專利名稱：混合光刺激方法及混合光刺激裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于一種混合光刺激方法以及混合光刺激裝置，尤其指一種可促進(jìn)膠原蛋白合成的混合光刺激方法以及混合光刺激裝置。
背景技術(shù)：
在皮膚科診斷中，常以藥物治療患者皮膚疾病，如青春痘等，但長期以來，藥物治療的結(jié)果多伴隨著副作用，長期服用會(huì)造成身體代謝上的負(fù)擔(dān)，且治療效果不盡理想，常會(huì)復(fù)發(fā)，無法有效改善患者的皮膚問題。近年來，醫(yī)療美容產(chǎn)業(yè)日益興盛，研究指出:波長介于400nm至475nm的藍(lán)光可用于青春痘治療，因藍(lán)光會(huì)與痤瘡桿菌(Propionibacterium acnes)或組織細(xì)胞中光感性內(nèi)紫質(zhì)(coproporphyrin)作用而產(chǎn)生毒性單相氧與自由基,進(jìn)而破壞細(xì)菌及部份皮脂腺組織細(xì)胞，改善青春痘的紅腫發(fā)炎。另一方面，波長介于600nm至750nm的紅光、波長介于550nm至600nm的黃光、及波長介于500nm至570nm的綠光,能夠刺激真皮層的纖維母細(xì)胞，進(jìn)而促進(jìn)膠原蛋白合成，防止皮膚老化。不過，為達(dá)到上述功效，目前業(yè)界大多使用激光或脈沖光，因此兩種光的能量或強(qiáng)度才足以達(dá)到上述效果，但卻容易造成細(xì)胞損傷。近來便積極發(fā)展一般光源或發(fā)光二極管光源來取代上述高強(qiáng)度光源，但目前發(fā)光二極管光源由于能量較弱，急需要找到適當(dāng)?shù)墓庹斩炔抛阋赃_(dá)到效果，否則光線照度過低會(huì)無法發(fā)揮療效；反之，光線照度過高時(shí)，除了會(huì)造成細(xì)胞受損之外，同時(shí)亦會(huì)使裝置體積提升，無法發(fā)展體積小且重量輕的可攜式光療裝置，而且所使用的光源皆為單一種光源。據(jù)此，若可以發(fā)產(chǎn)出一種混合光刺激方法及混合光刺激裝置，其中利用不同顏色且特定照度范圍的發(fā)光二極管組合，達(dá)到提升膠原蛋白合成，并可節(jié)省人力與時(shí)間成本，使患者能快速擁有美麗的肌膚。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種混合光刺激方法。本發(fā)明的另一目的在于提供一種混合光刺激裝置。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的混合光刺激方法，包括以下步驟:提供一發(fā)光二極管光源，該發(fā)光二極管光源為一黃光發(fā)光二極管與一紅光發(fā)光二極管的組合光源；以及將該發(fā)光二極管光源照射于一主體，以促進(jìn)膠原蛋白合成，其中，該黃光發(fā)光二極管的照度為1000至3500勒克司(Lux)，該紅光發(fā)光二極管的照度為6000至9500勒克司，且該黃光發(fā)光二極管與該紅光發(fā)光二極管的數(shù)量比為0.5-2: 0.5-2O所述的混合光刺激方法，其中，該主體為一纖維母細(xì)胞、一巨噬細(xì)胞或其組合。所述的混合光刺激方法，其中，該黃光發(fā)光二極管的光波長范圍介于570nm至590nm之間，該紅光發(fā)光二極 管的光波長范圍介于620nm至750nm。
