專利名稱：IL-1β化合物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及IL-I β -配體/IL-I受體的阻斷性化合物(文中稱作“IL-I β化合物”)在治療和/或預(yù)防自身炎癥綜合征如幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎綜合征中的新用途，所述化合物例如阻斷IL-I β配體-IL-I受體相互作用的小分子化合物、IL-I β的抗體或IL-I受體的抗體，例如本文所述的IL-I β結(jié)合分子，例如本文所公開的抗體，例如結(jié)合IL-I β的化合物或結(jié)合IL-I受體的化合物，和/或降低IL-I β配體或IL-I受體的蛋白水平的RNA化合物；本發(fā)明還涉及治療和/或預(yù)防哺乳動(dòng)物尤其是人類的自身炎癥綜合征如幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎綜合征的方法。
背景技術(shù)：
白介素-1β (IL-Ιβ與白介素-1 β在本文中具有相同的含義)是介導(dǎo)多種免疫與炎癥應(yīng)答的有效的免疫調(diào)節(jié)物。IL-I β的產(chǎn)生不當(dāng)或過(guò)多與多種疾病和病癥的病理相關(guān),例如敗血癥、感染性或內(nèi)毒素性休克、過(guò)敏、哮喘、骨質(zhì)丟失、缺血、中風(fēng)、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及其它炎癥性疾病。已經(jīng)提出將IL-I β抗體用于治療IL-I介導(dǎo)的疾病和紊亂；參見如WO95/01997及其前言中的討論以及WO 02/16436，其內(nèi)容引入本文用作參考。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明，令人驚異地發(fā)現(xiàn)IL-I β化合物在預(yù)防和治療例如哺乳動(dòng)物特別是人類的自身炎癥綜合征中有效。本發(fā)明所述的自身炎癥綜合征是指，例如但不僅限于ー組遺傳性疾病，其特征在于反復(fù)發(fā)作的炎癥反應(yīng)；其與自身免疫性疾病的不同之處在于沒(méi)有高效價(jià)的自身抗體或抗原特異性的T細(xì)胞。此外，本發(fā)明所述的自身炎癥綜合征表現(xiàn)出IL-Ιβ分泌増加(熱蛋白(Pyrin)負(fù)調(diào)控作用喪失，其似乎在所述疾病中發(fā)生了突變)、NFkB的活化及白細(xì)胞的凋亡受損。本發(fā)明所述的自身炎癥綜合征是指Muckle-Wells綜合征(麗S)、家族性寒冷性自身炎癥綜合征(FCAS)、新生兒多系統(tǒng)炎癥綜合征(N0MID)、慢性幼兒神經(jīng)皮膚關(guān)節(jié)綜合征(CINCA)、家族性地中海熱(FMF)和/或某種類型的幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎如全身型特發(fā)性幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(SOIJA)和/或某種類型的成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。IL-I β化合物優(yōu)選用于預(yù)防和治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和/或Muckle-Wells 綜合征。根據(jù)本發(fā)明的特別發(fā)現(xiàn)，提供了以下的實(shí)施方案本發(fā)明涉及用于預(yù)防和治療哺乳動(dòng)物包括人類的自身炎癥綜合征的組合物及方法。因此，IL-I β化合物也可用于制備治療自身炎癥綜合征的藥物和藥劑。在具體方面，此類藥物和藥劑包括治療有效劑量的IL-I β化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的另ー個(gè)實(shí)施方案，提供了抗體在預(yù)防和/或治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎綜合征和/或其他自身炎癥綜合征和/或Muckle-Wells綜合征中的用途，所述抗體特異性地結(jié)合于任何上述或下述的多肽，例如IL-I β配體或IL-I β受體，優(yōu)選IL-I β配體。該抗體任選地為單克隆抗體、人源化抗體、抗體片段或單鏈抗體。本發(fā)明的某一方面涉及結(jié)合IL-I β配體的分離的抗體。另ー方面，所述抗體抑制或中和IL-I β配體的活性(拮抗性抗體)。另ー方面，所述抗體為單克隆抗體，其具有人源或非人源的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)殘基和人的骨架區(qū)(FR)殘基。可以標(biāo)記抗體，并將其固定于固體支持物上。另ー方面，所述抗體為抗體片段、單克隆抗體、單鏈抗體或抗獨(dú)特型抗體。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含抗IL-I β配體或IL-I β受體的抗體、優(yōu)選抗IL-I β配體抗體與藥學(xué)上可接受的載體的組合物。該組合物一方面包括治療有效量的抗體。該組合物優(yōu)選為無(wú)菌。可以以液體藥物制劑的形式施用該組合物，所述液體制劑可以進(jìn)行防腐以增加其貯存穩(wěn)定性?；蛘咴摽贵w為單克隆抗體、抗體片段、人源化抗體或單鏈抗體。本發(fā)明的另ー個(gè)實(shí)施方案，提供了 IL-I β化合物，如IL-I β抗體在預(yù)防和/或治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和/或其他自身炎癥綜合征和/或Muckle-Wells綜合征中的用途,所述IL-I β化合物能夠阻斷體內(nèi)的IL-I β正反饋環(huán)路。 該正反饋在體內(nèi)引起這些病人自身維持IL-I β的過(guò)量產(chǎn)生。本發(fā)明的另ー個(gè)實(shí)施方案提供了 IL-I β化合物如IL-I β抗體在MEFV基因突變的疾病中的用途，所述MEFV基因定位于染色體16ρ13上，并編碼熱蛋白(也稱作marenostrin)。