專利名稱：替莫唑胺的腦靶向藥物組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，涉及替莫唑胺的腦靶向粉末藥物組合物及其應(yīng)用。本發(fā)明的粉末組合物制成鼻粉劑，經(jīng)鼻腔黏膜吸收達(dá)到替莫唑胺的腦靶向給藥。
背景技術(shù)：
成人原發(fā)性腦腫瘤中有60%以上為腦膠質(zhì)瘤、惡性黑色素瘤。這是一類危害性極大的惡性腫瘤，發(fā)病率高、死亡率也高，從最初診斷開始計(jì)算的存活期僅為9-12個(gè)月。它使病人喪失多種功能，如運(yùn)動(dòng)障礙、癲癇、視覺障礙、語言障礙等，生活質(zhì)量極差。病人盡管經(jīng)手術(shù)、放療和化療治療，但病人幾乎無一例外地會(huì)出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)。替莫唑胺(temozolomide，TMZ)是由英國癌癥研究戰(zhàn)略技術(shù)公司開發(fā)，并由 Schering-Plough公司生產(chǎn)，是一類稱之為咪唑四嗪新型物質(zhì)的第一個(gè)化合物，口服的細(xì)胞毒性烷化劑，其口服后可被完全吸收，組織分布好，可透過血腦屏障，生物利用度高，是用于治療經(jīng)常規(guī)治療后病情出現(xiàn)發(fā)展或復(fù)發(fā)的惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤及作為已轉(zhuǎn)移的晚期黑素瘤的一線治療藥物。替莫唑胺為白色或淺棕色或淡粉色粉末，無臭，微溶于水和二甲基亞砜，溶于熱水。在pH<5的條件下穩(wěn)定，在pH>7時(shí)易分解。替莫唑胺膠囊劑及其注射用凍干粉針劑分別于1999年和2009年通過FDA批準(zhǔn)在美國上市。目前中國市售僅有替莫唑胺的膠囊齊U，其服用劑量大，可產(chǎn)生致癌、致畸及生殖器官毒性，且治療成本昂貴，給患者經(jīng)濟(jì)和身心上帶來沉重的負(fù)擔(dān)。替莫唑胺市售劑型為膠囊劑、凍干粉針劑，有關(guān)替莫唑胺其他劑型的研究根據(jù)公開的文獻(xiàn)報(bào)道中主要有如下幾種替莫唑胺聚乳酸納米微球(中國專利 CN200610161653. 3)、替莫唑胺緩釋植入劑(中國專利CN200710203056. 7)、替莫唑胺控釋給藥系統(tǒng)(中國專利CN03134852. 1)、替莫唑胺多聚體局部緩釋藥(中國專利 CN200410043908. 7)、替莫唑胺腦部緩釋植入劑(中國專利200510024953. 2)及替莫唑胺脂質(zhì)體、分散片等，以上劑型實(shí)用性差、成本昂貴、不利于工業(yè)化生產(chǎn)、且患者使用不便。替莫唑胺的直接作用部位是腦部，而鼻腔給藥與其他給藥方式相比，是無侵入性地將藥物導(dǎo)入腦脊液，使得達(dá)到腦部的藥物濃度增大，降低了藥物對周圍器官的毒副作用， 這一非侵入性給藥方法更簡單、安全、生物利用度高、節(jié)省費(fèi)用、患者順應(yīng)性好。目前腦靶向常采用如下三種方式來實(shí)現(xiàn)(1)破壞血腦屏障，一般通過頸動(dòng)脈中注射甘露醇溶液來實(shí)現(xiàn)。( 腦室內(nèi)給藥，應(yīng)用一種植入頭皮內(nèi)的塑料貯庫式藥物，通過導(dǎo)管從腦部的開口進(jìn)入腦室內(nèi)并釋放。( 鼻腔給藥，如果經(jīng)鼻腔給予足夠劑量的藥物，藥物通過嗅球神經(jīng)直接吸收經(jīng)神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)入到大腦或腦脊液中，繞過血腦屏障，從而達(dá)到高集聚于腦部的藥物實(shí)現(xiàn)靶向性的治療。鼻腔給藥不僅可以用于鼻腔局部疾病的治療，藥物還能通過鼻腔發(fā)揮全身作用。 近年來研究發(fā)現(xiàn)，鼻腔給藥可為腦部疾病治療提供有效的給藥途徑，它與其他方法如腦室給藥相比，是無侵入性地將藥物導(dǎo)入腦脊液，其給藥方法方便、快捷、吸收迅速，生物利用度高，患者順應(yīng)性好。對于目標(biāo)受體位于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，且療效與腦功能有關(guān)的藥物及在常規(guī)給藥途徑下腦內(nèi)濃度極低的藥物，優(yōu)勢顯著。然而本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚，并非所有的藥物都適合于鼻腔給藥，不同的藥物經(jīng)鼻給藥后的吸收情況并無規(guī)律可循。鼻腔給藥在藥物吸收方面以及藥物的理化性質(zhì)例如穩(wěn)定性等方面是非常令人關(guān)注的。本領(lǐng)域仍然需要有適用于替莫唑胺的新治療方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種質(zhì)量穩(wěn)定、吸收快、具有腦靶向作用、毒副作用小、和/ 或使用方便的替莫唑胺的藥物組合物，其特別是可以通過鼻粘膜給藥，例如以鼻粉劑的形式給藥。發(fā)明人經(jīng)研究現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，一方面，替莫唑胺與吸收促進(jìn)劑組合用于鼻腔給藥可以獲得良好的吸收效果；另一方面，替莫唑胺與穩(wěn)定劑組合可以提高藥物組合物的穩(wěn)定性。