專利名稱：藏茵陳有效部位提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物提取物的制備方法，尤其涉及藏茵陳有效部位提取物的制備方法。
背景技術(shù)：
“藏茵陳”是藏藥醫(yī)學(xué)中治療肝膽病、血液病的特色藥用資源植物。藏藥所述的藏茵陳指藏藥“蒂達(dá)”，“蒂達(dá)”主要為龍膽科的獐牙菜屬、花錨屬、扁蕾屬和肋柱花屬等數(shù)10種植物?！安匾痍悺彼幉暮h(huán)烯醚萜類和口山酮類成分，是“藏茵陳”治療肝炎和膽囊炎等肝膽系統(tǒng)疾病的主要藥效成分。中國(guó)發(fā)明專利(專利號(hào)92108809. 4)公開了一種藏茵陳有效成分的提取工藝、設(shè)備和藏茵陳片劑的生產(chǎn)方法，該方法用藏茵陳草為原料，乙醇為提取劑，連續(xù)提取工序生產(chǎn)藏茵陳片劑；中國(guó)發(fā)明專利(專利號(hào)200710061832.4)公開了一種藏茵陳針劑的制備工藝，該工藝以藏茵陳為原料，經(jīng)親水性溶劑提取、重力分離和分子篩截留方法生產(chǎn)治療各種肝炎、膽囊炎、肝損傷、肝纖維化、脂肪肝等疾病的注射水劑和凍干粉劑；中國(guó)發(fā)明專利(專利號(hào)200710061832.4)公開了一種由提取、除雜、濃縮、初步分離、吸附分離、濃縮、干燥、粉碎、進(jìn)一步精制等工藝設(shè)備而成的藏茵陳有效成分的提取方法，該方法采用水、乙醇提取，乙醇超聲提取，采用離心、大孔樹脂等吸附、分離有效成分；中國(guó)發(fā)明專利(專利號(hào)200710163097.8)公開了一種藏茵陳提取物，包含獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、異葒草苷5種成分；中國(guó)發(fā)明專利(專利號(hào)200910078578.8)公開了一種藏茵陳提取物，其中至少含總黃酮，總黃酮占該藏茵陳提取物的2(Γ75% ;中國(guó)發(fā)明專利(專利號(hào)201010176093. 5)公開了一種分離藏茵陳中苷類化學(xué)成分的方法，包括提取藏茵陳提取物水溶液、依據(jù)極性梯度萃取組分和柱層析分離純化三個(gè)工藝步驟。但上述藏茵陳提取和分離方法只涉及藏茵陳浸膏的提取及藏茵陳活性部位樹脂和柱層析分離純化方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種分離效果好、收率高、產(chǎn)品質(zhì)量好的藏茵陳有效部位提取物的制備方法。為解決上述問題，本發(fā)明所述的藏茵陳有效部位提取物的制備方法，包括以下步驟
⑴將干燥、切成O. 5^2cm小段的藏茵陳原料按其重量的1(Γ30倍加純水或乙醇溶液冷浸12 48h后，在溫度為2(T60°C的條件下超聲提取3(T60min，經(jīng)濾布過濾，得粗提液；
⑵將所述粗提液經(jīng)離心除雜后，得到離心液，該離心液經(jīng)減壓濃縮除去乙醇后，加純水至濃縮前體積量，得提取液；
⑶將所述提取液依次采用陶瓷膜澄清和超濾膜分離的膜分離方式進(jìn)行純化分離，最后得到超濾分離液；