熱蛋白在粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及滑膜成纖維細(xì)胞中表達(dá)。熱蛋白參與IL-I β的加工。本發(fā)明的另ー個(gè)實(shí)施方案涉及ー種制品，包括(a)含有抗IL-I β配體或IL-I β受體抗體、優(yōu)選抗IL-I β配體抗體的組合物；(b)包含所述組合物的容器；以及(c)粘附于所述容器的標(biāo)簽或所述容器內(nèi)的包裝插頁(yè)，其涉及所述抗IL-I β配體或IL-I β受體的抗體(優(yōu)選抗IL-I β配體的抗體)在治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和/或其他自身炎癥綜合征和/或Muckle Wells綜合征中的用途。該組合物可以包括治療有效量的抗IL-I β配體或IL-I β受體的抗體，優(yōu)選抗IL-I β配體的抗體。本發(fā)明的另ー個(gè)實(shí)施方案中提供了如上所定義的方法或用途，包括聯(lián)合施用治療有效量的游離形式或鹽形式的IL-I β化合物和ー種第二藥物，其中所述IL-I β化合物優(yōu)選以藥學(xué)上可接受的遞送形式如靜脈內(nèi)或皮下進(jìn)行施用，所述第二藥物為游離形式或鹽形式的抗炎化合物。本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中所用的IL-I β化合物為IL-I β結(jié)合分子，其包括含有至少ー個(gè)免疫球蛋白重鏈的可變結(jié)構(gòu)域(Vh)的抗原結(jié)合位點(diǎn)，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域依次包含高度可變區(qū)CDR1、CDR2和CDR3，其中所述CDRl具有氨基酸序列Val-Tyr-Gly-Met-Asn，CDR2 具有氨基酸序列 Ile-Ile-Trp-Tyr-Asp-Gly-Asp-Asn-Gln-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-VaI-Lys-Gly,而CDR3具有氨基酸序列Asp-Leu-Arg-Thr-Gly-Pro ;及其直接的等價(jià)物。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明所用的IL-I β化合物為含有至少ー個(gè)免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的IL-Ιβ結(jié)合分子，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域依次含有高度可變區(qū)CDR1’、CDR2’ 和 CDR3’，其中所述 CDR1’ 具有氨基酸序列 Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-IIe-Gly-Ser-Ser-Leu-His,所述 CDR2’ 具有氨基酸序列 Ala-Ser-Gln-Ser-Phe-Ser,而所述 CDR3’ 具有氨基酸序列Hi s-Gln-Ser-Ser-Ser-Leu-Pro,及其直接的等價(jià)物。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明所用的IL-I β化合物為單結(jié)構(gòu)域的IL-I β結(jié)合分子，其包括含有如上所定義的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(Vh)的分離的免疫球蛋白重鏈，所述化合物用于例如制備治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎綜合征和/或其他自身炎癥綜合征的藥物，優(yōu)選用于制備治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎綜合征和/或Muckle Wells綜合征的藥物。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明所用的IL-I β化合物為含有重鏈(Vh)和輕鏈(\)可變結(jié)構(gòu)域的IL-I β結(jié)合分子，其中所述IL-I β結(jié)合分子包含至少ー個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，其包括a)依次含有高度可變區(qū)⑶R1、⑶R2和⑶R3的免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(Vh)，其中所述CDRl具有氨基酸序列Val-Tyr-Gly-Met-Asn，所述CDR2具有氨基酸序列Ile-Ile-Trp-Tyr-Asp-Gly-Asp-Asn-Gln-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly,所述 CDR3 具有氨基酸序列 Asp-Leu-Arg-Thr-Gly-Pro,以及 b)依次含有高度可變區(qū)⑶R1’、⑶R2’和⑶R3’的免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(Vl),其中所述 CDR1’ 具有氨基酸序列 Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Ile-Gly-Ser-Ser-Leu-His，所述⑶R2’具有氨基酸序列Ala-Ser-Gln-Ser-Phe-Ser,而所述⑶R3’具有氨基酸序列His-Gln-Ser-Ser-Ser-Leu-Pro ；以及其直接的等價(jià)物。除非另有說(shuō)明，本文所述的任何多肽鏈所具有的氨基酸序列均描述為起始于N末端而結(jié)束于C末端。若抗原結(jié)合位點(diǎn)同時(shí)含有Vh和\結(jié)構(gòu)域，它們可以位于同一多肽分子中，或優(yōu)選每ー結(jié)構(gòu)域位于不同的鏈上，Vh結(jié)構(gòu)域?yàn)槊庖咔虻鞍字劓溁蚱淦蔚囊徊糠?，而\為免疫球蛋白輕鏈或其片段的一部分?！癐L-Ιβ結(jié)合分子”是指能単獨(dú)或與其它分子一同結(jié)合IL-I β配體的任何分子?？