本發(fā)明基于上述發(fā)現(xiàn)而得以完成。發(fā)明概沭本發(fā)明第一方面提供了一種藥物組合物，其包含治療有效量的替莫唑胺、吸收促進(jìn)劑、和藥用載體。本發(fā)明第二方面提供了一種藥物組合物，其包含治療有效量的替莫唑胺、穩(wěn)定劑、 和藥用載體。本發(fā)明第三方面提供了替莫唑胺或者本發(fā)明藥物組合物在制備用于鼻腔給藥的藥物中的用途。發(fā)明詳述本發(fā)明第一方面提供了一種藥物組合物，其包含治療有效量的替莫唑胺、吸收促進(jìn)劑、和藥用載體。根據(jù)本發(fā)明，該藥物組合物是腦靶向給藥的藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明， 該藥物組合物是經(jīng)鼻給藥的藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其包含5 60wt%替莫唑胺、1 25wt%的吸收促進(jìn)劑、和藥用載體。在本發(fā)明中，所述的藥用載體可以是以用于平衡該藥物組合物至100%全量的量加入的，亦可稱為平衡量或余量，即是在替莫唑胺和吸收促進(jìn)劑以及任選的其它輔料計(jì)入到組合物中之后，再加入藥用載體，以便使組合物的總量到達(dá) IOOwt %。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其包含20 60wt%替莫唑胺、1 15wt%的吸收促進(jìn)劑、和藥用載體。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其包含30 60wt%替莫唑胺、1 10wt%的吸收促進(jìn)劑、和藥用載體。 根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其還包含穩(wěn)定劑。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其包含5 60wt%替莫唑胺、1 25wt%的吸收促進(jìn)劑、1 IOwt%的穩(wěn)定劑、和藥用載體。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其包含20 60wt%替莫唑胺、1 15wt%的吸收促進(jìn)劑、1 5wt%的穩(wěn)定劑、和藥用載體。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其包含30 60wt%替莫唑胺、1 IOwt%的吸收促進(jìn)劑、1 3wt%的穩(wěn)定劑、和藥用載體。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其為粉末組合物，并且該粉末的顆粒粒徑為 60-250 μ m,優(yōu)選 100-250 μ m,優(yōu)選 150-250 μ m。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述的吸收促進(jìn)劑是選自下列的一種或多種(1) α、β、Y -環(huán)糊精的環(huán)糊精類和取代的環(huán)糊精類(如α -環(huán)糊精、β -環(huán)糊精、Y-環(huán)糊精、二甲基-β-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、磺丁基醚-β-環(huán)糊精等)；(2) 膽酸鹽類例如甘膽酸鹽、膽酸鹽、去氧膽酸鹽等C3)金屬離子螯合物類乙二胺四乙酸鈉、 水楊酸鹽等。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的吸收促進(jìn)劑是β-環(huán)糊精和取代的β-環(huán)糊精(例如β-環(huán)糊精、二甲基-β-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、磺丁基醚-β-環(huán)糊精)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的吸收促進(jìn)劑是選自下列的一種或多種β-環(huán)糊精、二甲基-β-環(huán)糊精、羥丙基-β -環(huán)糊精、磺丁基醚-β -環(huán)糊精。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述的藥用載體選自乳糖、甘露醇、微晶纖維素、氯化鈉、葡萄糖。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述的穩(wěn)定劑是有機(jī)酸或其鹽。 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的穩(wěn)定劑是選自下列的一種或多種檸檬酸、酒石酸、蘋果酸、馬來酸、檸檬酸鈉。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的穩(wěn)定劑用量為 10%，優(yōu)選用量為1 3%。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其為鼻粉劑，其中所述的鼻粉劑含 5 300mg(例如約20mg)替莫唑胺/單位劑量。本發(fā)明第二方面提供了一種藥物組合物，其包含治療有效量的替莫唑胺、穩(wěn)定劑、 和藥用載體。