專利名稱：毛發(fā)生長(zhǎng)控制方法、毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑的評(píng)價(jià)或選擇方法、以及毛發(fā)生長(zhǎng)抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本法明涉及毛發(fā)生長(zhǎng)控制方法、毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑的評(píng)價(jià)或選擇方法、以及毛發(fā)生長(zhǎng)抑制劑。
背景技術(shù)：
頭發(fā)或者體毛是生物學(xué)上保護(hù)頭部、胸部、手足等重要器官的物體。然而，近年來(lái)，特別是手足等上的體毛，從美觀上認(rèn)為最好沒(méi)有的傾向越來(lái)越高。作為除去體毛的方法，可以列舉刮臉刀、拔毛器等機(jī)械除去方法、使用脫毛劑或除毛劑的通過(guò)化學(xué)作用的除去方法。然而，這些體毛除去方法有時(shí)候會(huì)伴隨對(duì)皮膚的物理或者化學(xué)刺激，另外，由于從抑毛作用的觀點(diǎn)出發(fā)還不充分，因此，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間之后必須再次進(jìn)行體毛除去處理。希望減少體毛除去處理。一直以來(lái)，在評(píng)價(jià)或者選擇育毛劑或者抑毛劑的情況下，是涂布于活體的皮膚上(專利文獻(xiàn)I 3),或者在體外(in vitro)對(duì)人或者小鼠或者大鼠、或者豬的毛囊的器官培養(yǎng)物給予候選物質(zhì)之后，測(cè)定毛的伸長(zhǎng)或者毛囊的生長(zhǎng)的狀況，基于該測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)候選物質(zhì)的育毛或者抑毛作用(專利文獻(xiàn)4 7、非專利文獻(xiàn)I 3)。如果考慮效率或者評(píng)價(jià)的正確性，則更加優(yōu)選體外試驗(yàn)。然而，體外的毛囊的器官培養(yǎng)存在有時(shí)候難以得到作為樣品的毛囊，培養(yǎng)中花費(fèi)功夫，由于到能觀察毛發(fā)的伸長(zhǎng)或者毛囊生長(zhǎng)需要幾天時(shí)間因而評(píng)價(jià)花費(fèi)時(shí)間等的問(wèn)題。尋求用于更有效地評(píng)價(jià)或者選擇育毛劑或者抑毛劑的體外篩選體系的開(kāi)發(fā)。在專利文獻(xiàn)7中，記載了在人體毛囊中存在熱休克蛋白(heat shock protein)HSP-27、HSP-70以及HSP-90，通過(guò)對(duì)毛囊給予HSP-27抗體從而觀察到毛發(fā)纖維發(fā)育顯著降低，通過(guò)給予HSP-90特異性阻礙物質(zhì)格爾德霉素(Geldanamycin)、或者HSP合成阻礙物質(zhì)的KNK437從而人體毛囊發(fā)育容量依賴性降低。但是，因?yàn)闊嵝菘说鞍追N類多，其功能也涉及多方面，因此上述熱休克蛋白干預(yù)毛發(fā)生長(zhǎng)的分子機(jī)理不明，另外也不能預(yù)測(cè)其它的熱休克蛋白能否干預(yù)毛發(fā)生長(zhǎng)。白薇(Cynanchumatratum)是蘿蘑科(Asclepiadaceae)鵝絨藤屬(Cynanchum)的多年生草本，其根用于白薇湯等的中醫(yī)方劑中。已知白薇具有清熱涼血、解熱、利尿作用等的藥效，另外，作為其藥效成分，已知有具有強(qiáng)心苷作用的白薇醇(Cynanchol)。在專利文獻(xiàn)8中，公開(kāi)了含有包含白薇的具有生津作用的生藥的提取物及其活性成分和具有血管新生活性作用的生藥的提取物及其活性成分的育毛用的皮膚外用劑。在專利文獻(xiàn)9中，記載有將含有屬于蘿蘑科的植物的提取物的組合物用于包括體毛生長(zhǎng)的阻礙、抑制或者延遲的人體皮膚的化妝處理中的用途。然而，不清楚白薇本身單獨(dú)對(duì)毛發(fā)生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生怎樣的影響?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)1:國(guó)際公開(kāi)第03/086331號(hào)小冊(cè)子專利文獻(xiàn)2:日本特開(kāi)2005-206536號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)3:日本特開(kāi)2006-008657號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)4:國(guó)際公開(kāi)第2010/016606號(hào)小冊(cè)子專利文獻(xiàn)5:日本特開(kāi)平11-49647號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)6:日本特開(kāi)2002-62289號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)7:日本專利第4189024號(hào)專利文獻(xiàn)8:日本特開(kāi)2003-221313號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)9:日本特表2007-517824號(hào)公報(bào)非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)1: Jindo et al., The Journal of Dermatology, Vol, 20:756-762, 1993.