赏ㄟ^(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法(定性測(cè)定)顯示結(jié)合反應(yīng)，包括例如用于測(cè)定抑制IL-I β與其受體結(jié)合的生物檢定或任意類型的結(jié)合測(cè)定，其中使用沒(méi)有相關(guān)特異性但是同種型的抗體，如抗-CD25抗體作為陰性對(duì)照進(jìn)行測(cè)試。有利的是，可通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn)來(lái)顯示本發(fā)明的IL-I β結(jié)合分子與IL-I β的結(jié)合。抗原結(jié)合分子的實(shí)例包括由B細(xì)胞或雜交瘤產(chǎn)生的抗體，以及嵌合抗體、CDR移植或人抗體或其任意片段，如F(ab’)2和Fab片段，以及單鏈或單結(jié)構(gòu)域的抗體。單鏈抗體包括抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)，其間由10至30個(gè)氨基酸(優(yōu)選15至25個(gè)氨基酸)組成的肽連接體共價(jià)相連。因此，該結(jié)構(gòu)不包括重鏈和輕鏈的恒定區(qū)，并且認(rèn)為所述小肽間隔區(qū)的抗原性弱于完整的恒定區(qū)。“嵌合抗體”是指抗體中重鏈或輕鏈或兩者的恒定區(qū)均來(lái)自人，而重鏈和輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域均為非人源性(例如來(lái)源于鼠)、或?yàn)槿嗽吹珌?lái)自不同的人抗體。“CDR-移植抗體”是指抗體的高度可變區(qū)(CDR)來(lái)自于供體抗體，例如非人(如鼠)抗體或不同的人抗體，而該免疫球蛋白的其他部分如恒定區(qū)及可變結(jié)構(gòu)域的高度保守區(qū)(即骨架區(qū))完全或基本上來(lái)自受體抗體，例如人源抗體。然而，CDR-移植抗體的骨架區(qū)可能含有若干供體序列的氨基酸，例如在毗鄰高度可變區(qū)的骨架區(qū)部分?！叭丝贵w”是指抗體中重鏈和輕鏈的恒定區(qū)和可變區(qū)均來(lái)自人，或與人源序列基本一致，但不必來(lái)自同一抗體；并且包括由鼠產(chǎn)生的抗體，其中鼠免疫球蛋白的可變和恒定區(qū)基因已經(jīng)替換為人中的其相應(yīng)部分，如 EP 0546073 BI、USP 5545806、USP 5569825、USP 5625126、USP5633425,USP 5661016,USP 5770429,EP O 438474 BI 和 EP O 463151 BI 中的通用術(shù)語(yǔ)所述。特別優(yōu)選本發(fā)明的IL-Ιβ結(jié)合分子為人抗體，特別是如下文實(shí)施例及WO02/16436中所述的ACZ 885抗體。因此，在本發(fā)明優(yōu)選的抗體中，重鏈和輕鏈的 可變結(jié)構(gòu)域均為來(lái)自人，例如ACZ885抗體中顯示為SEQ ID NO: I和SEQ ID N0:2的序列。恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域優(yōu)選也包括合適的人恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域，例如“ Sequences of Proteins of Immunological Interest”，KabatE. A.等人(美國(guó)衛(wèi)生和人類服務(wù)部，公共衛(wèi)生服務(wù)處，國(guó)立衛(wèi)生研究院)所述的序列。高度可變區(qū)可與任意種類的骨架區(qū)相連，但優(yōu)選為人源。合適的骨架區(qū)描述于Kabat E.A.等人，同上。優(yōu)選的重鏈骨架為人的重鏈骨架，例如SEQ ID NO: I所示的ACZ885抗體重鏈骨架區(qū)。它依次由FR1、FR2、FR3和FR4區(qū)域組成。與之相似，SEQ ID N0:2顯示了優(yōu)選的ACZ 885輕鏈骨架，其依次由FR1’、FR2’、FR3’和FR4’區(qū)域組成。因此，本發(fā)明也提供包含至少ー個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的IL-I β結(jié)合分子，所述抗原結(jié)合位點(diǎn)含有與SEQ ID NO: I所示基本相同的氨基酸序列的第一結(jié)構(gòu)域，其起始于I位氨基酸而結(jié)束于118位氨基酸，或該抗原結(jié)合位點(diǎn)含有如上所述的第一結(jié)構(gòu)域以及第ニ結(jié)構(gòu)域，后者含有的氨基酸序列與SEQ ID NO: I所示的基本相同，其起始于I位氨基酸而結(jié)束于107位氨基酸。通常在非人體系如鼠體系中產(chǎn)生針對(duì)天然存在于所有人的蛋白質(zhì)的單克隆抗體，所產(chǎn)生的抗體通常為非人源蛋白質(zhì)。其直接后果是，當(dāng)由雜交瘤產(chǎn)生的異種抗體施用于人時(shí)，會(huì)引發(fā)主要由異種免疫球蛋白的恒定部分介導(dǎo)的不良免疫應(yīng)答。這顯然限制了此類抗體的應(yīng)用，因?yàn)樗鼈儫o(wú)法長(zhǎng)期施用。因此特別優(yōu)選使用在施用于人時(shí)不易引發(fā)大規(guī)模異種應(yīng)答的單鏈、單結(jié)構(gòu)域、嵌合、CDR移植或特別是人抗體。鑒于以上所述，更優(yōu)選的本發(fā)明IL-Ιβ結(jié)合分子選自人抗IL-Ιβ抗體，其至少包括a)免疫球蛋白重鏈或其片段，包括⑴依次含有高度可變區(qū)⑶R1、⑶R2和CDR3的可變結(jié)構(gòu)域，以及(ii)人重鏈的恒定區(qū)部分或其片段；所述CDRl具有氨基酸序列 Val-Tyr-Gly-Met-Asn, CDR2 具有氨基酸序列 Ile-Ile-Trp-Tyr-Asp-Gly-Asp-Asn-Gln-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly,而所述 CDR3 具有氨基酸序列Asp-Leu-Arg-Thr-Gly-Pro,以及b)免疫球蛋白輕鏈或其片段，包括⑴依次含有高度可變區(qū)及任選的CDR1’、CDR2’和CDR3’高度可變區(qū)的可變結(jié)構(gòu)域，以及(ii)人輕鏈的恒定區(qū)部分或其片段；所述 CDRl ’ 具有氨基酸序列 Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Ile-Gly-Ser-Ser-Leu-His,所述⑶R2’具有氨基酸序列Ala-Ser-Gln-Ser-Phe-Ser,而所述⑶R3’具有氨基酸序列His-Gln-Ser-Ser-Ser-Leu-Pro ；及其直接的等價(jià)物。或者，本發(fā)明的IL-I β結(jié)合分子可以選自包含抗原結(jié)合位點(diǎn)的單鏈結(jié)合分子，所述抗原結(jié)合位點(diǎn)包括