根據(jù)本發(fā)明第二方面，該藥物組合物是腦靶向給藥的藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明，該藥物組合物是經(jīng)鼻給藥的藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其包含5 60wt%替莫唑胺、1 10wt%的穩(wěn)定劑、和藥用載體。在本發(fā)明中，所述的藥用載體可以是以用于平衡該藥物組合物至100%全量的量加入的，亦可稱為平衡量或余量，即是在替莫唑胺和吸收促進(jìn)劑以及任選的其它輔料計(jì)入到組合物中之后，再加入藥用載體，以便使組合物的總量到達(dá)100wt%。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其包含20 60wt%替莫唑胺、1 的穩(wěn)定劑、和藥用載體。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其包含30 60wt%替莫唑胺、1 的穩(wěn)定劑、和藥用載體。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其還包含吸收促進(jìn)劑。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其包含5 60wt%替莫唑胺、1 25wt%的吸收促進(jìn)劑、1 IOwt%的穩(wěn)定劑、和藥用載體。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其包含20 60wt%替莫唑胺、1 15wt%的吸收促進(jìn)劑、1 5wt%的穩(wěn)定劑、和藥用載體。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其包含30 60wt%替莫唑胺、1 IOwt%的吸收促進(jìn)劑、1 3wt%的穩(wěn)定劑、和藥用載體。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其為粉末組合物，并且該粉末的顆粒粒徑為 60-250 μ m,優(yōu)選 100-250 μ m,優(yōu)選 150-250 μ m。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述的穩(wěn)定劑是有機(jī)酸或其鹽。
5在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的穩(wěn)定劑是選自下列的一種或多種檸檬酸、酒石酸、蘋果酸、馬來酸、檸檬酸鈉。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的穩(wěn)定劑用量為 10%，優(yōu)選用量為1 3%。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述的吸收促進(jìn)劑是選自下列的一種或多種(1) α、β、Y -環(huán)糊精的環(huán)糊精類和取代的環(huán)糊精類(如α -環(huán)糊精、β -環(huán)糊精、Y-環(huán)糊精、二甲基-β-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、磺丁基醚-β-環(huán)糊精等)；(2) 膽酸鹽類例如甘膽酸鹽、膽酸鹽、去氧膽酸鹽等C3)金屬離子螯合物類乙二胺四乙酸鈉、 水楊酸鹽等。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的吸收促進(jìn)劑是β-環(huán)糊精和取代的β-環(huán)糊精(例如β-環(huán)糊精、二甲基-β-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、磺丁基醚-β-環(huán)糊精)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的吸收促進(jìn)劑是選自下列的一種或多種β -環(huán)糊精、二甲基-β -環(huán)糊精、羥丙基-β -環(huán)糊精、磺丁基醚-β -環(huán)糊精。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述的藥用載體選自乳糖、甘露醇、微晶纖維素、氯化鈉、葡萄糖、環(huán)糊精類(例如α-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、Υ-環(huán)糊精、二甲基- β -環(huán)糊精、羥丙基- β -環(huán)糊精、磺丁基醚- β -環(huán)糊精)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的藥用載體為乳糖或甘露醇或羥丙基-環(huán)糊精或其組合。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其為鼻粉劑，其中所述的鼻粉劑含 5 300mg(例如約20mg)替莫唑胺/單位劑量。根據(jù)本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)的藥物組合物，其具有如實(shí)施例所述的配方組成。