所述的混合光刺激方法，其中，該發(fā)光二極管光源的照射時(shí)間介于5分鐘至90分鐘。本發(fā)明提供的混合光刺激裝置，包括:一殼體，形成一容置空間且具有一頂面以及一側(cè)緣，該頂面設(shè)有一出光口 ；—散光片，覆蓋該殼體的該出光口 ；一第一光源模塊，其設(shè)置于該殼體的該容置空間內(nèi)且具有一第一發(fā)光二極管，該第一發(fā)光二極管設(shè)于該散光片下方，且該第一發(fā)光二極管為一黃光發(fā)光二極管與一紅光發(fā)光二極管的組合光源，其中，該黃光發(fā)光二極管的照度為1000至3500勒克司，該紅光發(fā)光二極管的照度為6000至9500勒克司，且該黃光發(fā)光二極管與該紅光發(fā)光二極管的數(shù)量比為 0.5-2: 0.5-2 ;以及一控制模塊，其電性連接該第一光源模塊與一電源模塊。所述的混合光刺激裝置，其中，該電源模塊為一外部電源或設(shè)置于該殼體的該容置空間內(nèi)。所述的混合光刺激裝置，其中，該控制模塊包括:一充電孔，以供該電源模塊電性連接該控制模塊。所述的混合光刺激裝置，其中，該控制模塊包括:一電源開關(guān)，設(shè)置于該殼體表面，以控制該電源模塊供應(yīng)電源。所述的混合光刺激裝置，其中，該殼體的該側(cè)緣設(shè)有一出光孔。所述的混合光刺激裝置，其中，包括:一透光片，覆蓋該出光孔；以及一第二光源模塊，對應(yīng)透光片設(shè)置并發(fā)出光線穿過該透光片。所述的混合光刺激裝置，其中，該控制模塊包括:一模式切換開關(guān)，皆設(shè)置于該殼體表面，以啟動(dòng)該第一光源模塊或該第二光源模塊。本發(fā)明采用發(fā)出特定照度范圍的紅光發(fā)光二極管以及黃光發(fā)光二極管的混合光源，以期達(dá)到刺激纖維母細(xì)胞，增加膠原蛋白合成，同時(shí)促進(jìn)血液循環(huán)、加快老廢細(xì)胞代謝


圖1為本發(fā)明實(shí)施例一混合光刺激裝置的結(jié)構(gòu)示意2為本發(fā)明實(shí)施例一混合光刺激裝置的側(cè)面3為本發(fā)明實(shí)施例一混合光刺激裝置的系統(tǒng)方塊圖。圖4顯示本發(fā)明實(shí)施例二的人類纖維母細(xì)胞存活率與膠原蛋白合成率。圖5顯示本發(fā)明實(shí)施例二中每單位人類纖維母細(xì)胞的膠原蛋白合成率。圖6顯示本發(fā)明實(shí)施例三的人類纖維母細(xì)胞存活率與膠原蛋白合成率。圖7顯示本發(fā)明實(shí)施例三中每單位人類纖維母細(xì)胞的膠原蛋白合成率。附圖中主要組件符號(hào)說明:殼體10 ；頂面11，出光口 111;側(cè)緣12，出光孔121;透光片13 ； 散光片14 ；
電源模塊20 ；控制模塊30，電源開關(guān)31 ;模式切換開關(guān)32，充電孔33 ；第一光源模塊40,第一發(fā)光二極管41 ;第二光源模塊50,第二發(fā)光二極管51。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的一態(tài)樣提供一種混合光刺激方法，包括以下步驟:提供一發(fā)光二極管光源，該發(fā)光二極管光源為一黃光發(fā)光二極管與一紅光發(fā)光二極管的組合光源；以及將該發(fā)光二極管光源照射于一主體，以促進(jìn)膠原蛋白合成，其中，該黃光發(fā)光二極管的照度為1000至3500勒克司(Iux)，該紅光發(fā)光二極管的照度為6000至9500勒克司，且該黃光發(fā)光二極管與該紅光發(fā)光二極管的數(shù)量比為0.5-2: 0.5-2。公知技術(shù)通常使用不同波長的激光或脈沖光達(dá)到青春痘治療、刺激真皮層的纖維母細(xì)胞提升膠原蛋白合成，不過因激光或脈沖光強(qiáng)度極高且設(shè)備龐大，一般消費(fèi)者難以擁有。近來，雖有使用發(fā)光二極管做為光源，期望可以達(dá)到上述提升膠原蛋白的效果，但由于未有公知技術(shù)研究針對發(fā)光二極管發(fā)光的照度以及混合光源對于細(xì)胞的影響，因在未設(shè)定特定照度的前提下，公知方法是否可以達(dá)到上述效果實(shí)屬未知。反觀，本發(fā)明所述方法，利用發(fā)出黃光與紅光的發(fā)光二極管做為混合光源，并將其限定于不同照度范圍，因此可以確保達(dá)到刺激纖維母細(xì)胞提升膠原蛋白合成。