⑷將所述超濾分離液用大孔樹脂進(jìn)行吸附后，用質(zhì)量濃度為20飛0%的乙醇溶液洗脫， 得到洗脫液；所述洗脫液經(jīng)納濾膜濃縮得濃縮液，該濃縮液經(jīng)干燥至恒重，即得藏茵陳有效部位提取物。所述步驟⑴中的藏茵陳原料是指川西猜牙菜(5ke_riia mussotii )、印度猜牙菜 {Swertia cAiraja'ia)和抱莖猜牙菜(Skeriia franchetiana)中飽一種。所述步驟⑴中的乙醇溶液的質(zhì)量濃度為(Γ95%。所述步驟⑵中的離心轉(zhuǎn)速為300(T5000rpm。所述步驟⑵中的減壓濃縮條件是指真空度為O. Γ0. 5MPa，溫度為5(T80°C。所述步驟⑶中的陶瓷膜膜孔徑為50nnT800nm。所述步驟⑶中的超濾膜的截留有機(jī)物分子量為500(T50000Dalton。所述步驟⑷中的納濾膜的截留有機(jī)物分子量為30(Tl000Dalton。所述步驟⑷中的干燥是指噴霧干燥、微波干燥或冷凍干燥中的一種。所述步驟⑷中的大孔樹脂是指非極性或弱極性或中極性大孔樹脂。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)
I、本發(fā)明利用超聲提取技術(shù)、膜分離技術(shù)和樹脂純化技術(shù)制得的藏茵陳提取物呈棕色粉末,味極苦,主要有效成分為龍膽苦苷(Gentiopicroside)、猜牙菜苦苷(Swertiamarin)、 猜牙菜苷(Sweroside)、芒果苷(Mangiferin)、當(dāng)藥醇苷(Swertianolin)、異IE草苷 (isoorientin)、當(dāng)藥黃素和和7_0_[ a -L-卩比喃鼠李糖-(I — 2) -β -D-卩比喃木糖]_1， 8_ 二輕基 _3_ 甲氧基口山酮(7-0-[ a -L-rhamnopyranosyl - (I — 2)-β -D~xylopyran osyl] - I, 8- dihydroxy-3-methoxyxanthone)，總含量 15. 5% 40. 4%,其中龍膽苦苷含量3. 49Γ20. 6%，獐牙菜苦苷含量O. 69Γ4. 8%，獐牙菜苷含量為O. 1°/Γ . 6%，芒果苷含量 09Γ10. 6%,當(dāng)藥醇苷含量09Γ10. 2%,異葒草苷0°/Γ5. 0%,當(dāng)藥黃素0°/Γ8. 5%, 7-0-[a -L-吡喃鼠李糖-(I — 2)-β-D-吡喃木糖]-I，8-二羥基-3-甲氧基口山酮含量09Γ8. 3%。2、本發(fā)明采用超聲提取時(shí)溫度較低，較常規(guī)熱回流提取，避免了由于環(huán)烯醚萜類物質(zhì)的熱不穩(wěn)定性而導(dǎo)致分解的現(xiàn)象，因此有效成分收率高。3、本發(fā)明采用有機(jī)膜和樹脂組合方式進(jìn)行分離純化，分離純化效果好，有效成分
含量高，產(chǎn)品質(zhì)量好。4、本發(fā)明可實(shí)現(xiàn)線性放大，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I 藏茵陳有效部位提取物的制備方法，包括以下步驟
⑴取干燥的川西獐牙菜原料lOKg，切成O. 5^2cm的小段，加10倍量純水冷浸12 h后， 在溫度20°C (常溫)下用北京弘祥隆生物技術(shù)開發(fā)有限公司生產(chǎn)的CTXNW-100B組合式循環(huán)超聲提取機(jī)提取I次，時(shí)間30min，經(jīng)濾布過濾得粗提液。⑵將粗提液用上海浦東天本離心機(jī)械有限公司生產(chǎn)的GQ75型管式離心機(jī)以 3000rpm的轉(zhuǎn)速離心l(T20min,除去粗提液中的顆粒物質(zhì)得到90Kg離心液。⑶將離心液采用合肥世杰膜工程有限責(zé)任公司生產(chǎn)的SJM-FHM-IO型膜孔徑為 200nm的陶瓷微濾膜設(shè)備過濾，得澄清液IOOKg (試驗(yàn)過程補(bǔ)加水20Kg，剩陶瓷膜過濾殘留液10Kg)。澄清液用合肥世杰膜工程有限責(zé)任公司生產(chǎn)的SJM-DGN-060型、截留有機(jī)物分子量為5000Dalton的多功能膜設(shè)備進(jìn)行超濾截留分離(試驗(yàn)過程補(bǔ)加200Kg純水)，得超濾分離液280Kg (剩超濾膜殘留液18Kg)。