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物中包含20重量份的替莫唑胺細(xì)粉、16重量份的乳糖、3重量份的羥丙基-β-環(huán)糊精、和1重量份的穩(wěn)定劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物中包含20重量份的替莫唑胺細(xì)粉、18重量份的乳糖、1重量份的β -環(huán)糊精、和0. 5g重量份的穩(wěn)定劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物中包含15重量份的替莫唑胺細(xì)粉、M重量份的羥丙基-β-環(huán)糊精、和0. 5g重量份的穩(wěn)定劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述穩(wěn)定劑是枸櫞酸。本發(fā)明第三方面提供了替莫唑胺，或者本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述的藥物組合物，或者本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)所述的藥物組合物在制備用于鼻腔給藥的藥物中的用途。 本發(fā)明第三方面提供了替莫唑胺，或者本發(fā)明第一方面任一項(xiàng)所述的藥物組合物，或者本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)所述的藥物組合物在制備用于腦靶向給藥的藥物中的用途。根據(jù)本發(fā)明第三方面的用途，其中所述藥物是鼻粉劑。根據(jù)本發(fā)明第三方面的用途，其中所述藥物每單位劑量含替莫唑胺的量為5 300mg (例如約 20mg)。在本發(fā)明的任一方面，例如在本發(fā)明的第一方面，其中任意兩個(gè)或更多個(gè)實(shí)施方案之間所具有的特征可以相互組合，只要它們不會(huì)相互矛盾，當(dāng)然在相互之間組合時(shí)，必要的話可對相應(yīng)特征作適當(dāng)修飾。下面對本發(fā)明的各個(gè)方面和特點(diǎn)作進(jìn)一步的描述。本發(fā)明所引述的所有文獻(xiàn)，它們的全部內(nèi)容通過引用并入本文，并且如果這些文獻(xiàn)所表達(dá)的含義與本發(fā)明不一致時(shí)，以本發(fā)明的表述為準(zhǔn)。此外，本發(fā)明使用的各種術(shù)語和短語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的一般含義，即便如此，本發(fā)明仍然希望在此對這些術(shù)語和短語作更詳盡的說明和解釋，提及的術(shù)語和短語如有與公知含義不一致的，以本發(fā)明所表述的含義為準(zhǔn)。
如本文所述的，術(shù)語“藥物組合物”，其還可以是指組合物，可用于在受試者中實(shí)現(xiàn)治療、預(yù)防、減輕和/或緩解本發(fā)明所述疾病或病癥或不良健康狀況。在本發(fā)明中，如未另外指明，％是指重量/重量的百分?jǐn)?shù)。對于本發(fā)明配方而言， 如果未另外說明，以％表示的配方可以用藥用載體來平衡至100%的量。本發(fā)明提供了一種由替莫唑胺與藥用載體及穩(wěn)定劑、吸收促進(jìn)劑組成的，通過鼻粘膜吸收到達(dá)腦部治療腦腫瘤的鼻粉劑及其制備方法。實(shí)驗(yàn)通過比較含不同穩(wěn)定劑的鼻粉劑處方在高溫(60°C )高濕(25°C，RH92. 5% ) 及光照G500Lx)條件下放置10天的含量變化及各種穩(wěn)定劑在高濕(25°C，RH92. 5% )條件下的吸濕性，篩選出了穩(wěn)定性最好的替莫唑胺鼻粉劑處方。實(shí)驗(yàn)通過比較不同種類的吸收促進(jìn)劑及其用量對替莫唑胺經(jīng)離體羊鼻粘膜的促滲作用的影響，篩選出促滲效果最好的吸收促進(jìn)劑。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，羥丙基- β -環(huán)糊精和β -環(huán)糊精均對替莫唑胺有促滲作用，與未加促滲劑的處方相比，分別增加了 1.66倍和1.18倍，因此選擇羥丙基-β-環(huán)糊精或β-環(huán)糊精為吸收促進(jìn)劑，其用量為 25%。此外，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的藥用載體可以是羥丙基-β -環(huán)糊精，此時(shí)羥丙基-β -環(huán)糊精同時(shí)具備吸收促進(jìn)劑和藥用載體的作用。與藥用載體、穩(wěn)定劑、吸收促進(jìn)劑組成新的鼻腔給藥的鼻粉劑，本發(fā)明的藥物組合物例如鼻粉劑與已知的替莫唑胺藥物制劑相比，具有吸收快、腦靶向性、使用方便、順應(yīng)性好、毒副作用低、和/或穩(wěn)定性好的特點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式通過下面的實(shí)施例可以對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述，然而，本發(fā)明的范圍并不限于下述實(shí)施例。本領(lǐng)域的專業(yè)人員能夠理解，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，可以對本發(fā)明進(jìn)行各種變化和修飾。本發(fā)明對試驗(yàn)中所使用到的材料以及試驗(yàn)方法進(jìn)行一般性和/或具體的描述。