非專利文獻(xiàn)2:宇塚誠(chéng)和▲奏▼澤千加，日皮志(日本皮膚科學(xué)會(huì)雜志)，104 (8):979-987，1994.
非專利文獻(xiàn)3:Philpott et al., Journal of Cell Science, 97:463-471，1990.

發(fā)明內(nèi)容
S卩，在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種毛發(fā)生長(zhǎng)控制方法，該方法包括控制毛發(fā)組織中的DnaJC6的活化水平的工序。在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括下述工序(A) (C)的毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑的評(píng)價(jià)或者選擇方法，(A)測(cè)定在試驗(yàn)物質(zhì)的存在下以及不存在下能夠表達(dá)DnaJC6的細(xì)胞中的DnaJC6的表達(dá)量的工序；(B)比較試驗(yàn)物質(zhì)存在下的該細(xì)胞中的DnaJC6的表達(dá)量和試驗(yàn)物質(zhì)不存在下的該細(xì)胞中的DnaJC6的表達(dá)量的工序；(C)在試驗(yàn)物質(zhì)的存在下和不存在下之間DnaJC6的表達(dá)量存在顯著性差異的情況下，選擇該試驗(yàn)物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑的工序。本發(fā)明的其它實(shí)施方式為用于毛發(fā)生長(zhǎng)抑制中的白薇或者其提取物，或者，白薇或者其提取物在制造用于毛發(fā)生長(zhǎng)抑制的醫(yī)藥或者化妝品中的用途。另外，在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種毛發(fā)生長(zhǎng)抑制方法，所述方法包括將白薇或者其提取物適用于希望毛發(fā)生長(zhǎng)抑制的皮膚組織上。另外，在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明提供含有白薇或者其提取物作為有效成分的毛發(fā)生長(zhǎng)抑制劑。


圖1是黃連提取物以及白薇提取物對(duì)人體DnaJC6啟動(dòng)子活性的影響。n=3、mean土SD。*:Ρ〈0.05，***:Ρ〈0.001 (非配對(duì) t 檢驗(yàn)(non-paired t-test)、與溶劑對(duì)照(vsVehicle))。圖2是黃連提取物以及 白薇提取物對(duì)人體DnaJC6mRNA表達(dá)的影響。n=3、mean土SD。*:P〈0.05，**:P〈0.0l (非配對(duì) t 檢驗(yàn)、與溶劑對(duì)照)。圖3是黃連提取物以及白薇提取物對(duì)人體DnaJC6蛋白質(zhì)表達(dá)的影響。圖4是黃連提取物對(duì)毛發(fā)生長(zhǎng)的影響。A:毛發(fā)生長(zhǎng)的經(jīng)時(shí)觀察結(jié)果(n=5或者6、mean土SD。*:Ρ〈0.05，林:Ρ〈0.01，_:Ρ〈0.001(非配對(duì) t 檢驗(yàn)、與溶劑對(duì)照)。B:10 天之后
的培養(yǎng)毛囊圖像。圖5是白薇提取物對(duì)毛發(fā)生長(zhǎng)的影響。A:毛發(fā)生長(zhǎng)的經(jīng)時(shí)觀察結(jié)果(n=10 14、mean土SD。*#:Ρ〈0.001 (非配對(duì)t檢驗(yàn)、與溶劑對(duì)照)。B:9天之后的培養(yǎng)毛囊圖像。
具體實(shí)施例方式在本說(shuō)明書(shū)中，“非治療性”是指不含醫(yī)療行為的概念，即不含通過(guò)治療對(duì)人體的處置行為的概念。
·
