專利名稱：龍須藤總黃酮在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種龍須藤總黃酮的新用途。屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
龍須藤為豆科羊蹄甲屬植物龍須藤Bauhinia championii Benth.的藤,又稱九龍?zhí)?、梅花入骨丹，主要分布福建、江西、廣西、浙江等，具有祛風(fēng)濕、行血氣的功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，龍須藤的有效成分具有祛風(fēng)除濕、活血止痛、健脾理氣的作用，用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腰腿疼、跌打損傷、胃痛、小兒疳積。根據(jù)閩南名醫(yī)黃金鋼驗方，以龍須藤為主要成分的康美膚燒傷膏在臨床上具有良好治療燒燙傷作用。龍須藤藥材的化學(xué)成分主要為黃酮類、氰苷、沒食子酸等。已有文獻報道龍須藤總黃酮的提取分離方法，如徐偉，等，大孔吸附樹脂分離純化龍須藤總黃酮的工藝研究，廣東藥學(xué)院學(xué)報，2009，25 (2)，報道了采用AB-8大孔樹脂分離純化龍須藤黃酮的工藝條件。針對龍須藤總黃酮的用途，目前尚無相關(guān)文獻報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了龍須藤總黃酮的新用途。本發(fā)明提供了龍須藤總黃酮在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。其中，所述的藥物為鎮(zhèn)痛抗炎的藥物。其中，所述的龍須藤總黃酮中總黃酮的百分含量，以蘆丁計，不少于55%。本發(fā)明還提供了一種治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，它是由有效量的龍須藤總黃酮為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的制劑。所述的制劑是口服制劑。本發(fā)明龍須藤總黃酮用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，藥效明確，質(zhì)量可控，且制備方法穩(wěn)定，適合大生產(chǎn)，為臨床提供了一種新的選擇。


圖I大鼠一般狀態(tài)圖2正常對照組圖3模型組圖4雷公藤多苷組圖5總黃酮低劑量組圖6總黃酮中劑量組圖7總黃酮高劑量組
具體實施例方式實施例I龍須藤總黃酮的提取
I. I回流提取法稱取龍須藤粗粉20g，分別加入200ml的70%乙醇浸泡30min后， 在水浴上加熱回流提取2次.每次lh，趁熱過濾，殘渣用相應(yīng)溶劑洗滌2 3次，合并濾液回收至無醇味，加水溶解至每ImL含O. 5g生藥,離心(4000r/min) 15min,過濾，備用。取 I. OmL取置于25mL量瓶中，加水6. OmL ;加入5% (質(zhì)量分數(shù))亞硝酸鈉溶液I. OmL,使混勻，放置6min ;加人10% (質(zhì)量分數(shù))硝酸鋁I. OmL，搖勻，放置6min ;再加入4% (質(zhì)量分數(shù))NaOH溶液10. OmL，加水至刻度，搖勻，放置15min ;照分光光度法(中國藥典2010版一部附錄VB)于500nm的波長處測定吸光度A。樣品溶液中總黃酮的提取率(總黃酮提取率 =總黃酮質(zhì)量/龍須藤質(zhì)量X100% )。總黃酮的提取率為2. 63%。I. 2索氏提取法稱取龍須藤粗粉5g，分別加入50ml的70%乙醇浸泡30min后，將溫度控制在85°C，提取4h，趁熱抽濾。殘渣用相應(yīng)溶劑洗滌2 3次，合并濾液回收至無醇味，加水溶解至每ImL含O. 5g生藥,離心(4000r/min) 15min,過濾,備用。按上述分光光度法測定總黃酮，此法提取得到的總黃酮的提取率為2. 79%。I. 3超聲提取法稱取龍須藤粗粉20g，分別加入200ml的70%乙醇浸泡30min后， 超聲(300W)提取2次，每次30min，趁熱抽濾。殘渣用相應(yīng)溶劑洗滌2 3次，合并濾液回收至無醇味，加水溶解至每ImL含O. 5g生藥,離心(4000r/min) 15min,過濾,備用。按上述分光光度法測定總黃酮，此法提取得到的總黃酮的提取率為3. 58%。I. 4微波提取法稱取龍須藤粗粉5g，分別加入200ml的70%乙醇浸泡30min后，微波(400W)提取5min，趁熱抽濾，殘渣用相應(yīng)溶劑洗滌2 3次，合并濾液回收至無醇味，加水溶解至每ImL含O. 5g生藥,離心(4000r/min) 15min,過濾,備用。按上述分光光度法測定總黃酮，此法提取得到的總黃酮的提取率為2. 97%。I. 5超臨界CO2萃取法稱取龍須藤粗粉5g，裝入萃取釜中，在以lmL/g的無水乙醇為夾帶劑，萃取溫度60°C，萃取壓力35MPa，萃取時間lh，CO2流量SOkg/tT1的CO2超臨界萃取系統(tǒng)中萃取，收集萃取液，回收至無醇味，加水溶解至每ImL含O. 5g生藥,離心(4000r/ min) 15min，過濾，備用。按上述分光光度法測定總黃酮，此法提取得到的總黃酮的提取率為
I.97%。I. 6浸潰法稱取龍須藤粗粉5g，于70%乙醇、料液比I : 20、浸潰6h、室溫條件下浸潰提取，抽濾，殘渣用相應(yīng)溶劑洗滌2 3次，合并濾液回收至無醇味，加水溶解至每ImL 含O. 5g生藥,離心(4000r/min) 15min,過濾,備用。按上述分光光度法測定總黃酮,此法提取得到的總黃酮的提取率為I. 31%。I. 7滲漉提取法稱取龍須藤粗粉20g，用80%乙醇潤濕后裝入滲漉柱中，加溶劑浸泡24h后開始滲漉，控制流速3mL/min，收集滲漉液，回收至無醇味，加水溶解至每ImL含 O. 5g生藥,離心(4000r/min) 15min,過濾,備用。按上述分光光度法測定總黃酮,此法提取得到的總黃酮的提取率為2. 07%。I. 8龍須藤總黃酮的純化用乙醇浸泡4倍生藥量的AB-8型大孔樹脂24h后，上柱進行預(yù)處理，用體積分數(shù) 95%乙醇流動清洗，至流出的乙醇液至乙醇液與水I : 5混合不呈白色混濁為止，然后以蒸餾水沖洗至水洗液無醇味。取龍須藤提取液40mL (每ImL含O. 5g生藥，總黃酮含量不得少于1% )上樣，采用體積分數(shù)50%乙醇洗脫，洗脫體積為16倍生藥量，收集洗脫液，濃縮。純化得到的總黃酮的提取率為2. 99%，從提取液中的轉(zhuǎn)移率為83. 67%。