⑷將超濾分離液用非極性大孔樹脂D101( 150*30cm)進(jìn)行吸附后，用樹脂體積6倍量(約300L)的質(zhì)量濃度為40%的乙醇溶液洗脫，得到洗脫液；洗脫液經(jīng)合肥世杰膜工程有限責(zé)任公司生產(chǎn)的SJM-DGN-060型、截留有機(jī)物分子量為300Dalton的納濾膜濃縮得濃縮液12Kg，該濃縮液用R2002K型20L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)一步濃縮后，采用瑞士 BUCHI生產(chǎn)的Mini Spray Dryer B-29型噴霧干燥器進(jìn)行噴霧干燥,設(shè)定塔風(fēng)溫度為160°C、出塔風(fēng)溫為80°C、 氣流量為20 m/h，干燥至恒重，即得棕色藏茵陳有效部位提取物O. 2Kg，得率2. 0%。該提取物經(jīng)美國(guó)安捷倫公司生產(chǎn)的Agilent 1200型高效液相色譜HPLC測(cè)定含龍膽苦苷11. 6%、獐牙菜苦苷3. 4%、獐牙菜苷O. 5%、芒果苷0%、當(dāng)藥醇苷O %、異葒草苷O %、當(dāng)藥黃素0%和7-0-[a-L-吡喃鼠李糖-(I — 2)-β-D-卩比喃木糖]-I，8-二羥基-3-甲氧基口山酮含量O %，合計(jì)總含量15. 5%。實(shí)施例2 藏茵陳有效部位提取物的制備方法，包括以下步驟
⑴取干燥的川西獐牙菜原料5Kg，切成O. 5^2cm的小段，加20倍量質(zhì)量濃度為30%的乙醇溶液冷浸48 h后，在溫度40°C下用CTXNW-100B組合式循環(huán)超聲提取機(jī)提取I次，時(shí)間 30min,經(jīng)濾布過濾得粗提液。⑵將粗提液用GQ75型管式離心機(jī)以5000rpm的轉(zhuǎn)速離心l(T20min除雜，除去粗提液中的顆粒物質(zhì)得到96Kg離心液，該離心液在真空度O. 3MPa和溫度為80°C條件下經(jīng)減壓濃縮除去乙醇后，補(bǔ)加純水至濃縮前體積量，得提取液。⑶將提取液采用SJM-FHM-10型膜孔徑為50nm的陶瓷微濾膜設(shè)備過濾，得澄清液 104Kg (試驗(yàn)過程補(bǔ)加水20Kg，剩陶瓷膜過濾殘留液9Kg)。澄清液用SJM-DGN-060型、截留有機(jī)物分子量為IOOOODalton的多功能膜設(shè)備進(jìn)行超濾截留分離(試驗(yàn)過程補(bǔ)加200Kg純水)，得超濾分離液288Kg (剩超濾膜殘留液16Kg)。⑷將超濾分離液用非極性大孔樹脂D201 (150*30cm)進(jìn)行吸附后，用樹脂體積6 倍量(約300L)的質(zhì)量濃度為20%的乙醇溶液洗脫，得到洗脫液；洗脫液經(jīng)SJM-DGN-060型、 截留有機(jī)物分子量為300Dalton的納濾膜濃縮得濃縮液12Kg，納濾濃縮液用R2002K型20L 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)一步濃縮后，采用FDU-1100型冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，冷卻溫度為_45°C， 真空度為O. 05、. IMPa，干燥至恒重，得棕色藏茵陳有效部位提取物O. 2Kg，得率4. 0%。該提取物經(jīng)Agilent 1200型高效液相色譜HPLC測(cè)定含龍膽苦苷12. 6%、獐牙菜苦苷3. 5%、獐牙菜苷I. 2%、芒果苷3. 6%、當(dāng)藥醇苷3. 2%、異葒草苷2. 3 %、當(dāng)藥黃素2. 8%和 7-0-[a-L-吡喃鼠李糖-(I — 2)-β-D-吡喃木糖]-I，8-二羥基-3-甲氧基口山酮含量 2.5 %，合計(jì)總含量31. 7%。實(shí)施例3 藏茵陳有效部位提取物的制備方法，包括以下步驟