在本說(shuō)明書(shū)中，“毛發(fā)生長(zhǎng)控制”是指促進(jìn)或者抑制毛發(fā)或者毛囊伸長(zhǎng)的作用，或者增加或者減少毛發(fā)直徑的作用。即，本發(fā)明中的“毛發(fā)生長(zhǎng)控制”是指包括促進(jìn)以及抑制毛發(fā)生長(zhǎng)的概念。在本說(shuō)明書(shū)中，“DnaJC6”是指 NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)(OMIM) [http: //www.ncb1.nlm.nih.gov/sites/entrez db=omim]中作為 MIM ID*608375 注冊(cè)的蛋白質(zhì)。DnaJC6 是被分類為熱休克蛋白的蛋白質(zhì)。熱休克蛋白中存在許多族。例如可以大致劃分為HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、HSP40、HSP27、HSPlO 的族。其中，DnaJC6 是屬于 DNAJ/HSP40 族中的分子伴侶(molecular chaperone) 在本說(shuō)明書(shū)中，“DnaJC6基因”、“DnaJC6mRNA”以及“DnaJC6啟動(dòng)子”分別是指編碼DnaJC6的基因，其mRNA、以及控制編碼DnaJC6的基因的啟動(dòng)子。本發(fā)明涉及通過(guò)控制基因的表達(dá)的毛發(fā)生長(zhǎng)的控制方法、將基因的表達(dá)作為標(biāo)識(shí)的毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑的評(píng)價(jià)或者選擇方法、以及毛發(fā)生長(zhǎng)抑制劑。本發(fā)明者們發(fā)現(xiàn)，通過(guò)控制DnaJC6的表達(dá)可以控制毛發(fā)生長(zhǎng)，通過(guò)將DnaJC6的表達(dá)作為標(biāo)識(shí)可以有效地評(píng)價(jià)或者選擇控制毛發(fā)生長(zhǎng)的物質(zhì)，以及探索抑制毛發(fā)生長(zhǎng)的物質(zhì)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)白薇或者其提取物具有抑制毛發(fā)生長(zhǎng)的作用。根據(jù)本發(fā)明，可以控制動(dòng)物身體希望的部位上的毛發(fā)生長(zhǎng)。另外根據(jù)本發(fā)明，可以在體外簡(jiǎn)便、迅速地并且高效地評(píng)價(jià)或者選擇毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑。另外，根據(jù)本發(fā)明，可以使用來(lái)自植物的對(duì)活體安全并且高效的原材料，實(shí)現(xiàn)毛發(fā)生長(zhǎng)抑制。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括控制毛囊組織中的DnaJC6的活化水平的工序的毛發(fā)生長(zhǎng)控制方法。作為上述組織，可以列舉動(dòng)物的活體的組織、以及來(lái)自動(dòng)物的活體的組織。作為動(dòng)物，優(yōu)選可以列舉人或者非人哺乳動(dòng)物、進(jìn)一步優(yōu)選為人。另外，作為動(dòng)物優(yōu)選需要控制毛發(fā)生長(zhǎng)的動(dòng)物，例如可以列舉希望或者不希望生毛或者長(zhǎng)毛的動(dòng)物、希望除毛或者脫毛的動(dòng)物、不希望脫毛的動(dòng)物等。作為來(lái)自活體的組織，可以列舉取自動(dòng)物的組織及其培養(yǎng)物。上述活化水平的控制，例如可以通過(guò)控制上述組織中的DnaJC6蛋白質(zhì)的存在量、DnaJC6蛋白質(zhì)的活化、DnaJC6蛋白質(zhì)的表達(dá)、編碼DnaJC6蛋白質(zhì)的基因或mRNA的表達(dá)、或者編碼DnaJC6蛋白質(zhì)的基因的啟動(dòng)子的活化來(lái)進(jìn)行。這些可以單獨(dú)控制，也可以組合起來(lái)控制。