因此，以適當(dāng)光照度紅光與黃光發(fā)光二極管的混合光源且持續(xù)適當(dāng)時(shí)間進(jìn)行照射時(shí)，會(huì)刺激巨曬細(xì)胞(macrophage)釋放細(xì)胞激素(cytokine),促進(jìn)纖維母細(xì)胞分裂；同時(shí)亦會(huì)刺激纖維母細(xì)胞合成DNA及分泌生長因子(fibroblast growth factor, FGF),進(jìn)而增加膠原蛋白合成。若該主體為體內(nèi)細(xì)胞，例如真皮層內(nèi)的纖維母細(xì)胞或者巨噬細(xì)胞，則可以直接透光，照射皮膚達(dá)到促進(jìn)傷口愈合以及抗衰老的效果；或者，若該主體為體外細(xì)胞，則可先經(jīng)過上述處理后，再將經(jīng)處理的細(xì)胞植回生物體達(dá)到上述功效。由此可知，本發(fā)明所述的主體，是指受光照刺激的物體。于本發(fā)明上述的混合光刺激方法中，該主體較佳為一纖維母細(xì)胞、一巨噬細(xì)胞或其組合。于本發(fā)明一較佳具體實(shí)例中，該主體為一纖維母細(xì)胞。此外，該黃光發(fā)光二極管的光波長范圍可介于570nm至590nm之間，該紅光發(fā)光二極管的光波長范圍可介于620nm至750nm。此外，該紅光與黃光發(fā)光二極管的混合光源，在照射時(shí)間上沒有特殊限制，只要能夠達(dá)到上述功效而且不會(huì)對該主體造成傷害即可，可以根據(jù)該紅光發(fā)光二極管與該黃光發(fā)光二極管所發(fā)出光線的預(yù)定照度而有所調(diào)整，當(dāng)照度較高時(shí)，便能用較短的照射時(shí)間就達(dá)到相同效果；反之，當(dāng)照度較低時(shí)，則可用較長的照射時(shí)間達(dá)到相同的效果。舉例而言,在紅光發(fā)光二極管發(fā)出6000至9500勒克司與黃光發(fā)光二極管的發(fā)出1000至3500勒克司的光照度下，照射時(shí)間可以介于5分鐘至90分鐘。若高于上述照度范圍，短時(shí)間內(nèi)雖然不會(huì)有太大的影響，但長時(shí)間下來卻會(huì)因照度過高造成細(xì)胞受損；反之，若照度過低，即使長時(shí)間使用也難以有效達(dá)到效果。本發(fā)明提供的混合光刺激裝置，其中采用發(fā)出特定照度范圍的紅光發(fā)光二極管以及黃光發(fā)光二極管的混 合光源，以期達(dá)到刺激纖維母細(xì)胞，增加膠原蛋白合成，同時(shí)促進(jìn)血液循環(huán)、加快老廢細(xì)胞代謝。
本發(fā)明的另一態(tài)樣提供一種混合光刺激裝置，包括:一殼體，形成一容置空間且具有一頂面以及一側(cè)緣，該頂面設(shè)有一出光口 ；一散光片，覆蓋該殼體的該出光口 ；一第一光源模塊，其設(shè)置于該殼體的該容置空間內(nèi)且具有一第一發(fā)光二極管，該第一發(fā)光二極管設(shè)于該散光片下方，且該第一發(fā)光二極管為一黃光發(fā)光二極管與一紅光發(fā)光二極管的組合光源，其中，該黃光發(fā)光二極管的照度為1000至3500勒克司(lux)，該紅光發(fā)光二極管的照度為6000至9500勒克司，且該黃光發(fā)光二極管與該紅光發(fā)光二極管的數(shù)量比為0.5-2: 0.5-2 ;以及一控制模塊,其電性連接該第一光源模塊與一電源模塊。由上述可知，本發(fā)明混合光刺激裝置中組合發(fā)出黃光與紅光的發(fā)光二極管做為混合光源，且不同顏色的光線皆限定于對應(yīng)的照度范圍，因此經(jīng)本發(fā)明的混合光刺激裝置照射后，可刺激纖維母細(xì)胞，確保膠原蛋白合成提升。于本發(fā)明上述混合光刺激裝置中，該電源模塊可為一外部電源或設(shè)置于該殼體的該容置空間內(nèi)。若該電源模塊設(shè)置于該殼體的該容置空間內(nèi)，其可包含可充式電池或者可容納一般的干電池或者微型電池，達(dá)到供應(yīng)電源的效果。