專利名稱：少棘蜈蚣多肽毒素omega-SLPTX-Ssm1a的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及少棘蜈蚣多肽毒素omega-SLPTX-Ssmla的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
鈣離子通道是細胞膜上的ー類重要的跨膜蛋白，不僅調(diào)節(jié)Ca2+跨膜運動的速度和量，而且參與一系列Ca2+依賴生理活動，包括肌肉收縮，激素和神經(jīng)遞質(zhì)的釋放以及細胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)等。Cavl家族與骨骼和平滑肌收縮以及神經(jīng)內(nèi)分泌有關(guān)；Cav2在神經(jīng)遞質(zhì)的釋放和神經(jīng)元興奮的控制中有非常重要的作用。鈣離子通道由α亞基和β亞基等一些輔助型亞基構(gòu)成，其中α亞基包括四個相同的結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，每個結(jié)構(gòu)域包含六個跨膜片段。雖然鈣離子通道具有非常重要的功能，但是到目前為止鈣通道的結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系以及藥物 作用靶點還有待進ー步的研究。鈣離子通道的抑制劑廣泛的存在于動物毒液中，如蜘蛛、芋螺等，許多小分子藥物如ニ氫吡啶等都能選擇性的抑制鈣離子通道。但是到目前為止，從未有多肽毒素作為鈣離子通道的激活劑的報道。Bay Κ8644是目前為止唯一研究比較清楚的鈣通道激活劑，能促進L型鈣通道的開放增加內(nèi)向鈣通道電流，并作為工具試劑來研究鈣通道的結(jié)構(gòu)和功能關(guān)系。缺血再灌注損傷是指組織缺血一段時間，當(dāng)血流重新恢復(fù)后，細胞功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)破壞反而較缺血時進一歩加重，器官功能進ー步惡化的綜合征。鈣超載是缺血再灌注損傷最主要的損傷機制之一。在心肌和肺部缺血再灌注損傷的預(yù)處理過程中，用鈣通道激動劑Bay Κ8644能誘導(dǎo)出短暫的鈣內(nèi)流，能防止心肌和肺部缺血后再灌注時對心肌和肺部造成損傷，提高組織對缺血的耐受性，因此Bay K8644也作藥物來防止組織在缺血再灌注的過程中發(fā)生損傷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種少棘蜈蟻多肽毒素omega-SLPTX-Ssmla的應(yīng)用。本發(fā)明提供的少棘蜈蚣多肽毒素omega-SLPTX-Ssmla，是從少棘蜈蚣粗度中通過分子篩和反向高效液相色譜分離純化得到，其氨基酸順序為EECPSLSGGSSNYCSKKETFTSNGNLEQTRRYCNSVAAPSTACTDLKTGGKLCEYSCNTDGCNSVAGMEPTRAVYFIAILMLA。該多肽包括 83 個氨基酸殘基分子量為8810. 4 Da，等電點為5. 23，分子內(nèi)含三對ニ硫鍵。少棘蜈蚣多肽毒素omega-SLPTX-Ssmla的基因克隆包括少棘蜈蚣毒腺總RNA提取，mRNA純化，mRNA反轉(zhuǎn)錄及cDNA文庫構(gòu)建，設(shè)計引物，利用PCR方法篩選少棘蜈蚣鈣離子通道激活劑多肽基因。擴增引物長度為14個核苷酸，其序列為5’ -GAGTATGA ATGAGG _3’，PCR另ー擴增引物為CL0NTECH公司SMART TM cDNA Library Construction Kit 中的 3’ PCR Primer 引物，其序列為 5 'ATTCTACAGGCCGAGGCGGCCGACATG 3 '。所獲陽性單克隆進行基因核苷酸序列測定?；驕y序結(jié)果表明編碼少棘蜈蚣鈣離子通道激活劑的基因由426個核苷酸組成，自5’端至3’端序列為
atgcca β M P 2
tccctctgcataattgcattattcggaacgctaacattttacaccctcatcccgtcaatc 66 SLCI IALFGTLTFYTLIPSI 22
cacaccctaaaat gcgtaagat gcgat ggcc ct at gagtaact acgact gcaaaactacc 128 HTLKCVRCDGPMSNYDCKTT 42 tatccggcagctgaggagtgtccaagct tgagcggaggttcaagcaatt
權(quán)利要求
1.分子量為8811.3 Da，等電點為5. 23的少棘蜈蚣毒素omega-SLPTX-Ssmla在制備治療鈣通道疾病藥物中的應(yīng)用。
2.分子量為8811.3 Da，等電點為5. 23的少棘蜈蚣毒素omega-SLPTX-Ssmla作為鈣通道研究的工具試劑應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及少棘蜈蚣多肽毒素omega-SLPTX-Ssm1a的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。omega-SLPTX-Ssm1a一級序列包括83個氨基酸殘基，其中六個半胱氨酸形成三對二硫鍵，分子量為8811.3 Da。編碼該毒素基因包括426個核苷酸，其中包括信號肽、前提肽和成熟肽。少棘蜈蚣毒素omega-SLPTX-Ssm1對大鼠背根神經(jīng)節(jié)上的鈣離子通道電流有非常顯著的增強作用，是一種新型的鈣通道的激動劑。本發(fā)明中的少棘蜈蚣毒素omega-SLPTX-Ssm能夠增加鈣通道的開放使鈣離子內(nèi)流，能夠用于制備治療鈣通道疾病的藥物，也能作為一種新的鈣通道研究的工具試劑。
文檔編號A61K38/17GK102671185SQ201210174880
公開日2012年9月19日 申請日期2012年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月31日
發(fā)明者容明強, 楊仕隆, 賴仞 申請人:中國科學(xué)院昆明動物研究所