在一個(gè)實(shí)施方式中，上述控制工序可以是通過(guò)降低DnaJC6的活化水平來(lái)控制毛發(fā)生長(zhǎng)的工序。作為降低DnaJC6的活化水平的手段，例如可以列舉使用對(duì)DnaJC6蛋白質(zhì)特異性的抗體使DnaJC6蛋白質(zhì)惰性化，通過(guò)阻礙DnaJC6基因的啟動(dòng)子的活性來(lái)抑制由DnaJC6基因到mRNA的轉(zhuǎn)錄，通過(guò)RNAi等手段來(lái)抑制由DnaJC6mRNA到蛋白質(zhì)的翻譯等。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，上述活化水平，作為DnaJC6基因的啟動(dòng)子的活性優(yōu)選降低20%以上，進(jìn)一步優(yōu)選降低50%以上?；蛘咦鳛镈naJC6mRNA的表達(dá)量?jī)?yōu)選降低10%以上，進(jìn)一步優(yōu)選降低20%以上。通過(guò)降低DnaJC6的活化水平，可以抑制上述組織的毛發(fā)生長(zhǎng)。在其它的實(shí)施方式中，上述控制工序可以是通過(guò)增強(qiáng)DnaJC6活化水平從而促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的工序。作為增強(qiáng)DnaJC6的活化水平的手段，例如，可以列舉向上述組織的細(xì)胞中導(dǎo)入DnaJC6基因；向上述組織的細(xì)胞中導(dǎo)入含有DnaJC6基因的表達(dá)載體；通過(guò)增加DnaJC6基因的啟動(dòng)子的活性來(lái)促進(jìn)從DnaJC6基因到mRNA的轉(zhuǎn)錄；抑制DnaJC6mRNA的分解；抑制DnaJC6蛋白質(zhì)的分解等。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，上述活化水平，作為DnaJC6基因的啟動(dòng)子的活性優(yōu)選增強(qiáng)20%以上，進(jìn)一步優(yōu)選增強(qiáng)50%以上?；蛘咦鳛镈naJC6mRNA的表達(dá)量?jī)?yōu)選增強(qiáng)10%以上，進(jìn)一步優(yōu)選增強(qiáng)20%以上。通過(guò)增強(qiáng)DnaJC6的活化水平，可以促進(jìn)上述組織的毛發(fā)生長(zhǎng)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，提供包括下述工序(A) (C)的毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑的評(píng)價(jià)或者選擇方法: (A)在試驗(yàn)物質(zhì)的存在下以及不存在下測(cè)定能夠表達(dá)DnaJC6的細(xì)胞中的DnaJC6
表達(dá)量的工序；(B)比較試驗(yàn)物質(zhì)的存在下該細(xì)胞中的DnaJC6的表達(dá)量和試驗(yàn)物質(zhì)不存在下該細(xì)胞中的DnaJC6的表達(dá)量的工序；以及(C)在試驗(yàn)物質(zhì)的存在下和不存在下之間DnaJC6的表達(dá)量存在顯著性差異的情況下，選擇該試驗(yàn)物質(zhì)作為毛發(fā)控制劑的工序。作為上述“能夠表達(dá)DnaJC6的細(xì)胞”，可以列舉生來(lái)具有DnaJC6基因并且具有表達(dá)其的能力的細(xì)胞、以及外來(lái)導(dǎo)入能夠表達(dá)DnaJC6基因的細(xì)胞。該細(xì)胞可以是取自活體的細(xì)胞、或者也可以是取自活體的組織或者器官中所含的細(xì)胞，也可以是培養(yǎng)細(xì)胞。優(yōu)選該細(xì)胞來(lái)自于哺乳動(dòng)物。作為生來(lái)具有DnaJC6基因并且具有表達(dá)其的能力的細(xì)胞，可以列舉來(lái)自活體的一切組織的細(xì)胞，優(yōu)選來(lái)自于取自哺乳動(dòng)物的皮膚的細(xì)胞，例如可以列舉存在于哺乳動(dòng)物皮膚切片中的細(xì)胞、來(lái)自毛發(fā)組織的細(xì)胞、來(lái)自表皮組織的細(xì)胞、來(lái)自真皮組織的細(xì)胞(纖維芽細(xì)胞等)和來(lái)自腦的細(xì)胞等，以及來(lái)自這些細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)物、器官培養(yǎng)物等高次培養(yǎng)物。外來(lái)的能夠表達(dá)DnaJC6基因的細(xì)胞可以通過(guò)將編入了 DnaJC6基因的表達(dá)載體導(dǎo)入任意的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，對(duì)該細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化而得到。