另一方面，若電源模塊為一外部電源或者為設(shè)置于該殼體的該容置空間內(nèi)的可充式電池，該控制模塊可具有選擇性地包括:一充電孔，以供該電源模塊電性連接該控制模塊。除此之外，于本發(fā)明上述混合光刺激裝置中，該控制模塊也可具選擇性地包括:一電源開關(guān)，設(shè)置于該殼體表面，以控制該電源模塊供應(yīng)電源。此外，該殼體較佳是由透光率低的材料所構(gòu)成，如反射性高或密度高的材料，以減少混合光刺激裝置的漏光現(xiàn)象。此外，本領(lǐng)域人士亦可由各種結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，增加混合光刺激裝置整體結(jié)構(gòu)的密合度，以降低混合光刺激裝置的漏光現(xiàn)象。另一方面，于本發(fā)明上述混合光刺激裝置中，該殼體的該側(cè)緣可選擇性設(shè)有一出光孔。此情況下，混合光刺激裝置可以還包括:一透光片，覆蓋該出光孔；以及一第二光源模塊對應(yīng)透光片設(shè)置并發(fā)出光線穿過該透光片。此情況下，該控制模塊亦可再包括:一模式切換開關(guān)，皆設(shè)置于該殼體表面，以啟動(dòng)該第一光源模塊或該第二光源模塊，換言之，即切換第一光源模塊與第二光源模塊之間的作動(dòng)。此外，該第一光源模塊與該第二光源模塊內(nèi)所采用的發(fā)光二極管，可為相同顏色或不同顏色。于本發(fā)明上述混合光刺激裝置中，設(shè)于該出光口的該散光片，可以有利于均勻出光，避免診療光直接照射使用者眼睛，并提高裝置光刺激效果的均勻性，換言之即將原本屬于點(diǎn)光源的發(fā)光二極管，經(jīng)過散光作用后，在出光口處形成面光源；另外，設(shè)于該出光孔的該透光片，貝1J不一定需為散光片，若為散光片則可以達(dá)到上述效果，若非為散光片，貝1J可以直接傳遞點(diǎn)光源所提供的光線。于本發(fā)明上述混合光刺激裝置中，該第一光源模塊與該第二光源模塊可以設(shè)計(jì)成可替換式，換言之使用紅光發(fā)光二極管與黃光發(fā)光二極管組成該第一光源模塊與該第二光源模塊。若需要較高比例的紅光進(jìn)行照射時(shí)，則增加發(fā)光模塊中紅光發(fā)光二極管的數(shù)量。除此之外，亦可以將該第一光源模塊與該第二光源模塊中所使用的發(fā)光二極管設(shè)計(jì)成可替換式，換言之若需要較高比例黃光照射時(shí)，則將光源模塊上的發(fā)光二極管拆換成黃光發(fā)光二極管。綜上所述，本發(fā)明的混合光刺激方法與混合光刺激裝置，可以通過采用不同顏色的發(fā)光二極管，例如紅光 與黃光發(fā)光二極管的組合，進(jìn)行光刺激作用，因此可以達(dá)到提升膠原蛋白合成，進(jìn)而達(dá)到抗老化的功效。以下是由特定的具體實(shí)施例說明本發(fā)明的實(shí)施方式，熟習(xí)此技藝的人士可由本說明書所揭示的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)與功效。本發(fā)明亦可由其他不同的具體實(shí)施例加以施行或應(yīng)用，本說明書中的各項(xiàng)細(xì)節(jié)亦可基于不同觀點(diǎn)與應(yīng)用，在不悖離本發(fā)明的精神下進(jìn)行各種修飾與變更。本發(fā)明的實(shí)施例中該些附圖均為簡化的示意圖。惟該些圖標(biāo)僅顯示與本發(fā)明有關(guān)的組件，其所顯示的組件非為實(shí)際實(shí)施時(shí)的態(tài)樣，其實(shí)際實(shí)施時(shí)的組件數(shù)目、形狀等比例為一選擇性的設(shè)計(jì)，且其組件布局型態(tài)可能更復(fù)雜。實(shí)施例一參考圖1至圖3，其中圖1為本發(fā)明混合光刺激裝置的結(jié)構(gòu)示意圖，圖2為本發(fā)明混合光刺激裝置的側(cè)面圖，圖3為本發(fā)明混合光刺激裝置的系統(tǒng)方塊圖。