a)依次含有高度可變區(qū)⑶Rl、⑶R2和⑶R3的第一結(jié)構(gòu)域，所述⑶Rl具有氨基酸序列 Val-Tyr-Gly-Met-Asn, CDR2 具有氨基酸序列 Ile-Ile-Trp-Tyr-Asp-Gly-Asp-Asn-Gln-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Ly s-Gly,而所述 CDR3 具有氨基酸序列Asp-Leu-Arg-Thr-Gly-Pro,b)含有高度可變區(qū)⑶R1’、⑶R2’和⑶R3’的第二結(jié)構(gòu)域，所述⑶R1’具有氨基酸序列 Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Ile-Gly-Ser-Ser-Leu-His,所述 CDR2’ 具有氨基酸序列Ala-Ser-Gln-Ser-Phe-Ser,而所述CDR3’ 具有氨基酸序列 His-Gln-Ser-Ser-Ser-Leu-Pro,以及c)與第一結(jié)構(gòu)域的N末端和第二結(jié)構(gòu)域的C末端相連、或與第一結(jié)構(gòu)域的C末端和第二結(jié)構(gòu)域的N末端相連的肽連接體；及其直接的等價(jià)物。眾所周知，對(duì)氨基酸序列的微小改變?nèi)绌`個(gè)、幾個(gè)或甚至多個(gè)氨基酸的缺失、添加 或替換，均可能導(dǎo)致形成性質(zhì)基本相同的原有蛋白質(zhì)的等位形式。因此，術(shù)語(yǔ)“其直接的等價(jià)物”是指以下任何單結(jié)構(gòu)域的IL-Ιβ結(jié)合分子(分子X(jué))，(i)其中高度可變區(qū)⑶R1、⑶R2和⑶R3整體而言與上述高度可變區(qū)的同源性至少為80%，優(yōu)選至少90%，更優(yōu)選至少95%，且，(ii)其對(duì)IL-I β與其受體結(jié)合的抑制程度基本上與參照分子相當(dāng)，所述參照分子具有與分子X(jué)相同的骨架區(qū)，但其高度可變區(qū)⑶R1、⑶R2和⑶R3與上述一致，或每個(gè)結(jié)合位點(diǎn)具有至少兩個(gè)結(jié)構(gòu)域的任何IL-I β結(jié)合分子(分子V )(i)其中高度可變區(qū)⑶R1、⑶R2、⑶R3、⑶R1’、⑶R2’和⑶R3’整體而言與上述高度可變區(qū)的同源性至少為80%，優(yōu)選至少90%，更優(yōu)選至少95%，且(ii)其對(duì)IL-I β與其受體結(jié)合的抑制程度基本與參照分子相當(dāng)，所述參照分子具有與分子X(jué)’相同的骨架區(qū)和恒定區(qū)，但其高度可變區(qū)⑶R1、⑶R2、⑶R3、⑶R1’、⑶R2’和CDR3’與上述一致。本發(fā)明的另一方面也提供含有重鏈(Vh)和輕鏈(\)可變結(jié)構(gòu)域的IL-I β結(jié)合分子，其中所述IL-I β結(jié)合分子包括至少ー個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，其包括a)依次含有高度可變區(qū)⑶R1、⑶R2和⑶R3的免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(Vh)，所述⑶Rl具有氨基酸序列Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, Q)R2具有氨基酸序列Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly,而所述 CDR3 具有氨基酸序列 Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile,且b)含有⑶R3’高度可變區(qū)的免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(\)，所述⑶R3’具有氨基酸序列 Gln-Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-Phe-Pro ；及其直接的等價(jià)物。本發(fā)明的另一方面提供含有重鏈(Vh)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的IL-I β結(jié)合分子，其中所述IL-I β結(jié)合分子包括至少ー個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，包括a)依次含有高度可變區(qū)⑶R1、⑶R2和⑶R3的免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(Vh)，所述CDRl具有氨基酸序列Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly,所述CDR2具有氨基酸序列Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly,而所述 CDR3 具有氨基酸序列 Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-IIe,且b)依次含有高度可變區(qū)⑶R1’、⑶R2’和⑶R3’的免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(Vl),所述 CDRl ’ 具有氨基酸序列 Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Ala,所述Q)R2’具有氨基酸序列Asp-Ala-Ser-Asn-Arg-Ala-Thr,而所述Q)R3’具有氨基酸序列Gln-Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-Phe-Pro ；及其直接的等價(jià)物。