編入DnaJC6基因的表達(dá)載體的制作方法以及將表達(dá)載體導(dǎo)入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。作為上述試驗(yàn)物質(zhì)，只要是希望作為毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑使用的物質(zhì)，沒(méi)有特別地限定，例如可以列舉動(dòng)植物、海洋生物、微生物等及其提取物；來(lái)自它們的天然成分；合成化合物；以及它們的混合物和組合物等。在上述工序(A)中，在試驗(yàn)物質(zhì)的存在下以及不存在下，測(cè)定能夠表達(dá)DnaJC6的細(xì)胞中的DnaJC6的表達(dá)量。例如，在將試驗(yàn)物質(zhì)給予細(xì)胞前后，或者在試驗(yàn)物質(zhì)添加組和試驗(yàn)物質(zhì)未添加組中，或者在試驗(yàn)物質(zhì)添加組和對(duì)照物質(zhì)添加組中，分別測(cè)定DnaJC6的表達(dá)量。DnaJC6的表達(dá)量的測(cè)定，可以將DnaJC6蛋白質(zhì)的表達(dá)、或者編碼DnaJC6蛋白質(zhì)的基因或mRNA的表達(dá)、編碼DnaJC6蛋白質(zhì)的基因的啟動(dòng)子的活化的量等作為標(biāo)識(shí)進(jìn)行測(cè)定。這些標(biāo)識(shí)可以單獨(dú)測(cè)定，也可以組合測(cè)定。作為標(biāo)識(shí)的參數(shù)(例如，蛋白質(zhì)表達(dá)、基因或者mRNA表達(dá)、啟動(dòng)子的活化等)的測(cè)定方法可以按照本領(lǐng)域中公知的方法進(jìn)行測(cè)定。例如，作為編碼DnaJC6蛋白質(zhì)的基因或者mRNA的表達(dá)量的測(cè)定方法，可以列舉RT-PCR (逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))、實(shí)時(shí)(Real-time)RT-PCR等聚合酶連鎖反應(yīng)(PCR)法、Northern 印跡法(Northern blotting)、RNA酶保護(hù)試驗(yàn)法(RNase protection assay)>DNA陣列分析等。另外，例如作為DnaJC6蛋白質(zhì)的表達(dá)量的測(cè)定方法，可以列舉瓊脂糖凝膠電泳、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE )、色譜法、免疫學(xué)測(cè)定方法(例如，利用對(duì)DnaJC6蛋白質(zhì)特異性的抗體的免疫組織化學(xué)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)、放射免疫分析法(RIA法)、免疫印跡法(Western blotting)、免疫沉淀等)、比色定量法、熒光.光學(xué)測(cè)定法、質(zhì)量分析、電子顯微鏡觀察等、以及這些的組合等，但是不限定于這些。上述方法中，優(yōu)選利用對(duì)DnaJC6蛋白質(zhì)特異的抗體的免疫印跡法、酶聯(lián)免疫吸附法、或者放射免疫分析法。在上述工序(B)中，在試驗(yàn)物質(zhì)的存在下的情況和不存在下的情況之間比較上述(A)中測(cè)定的值。例如，通過(guò)在試驗(yàn)物質(zhì)給藥前后進(jìn)行比較，或者比較試驗(yàn)物質(zhì)添加組與試驗(yàn)物質(zhì)未添加組或?qū)φ瘴镔|(zhì)添加組來(lái)進(jìn)行。例如，在試驗(yàn)物質(zhì)給藥前后、在試驗(yàn)物質(zhì)添加群和試驗(yàn)物質(zhì)未添加組之間、或 者在試驗(yàn)物質(zhì)添加組和對(duì)照物質(zhì)添加組之間比較在(A)中測(cè)定的DnaJC6蛋白質(zhì)的表達(dá)、或者編碼DnaJC6蛋白質(zhì)的基因或mRNA的表達(dá)、編碼DnaJC6蛋白質(zhì)的基因的啟動(dòng)子的活化的量等。優(yōu)選按照統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行比較。在上述工序(C)中，基于上述(B)中得到的比較結(jié)果，評(píng)價(jià)試驗(yàn)物質(zhì)的毛發(fā)生長(zhǎng)控制效果?？