雖然為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的所使用的許多材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的，但是本發(fā)明仍然在此作盡可能詳細(xì)描述。Α、制備實(shí)施例部分實(shí)施例1 替莫嗶胺粉末組合物的制備稱取已粉碎過120目篩的替莫唑胺細(xì)粉30g，備用。另將精密稱取且粉碎過120 目的乳糖65g，羥丙基-β -環(huán)糊精3. 5g，檸檬酸1. 5g，備用。將替莫唑胺與乳糖、羥丙基- β -環(huán)糊精、穩(wěn)定劑采用等量遞增法混合均勻，研磨，再次過200目篩3次，得本發(fā)明的替莫唑胺粉末組合物，可用作替莫唑胺鼻粉劑例如分裝在膠囊中或者分裝在帶有粉末定量閥的容器中。測得顆粒平均粒度185微米。實(shí)施例2 替莫嗶胺粉末組合物的制備稱取已粉碎過120目篩的替莫唑胺細(xì)粉60g，備用。另將精密稱取且粉碎過100目的乳糖38g，日-環(huán)糊精18，酒石酸18，備用。將替莫唑胺與乳糖、β-環(huán)糊精、穩(wěn)定劑采用等量遞增法混合均勻，研磨，再次過200目篩3次，得本發(fā)明的替莫唑胺粉末組合物，可用作替莫唑胺鼻粉劑例如分裝在膠囊中或者分裝在帶有粉末定量閥的容器中。測得顆粒平均粒度215微米。CN 102526038 A
實(shí)施例3 替莫唑胺粉末組合物的制備稱取已粉碎過140目篩的替莫唑胺細(xì)粉45g，備用。另將精密稱取且粉碎過140目的甘露醇42g，羥丙基-β -環(huán)糊精10g，檸檬酸3g，備用。將替莫唑胺與羥丙基-β -環(huán)糊精、穩(wěn)定劑采用等量遞增法混合均勻，研磨，再次過200目篩3次，得本發(fā)明的替莫唑胺粉末組合物，可用作替莫唑胺鼻粉劑，例如分裝在膠囊中或者分裝在帶有粉末定量閥的容器中。 測得顆粒平均粒度185微米。實(shí)施例4 替莫唑胺粉末組合物的制備參考實(shí)施例1方法制備，配方組成為替莫唑胺細(xì)粉40g、二甲基-β-環(huán)糊精Sg、 蘋果酸2g、乳糖加至100g。實(shí)施例5 替莫唑胺粉末組合物的制備參考實(shí)施例1方法制備，配方組成為替莫唑胺細(xì)粉50g、羥丙基- β -環(huán)糊精3g、 馬來酸2g、乳糖加至100g。實(shí)施例6 替莫唑胺粉末組合物的制備參考實(shí)施例1方法制備，配方組成為替莫唑胺細(xì)粉45g、磺丁基醚-β-環(huán)糊精 6g、檸檬酸2g、甘露醇加至100g。對照例1 除了將檸檬酸改為檸檬酸鈉外，其它與實(shí)施例1相同，制得替莫唑胺粉末組合物。對照例2 除了將β -環(huán)糊精替換為去氧膽酸鈉外，其它與實(shí)施例2相同，制得替莫唑胺粉末組合物。對照例3 除了不用檸檬酸外，其它與實(shí)施例3相同，制得替莫唑胺粉末組合物。對照例4 除了將蘋果酸改為蘋果酸鈉外，其它與實(shí)施例4相同，制得替莫唑胺粉末組合物。對照例5 除了將馬來酸改為磷酸二氫鈉外，其它與實(shí)施例5相同，制得替莫唑胺粉末組合物。對照例6 除了不用檸檬酸外，其它與實(shí)施例6相同，制得替莫唑胺粉末組合物。B、實(shí)驗(yàn)例部分實(shí)驗(yàn)例1 實(shí)施例1、2、3制劑對鼻腔纖毛的影響本發(fā)明以纖毛持續(xù)運(yùn)動(dòng)時(shí)間為指標(biāo)，通過離體蟾蜍上顎實(shí)驗(yàn)考察了實(shí)施例1、2、3 替莫唑胺鼻粉劑給藥系統(tǒng)的鼻纖毛毒性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示三個(gè)制劑樣品對纖毛運(yùn)動(dòng)有一定影響，但經(jīng)生理鹽水淋洗后，纖毛均可恢復(fù)擺動(dòng)，且擺動(dòng)時(shí)間較長，說明對纖毛的毒性是可逆的。實(shí)驗(yàn)例2 實(shí)施例1制劑鼻腔給藥藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)參考以下文獻(xiàn)進(jìn)行張煜輝，岳志健，劉建民等.替莫唑胺緩釋微球局部植入治療大鼠腦膠質(zhì)瘤的療效[J].中國腫瘤生物治療雜志，2009，16 ) :396-400。SD大鼠C6腦膠質(zhì)瘤模型的建立C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞以含10%小牛血清的DMEM液培養(yǎng)。手術(shù)前12小時(shí)大鼠禁食和水，用3%戊巴比妥鈉GOmg/kg)腹腔注射麻醉后，俯臥位固定于立體定向儀上，沿頭皮正中略偏右縱向切開頭皮，暴露前囟和矢狀縫。于前囟前1mm、 矢狀縫右旁開3mm處，用牙鉆鉆一骨孔，深達(dá)硬腦膜表面而不損及腦組織。用靜脈注射套管針抽取50 μ LC6細(xì)胞混懸液，垂直固定于立體定向儀上，經(jīng)骨孔垂直于顱骨板進(jìn)針6mm，回退1mm，待細(xì)胞基本沉淀后，緩慢注射10 μ LC6細(xì)胞混懸液，注射時(shí)間10分鐘，注射完畢后，留置15分鐘，拔出內(nèi)芯，再留置5分鐘，塞住套管口，緩慢拔出套管，縫合頭皮。肌注青霉素1 萬U。 實(shí)驗(yàn)方法接種C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞后觀察大鼠活動(dòng)，6d后將80只SD大鼠隨機(jī)分為4 組，每組20只。