如圖1至圖3所示，本發(fā)明的混合光刺激裝置包括:一殼體10、一透光片13、一散光片14、一第一光源模塊40、一第二光源模塊50以及一控制模塊30。該殼體10形成一容置空間，可以容納各個(gè)模塊。此外，該殼體10具有一頂面11以及一側(cè)緣12，該頂面11設(shè)有一出光口 111，該側(cè)緣12設(shè)有一出光孔121。位于該頂面11的該出光口 111處，使用該散光片14覆蓋；位于該側(cè)緣12的該出光孔121，使用該透光片13覆蓋。此外，該第二光源模塊50對應(yīng)透光片13設(shè)置于該殼體10的該容置空間，并發(fā)出光線穿過該透光片13，且具有至少一第二發(fā)光二極管51。于此，若該透光片13僅單純用于透光而非用于散光，則第二光源模塊50則成為點(diǎn)光源。該第一光源模塊40設(shè)置于該殼體10的該容置空間內(nèi)且具有數(shù)組排列的復(fù)數(shù)個(gè)第一發(fā)光二極管41,該第一發(fā)光二極管41設(shè)于該散光片14下方,且該第一發(fā)光二極管41是紅光發(fā)光二極管與黃光發(fā)光二極管的組合光源，其中，該黃光發(fā)光二極管經(jīng)過該散光片14發(fā)出的光線照度為1000至3500勒克司(lux)，該黃光發(fā)光二極管經(jīng)過該散光片14發(fā)出的光線照度為6000至9500勒克司，且該黃光發(fā)光二極管與該紅光發(fā)光二極管的數(shù)量比為
0.5-2: 0.5-2ο于本實(shí)施例中，該黃光發(fā)光二極管與紅光發(fā)光二極管的數(shù)量比為1:1。該控制模塊30電性連接該第一光源模塊40與一電源模塊20，且該控制模塊30包括:一充電孔33,以供該電源模塊20電性連接該控制模塊30 ;—電源開關(guān)31,設(shè)置于該殼體10表面，以控制該電源模塊20供應(yīng)電源；以及一模式切換開關(guān)32,皆設(shè)置于該殼體10表面，以啟動(dòng)該第一光源模塊40或該第二光源模塊50。該電源模塊20可為一外部電源或設(shè)置于該殼體10的該容置空間內(nèi)。當(dāng)該電源模塊20設(shè)置于該殼體10的該容置空間內(nèi)，該電源模塊20可含可充式電池或者可容納一般的干電池或者微型電池，達(dá)到供應(yīng)電源的效果。因此，上述混合光刺激裝置采用發(fā)出特定照度范圍的紅光發(fā)光二極管與黃光發(fā)光二極管的混合光源，便可達(dá)到刺激纖維母細(xì)胞，增加膠原蛋白合成，同時(shí)促進(jìn)血液循環(huán)、力口快老廢細(xì)胞代謝。實(shí)施例二利用發(fā)光二極管發(fā)出照度為7，8001ux的紅光，探討其對于人類纖維母細(xì)胞存活率與分泌膠原蛋白的影響。首先，將含人 類纖維母細(xì)胞的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液，加至48孔培養(yǎng)盤內(nèi)，所接種的細(xì)胞數(shù)為2 X IO4個(gè)/孔，48孔中每一孔內(nèi)培養(yǎng)液的總體積(含細(xì)胞)共0.5ml，置于CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。之后，取出全部培養(yǎng)液，再加入PBS緩沖液0.5ml，并使用紅光發(fā)光二極管(Lux 7, 800)照射5、10、15、30分鐘后，取出孔內(nèi)全部的PBS緩沖液再加入0.5ml的培養(yǎng)液，再培養(yǎng)24小時(shí)，并重復(fù)一次上述光刺激步驟。而后，更換新的培養(yǎng)基0.5ml及加入0.125ml的MTT試劑，放至37°C、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)反應(yīng)4小時(shí)后，再將全部培養(yǎng)基取出，加入0.5ml的DMSO溶解甲臢(formazan),取0.2ml至96孔內(nèi)利用ELISA微量盤分析儀，測量其在0D570nm時(shí)的吸光值。