⑴取干燥的抱莖獐牙菜原料10Kg，切成O. 5^2cm的小段，加10倍量質(zhì)量濃度為50%的乙醇溶液冷浸24 h后，在溫度60°C下用CTXNW-100B組合式循環(huán)超聲提取機(jī)提取I次，時(shí)間 30min,經(jīng)濾布過濾得粗提液。⑵將粗提液用GQ75型管式離心機(jī)以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心l(T20min除雜，除去粗提液中的顆粒物質(zhì)得到92Kg離心液，該離心液在真空度O. 3MPa和溫度為70°C條件下經(jīng)減壓濃縮除去乙醇后，補(bǔ)加純水至濃縮前體積量，得提取液。⑶將提取液采用SJM-FHM-10型膜孔徑為SOOnm的陶瓷微濾膜設(shè)備過濾，得澄清液 IOlKg(試驗(yàn)過程補(bǔ)加水20Kg，剩陶瓷膜過濾殘留液lOKg)。澄清液用SJM-DGN-060型、截留有機(jī)物分子量為50000Dalton的多功能膜設(shè)備進(jìn)行超濾截留分離(試驗(yàn)過程補(bǔ)加200Kg純水)，得超濾分離液280Kg (剩超濾膜殘留液20Kg)。⑷將超濾分離液用非極性大孔樹脂HP-20 (150*30cm)進(jìn)行吸附后，用樹脂體積6 倍量(約300L)的質(zhì)量濃度為50%的乙醇溶液洗脫，得到洗脫液；洗脫液經(jīng)SJM-DGN-060型、 截留有機(jī)物分子量為IOOODalton的納濾膜濃縮得濃縮液15Kg，納濾濃縮液用R2002K型 20L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)一步濃縮后，采用KMZ-2006型微波真空干燥機(jī)進(jìn)行微波干燥，微波功率為4 6KW，真空度為O. Γ0. 5MPa，干燥至恒重，得棕色藏茵陳有效部位提取物O. 48Kg，得率
4.8%ο該提取物經(jīng)Agilent 1200型高效液相色譜HPLC測(cè)定含龍膽苦苷3. 4%、獐牙菜苦苷O. 6%、獐牙菜苷O. 1%、芒果苷I. 6%、當(dāng)藥醇苷10. 2%、異葒草苷3. 6 %、當(dāng)藥黃素8. 5%和 7-0-[a-L-吡喃鼠李糖-(I — 2)-β-D-吡喃木糖]-I，8-二羥基-3-甲氧基口山酮含量 8. 3 %，合計(jì)總含量42. 3%ο實(shí)施例4 藏茵陳有效部位提取物的制備方法，包括以下步驟
⑴取干燥的印度獐牙菜原料lOKg，切成O. 5^2cm的小段，加10倍量質(zhì)量濃度為70%的乙醇溶液冷浸36 h后，在溫度20°C下用CTXNW-100B組合式循環(huán)超聲提取機(jī)提取I次，時(shí)間 30min,經(jīng)濾布過濾得粗提液。⑵將粗提液用GQ75型管式離心機(jī)以3500rpm的轉(zhuǎn)速離心l(T20min除雜，除去粗提液中的顆粒物質(zhì)得到90Kg離心液，該離心液在真空度O. 4MPa和溫度為70°C條件下經(jīng)減壓濃縮除去乙醇后，補(bǔ)加純水至濃縮前體積量，得提取液。⑶將提取液采用SJM-FHM-10型膜孔徑為400nm的陶瓷微濾膜設(shè)備過濾，得澄清液 96Kg (試驗(yàn)過程補(bǔ)加水20Kg，剩陶瓷膜過濾殘留液13Kg)。