h，酶解液加熱至100°C，保溫60min，冷卻至10°C，4000r/min離心，清液緩緩加入乙醇，控制溶液中的乙醇濃度至50% (v/v)，混合攪 拌30分鐘，采用三組離心機離心分離，獲得小核菌葡聚糖沉淀。小核菌葡聚糖沉淀用純凈水復溶，控制小核菌葡聚糖濃度為2% (w/v)，加入O. 5% (w/v)的粉末狀活性炭，100°C保溫30min,冷卻至室溫,采用4000r/min離心，離心清液采用高速離心機13000r/min離心，離心清液采用O. I μ m的陶瓷膜過濾，得到高透明小核菌葡聚糖溶液280mL，所得到小核菌葡聚糖溶液粘度980cp，重均分子量156kD，小核菌葡聚糖在溶液中的含量為I. 12% (w/v)。實施例4取小核菌發(fā)酵液10L，升溫至100°C并攪拌，保溫60min，然后冷卻至室溫。用10%(w/v)檸檬酸調(diào)節(jié)pH5. 5，然后加入O. 05% (w/v)溶菌酶、纖維素酶、幾丁質(zhì)酶、半纖維素酶的混合酶(w/w=2:1:1:1),45°C攪拌處理4h,用lmol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)預處理發(fā)酵液pH值為8. 0，加入O. 1%(w/v)木瓜蛋白酶，升溫到50°C，反應4h，酶解液加熱至100°C，保溫30min，冷卻至4-15°C，4000r/min離心，清液緩緩加入乙醇，控制溶液中的乙醇濃度至40% (v/v)，混合攪拌30分鐘，采用三足式離心機離心分離，獲得小核菌葡聚糖沉淀。小核菌葡聚糖沉淀用純凈水復溶，控制小核菌葡聚糖濃度為l%(w/v)，加入O. 5%(w/v)的粉末狀活性炭，IOO0C保溫30min,冷卻至室溫,采用4000r/min離心,離心清液采用高速管式離心機13000r/min離心，離心清液采用O. 5 μ m的陶瓷膜過濾，得到高透明小核菌葡聚糖溶液4. 5L,所得到小核菌葡聚糖溶液粘度1128cp，重均分子量252kD，小核菌葡聚糖在溶液中的含量為O. 78%(w/v)。試驗例提升皮膚自體的修復能力、顯著增強和恢復組織彈性是小核菌葡聚糖溶液在化妝品中最重要的作用。小核菌葡聚糖為β結(jié)構(gòu)的葡聚糖，具有明顯的免疫調(diào)節(jié)和抗氧化作用，可以通過促進表皮細胞增殖和分化以及清除氧自由基，促進皮膚再生以及提高皮膚彈性。通過對大鼠皮膚中羥脯氨酸、S0D、谷胱甘肽等指標的考察，研究小核菌葡聚糖在提升皮膚自體的修復能力、顯著增強和恢復組織彈性方面的功效。從實驗結(jié)果來看本發(fā)明各個實施例所獲得小核菌葡聚糖溶液能夠明顯提高老化大鼠皮膚中羥脯氨酸的含量、SOD活力，提升谷胱甘肽含量，表明小核菌葡聚糖具有顯著的提高老化大鼠皮膚修復能力以及抗氧化能力的作用實驗結(jié)果如表I、表2。
表I小核菌葡聚糖溶液對老年大鼠皮膚羥脯氨酸含量的影響
權(quán)利要求
1.一種高透明度小核菌葡聚糖的提取方法，其特征在于由下述工藝步驟完成 (1)發(fā)酵液預處理將小核菌發(fā)酵液升溫至70°c-100°c，保溫10min-60min，冷卻至室令曰■Yhh， (2)酶解采用下述方式中的任意一種進行酶解 A.用堿性物質(zhì)調(diào)節(jié)預處理發(fā)酵液pH值為7.5-9. O,開啟攪拌，加入w/v為O. 01-0. 2%蛋白酶，升溫到50-60°C，反應2-8h，將所得的酶解溶液冷卻至35 °C，用酸性物質(zhì)調(diào)節(jié)PH6. O,然后加入w/v為O. 01-0. 2%破壁酶，繼續(xù)攪拌l_5h，酶解液加熱至80-10(TC，保溫20_60min; B.用酸性物質(zhì)調(diào)節(jié)ρΗ6·0，然后加入w/v為O. 01-0. 2%破壁酶，35-45 °C攪拌l_5h，用堿性物質(zhì)調(diào)節(jié)預處理發(fā)酵液PH值為7. 5-9. O,，加入w/v為O. 01-0. 2%蛋白酶，升溫到50-60°C，反應 2-8h，酶解液加熱至 80-100°C，保溫 20_60min; (3)乙醇醇析將步驟(2)中獲得的酶解液冷卻至4-40°C，固液分離，清液加入乙醇，控制溶液中的乙醇濃度在v/v為40%-80%，混合攪拌30-90min，固液分離得小核菌葡聚糖沉淀； (4)純化小核菌葡聚糖用水復溶，控制小核菌葡聚糖濃度w/v為O.5-3%，加入w/v為O. 05-2%的活性炭，60-100°C保溫20-60min，冷卻至室溫后，3000-6000r/min離心，清液8000-13000r/min再離心，清液采用O. 2 μ m_2 μ m的膜過濾，得到高透明度的小核菌葡聚糖溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的提取方法，其特征在于步驟(2)中采用的蛋白酶為中性蛋白酶或堿性蛋白酶或其混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的提取方法，其特征在于步驟(2)中采用的蛋白酶為木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶中的一種或幾種的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的提取方法，其特征在于步驟(2)中采用的破壁酶為溶菌酶、纖維素酶、幾丁質(zhì)酶、半纖維素酶中的一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的提取方法，其特征在于步驟(2)酶解過程使用的堿性物質(zhì)為氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉中的一種或數(shù)種的混合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的制備方法，其特征在于步驟(2)使用的酸性物質(zhì)為蘋果酸、檸檬酸、乙酸、鹽酸、硫酸中的一種或數(shù)種的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的制備方法，其特征在于步驟(4)采用的膜過濾組件為中空纖維膜組件或陶瓷膜組件或平板膜或卷式膜。
8.應用權(quán)利要求I所述的制備方法制備的小核菌葡聚糖，其特征在于步驟(4)中獲得的高透明度的小核菌葡聚糖溶液中葡聚糖的重均相對分子量150-500KD，含量w/v為O.1%-2%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種高透明度小核菌葡聚糖的提取方法，該方法主要是將小核菌發(fā)酵液升溫至70-100℃，后迅速冷卻至室溫，采用的是二步酶解方法，第一步采用蛋白酶降解發(fā)酵液和菌絲體中的蛋白質(zhì)，第二步采用破壁酶降解小核菌細胞壁，使胞內(nèi)多糖進一步溶出，將提取的小核菌葡聚糖用水復溶，再用活性炭脫色，離心，清液采用0.5μm-5μm的膜過濾，得到高透明度小核菌葡聚糖溶液。本發(fā)明所獲得的小核菌葡聚糖具有皮膚保濕功效，同時提升皮膚自體的修復能力，顯著增強和恢復組織彈性等作用，主要用于輕工、醫(yī)藥、化妝品領域。
文檔編號A61K8/73GK102796205SQ20121030753
公開日2012年11月28日 申請日期2012年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月24日
發(fā)明者楊傳倫, 馬韻升, 史慶苓, 徐澤平, 張心青, 王秀芝, 周傳兵 申請人:黃河三角洲京博化工研究院有限公司, 山東京博控股股份有限公司