梢赃x擇對(duì)DnaJC6的表達(dá)產(chǎn)生影響的物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑。例如,在試驗(yàn)物質(zhì)的存在下和不存在下之間上述細(xì)胞的DnaJC6的表達(dá)量存在顯著性差異的情況下，可以選擇該試驗(yàn)物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，選擇使DnaJC6的表達(dá)量減少的試驗(yàn)物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)抑制齊U。作為優(yōu)選的例子，在與試驗(yàn)物質(zhì)不存在下的情況相比，試驗(yàn)物質(zhì)存在下的DnajcemRNA的表達(dá)量?jī)?yōu)選減少了 10%以上，進(jìn)一步優(yōu)選減少了 20%以上的情況下，選擇該物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)抑制劑。表達(dá)量的減少優(yōu)選為統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性減少。在其它實(shí)施方式中，選擇使DnaJC6的表達(dá)量增加的試驗(yàn)物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)促進(jìn)齊U。作為優(yōu)選的例子，在與試驗(yàn)物質(zhì)不存在下的情況相比，試驗(yàn)物質(zhì)存在下的DnajcemRNA的表達(dá)量?jī)?yōu)選增加了 10%以上，進(jìn)一步優(yōu)選增加了 20%以上的情況下，選擇該物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)促進(jìn)劑。表達(dá)量的增加優(yōu)選為統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性增加。在將DnaJC6基因啟動(dòng)子的活化作為標(biāo)識(shí)測(cè)定DnaJC6的表達(dá)的情況下，可以列舉包括下述(a) (d)的工序的方法作為優(yōu)選的例子，(a)將通過(guò)編碼DnaJC6的基因的啟動(dòng)子來(lái)控制的報(bào)告基因?qū)氲侥軌虮磉_(dá)DnaJC6的細(xì)胞中的工序；
(b)測(cè)定在試驗(yàn)物質(zhì)的存在下以及不存在下該細(xì)胞中的報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物的量的
工序；(c)比較試驗(yàn)物質(zhì)存在下的該細(xì)胞中的報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物的量和試驗(yàn)物質(zhì)不存在下的該細(xì)胞中的報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物的量的工序；以及，(d)在試驗(yàn)物質(zhì)存在下和不存在下之間該報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物的量存在顯著性差異的情況下，選擇該物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑的工序。作為用于測(cè)定的啟動(dòng)子，優(yōu)選人DnaJC6啟動(dòng)子。作為人DnaJC6啟動(dòng)子，可以列舉具有序列號(hào)I所表不的喊基序列的啟動(dòng)子、以及相對(duì)于序列號(hào)I所表不的喊基序列取代、缺失、插入、加成了 I個(gè) 多個(gè)(優(yōu)選為I 10個(gè)，進(jìn)一步優(yōu)選為I 5個(gè))的堿基并且由與具有序列號(hào)I所表示的堿基序列的啟動(dòng)子同樣的轉(zhuǎn)錄因子控制來(lái)控制下游的基因的表達(dá)的啟動(dòng)子。在上述(a)中，由編碼DnaJC6的基因的啟動(dòng)子控制的報(bào)告基因被導(dǎo)入到能夠表達(dá)DnaJC6的細(xì)胞中。優(yōu)選在該啟動(dòng)子的下游能夠起作用地連接報(bào)告基因。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，上述報(bào)告基因選自熒光素酶、氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶、半乳糖苷酶、葡萄糖醛酸酶以及綠色熒光蛋白質(zhì)。上述(b) (d)除了測(cè)定對(duì)象是報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物的量之外，其它都和上述(A)