澄清液用SJM-DGN-060型、截留有機(jī)物分子量為IOOOODalton的多功能膜設(shè)備進(jìn)行超濾截留分離(試驗(yàn)過程補(bǔ)加200Kg純水)，得超濾分離液274Kg (剩超濾膜殘留液21Kg)。⑷將超濾分離液用非極性大孔樹脂XAD-16 (150*30cm)進(jìn)行吸附后，用樹脂體積 6倍量(約300L)的質(zhì)量濃度為60%的乙醇溶液洗脫，得到洗脫液；洗脫液經(jīng)SJM-DGN-060 型、截留有機(jī)物分子量為500Dalton的納濾膜濃縮得濃縮液18Kg，納濾濃縮液用R2002K型 20L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)一步濃縮后，采用KMZ-2006型微波真空干燥機(jī)進(jìn)行微波干燥，微波功率為4 6KW，真空度為O. Γ0. 5MPa，干燥至恒重，得棕色藏茵陳有效部位提取物O. 5Kg，得率
5.0%。該提取物經(jīng)Agilent 1200型高效液相色譜HPLC測(cè)定含含龍膽苦苷12. 8%、獐牙菜苦苷3. 2%、獐牙菜苷I. 6%、芒果苷9. 8%、當(dāng)藥醇苷7. 5%、異葒草苷0%、當(dāng)藥黃素0%和 7-0-[a-L-吡喃鼠李糖-(I — 2)-β-D-吡喃木糖]-I，8-二羥基-3-甲氧基口山酮含量 O %，合計(jì)總含量34. 9%。實(shí)施例5 藏茵陳有效部位提取物的制備方法，包括以下步驟
⑴取干燥的印度獐牙菜原料5Kg，切成O. 5^2cm的小段，加20倍量質(zhì)量濃度為95%的乙醇溶液冷浸30 h后，在溫度40°C下用CTXNW-100B組合式循環(huán)超聲提取機(jī)提取I次，時(shí)間 30min，經(jīng)濾布過濾得粗提液。⑵將粗提液用GQ75型管式離心機(jī)以4500rpm的轉(zhuǎn)速離心l(T20min除雜，除去粗提液中的顆粒物質(zhì)得到95Kg離心液，該離心液在真空度O. IMPa和溫度為50°C條件下經(jīng)減壓濃縮除去乙醇后，補(bǔ)加純水至濃縮前體積量，得提取液。⑶將提取液采用SJM-FHM-10型膜孔徑為50nm的陶瓷微濾膜設(shè)備過濾，得澄清液 102Kg(試驗(yàn)過程補(bǔ)加水20Kg，剩陶瓷膜過濾殘留液12Kg)。澄清液用SJM-DGN-060型、截留有機(jī)物分子量為50000Dalton的多功能膜設(shè)備進(jìn)行超濾截留分離(試驗(yàn)過程補(bǔ)加200Kg純水)，得超濾分離液283Kg (剩超濾膜殘留液18Kg)。⑷將超濾分離液用弱極性大孔樹脂AB-8 (150*30cm)進(jìn)行吸附后，用樹脂體積6 倍量(約300L)的質(zhì)量濃度為40%的乙醇溶液洗脫，得到洗脫液；洗脫液經(jīng)SJM-DGN-060型、 截留有機(jī)物分子量為300Dalton的納濾膜濃縮得濃縮液20Kg，納濾濃縮液用R2002K型20L 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)一步濃縮后，采用FDU-1100型冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，冷卻溫度為_45°C， 真空度為O. 05、. IMPa，干燥至恒重，得棕色藏茵陳有效部位提取物O. 21Kg，得率4. 2%。該提取物經(jīng)Agilent 1200型高效液相色譜HPLC測(cè)定含龍膽苦苷11. 2%、獐牙菜苦苷3. 2%、獐牙菜苷I. 5%、芒果苷10. 6%、當(dāng)藥醇苷8. 6%、異葒草苷0%、當(dāng)藥黃素0%和 7-0-[a-L-吡喃鼠李糖-(I — 2)-β-D-吡喃木糖]-I，8-二羥基-3-甲氧基口山酮含量