4
其中，I. 1-1. 7種提取方法得到的都是粗黃酮，經(jīng)過I. 8的純化，得到本發(fā)明龍須藤總黃酮，所述的龍須藤總黃酮中總黃酮的百分含量，以蘆丁計，不少于55%。具體含量測定方法及檢測數(shù)據(jù)為以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法測定龍須藤總黃酮含量。即精密稱取蘆丁對照品23. Omg,置50mL量瓶中，加95%乙醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。精密吸取對照品溶液I. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. 0,6. OmL，分別置于25mL量瓶中，加水至6. OmL ;加入5% 亞硝酸鈉溶液I. OmL，使混勻，放置6min ;加入10%硝酸鋁I. OmL，搖勻，放置6min ;再加入 4%氫氧化鈉溶液10. OmL，加水至刻度，搖勻，放置15min ;照分光光度法(中國藥典2010 版一部附錄VB)于500nm的波長處測定吸光度A，計算得出回歸方程。精密吸取樣品溶液
I.OmL置IOmL量瓶中，再精密吸取溶液I. OmL，按以上方法，自“加水至6. OmL”起依法測定吸光度，代入回歸方程計算出樣品溶液中總黃酮的百分含量。(總黃酮的百分含量=總黃酮的含量/總提取物)經(jīng)三次實驗，純化得到的龍須藤總黃酮百分含量分別為55%、59%、61%，結(jié)果得龍須藤總黃酮平均百分含量為58%。以下通過藥效學(xué)試驗證明本發(fā)明的有益效果。藥品與試劑雷公藤多苷片，黃石飛云制藥有限公司生產(chǎn)(批準文號，國藥準字Z42021212，)；本發(fā)明藥物(實施例I中I. 3超聲法再經(jīng)純化制備的龍須藤總黃酮)；本發(fā)明藥物的低劑量為含總黃酮10. 5mg/mL、中劑量為含總黃酮21mg/mL、高劑量為含總黃酮 42mg/mLo角叉菜膠(carrageenan)用生理鹽水配成I %,放置2d后使用。硫化鈉上海統(tǒng)亞化工科技發(fā)展有限公司，批號051212。二甲苯AR，上海興達化工試劑廠，批號20050203。 乙醚AR，上海市久億化學(xué)試劑有限公司，批號20050401。牛II型膠原，完全弗氏佐劑，由美國SIGMA公司生產(chǎn)，購自北京博蕾德生物科技有限公司。TNF-a、IL_1 (ELISA法)、免疫球蛋白(lgG、IgM)試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。試驗例I本發(fā)明藥物的抗炎實驗I對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響將50只體重20±2g克小鼠，按體重隨機分為5組低劑量本發(fā)明藥物組，中劑量本發(fā)明藥物組，高劑量本發(fā)明藥物組，陽性對照組(雷公藤多苷片)，模型對照組(白凡士林)。8組小鼠分別灌胃，每天I次，連續(xù)3d，末次涂藥 30min后，用二甲苯以O(shè). Iml/只的量在右耳兩側(cè)相同的地方均勻涂抹，左耳作對照，4h后處死，立即剪下雙耳，用直徑8mm打孔器取相同部位耳片，在萬分之一半自動分析天平上稱重，按以(右耳重-左耳重)/左耳重為腫脹率，以(模型組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/模型組平均腫脹度為腫脹抑制率。將對照組與給藥組的腫脹程度使用SPSS統(tǒng)計軟件處理分析，其平均數(shù)間差異采用單因素方差分析，見表I。表I本發(fā)明藥物組對小鼠二甲苯致炎的影響(η = 10)
權(quán)利要求
1.龍須藤總黃酮在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，其特征在于所述的藥物為鎮(zhèn)痛抗炎的藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的用途，其特征在于所述的龍須藤總黃酮中總黃酮的百分含量，以蘆丁計，不少于55%。
4.一種治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，其特征在于它是由有效量的龍須藤總黃酮為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的制劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，其特征在于所述的制劑是口服制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了龍須藤總黃酮在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。本發(fā)明還提供了一種治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物。本發(fā)明龍須藤總黃酮用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，藥效明確，質(zhì)量可控，且制備方法穩(wěn)定，適合大生產(chǎn)，為臨床提供了一種新的選擇。
文檔編號A61K36/48GK102579558SQ20121009266
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月31日
發(fā)明者張玉琴, 徐偉, 李煌, 褚克丹, 鄭海音, 陳立典 申請人:福建中醫(yī)藥大學(xué)