(C)相同。S卩，在上述(d)中，在試驗(yàn)物質(zhì)存在下和不存在下之間上述細(xì)胞的報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物的量存在顯著性差異的情況下，可以選擇該試驗(yàn)物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，可以選擇使上述報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物的量減少的試驗(yàn)物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)抑制劑，可以選擇使該報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物的量增加的試驗(yàn)物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)促進(jìn)齊U。優(yōu)選為，在試驗(yàn)物質(zhì)存 在下的報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物的量的減少與試驗(yàn)物質(zhì)不存在下的情況相比優(yōu)選為20%以上，進(jìn)一步優(yōu)選為50%以上的情況下，選擇該物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)抑制齊U。另外，優(yōu)選為，在試驗(yàn)物質(zhì)存在下的報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物的量的增加與試驗(yàn)物質(zhì)不存在下的情況相比優(yōu)選為20%以上，進(jìn)一步優(yōu)選為50%以上的情況下，選擇該物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)促進(jìn)劑。表達(dá)量的減少或增加優(yōu)選為統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性減少或增加。由此得到的毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑可以用于生毛、養(yǎng)毛、除毛、脫毛、生毛抑制等，或者可以作為生毛劑、養(yǎng)毛劑、除毛劑、脫毛劑、生毛抑制劑等的有效成分。或者，可以通過(guò)將該毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑給予需要生毛、養(yǎng)毛、除毛、脫毛、生毛抑制等的毛發(fā)生長(zhǎng)的促進(jìn)或者抑制的被檢測(cè)體，促進(jìn)或抑制該被檢測(cè)體的毛發(fā)生長(zhǎng)，從而可以實(shí)現(xiàn)生毛、養(yǎng)毛、除毛、脫毛、生毛抑制等?；蛘?，該毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑可以用于生毛、養(yǎng)毛、除毛、脫毛、生毛抑制等的組合物、醫(yī)藥、準(zhǔn)醫(yī)藥品、化妝品或者飲食品，或者用于這些的制造。如后述的實(shí)施例所示，本發(fā)明者們發(fā)現(xiàn)白薇提取物具有顯著地抑制人體器官培養(yǎng)毛的伸長(zhǎng)的作用。因此，白薇或者其提取物作為毛發(fā)生長(zhǎng)抑制劑有用。另外，白薇或者其提取物通過(guò)該毛發(fā)抑制作用，可以發(fā)揮生毛或者養(yǎng)毛的抑制、或者除毛、脫毛等的效果。