分組具體如下(1)假手術(shù)組切除腫瘤組織表面腦組織。( 替莫唑胺灌胃組切除腫瘤組織表面腦組織，每天50mg/kg替莫唑胺(用實(shí)施例1的配方加水溶解、過濾配制而成)灌胃給藥連續(xù)5d。( 替莫唑胺靜脈注射組切除腫瘤組織表面腦組織，每天50mg/kg替莫唑胺(用實(shí)施例1的配方加水溶解、無菌過濾配制而成)靜脈注射連續(xù)5d。 (4)替莫唑胺鼻腔給藥組切除腫瘤組織表面腦組織，每天lOOmg/mL TMZ的混懸液(用實(shí)施例1配制成)鼻腔給藥100 μ L，連續(xù)5d。分組后各組進(jìn)行相應(yīng)的治療，治療14d后。行冠狀面和矢狀面TlWI和增強(qiáng)掃描，掃描后各組處死10只，剩余10只用于觀察生存期。結(jié)果顯示，各試驗(yàn)組造模成功，灌胃組和靜脈注射組的生存期分別為16.5天和19.3天，與生存期為26. 7天的鼻腔給藥組相比有顯著差異ρ < 0. 05。 _4] t^H列 33 mmmmmm^^m參考以下文獻(xiàn)進(jìn)行張奇志.尼莫地平鼻腔給藥的腦內(nèi)遞藥特性研究.上海復(fù)旦大學(xué)博士畢業(yè)論文，2003，Pll-12、P25-26。實(shí)驗(yàn)方法將SD大鼠隨機(jī)分為3組，空腹8h，鼻腔、靜脈給藥組稱重后，按1. 2g/ kg腹腔注射20%烏拉坦進(jìn)行麻醉，將大鼠仰臥，作氣管插管，并暴露小腦延髓池以備抽取 CSF0手術(shù)完成后約15min分別進(jìn)行鼻腔、靜注(兩種給藥方式所用試藥均使用實(shí)施例3 的配方)給藥實(shí)驗(yàn)，劑量均為50mg/kg。于5、10、15、30、45min、和1,1. 5、2、3、4、6、8h采集 CSF,隨后立即處死大鼠，斷頭，收集血樣和分離腦組織，血漿、CSF和腦組織置于-20°C儲(chǔ)存?zhèn)溆茫? 內(nèi)測定。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)重復(fù)做4只大鼠。灌胃組大鼠因不抽取CSF，故不麻醉直接灌注藥液，劑量50mg/kg。于上述相同時(shí)間尾靜脈取血和分離腦組織。血液樣品預(yù)處理取0. 5mL酸化血漿，加入提取溶劑乙酸乙酯3mL，渦旋混合lmin， 往復(fù)振蕩lOmin，離心5min，分取上層液于另一試管中，40°C氮?dú)饬飨麓蹈?，殘留物加?200 μ L流動(dòng)相溶解，渦旋混合，取20 μ L注入色譜儀。腦脊液樣品預(yù)處理取酸化腦脊液 0. anL，加入提取溶劑乙酸乙酯1. 5mL，渦旋混合lmin，往復(fù)振蕩lOmin，離心5min，分取上層液于另一試管中，40°C氮?dú)饬飨麓蹈?，殘留物加?00 μ L流動(dòng)相溶解，渦旋混合，取20 μ L 注入色譜儀。腦組織樣品預(yù)處理從低溫冰箱取出待測腦組織，放置于室溫，解凍，以腦組織生理鹽水=1 2 (w/v)的比例勻漿。取0.4mL腦勻漿，加入提取溶劑乙酸乙酯1.5mL， 渦旋混合lmin，往復(fù)振蕩lOmin，離心5min，分取上層液于另一試管中，40°C氮?dú)饬飨麓蹈桑?殘留物加入200 μ L流動(dòng)相溶解，渦旋混合，取20 μ L注入色譜儀。結(jié)果顯示，在腦脊液和腦組織兩種組織中的替莫唑胺濃度，鼻給藥組均顯著高于靜注給藥組(P < 0. 05)；而對于血液中的替莫唑胺濃度，兩種給藥方式無明顯區(qū)別。實(shí)驗(yàn)例4.穩(wěn)定性考察取實(shí)施例1 6的試樣和對照例1 6的試藥，封裝在安瓿瓶中，在50°C烘箱中放置1個(gè)月后，測定各樣品在加熱處理1月時(shí)與其未經(jīng)加熱處理時(shí)粉末中的活性成分的殘余率(％ )。結(jié)果顯示，實(shí)施例1 6的試樣殘余率均在94 98%之間的范圍內(nèi)，而對照例 1 6的試樣殘余率均在82 88%之間的范圍內(nèi)。例如實(shí)施例1的殘余率為97. 1%，而對照例1的殘余率為86. 2% ；實(shí)施例3的殘余率為98. 6%，而對照例3的殘余率為83. 7%。 此外，各對照例樣品與其相似的相應(yīng)實(shí)施例配方樣品的殘余率相比均至少低6%。棚列5 :#H瞻■■革咖找·隨_■續(xù)越■本研究目的是替莫唑胺鼻腔腦靶向在大鼠體內(nèi)的抗腦膠質(zhì)瘤效應(yīng)進(jìn)行評價(jià)。為了評價(jià)該系統(tǒng)對腦膠質(zhì)瘤的治療效果，本研究建立了荷腦膠質(zhì)瘤的Wistar大鼠模型，進(jìn)行生存曲線實(shí)驗(yàn)，腫瘤體積抑制率實(shí)驗(yàn)以及腫瘤HE染色常規(guī)病理檢查。各試驗(yàn)所用替莫唑胺試藥均是替莫唑胺原料藥，必要時(shí)用生理鹽水溶解/混懸制成。1、實(shí)驗(yàn)材料與儀器鼠腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞系購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物所；馬血清購自北京拜爾迪生物科技有限公司；胎牛血清(FBS)購自中美合資蘭州民海生物工程有限公司；Ham’ s FlO培養(yǎng)基以及雙抗均購自GIBC0/BRL公司(Germany)北京代理邁晨科技有限公司；腦立體定位儀購自深圳瑞沃德生命科技有限公司。