O%，合計(jì)總含量35. 1%。實(shí)施例6 藏茵陳有效部位提取物的制備方法，包括以下步驟
⑴取干燥的川西獐牙菜原料10Kg，切成O. 5^2cm的小段，加10倍量質(zhì)量濃度為70%乙醇溶液冷浸40h后，在溫度20°C下用CTXNW-100B組合式循環(huán)超聲提取機(jī)提取I次，時(shí)間 45min,經(jīng)濾布過濾得粗提液。⑵將粗提液用GQ75型管式離心機(jī)以4500rpm的轉(zhuǎn)速離心l(T20min除雜，除去粗提液中的顆粒物質(zhì)得到97Kg離心液，該離心液在真空度O. 2MPa和溫度為60°C條件下經(jīng)減壓濃縮除去乙醇后，補(bǔ)加純水至濃縮前體積量，得提取液。⑶將提取液采用SJM-FHM-10型膜孔徑為200nm的陶瓷微濾膜設(shè)備過濾，得澄清液 105Kg(試驗(yàn)過程補(bǔ)加水20Kg，剩陶瓷膜過濾殘留液lOKg)。澄清液用SJM-DGN-060型、截留有機(jī)物分子量為50000Dalton的多功能膜設(shè)備進(jìn)行超濾截留分離(試驗(yàn)過程補(bǔ)加200Kg純水)，得超濾分離液280Kg (剩超濾膜殘留液22Kg)。⑷將超濾分離液用弱極性大孔樹脂DM130 (150*30cm)進(jìn)行吸附后，用樹脂體積6 倍量(約300L)的質(zhì)量濃度為60%的乙醇溶液洗脫，得到洗脫液；洗脫液經(jīng)SJM-DGN-060型、 截留有機(jī)物分子量為500Dalton的納濾膜濃縮得濃縮液17. 5Kg，納濾濃縮液用R2002K型 20L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)一步濃縮后，采用KMZ-2006型微波真空干燥機(jī)進(jìn)行微波干燥，微波功率為4 6KW，真空度為O. Γ0. 5MPa，干燥至恒重，得棕色藏茵陳有效部位提取物O. 45Kg，得率 4. 5%ο該提取物經(jīng)Agilent 1200型高效液相色譜HPLC測(cè)定含含龍膽苦苷8. 6%、獐牙菜苦苷2. 2%、獐牙菜苷O. 8%、芒果苷8. 8%、當(dāng)藥醇苷6. 3%、異葒草苷5. 0%、當(dāng)藥黃素4. 2%和 7-0-[a-L-吡喃鼠李糖-(I — 2)-β-D-吡喃木糖]-I，8-二羥基-3-甲氧基口山酮含量 4. 5%，合計(jì)總含量46. 0%。實(shí)施例7 藏茵陳有效部位提取物的制備方法，包括以下步驟
⑴取干燥的印度獐牙菜原料5Kg，切成O. 5^2cm的小段，加20倍量質(zhì)量濃度為30%乙醇溶液冷浸30h后，在溫度40°C下用CTXNW-100B組合式循環(huán)超聲提取機(jī)提取I次，時(shí)間 60min,經(jīng)濾布過濾得粗提液。
⑵將粗提液用GQ75型管式離心機(jī)以3500rpm的轉(zhuǎn)速離心l(T20min除雜，除去粗提液中的顆粒物質(zhì)得到92Kg離心液，該離心液在真空度O. 5MPa和溫度為80°C條件下經(jīng)減壓濃縮除去乙醇后，補(bǔ)加純水至濃縮前體積量，得提取液。⑶將提取液采用SJM-FHM-10型膜孔徑為400nm的陶瓷微濾膜設(shè)備過濾，得澄清液 96Kg (試驗(yàn)過程補(bǔ)加水20Kg，剩陶瓷膜過濾殘留液12Kg)。澄清液用SJM-DGN-060型、截留有機(jī)物分子量為5000Dalton的多功能膜設(shè)備進(jìn)行超濾截留分離(試驗(yàn)過程補(bǔ)加200Kg純水)，得超濾分離液275Kg (剩超濾膜殘留液16Kg)。