在本說(shuō)明書中，若當(dāng)最優(yōu)排列時(shí)，氨基酸序列之間類似位點(diǎn)上的氨基酸殘基至少有80%相同(將氨基酸序列中的缺ロ或插入計(jì)作不同殘基)，則氨基酸序列彼此的同源性為至少80%?？梢岳枚喾N試驗(yàn)，例如WO 02/16436所述的試驗(yàn)，方便地測(cè)試IL-I β與其受體間結(jié)合的抑制情況。術(shù)語(yǔ)“程度相當(dāng)”是指參照分子和等效分子在上述的某個(gè)測(cè)定試驗(yàn)中，在統(tǒng)計(jì)學(xué)基礎(chǔ)上具有基本相同的IL-I β結(jié)合抑制曲線。例如，當(dāng)進(jìn)行上述測(cè)定時(shí)，本發(fā)明 的IL-I β結(jié)合分子對(duì)IL-I β與其受體的結(jié)合抑制所具有的IC5tl通常為相應(yīng)參照分子IC5tl的+/-X5之內(nèi)，優(yōu)選與參照分子的IC5tl基本相同。例如，所采用的試驗(yàn)可以是可溶性IL-I受體與本發(fā)明的IL-Ιβ結(jié)合分子對(duì)IL-I β結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)性抑制試驗(yàn)。最優(yōu)選用于本發(fā)明的IL-I β結(jié)合分子為人IL-I抗體，其至少包括a)包含可變結(jié)構(gòu)域和人重鏈恒定區(qū)的重鏈，所述可變結(jié)構(gòu)域具有與SEQ ID NO: I所示基本相同的氨基酸序列，起始于I位氨基酸而終止于118位氨基酸；且b)包含可變結(jié)構(gòu)域和人輕鏈恒定區(qū)的輕鏈，所述可變結(jié)構(gòu)域具有與SEQ ID NO:2所示基本相同的氨基酸序列，起始于I位氨基酸而終止于107位氨基酸。最優(yōu)選用于本發(fā)明的IL-I β結(jié)合分子為ACZ885 (參見實(shí)施例)。人重鏈恒定區(qū)可為Y I、Y 2、Y 3、Y 4、μ、α I、α 2、δ或ε型,優(yōu)選為Y型,更優(yōu)選為Y I型，而人輕鏈恒定區(qū)可為K或λ型(其中包括λ I、λ 2和λ 3亞型)，但優(yōu)選為K型。所有這些恒定區(qū)的氨基酸序列見于Kabat等人，同上。可通過(guò)重組DNA技術(shù)產(chǎn)生本發(fā)明的IL-I β結(jié)合分子,如WO 02/16436中所述。在本發(fā)明的另ー個(gè)實(shí)施方案中，IL-I β化合物可以是對(duì)人IL-I β抗原表位具有結(jié)合特異性的抗體，所述抗原表位包括含有成熟的人IL-I β的Glu64殘基的環(huán)(成熟的人IL-I β的殘基Glu 64相當(dāng)于人IL-I β前體的殘基180)。該表位在IL-I β受體的識(shí)別位點(diǎn)以外，因此該表位的抗體如ACZ885抗體能夠抑制IL-I β與其受體間的結(jié)合很出人意料。因此使用此類抗體治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和/或自身炎癥綜合征和/或MuckleWells綜合征具有新穎性，并且涵蓋于本發(fā)明的范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明另一方面包括對(duì)人IL-I β的抗原表位具有結(jié)合特異性的IL-I β抗體在治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和/或自身炎癥綜合征和/或MuckleWells綜合征中的用途，其中所述抗原表位包括含有成熟的人IL-I β中Glu64殘基的環(huán)，并且所述抗體能夠抑制IL-I β與其受體的結(jié)合。本發(fā)明另一方面包括i)對(duì)成熟的人IL-I β的抗原表位具有結(jié)合特異性的IL-I β抗體在預(yù)防和/或治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和/或自身炎癥綜合征和/或Muckle Wells綜合征中的用途，所述表位包括含有Glu64的環(huán)，且所述抗體能夠抑制IL-I β與其受體的
結(jié)合；ii)用于在病人中預(yù)防和/或治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和/或自身炎癥綜合征和/或Muckle Wells綜合征的方法，所述方法包括向病人施用有效量的IL-I β抗體，所述抗體對(duì)成熟的人IL-I β的抗原表位(包括含有Glu64的環(huán))具有結(jié)合特異性并且能夠抑制IL-I β與其受體的結(jié)合；iii)用于治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和/或自身炎癥綜合征和/或Muckle Wells綜合征的藥物組合物，其包括對(duì)成熟的人IL-I β的抗原表位(包括含有Glu64的環(huán))具有結(jié)合特異性的IL-Ιβ抗體(其中所述抗體能夠抑制IL-I β與其受體的結(jié)合)，以及藥學(xué)上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體；iv)對(duì)成熟人IL-I β的抗原表位(包括含有Glu64的環(huán))具有結(jié)合特異性的IL-I β 抗體在制備治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和/或自身炎癥綜合征和/或Muckle Wells綜合征藥物中的用途，其中所述抗體能夠抑制IL-I β與其受體的結(jié)合。本說(shuō)明書中，若抗體對(duì)IL-I β與其受體結(jié)合的抑制程度能夠與ACZ885抗體基本相同，即按照實(shí)施例中公開的標(biāo)準(zhǔn)BIAcore分析而測(cè)量的該抗體解離平衡常數(shù)(Kd)為IOnM或更低，例如InM或更低，優(yōu)選IOOpM或更低，更優(yōu)選50ρΜ或更低，則該抗體為“能夠抑制IL-I β的結(jié)合”。