細(xì)胞存活率的計(jì)算為:細(xì)胞存活率(％ )=(照光后OD57tl/控制組OD57tl) X 100%，其中控制組是指未使用混合光刺激裝置照射的細(xì)胞。另外，對于膠原蛋白檢測方面，首先將含人類纖維母細(xì)胞的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液，力口至48孔培養(yǎng)盤內(nèi)，所接種的細(xì)胞數(shù)為2X IO4個(gè)/孔，48孔中每一孔內(nèi)培養(yǎng)液的總體積(含細(xì)胞)共0.5ml，置于CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。之后，取出全部培養(yǎng)液，再加入PBS緩沖液0.5ml，并使用紅光發(fā)光二極管(Lux 7, 800)照射5、10、15、30分鐘后，取出孔內(nèi)全部的PBS緩沖液再加入0.5ml的培養(yǎng)液，再培養(yǎng)24小時(shí)，并重復(fù)一次上述光刺激步驟。而后，將孔中的培養(yǎng)基全部取出，并放入1.5ml離心管，之后培養(yǎng)過細(xì)胞的孔各別加入0.5ml 0.5M的醋酸水溶液(4°C )，放置20分鐘溶解其中的膠原蛋白后，取出孔中全部的水溶液并放入1.5ml離心管中，離心管再先后分別加入50μ I酸中和劑(acid neutralizing reagent, Biocolor) >4 °C 100 μ I 的分離濃縮劑(Isolation &Concentration Reagent, Biocolor),并于4°C冰箱中放置過夜。之后,將離心管取出并以12000rpm離心10分鐘,移除上清液,再于離心管中加入Iml呈色劑(Sircol Dye Reagent,Biocolor)加入離心管中并震蕩30分鐘，再以12000rpm離心10分鐘后，移除上清液，再加入 4°C 750 μ I 的酸鹽清洗劑(Acid-Salt Wash Reagent,Biocolor),再以 12000rpm離心 10分鐘后，移除上清液，離心管再加入250μ I堿劑(Alkali Reagent,Biocolor),最后每管中各取出200 μ I加入96孔盤中，測量555nm的吸光值。針對膠原蛋白生成率(％)=(照光后的膠原蛋白生成量/控制組膠原蛋白生成量)X 100%，其中控制組是指未使用混合光刺激裝置照射的細(xì)胞。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果參考圖4與圖5，其中圖4是照度為7，8001ux的紅光發(fā)光二極管照射人類纖維母細(xì)胞后，細(xì)胞存活率與膠原蛋白生成率；圖5是照射后每單位細(xì)胞的膠原蛋白生成率。如圖4所示，顯示在照射5分鐘后，即有促進(jìn)纖維母細(xì)胞增殖的效果，且膠原蛋白的含量亦隨著細(xì)胞數(shù)量增加而增加。另外，如圖5所示，可知雖然一開始因纖維母細(xì)胞數(shù)量增殖提高而使得每單位細(xì)胞的膠原蛋白生成量降低，但隨著照射時(shí)間增加，每單位纖維母細(xì)胞的膠原蛋白生成量則逐漸提升。實(shí)施例三利用發(fā)光二極管發(fā)出照度為22901ux的黃光，探討其對于人類纖維母細(xì)胞存活率與分泌膠原蛋白的影響。首先，將含人類纖維母細(xì)胞的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液，加至48孔培養(yǎng)盤內(nèi)，所接種的細(xì)胞數(shù)為2 X IO4個(gè)/孔，48孔中每一孔內(nèi)培養(yǎng)液的總體積(含細(xì)胞)共0.5ml，置于CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。