⑷將超濾分離液用中極性大孔樹脂ADS-7 (150*30cm)進(jìn)行吸附后，用樹脂體積6 倍量(約300L)的質(zhì)量濃度為20%的乙醇溶液洗脫，得到洗脫液；洗脫液經(jīng)SJM-DGN-060型、 截留有機(jī)物分子量為300Dalton的納濾膜濃縮得濃縮液14Kg，納濾濃縮液用R2002K型20L 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)一步濃縮后，采用FDU-1100型冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，冷卻溫度為_45°C， 真空度為O. 05、. IMPa，干燥至恒重，得棕色藏茵陳有效部位提取物O. 14Kg，得率2. 8%。該提取物經(jīng)Agilent 1200型高效液相色譜HPLC測(cè)定含龍膽苦苷22. 6%、獐牙菜苦苷6. 8%、獐牙菜苷3. 2%、芒果苷0%、當(dāng)藥醇苷0%、異葒草苷0%、當(dāng)藥黃素0%和7-0-[a -L-吡喃鼠李糖-(I — 2)-i3-D-吡喃木糖]-1，8-二羥基-3-甲氧基口山酮含量O %，合計(jì)總含量 27. 0%。實(shí)施例8 藏茵陳有效部位提取物的制備方法，包括以下步驟
⑴取干燥的抱莖獐牙菜原料10Kg，切成O. 5^2cm的小段，加30倍量質(zhì)量濃度為50%的乙醇溶液冷浸24 h后，在溫度60°C下用CTXNW-100B組合式循環(huán)超聲提取機(jī)提取I次，時(shí)間 30min,經(jīng)濾布過濾得粗提液。⑵將粗提液用GQ75型管式離心機(jī)以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心l(T20min除雜，除去粗提液中的顆粒物質(zhì)得到140Kg離心液，該離心液在真空度O. 2MPa和溫度為70°C條件下經(jīng)減壓濃縮除去乙醇后，補(bǔ)加純水至濃縮前體積量，得提取液。⑶將提取液采用SJM-FHM-10型膜孔徑為SOOnm的陶瓷微濾膜設(shè)備過濾，得澄清液 145Kg(試驗(yàn)過程補(bǔ)加水20Kg，剩陶瓷膜過濾殘留液13Kg)。澄清液用SJM-DGN-060型、截留有機(jī)物分子量為IOOOODalton的多功能膜設(shè)備進(jìn)行超濾截留分離(試驗(yàn)過程補(bǔ)加200Kg純水)，得超濾分離液405Kg (剩超濾膜殘留液30Kg)。⑷將超濾分離液用中極性大孔樹脂ADS-7 (150*30cm)進(jìn)行吸附后，用樹脂體積6 倍量(約300L)的質(zhì)量濃度為50%的乙醇溶液洗脫，得到洗脫液；洗脫液經(jīng)SJM-DGN-060型、 截留有機(jī)物分子量為IOOODalton的納濾膜濃縮得濃縮液20Kg，納濾濃縮液用R2002K型 20L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)一步濃縮后，采用瑞士 BUCHI生產(chǎn)的Mini Spray Dryer B-29型噴霧干燥器進(jìn)行噴霧干燥，設(shè)定塔風(fēng)溫度為160°C、出塔風(fēng)溫為80°C、氣流量為20 m/h，干燥至恒重，即得棕色藏茵陳有效部位提取物O. 24Kg，得率4. 8%。該提取物經(jīng)Agilent 1200型高效液相色譜HPLC測(cè)定含龍膽苦苷2. 6%、獐牙菜苦苷O. 4%、獐牙菜苷O. 1%、芒果苷I. 1%、當(dāng)藥醇苷6. 0%、異葒草苷2. 4 %、當(dāng)藥黃素6. 5%和 7-0-[a-L-吡喃鼠李糖-(I — 2)-β-D-吡喃木糖]-I，8-二羥基-3-甲氧基口山酮含量 7.2 %，合計(jì)總含量34. 7%。
