專利名稱：一種從野菊花中提取精制高純度總黃酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬植物有效成分分離技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種從野菊花中提取精制高純度總黃酮的方法。
背景技術(shù)：
野菊花是菊科植物野菊(Chrysanthemum indicum L)的干燥頭狀花序,為常用清熱解毒中藥。黃酮類化合物是一系列具有2-苯基色原酮結(jié)構(gòu)的化合物，是野菊花中主要的活性成分，具有廣譜抗菌消炎、抗病毒、清除氧自由基、增加冠脈血流量、抗氧化、降血壓等多種生物活性。由野菊花膏粉(主要成分為黃酮類化合物)、珍珠層、槐米、鹽酸可樂定等中 西藥制成的珍菊降壓片，在高血壓診療中得到較廣泛的應用。以黃酮類化合物為主要成分的野菊花栓、野菊花注射液、顆粒劑等也已經(jīng)投入使用。因此研究從野菊花中提取和精制黃酮類化合物有利于提高野菊花利用率，也有利于為黃酮單體的制備提供較高純度的原料。目前野菊花黃酮的提取方法主要有水提法、甲醇提取法和乙醇提取法，在此基礎(chǔ)上還可以結(jié)合超聲、微波等外加物理場強化效果。水提法工藝成本低、無毒，但提取液中雜質(zhì)多，且易霉變；甲醇提取法毒性較大；微波法、超聲法對設(shè)備要求較高；乙醇提取法具有毒性低、提取液不易霉變、溶劑易回收等特點，是較為合適的提取方法。一般野菊花提取物得到的浸膏中總黃酮含量較低，需要進一步精制。野菊花浸膏精制總黃酮的方法主要有醇沉法、液-液萃取法、大孔樹脂吸附法和制備型高效液相色譜法等。在工業(yè)上，醇沉法較為常見，但黃酮損失嚴重；大孔樹脂吸附法和制備型高效液相色譜法是實驗室分離純化黃酮的主要方法，但不利于工業(yè)化生產(chǎn)；液-液萃取法具有生產(chǎn)能力大、效率較高、便于連續(xù)和安全操作、易于實現(xiàn)自動控制等一系列特點，是較為常用的精制方法。目前野菊花浸膏精制總黃酮的工藝中，液-液萃取法多用于提純前的預處理，沒有將其作為主要的精制手段來研究，因此研究液-液萃取法精制總黃酮具有較高的工業(yè)價值，也有利于為黃酮單體的制備提供較高純度的原料。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從野菊花中提取精制高純度總黃酮的方法。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種從野菊花中提取精制高純度總黃酮的方法，它包括如下步驟
(1)取40-100目的野菊花粉，加入體積百分比為40-90%的乙醇水溶液，固液比為1:5-20g/mL,在40-70 0C下攪拌提取0. 5_2h，將提取液蒸干，得野菊花浸膏；
(2)將野菊花浸膏重新溶解制成5-15g/L的水溶液作為原料液；
(3)加入水飽和的正丁醇萃取，水飽和的正丁醇與原料液的相比為1-5，在25-600C下攪拌萃取0. 5-2h，靜置分層，取上相，得萃取物；
(4)重復2次步驟3，合并第2、3次的萃取物，蒸干，得野菊花總黃酮產(chǎn)品，其純度可達60%以上。
本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明從野菊花中提取精制高純度總黃酮的方法，用乙醇水溶液從野菊花中提取總黃酮，再用液-液萃取法進行精制，產(chǎn)品總黃酮的純度高，達到60%以上。


圖I萃取率和純度隨萃取次數(shù)的變化；
圖2萃取率和純度隨萃取次數(shù)的變化。
具體實施例方式本發(fā)明從野菊花中提取精制高純度總黃酮的方法的具體步驟如下
I、取40-100目的野菊花粉，加入體積百分比為40-90%的乙醇水溶液，固液比為l:5-20g/mL，在40-70 0C下攪拌提取0. 5_2h，將提取液蒸干，得野菊花浸膏。2、將野菊花浸膏重新溶解制成5_15g/L的水溶液作為原料液。3、加入水飽和的正丁醇萃取，水飽和的正丁醇與原料液的相比為1-5，在25-60 0C下攪拌萃取0. 5-2h，靜置分層，取上相，得萃取物。4、重復2次步驟3，合并第2、3次的萃取物，蒸干，得野菊花總黃酮產(chǎn)品，其純度(重量百分比)可達60%以上(由NaNO2-Al (NO3)3-NaOH比色法測定)。本發(fā)明中所述的NaNO2-Al (NO3) 3_NaOH比色法如下