之后，取出 全部培養(yǎng)液，再加入PBS緩沖液0.5ml，并使用黃光發(fā)光二極管(Lux 2290)照射5、10、15、30分鐘后，取出孔內(nèi)全部的PBS緩沖液再加入0.5ml的培養(yǎng)液，再培養(yǎng)24小時(shí)，并重復(fù)一次上述光刺激步驟。而后，更換新的培養(yǎng)基0.5ml及加入0.125ml的MTT試劑，放至37°C、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)反應(yīng)4小時(shí)后，再將全部培養(yǎng)基取出，加入0.5ml的DMSO溶解甲臢(formazan),取0.2ml至96孔內(nèi)利用ELISA微量盤分析儀，測量其在0D570nm時(shí)的吸光值。細(xì)胞存活率的計(jì)算為:細(xì)胞存活率(％ )=(照光后OD57tl/控制組OD57tl) X 100%，其中控制組是指未使用混合光刺激裝置照射的細(xì)胞。另外，對于膠原蛋白檢測方面，首先將含人類纖維母細(xì)胞的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液，力口至48孔培養(yǎng)盤內(nèi)，所接種的細(xì)胞數(shù)為2X IO4個(gè)/孔，48孔中每一孔內(nèi)培養(yǎng)液的總體積(含細(xì)胞)共0.5ml，置于CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。之后，取出全部培養(yǎng)液，再加入PBS緩沖液
0.5ml，并使用黃光發(fā)光二極管(Lux 2290)照射5、10、15、30分鐘后，取出孔內(nèi)全部的PBS緩沖液再加入0.5ml的培養(yǎng)液，再培養(yǎng)24小時(shí)，并重復(fù)一次上述光刺激步驟。而后，將孔中的培養(yǎng)基全部取出，并放入1.5ml離心管，之后培養(yǎng)過細(xì)胞的孔各別加入0.5ml 0.5M的醋酸水溶液(4°C )，放置20分鐘溶解其中的膠原蛋白后，取出孔中全部的水溶液并放入1.5ml離心管中，離心管再先后分別加入50 μ I酸中和劑(acidneutralizing reagent,Biocolor) >4°C 100 μ I 的分離濃縮劑(Isolation&ConcentrationReagent,Biocolor),并于4°C冰箱中放置過夜。之后,將離心管取出并以12000rpm離心10分鐘，移除上清液，再于離心管中加入Iml呈色劑(Sircol Dye Reagent,Biocolor)加入離心管中并震蕩30分鐘，再以12000rpm離心10分鐘后，移除上清液，再加入4°C 750 μ I的酸鹽清洗劑(Acid-Salt Wash Reagent,Biocolor),再以12000rpm離心10分鐘后，移除上清液，離心管再加入250 μ I堿劑(Alkali Reagent, Biocolor),最后每管中各取出200 μ I加入96孔盤中，測量555nm的吸光值。針對膠原蛋白生成率(％ )=(照光后的膠原蛋白生成量/控制組膠原蛋白生成量)X 100%，其中控制組是指未使用混合光刺激裝置照射的細(xì)胞。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果參考圖6與圖7，其中圖6是照度為22901UX的黃光發(fā)光二極管照射人類纖維母細(xì)胞后，細(xì)胞存活率與膠原蛋白生成率；圖7是照射后每單位細(xì)胞的膠原蛋白生成率。如圖6所示，顯示在照射5分鐘后，即有促進(jìn)纖維母細(xì)胞增殖的效果，且膠原蛋白的含量亦隨著細(xì)胞數(shù)量增加而增加。另外，如圖7所示，可知經(jīng)照射5至10分鐘左右，每單位細(xì)胞的膠原蛋白生成量提升至最高。上述實(shí)施例僅為了方便說明而舉例而已，本發(fā)明所主張的權(quán)利范圍自應(yīng)以申請的權(quán)利要求范圍所述為準(zhǔn)， 而非僅限于上述實(shí)施例。