健康雄性Wistar大鼠000士10% g)購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均按照國際動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。2、實(shí)驗(yàn)方法(1)荷腦膠質(zhì)瘤Wistar大鼠模型的建立在實(shí)驗(yàn)前，雄性Wistar大鼠首先適應(yīng)生存環(huán)境7天，并給與標(biāo)準(zhǔn)的鼠糧和飲水。室溫和相對濕度分別保持在25°C和50%。為了構(gòu)建荷腦膠質(zhì)瘤大鼠模型，所有的實(shí)驗(yàn)用Wistar大鼠均用20 %烏拉坦 (0. 6ml/100g)腹腔注射麻醉后，去頭頂毛發(fā)并將其固定于腦立體定位儀上，用酒精消毒。沿內(nèi)眥連線中點(diǎn)向后縱向切開頭皮暴露出顱骨。利用大鼠腦立體定位儀確定植入腫瘤的立體定位靶點(diǎn)前囟后1. 0mm，矢狀縫旁側(cè)3. 5mm，硬膜下深5. 0mm。待植入的腫瘤細(xì)胞液的細(xì)胞處于對數(shù)生長期，其細(xì)胞濃度為每10 μ 1含1 X IO6 個(gè)腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞，將細(xì)胞懸液放入37°C水浴保存。使用20uL微量注射器吸入IOul含 1 X IO6個(gè)腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的細(xì)胞懸液，垂直進(jìn)針深5mm (距硬腦膜)，以1 μ 1/min速率將細(xì)胞懸液注入靶區(qū)。注射完畢后留針5min，緩慢拔針，骨孔立即用無菌骨蠟封閉，術(shù)后切口用線逢合。(2)荷腦膠質(zhì)瘤Wistar大鼠的常規(guī)觀察術(shù)后的Wistar大鼠每兩天測體重一次，定時(shí)檢查其生理行為，觀察有無病理反應(yīng)，比如有無偏癱、蒼老和癲癇發(fā)作，同時(shí)進(jìn)食減少伴飲水增多，體重逐漸減輕等。(3)荷腦膠質(zhì)瘤Wistar大鼠的生存曲線實(shí)驗(yàn)在術(shù)后一周后，部分Wistar大鼠用于做生存曲線實(shí)驗(yàn)。將大鼠分為四組，每組10 只。四組Wistar大鼠分別進(jìn)行尾靜脈給藥，給藥量為每千克大鼠給50mg替莫唑胺，生理鹽水組(作為空白對照)，口服灌胃給藥替莫唑胺每千克大鼠給50mg(0. Iml混懸液)組，替莫唑胺鼻腔給藥組每千克大鼠給50mg(0. Iml混懸液)，每天給藥一次，持續(xù)給藥5次。定時(shí)記錄大鼠的體重，生理行為以及是否死亡，從而繪制出各給藥組的Wistar大鼠的生存曲線。(4)荷腦膠質(zhì)瘤Wistar大鼠的腫瘤體積抑制率實(shí)驗(yàn)在術(shù)后一周后，部分Wistar大鼠用于做腫瘤體積抑制率實(shí)驗(yàn)。將大鼠分為六組， 每組三只。給藥方案同生存曲線實(shí)驗(yàn)。在術(shù)后第16天，所有的Wistar大鼠被處死，采用 4% PBS多聚甲醛液固定并解剖出腫瘤，固定一天。用游標(biāo)卡尺測量解剖的完整腫瘤最大層
10面直徑，從而計(jì)算出腫瘤的體積。其計(jì)算公式為V (體積，mm3) = (I1 (mm) Xd2 (mm) Xd3 (mm)，其中(I1是腫瘤的最大前后徑，d2是腫瘤的最大左右徑，(13是腫瘤的最大上下徑。腦腫瘤體積的抑制率是利用各制劑組的腫瘤體積大小與生理鹽水組(空白對照組)的腫瘤體積大小進(jìn)行比較得到的，其公式如下
^^ , tV生理鹽水組-V制劑組
腫瘤體積抑制率(％)=-X100%
V生理鹽水組(5)荷腦膠質(zhì)瘤Wistar大鼠腫瘤HE染色常規(guī)病理檢查取上述大鼠全腦，沿腫瘤中心做冠狀切面，固定于4% PBS多聚甲醛液，取材后作 4mm冠狀切片，然后進(jìn)行常規(guī)脫水，石蠟包埋，連續(xù)切片并進(jìn)行HE染色。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)荷腦膠質(zhì)瘤Wistar大鼠的生存曲線實(shí)驗(yàn)在連續(xù)5次給藥后，各替莫唑胺組的Wistar大鼠的生存曲線。結(jié)果顯示，各組的大鼠生存時(shí)間分別是生理鹽水組(作為空白對照)為9-16天，口服灌胃給藥替莫唑胺13-18 天，替莫唑胺鼻腔給藥組為18-27天，尾靜脈給藥組為15-21天。而各組的平均存活時(shí)間結(jié)果顯示，替莫唑胺鼻腔給藥組(23天)顯著地長于生理鹽水組(12天，P = 0.001)，灌胃給藥替莫唑胺組(15天，P = 0. 00 ，尾靜脈給藥組(18天，P = 0. 016)。(2)荷腦膠質(zhì)瘤Wistar大鼠的腫瘤體積抑制率實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在術(shù)后第16天，各實(shí)驗(yàn)組的Wistar大鼠的腫瘤體積抑制率分別為灌胃給藥替莫唑胺組為36. 8士5. 8%，尾靜脈給藥組為46. 8士4. 8%，替莫唑胺鼻腔給藥組為 62. 3 士 2.8%。結(jié)果證明了與其他組相比，替莫唑胺鼻腔給藥組顯示了最強(qiáng)的抑制Wistar 大鼠模型的腦腫瘤體積的作用。(3)荷腦膠質(zhì)瘤Wistar大鼠腫瘤HE染色常規(guī)病理檢查對接種過腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的Wistar大鼠腦部進(jìn)行解剖，可見有腫瘤團(tuán)塊形成。對該腫瘤進(jìn)行HE染色，結(jié)果顯示，HE切片在光鏡下可清晰看見腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞較正常組織細(xì)胞(密集成群，并向腦組織呈侵襲性生長，符合膠質(zhì)瘤的形態(tài)特征。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其包含治療有效量的替莫唑胺、吸收促進(jìn)劑、和藥用載體。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其包含5 60wt%替莫唑胺、1 25wt%的吸收促進(jìn)劑、 和藥用載體。