權(quán)利要求
1.藏茵陳有效部位提取物的制備方法，包括以下步驟⑴將干燥、切成o. 5^2cm小段的藏茵陳原料按其重量的1(T30倍加純水或乙醇溶液冷浸12 48h后，在溫度為2(T60°C的條件下超聲提取3(T60min，經(jīng)濾布過濾，得粗提液；⑵將所述粗提液經(jīng)離心除雜后，得到離心液，該離心液經(jīng)減壓濃縮除去乙醇后，加純水至濃縮前體積量，得提取液；⑶將所述提取液依次采用陶瓷膜澄清和超濾膜分離的膜分離方式進(jìn)行純化分離，最后得到超濾分離液；⑷將所述超濾分離液用大孔樹脂進(jìn)行吸附后，用質(zhì)量濃度為20飛0%的乙醇溶液洗脫， 得到洗脫液；所述洗脫液經(jīng)納濾膜濃縮得濃縮液，該濃縮液經(jīng)干燥至恒重，即得藏茵陳有效部位提取物。
2.如權(quán)利要求I所述的藏茵陳有效部位提取物的制備方法，其特征在于所述步驟⑴ 中的藏茵陳原料是指)11西獐牙菜、印度獐牙菜和抱莖獐牙菜中的一種。
3.如權(quán)利要求I所述的藏茵陳有效部位提取物的制備方法，其特征在于所述步驟⑴ 中的乙醇溶液的質(zhì)量濃度為(T95%。
4.如權(quán)利要求I所述的藏茵陳有效部位提取物的制備方法，其特征在于所述步驟⑵ 中的離心轉(zhuǎn)速為300(T5000rpm。
5.如權(quán)利要求I所述的藏茵陳有效部位提取物的制備方法，其特征在于所述步驟⑵ 中的減壓濃縮條件是指真空度為0. ro. 5MPa，溫度為5(T80°C。
6.如權(quán)利要求I所述的藏茵陳有效部位提取物的制備方法，其特征在于所述步驟⑶ 中的陶瓷膜膜孔徑為50nnT800nm。
7.如權(quán)利要求I所述的藏茵陳有效部位提取物的制備方法，其特征在于所述步驟⑶ 中的超濾膜的截留有機(jī)物分子量為500(T50000Dalton。
8.如權(quán)利要求I所述的藏茵陳有效部位提取物的制備方法，其特征在于所述步驟⑷ 中的納濾膜的截留有機(jī)物分子量為30(Tl000Dalton。
9.如權(quán)利要求I所述的藏茵陳有效部位提取物的制備方法，其特征在于所述步驟⑷ 中的干燥是指噴霧干燥、微波干燥或冷凍干燥中的一種。
10.如權(quán)利要求I所述的藏茵陳有效部位提取物的制備方法，其特征在于所述步驟⑷ 中的大孔樹脂是指非極性或弱極性或中極性大孔樹脂。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藏茵陳有效部位提取物的制備方法，該方法包括以下步驟⑴將干燥、切成0.5~2cm小段的藏茵陳原料加純水或乙醇溶液冷浸后，經(jīng)超聲提取、濾布過濾，得粗提液；⑵將所述粗提液經(jīng)離心除雜后，得到離心液，該離心液經(jīng)減壓濃縮除去乙醇后，加純水至濃縮前體積量，得提取液；⑶將所述提取液依次采用陶瓷膜澄清和超濾膜分離的膜分離方式進(jìn)行純化分離，最后得到超濾分離液；⑷將所述超濾分離液用大孔樹脂進(jìn)行吸附后，用乙醇溶液洗脫，得到洗脫液；所述洗脫液經(jīng)納濾膜濃縮得濃縮液，該濃縮液經(jīng)干燥至恒重，即得藏茵陳有效部位提取物。本發(fā)明分離效果好、收率高、產(chǎn)品質(zhì)量好，可實(shí)現(xiàn)線性放大，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K36/51GK102579564SQ201210066770
公開日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月15日
發(fā)明者李玉林 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所