權(quán)利要求
1.一種混合光刺激方法，包括以下步驟: 提供一發(fā)光二極管光源，該發(fā)光二極管光源為一黃光發(fā)光二極管與一紅光發(fā)光二極管的組合光源；以及 將該發(fā)光二極管光源照射于一主體，以促進(jìn)膠原蛋白合成，其中，該黃光發(fā)光二極管的照度為1000至3500勒克司，該紅光發(fā)光二極管的照度為6000至9500勒克司，且該黃光發(fā)光二極管與該紅光發(fā)光二極管的數(shù)量比為0.5-2: 0.5-2。
2.如權(quán)利要求1所述的混合光刺激方法，其中，該主體為一纖維母細(xì)胞、一巨噬細(xì)胞或其組合。
3.如權(quán)利要求2所述的混合光刺激方法,其中，該黃光發(fā)光二極管的光波長范圍介于570nm至590nm之間，該紅光發(fā)光二極管的光波長范圍介于620nm至750nm。
4.如權(quán)利要求3所述的混合光刺激方法，其中，該發(fā)光二極管光源的照射時(shí)間介于5分鐘至90分鐘。
5.一種混合光刺激裝置，包括: 一殼體，形成一容置空間且具有一頂面以及一側(cè)緣，該頂面設(shè)有一出光口 ； 一散光片，覆蓋該殼體的該出光口 ； 一第一光源模塊， 其設(shè)置于該殼體的該容置空間內(nèi)且具有一第一發(fā)光二極管，該第一發(fā)光二極管設(shè)于該散光片下方，且該第一發(fā)光二極管為一黃光發(fā)光二極管與一紅光發(fā)光二極管的組合光源，其中，該黃光發(fā)光二極管的照度為1000至3500勒克司，該紅光發(fā)光二極管的照度為6000至9500勒克司，且該黃光發(fā)光二極管與該紅光發(fā)光二極管的數(shù)量比為0.5-2: 0.5-2 ;以及 一控制模塊，其電性連接該第一光源模塊與一電源模塊。
6.如權(quán)利要求5所述的混合光刺激裝置，其中，該電源模塊為一外部電源或設(shè)置于該殼體的該容置空間內(nèi)。
7.如權(quán)利要求6所述的混合光刺激裝置，其中，該控制模塊包括:一充電孔，以供該電源模塊電性連接該控制模塊。
8.如權(quán)利要求5所述的混合光刺激裝置，其中，該控制模塊包括:一電源開關(guān)，設(shè)置于該殼體表面，以控制該電源模塊供應(yīng)電源。
9.如權(quán)利要求5所述的混合光刺激裝置，其中，該殼體的該側(cè)緣設(shè)有一出光孔。
10.如權(quán)利要求9所述的混合光刺激裝置，其中，包括:一透光片，覆蓋該出光孔；以及一第二光源模塊，對應(yīng)透光片設(shè)置并發(fā)出光線穿過該透光片。
11.如權(quán)利要求10所述的混合光刺激裝置，其中，該控制模塊包括:一模式切換開關(guān)，皆設(shè)置于該殼體表面，以啟動(dòng)該第一光源模塊或該第二光源模塊。
全文摘要
一種混合光刺激方法及裝置，該方法包括以下步驟提供一發(fā)光二極管光源，該發(fā)光二極管光源為一黃光發(fā)光二極管與一紅光發(fā)光二極管的組合光源；以及將該發(fā)光二極管光源照射于一主體，以促進(jìn)膠原蛋白合成，其中，該黃光發(fā)光二極管的照度為1000至3500勒克司(lux)，該紅光發(fā)光二極管的照度為6000至9500勒克司，且該黃光發(fā)光二極管與該紅光發(fā)光二極管的數(shù)量比為0.5-2∶0.5-2。
文檔編號(hào)A61N5/06GK103212162SQ20121001687
公開日2013年7月24日 申請日期2012年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月19日
發(fā)明者杜明杰, 蕭翊瑋, 李鐘沛, 張榮監(jiān), 曹育嘉 申請人:福華電子股份有限公司