3.權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)的藥物組合物，其還包含穩(wěn)定劑；優(yōu)選地，該藥物組合物含有 1 10wt%、l 5wt%、或1 3wt%的穩(wěn)定劑。
4.一種藥物組合物，其包含治療有效量的替莫唑胺、穩(wěn)定劑、和藥用載體。
5.權(quán)利要求4的藥物組合物，其包含5 60Wt%替莫唑胺、1 IOwt^的穩(wěn)定劑、和藥用載體。
6.權(quán)利要求4-5任一項(xiàng)的藥物組合物，其還包含吸收促進(jìn)劑；優(yōu)選地，該藥物組合物含有1 25wt%、l 15wt%、或1 IOwt%的吸收促進(jìn)劑。
7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述的吸收促進(jìn)劑是選自下列的一種或多種(1)α、β、Y-環(huán)糊精的環(huán)糊精類和取代的環(huán)糊精類(如α-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、 Y-環(huán)糊精、二甲基-β-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、磺丁基醚-β-環(huán)糊精等)；( 膽酸鹽類例如甘膽酸鹽、膽酸鹽、去氧膽酸鹽等(3)金屬離子螯合物類乙二胺四乙酸鈉、水楊酸鹽等。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的吸收促進(jìn)劑是β-環(huán)糊精和取代的β-環(huán)糊精(例如 β -環(huán)糊精、二甲基-β -環(huán)糊精、羥丙基-β -環(huán)糊精、磺丁基醚-β -環(huán)糊精)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的吸收促進(jìn)劑是選自下列的一種或多種β -環(huán)糊精、二甲基- β -環(huán)糊精、 羥丙基-β -環(huán)糊精、磺丁基醚-β -環(huán)糊精。
8.權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述的藥用載體選自乳糖、甘露醇、微晶纖維素、氯化鈉、葡萄糖、環(huán)糊精類(例如α-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、Y-環(huán)糊精、二甲基- β -環(huán)糊精、羥丙基- β -環(huán)糊精、磺丁基醚- β -環(huán)糊精)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的藥用載體為乳糖或甘露醇或羥丙基-β -環(huán)糊精或其組合。
9.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述的穩(wěn)定劑是有機(jī)酸或其鹽。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的穩(wěn)定劑是選自下列的一種或多種檸檬酸、酒石酸、蘋果酸、馬來酸、檸檬酸鈉。
10.替莫唑胺或者權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的藥物組合物在制備用于鼻腔給藥的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了替莫唑胺的藥物組合物及其應(yīng)用，本發(fā)明的藥物組合物包含治療有效量的替莫唑胺、吸收促進(jìn)劑、和藥用載體。本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其包含治療有效量的替莫唑胺、穩(wěn)定劑、和藥用載體。本發(fā)明進(jìn)一步提供了本發(fā)明藥物組合物在制備用于鼻腔給藥的藥物中的用途。本發(fā)明的組合物可用作鼻粉劑。本發(fā)明的替莫唑胺鼻粉劑是由替莫唑胺與藥用載體、以及穩(wěn)定劑和或吸收促進(jìn)劑組成，通過鼻粘膜吸收到達(dá)腦部治療腦腫瘤的制劑。
文檔編號A61P35/00GK102526038SQ20121000173
公開日2012年7月4日 申請日期2012年1月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月12日
發(fā)明者何群, 李穎, 邊琳晶, 高永良, 高翠仙 申請人:北京人福軍威醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司