因此，本發(fā)明的另一方面提供了 IL-I β抗體在治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎綜合征和/或自身炎癥綜合征中的用途，其中所述抗體結(jié)合IL-I β的Kd為約10ηΜ、1ηΜ、優(yōu)選ΙΟΟρΜ、更優(yōu)選50ρΜ或更少。本發(fā)明的這方面也包括這類高親和性抗體，即如上所述對(duì)成熟的人IL-I β的抗原決定簇(包括含有Glu64的環(huán))具有結(jié)合特異性的IL-I β抗體的使用方法和組合物。 在本說(shuō)明書中，短語(yǔ)“幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎綜合征和/或自身炎癥綜合征”包括所有直接或間接作為幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或成人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎綜合征和/或自身炎癥綜合征的一部分的疾病及醫(yī)學(xué)病癥，所述疾病及醫(yī)學(xué)病癥包括該疾病或病癥的引起、發(fā)展、演進(jìn)、持續(xù)或病理。在本說(shuō)明書中，短語(yǔ)“Muckle Wells綜合征”(也稱為“麗S”)包括所有直接或間接作為Muckle Wells綜合征一部分的疾病及醫(yī)學(xué)病癥，所述疾病及醫(yī)學(xué)病癥包括該疾病或病癥的引起、發(fā)展、演進(jìn)、持續(xù)或病理。式I的化合物可作為唯一的活性成分施用，或者作為輔劑與其他藥物如免疫抑制劑或免疫調(diào)節(jié)劑或其他抗炎癥藥物聯(lián)合施用，例如用于治療或預(yù)防急性或慢性同種或異種移植物排斥反應(yīng)或炎癥或自身免疫疾??；也可與化療藥物如抗惡性細(xì)胞増殖藥物聯(lián)合施用。例如，本發(fā)明的抗體可與以下藥物聯(lián)合使用鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶抑制劑如環(huán)孢素A或FK506 ；mT0R抑制劑如雷帕霉素、40-0- (2-羥こ基)-雷帕霉素、CCI779、ABT578、AP23573、AP23464、AP23675、AP23841、TAFA-93、biolimus-7 或 biolimus-9 ;具有免疫抑制性質(zhì)的子囊霉素，如ABT-281、ASM981等；皮質(zhì)類固醇；環(huán)磷酰胺；硫唑嘌呤；甲氨蝶呤；來(lái)氟米特；咪唑立賓；霉酚酸或鹽；霉酚酸酯；15_去氧精胍菌素或其免疫抑制性同源物、類似物或衍生物；PKC抑制劑，如WO 02/38561或WO 03/82859中所公開的化合物，例如實(shí)施例56或70的化合物JAK3激酶抑制劑如N-芐基-3，4- ニ羥基-亞芐基-氰基こ酰胺-氰基-(3，4- ニ羥基)-]N-芐基肉桂酰胺(酪氨酸磷酸化抑制劑AG 490 )、靈菌紅素25-C (PNU156804)、[4-(4’ -羥基苯基)-氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉](胃!11- 131)、[4-(3’ -溴_4’ -羥基苯基)-氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉](腿1- 154)、[4-(3，，5’ -二溴_4’ -羥基苯基)_氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉]WHI-P97、KRX-211、3-{(3R, 4R)~4~ 甲基 _3_[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-I-基}-3_氧代-丙腈的游離形式或可藥用鹽形式，如單檸檬酸鹽(也稱為CP-690，550)，或如WO 04/052359或WO 05/066156中公開的化合物；免疫抑制性的單克隆抗體，如針對(duì)白細(xì)胞受體如MHC、⑶2、⑶3、⑶4、⑶7、⑶8、⑶25、⑶28、⑶40、⑶45、⑶52、⑶58、⑶80、⑶86或其配體的單克隆抗體；其他免疫調(diào)節(jié)化合物如含有至少一部分CTLA4或其突變體的胞外結(jié)構(gòu)域的重組結(jié)合分子，例如連接了非CTLA4蛋白質(zhì)序列的至少CTLA或其突變體的的胞外部分，如CTLA4Ig(例如被命名為ATCC 68629的免疫球蛋白)或其突變體如LEA29Y ;粘附分子抑制劑如LFA-I拮抗劑、ICAM-I或-3拮抗劑、VCAM-4拮抗劑或VLA-4拮抗劑；或化療藥物如紫杉醇、吉西他濱、順鉬、多柔比星或5-氟尿嘧啶；或抗感染藥物。容易與本發(fā)明化合物聯(lián)合使用的免疫調(diào)節(jié)藥物包括例如

-mTOR活性的調(diào)節(jié)劑如抑制劑，包括下式的雷帕霉素
41
HO , 40
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36CH3
5 35 30 6、0h3c2>^0H
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三三 18 20/
1315I1921
CH3CH以及雷帕霉素衍生物，例如包括40-0-烷基-雷帕霉素衍生物，如40-0-羥基烷基-雷帕霉素衍生物，如40-0- (2-羥基)-乙基-雷帕霉素(依維莫司);32_脫氧-雷帕霉素衍生物和32-羥基-雷帕霉素衍生物，例如32-脫氧雷帕霉素；16-0-取代的雷帕霉素衍生物如16-戊-2-炔基氧基-32-脫氧雷帕霉素、16-戍-2-塊基氧基_32 (S或R) - 二氫-雷帕霉素、16-戍-2-塊基氧基-32 (S或R) - 二氫-40-0- (2-羥乙基)-雷帕霉素；在40位氧基團(tuán)上被?；睦着撩顾匮苌铮?0-[3-羥基-2-(羥基-甲基)-2-甲基丙酸酯]-雷帕霉素(也稱為CCI779);40位上由雜環(huán)取代的雷帕霉素衍生物，如40-表-(四唑基)-雷帕霉素(也稱為ABT578);所謂的雷帕霉素類似物，如W09802441、W00114387及W00364383中公開的化合物，如AP23573，以及名稱為TAFA-93的公開化合物和雷帕霉素衍生物biolimus (biolimus A9)。