野菊花總黃酮采用NaNO2-Al (N03)3-Na0H比色法測定。以蘆丁為標準品，測定標準曲線精確稱取蘆丁粉末，于容量瓶定容作為母液，精確量取母液(濃度為0.213 g/L)0. 5、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0、12. 0 mL 于 25 mL 容量瓶中，加入 5% NaNO2 溶液 1.0 mL，放置 6 min，加A 10% Al (NO3) 3 溶液 I. 0 mL,放置 6 min,再加入 4% NaOH 溶液 10. 0 mL,放置 15 min 后加蒸餾水定容，搖勻，以不加顯色劑的空白組作對比，測定其在508 nm處的吸光度。經(jīng)測定，標準曲線為y=14.692x+0.0014 (R2=O. 9996)，其中x為吸光度，y為測試液濃度(g/L)。蘆丁在4. 3-102.2 mg/L范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。待測樣品在同等條件下顯色并測定吸光度，由標準曲線計算樣品中總黃酮含量(以蘆丁計)。為進一步闡述發(fā)明內(nèi)容，以下結(jié)合具體實施例說明發(fā)明的內(nèi)容，本發(fā)明的內(nèi)容包括以下實施例，但不局限于實施例。實施例I
將50g (40-50目)的野菊花粉導入三口燒瓶中，加入IOOOmL 70%的乙醇水溶液，在70 0C下攪拌回流提取lh，趁熱抽濾得提取液，將提取液蒸干即得野菊花浸膏，純度為21%。將提取獲得的野菊花浸膏重新溶解，配制成15g/L的水溶液作為原料液，加入水飽和的正丁醇作為萃取劑，相比為1，在25 T:下振蕩萃取lh，萃取3次，萃取結(jié)果如圖I所示。第I次萃取的萃取相中總黃酮純度約為25%，而第2、3次萃取的萃取相中總黃酮的純度均高于60%,因此本發(fā)明的技術(shù)關(guān)鍵是在多次液-液萃取時，取第2、3次萃取的萃取相作為野菊花總黃酮產(chǎn)品。合并第2、3次萃取相，蒸干，得野菊花總黃酮產(chǎn)品，其純度為63%。實施例2
將50g (40-100目)的野菊花粉導入三口燒瓶中，加入500mL 80%的乙醇水溶液，在40 0C下攪拌回流提取2h，趁熱抽濾得提取液，將提取液蒸干即得野菊花浸膏，總黃酮純度為22%。將提取獲得的野菊花浸膏重新溶解，配制成5g/L的水溶液作為原料液，加入水飽和的正丁醇作為萃取劑，相比為4，在25 0C下振蕩萃取0. 5h，萃取3次，萃取結(jié)果如圖2所示。第I次萃取的萃取相中總黃酮純度約為25%，而第2、3次萃取的萃取相中總黃酮的純度均高于60%，因此本發(fā)明的技術(shù)關(guān)鍵是在多次液-液萃取時，取第2、3次萃取的萃取相作為野菊花總黃酮產(chǎn)品。合并第2、3次萃取相，蒸干，得野菊花總黃酮產(chǎn)品，其純度為65%。
上述實施例用來解釋說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明進行限制，在本發(fā)明的精神和權(quán)利要求的保護范圍內(nèi)，對本發(fā)明作出的任何修改和改變，都落入本發(fā)明的保護范圍。
權(quán)利要求
1.一種從野菊花中提取精制高純度總黃酮的方法，其特征在于，它包括如下步驟 (1)取40-100目的野菊花粉，加入體積百分比為40-90%的乙醇水溶液，固液比為l:5-20g/mL，在40-70 0C下攪拌提取約0. 5_2h，將提取液蒸干，得野菊花浸膏； (2)將野菊花浸膏重新溶解制成5-15g/L的水溶液作為原料液； (3)加入水飽和的正丁醇萃取，水飽和的正丁醇與原料液的相比為1-5，在25-600C下攪拌萃取約0. 5-2h，靜置分層，取上相，得萃取物； (4)重復2次步驟3，合并第2、3次的 萃取物，蒸干，得野菊花總黃酮產(chǎn)品，其純度可達60%以上。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從野菊花中提取精制高純度總黃酮的方法，該方法用乙醇水溶液從野菊花中提取得到浸膏，再用液-液萃取法對浸膏進行多次萃取得到總黃酮萃取物，其技術(shù)關(guān)鍵是在多次液-液萃取時，取第2、3次萃取物作為野菊花總黃酮產(chǎn)品，其純度可達60%以上。
文檔編號A61P39/06GK102631392SQ201210135120
公開日2012年8月15日 申請日期2012年5月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月4日
發(fā)明者何潮洪, 周穎, 林真, 林良良, 沈劍, 陳菡, 陳潁潁 申請人:浙江大學