本說(shuō)明書中的術(shù)語(yǔ)“治療”既指預(yù)防性治療也指治愈性或疾病改善性的治療，包括治療有患病風(fēng)險(xiǎn)的或疑似患病的病人，以及患病或已被診斷為患有疾病或某種醫(yī)學(xué)病癥的病人，還包括對(duì)臨床復(fù)發(fā)的抑制。根據(jù)本發(fā)明，成功的治療也包括各種可恢復(fù)癥狀的消退，但不可恢復(fù)的癥狀無(wú)法消退。例如，Muckle-Wells的癥狀之一為進(jìn)行性的神經(jīng)性耳聾，其通常不可恢復(fù)，因此不應(yīng)對(duì)該癥狀的治愈寄予期望。然而，根據(jù)本發(fā)明，成功的治療可使Muckle-Wells的其他可恢復(fù)癥狀如皮疹、肌肉疼痛、發(fā)熱、疲勞及結(jié)膜炎完全消失。另一項(xiàng)衡量成功治療的標(biāo)準(zhǔn)是自身炎癥綜合征如Muckle-Wells中相關(guān)生物指標(biāo)的下降，即病人的血清淀粉樣蛋白(SAA)和c反應(yīng)蛋白(CRP)降至正常范圍，即每升血清<10mg。在本說(shuō)明書中，根據(jù)其臨床癥狀來(lái)確定疾病“Muckle-Wells”(分子病理學(xué))，所述臨床癥狀為急性發(fā)熱性炎癥性的關(guān)節(jié)炎和蕁麻疹發(fā)作、進(jìn)行性神經(jīng)性耳聾以及任選地長(zhǎng)期多臟器淀粉樣變(約25%的病例)。分子病理是由位于染色體16pl3的MEFV基因的一個(gè)或多個(gè)突變所致，所述基因編碼稱為熱蛋白(pyrin)的蛋白質(zhì)。上文定義的IL-Ιβ結(jié)合分子，具體而言為本發(fā)明第一及第二方面中的IL-I β結(jié)合分子，如對(duì)成熟的人IL-I β抗原表位(包括含有Glu64的環(huán))具有結(jié)合特異性的抗體，具體而言為能夠抑制IL-I β與其受體結(jié)合的抗體；以及結(jié)合IL-I β的Kd為約10ηΜ、1ηΜ、優(yōu) 選ΙΟΟρΜ、更優(yōu)選50pM或更低的IL-I β抗體，在文中均被視為本發(fā)明的抗體。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，IL-I β化合物如本發(fā)明的抗體的其他用途如下預(yù)防和治療炎癥性腸病(IBD)、幼年型關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、冠狀綜合征、動(dòng)脈再狹窄、囊性纖維化、阿爾茨海默病、多發(fā)性骨髓瘤、動(dòng)脈粥樣硬化、肺纖維化、Muckle-Wells綜合征及慢性阻塞性肺病(COPD)。對(duì)于本說(shuō)明書此處公開的所有適應(yīng)癥(本發(fā)明的適應(yīng)癥)而言，適宜劑量當(dāng)然根據(jù)以下因素而不同，例如所用的具體IL-I β化合物如本發(fā)明的抗體、宿主、給藥方式以及所治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度。然而，在預(yù)防性使用中，推薦采用每千克體重約O. 05mg至約IOmg的劑量通常能取得令人滿意的效果，更常用劑量為每千克體重約O. Img至約5mg?？梢酝ㄟ^(guò)胃腸外、靜脈內(nèi)(例如經(jīng)肘前靜脈或其他外周靜脈)、肌內(nèi)或皮下方便地施用本發(fā)明的抗體。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案涉及令人驚異的治療所用的給藥頻率，即采用IL-I β化合物、優(yōu)選IL-I β抗體，更優(yōu)選ACZ885(通常劑量為如每kg病人體重約O. Img至約50mg，更優(yōu)選為O. 5mg至20mg,甚至更優(yōu)選Img-IOmg的ACZ885)的治療日程可以為每周一次或更少，更優(yōu)選每2周一次或更少，更優(yōu)選每3周一次或更少，更優(yōu)選每月一次或更少，更優(yōu)選每2月一次或更少，更優(yōu)選每3月一次或更少，甚至更優(yōu)選每4月一次或更少，甚至更優(yōu)選每5月一次或更少，或甚至更優(yōu)選每6月一次或更少。最優(yōu)選每月一次?？梢酝ㄟ^(guò)常規(guī)方法生產(chǎn)本發(fā)明的藥物組合物。本發(fā)明的組合物優(yōu)選以凍干粉的形式提供。需要立刻使用時(shí)，將其溶于合適的水性載體中，例如無(wú)菌注射用水或無(wú)菌生理鹽水緩沖液。如果需要制備用于輸注而非靜推注射給藥的較大體積的溶液，則最好在制備時(shí)向鹽水中加入人血清白蛋白或病人自己的肝素化血液。過(guò)量的此類生理惰性蛋白質(zhì)的存在能避免由于輸注溶液所用的容器及管道壁吸收而造成的抗體損失。如果使用白蛋白，則合適的濃度為生理鹽水重量的O. 5-4. 5%。通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步舉例描述本發(fā)明。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例實(shí)施例I :ACZ885ACZ885的結(jié)構(gòu)和制備公開于例如WO 02/16436中。簡(jiǎn)而言之，重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基末端序列以及相應(yīng)的DNA序列如下面SEQ ID NO: I和SEQ ID N0:2所示，其中CDR以斜體和下劃線表示。ACZ885 重鏈可變區(qū) SEQ ID NO: ITCAGQ -I
GTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCVQLVESGGGVVQPGRSLRLS -21TGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTGTTTATGGCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCACAASGFTFS VYGMN WVRQAP -41GGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATTTGGTATGATGGAGATAATCAATACTATGCAGKGLEffVA I IffYDGDNQYYA -61GACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGDSVKG RFTISRDNSKNTLYL -8. ICAAATGAACGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTATTGTGCGAGAGATCTTAGGQMNGLRAEDTAVYYCAR DLR -101ACTGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCT G PF DYffGQGTLVTVSS118ACZ885 輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:2TGAAE -IATTGTGCTGACTCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAGAAAGTCACCATCIVLTQSPDFQSVTPKEKVT I -21ACCTGCCGGGCCAGTCAGAGCATTGGTAGTAGCTTACACTGGTACCAGCAGAAACCAGATT C RASQSIGSSLH W Y Q Q K p D -41CAGTCTCCAAAGCTCCTCATCAAGTATGCTTCCCAGTCCTTCTCAGGGGTCCCCTCGAGGQ S P K L L I K Y A S Q S F S GVPSR -61TTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACCCTCACCATCAATAGCCTGGAAGCTGAAFSGSGSGTDFTLTINSLEAE -81GATGCTGCAGCGTATTACTGTCATCADGAGTAGTAGTTTACCATTCACTTTCGGCCCTGGGDAAAYYC HQSSSLP FTFGpG -101ACCAAAGT GGATATCAAA-107TKVDIK實(shí)施例2 ACZ885的牛物化學(xué)和牛物學(xué)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)單克隆抗體ACZ 885具有體外中和白介素-I β的活性。通過(guò)表面等離子共振分析對(duì)該單克隆抗體與重組人IL-I β間的結(jié)合進(jìn)行進(jìn)一步的表征。利用可溶性IL-I受體通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn)來(lái)評(píng)估其中和模式。在對(duì)IL-I β刺激有應(yīng)答的原代人細(xì)胞中，測(cè)定抗體ACZ885對(duì)重組和天然產(chǎn)生的IL-I β的生物活性。確定解離平衡常數(shù)通過(guò)表面等離子共振分析確定重組人IL-I β與ACZ885間結(jié)合的結(jié)合和解離速率常數(shù)。將ACZ885固定，通過(guò)表面等離子共振測(cè)量濃度范圍為I至4ηΜ的重組人IL-Ιβ的結(jié)合。所選公式表示單價(jià)相互作用，因而可按照1:1的化學(xué)計(jì)量處理IL-I β與ACZ885間的結(jié)合事件。利用BIA評(píng)估軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
權(quán)利要求
1.用于治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物，該藥物包括人IL-Iβ結(jié)合抗體，所述抗體包含重鏈(Vh)和輕鏈(V1j)可變結(jié)構(gòu)域,其中所述IL-I β結(jié)合抗體包括至少ー個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，所述抗原結(jié)合位點(diǎn)包括 其氨基酸序列與SEQ ID NO: I所示序列相同的第一結(jié)構(gòu)域，和 其氨基酸序列與SEQ ID Ν0:2所示序列相同的第二結(jié)構(gòu)域，并且 其中所述抗體以每kg患者體重為O. l_50mg抗體的劑量胃腸外施用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的用途，其中所述抗體是ACZ885。
3.根據(jù)上述權(quán)利要求任ー項(xiàng)的用途,其中所述抗體以每kg患者體重為O.5-20mg抗體的劑量施用。
4.根據(jù)上述權(quán)利要求任ー項(xiàng)的用途,其中所述抗體以每kg患者體重為I-IOmg抗體的劑量施用。
5.根據(jù)上述權(quán)利要求任ー項(xiàng)的用途，其中所述抗體以每周一次或更少的頻率施用。
6.根據(jù)上述權(quán)利要求任ー項(xiàng)的用途，其中所述抗體以每月一次或更少的頻率施用。
7.根據(jù)上述權(quán)利要求任ー項(xiàng)的用途，其中所述抗體分子通過(guò)皮下施用于患者。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-6任ー項(xiàng)的用途，其中所述抗體通過(guò)靜脈內(nèi)施用于患者。
9.藥物組合物，其包含用于治療動(dòng)脈粥樣硬化的根據(jù)權(quán)利要求1-2任ー項(xiàng)所定義的抗體以及藥學(xué)上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體，其中所述抗體通過(guò)胃腸外施用。
全文摘要
本發(fā)明涉及IL-1β化合物的新用途，具體而言，本發(fā)明涉及IL-1β-配體/IL-1受體的阻斷性化合物的新用途。
文檔編號(hào)A61K39/395GK102861332SQ201210290408
公開日2013年1月9日 申請(qǐng)日期2006年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月26日
發(fā)明者P·洛厄爾, H·格拉姆, T·容, T·懷特, T·明德爾 申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司