即，白薇或者其提取物可以用于毛發(fā)生長(zhǎng)抑制，用于生毛或者養(yǎng)毛的抑制，或者用于除毛、脫毛等。該用途可以是對(duì)于人或者非人的動(dòng)物、或者來(lái)自這些的檢測(cè)體的用途，另外可以是治療用途、也可以是非治療用途。因此，作為一個(gè)實(shí)施方式，本發(fā)明提供含有白薇或者其提取物作為有效成分的毛發(fā)生長(zhǎng)抑制劑。作為一個(gè)實(shí)施方式，本發(fā)明的毛發(fā)生長(zhǎng)抑制劑本質(zhì)上由白薇或者其提取物構(gòu)成。該毛發(fā)生長(zhǎng)抑制劑可以用于生毛或者養(yǎng)毛的抑制或者用于除毛或者脫毛。在本說(shuō)明書(shū)中，“白薇”是指蘿蘑科猶絨藤屬的多年生草本Cynanchum atratum,“白薇提取物”是指由白薇得到的提取物。提取物可以是由白薇的任意部位、例如全草或者根、或者它們的組合得到的提取物，優(yōu)選為由根得到的提取物。上述部位可以直接用于提取工序，或者也可以在經(jīng)過(guò)粉碎、切斷或者干燥之后用于提取工序。作為上述提取物，可以利用市售的提取物，或者也可以是通過(guò)常用方法得到的各種溶劑提取物、或者其稀釋液、其濃縮液、其干燥粉末、膏體或者其經(jīng)過(guò)活性炭處理的物質(zhì)。作為一個(gè)例子，本發(fā)明中的白薇提取物可以通過(guò)將白薇在室溫(例如4 50°C)或者加熱(室溫 溶劑沸點(diǎn))條件下進(jìn)行提取，或者使用索氏提取器(Soxhlet extractor)等提取器具進(jìn)行提取得到。對(duì)于用于提取的溶劑，可以使用極性溶劑、非極性溶劑的任意種。作為溶劑的具體例子，例如可以列舉水；甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等醇類；丙二醇、丁二醇等多元醇類；丙酮、甲基乙基酮等酮類；乙酸甲酯、乙酸乙酯等酯類；四氫呋喃、二乙基醚等鏈狀和環(huán)狀醚類；聚乙二醇等聚醚類；角鯊?fù)?、己烷、環(huán)己烷、石油醚等烴類；甲苯等芳香族烴類；二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷等鹵化烴類；以及超臨界二氧化碳；吡啶類；油脂、蠟等其它油類等有機(jī)溶齊IJ;以及這些的混合物。優(yōu)選可以列舉水、醇類及其水溶液，作為醇類優(yōu)選乙醇。更加優(yōu)選的溶劑為水和乙醇水溶液。作為醇水溶液中的醇類和水的配合比例(體積比)優(yōu)選為0.001 100:99.999 0，進(jìn)一步優(yōu)選為5 95:95 5，更加優(yōu)選為20 80:80 20，更進(jìn)一步優(yōu)選為30 70:70 30，特別優(yōu)選為40 60:60 40。在乙醇水溶液的情況下，優(yōu)選乙醇類濃度為40 60體積％。作為溶劑的使用量，優(yōu)選相對(duì)于Ig白薇根(換算為干燥質(zhì)量)為I IOOmL ；作為提取時(shí)間，優(yōu)選為I分鐘 2個(gè)月，進(jìn)一步優(yōu)選為10分鐘 4周。此時(shí)的提取溫度為0°C 溶劑沸點(diǎn)，進(jìn)一步優(yōu)選為10 60°C，更加優(yōu)選為15 40°C。

得到提取物的提取手段，具體可以使用固液提取、液液提取、浸潰、煎出、浸出、回流提取、超聲波提取、微波提取、攪拌等手段。例如，作為浸潰的一個(gè)優(yōu)選例子，可以列舉在15 40°C下浸潰I小時(shí) 4周。另外，在縮短提取時(shí)間的情況下，優(yōu)選伴隨著攪拌的固液提取。作為該固液提取的一個(gè)優(yōu)選條件，可以列舉在10 100°C (優(yōu)選為20 IO(TC)下以1000 5000rpm攪拌I 30分鐘。為了防止提取物的氧化，可以并用煮沸脫氣或者通入氮?dú)獾榷栊詺怏w除去溶存的氧，并且在所謂的非氧化的氣氛下進(jìn)行提取的手段。白薇或者其提取物可以作為用于毛發(fā)生長(zhǎng)抑制，用于生毛或者養(yǎng)毛的抑制，或者用于除毛或者脫毛的組合物、醫(yī)藥、準(zhǔn)醫(yī)藥品、化妝品、飲食品或其原料、或者飼料或其原料使用，或者用于制造這些。該組合物、醫(yī)藥品、準(zhǔn)醫(yī)藥品、化妝品、飲食品或其原料、或者飼料或其原料可以作為人或者非人動(dòng)物用進(jìn)行制造或者使用。或者，白薇或者其提取物可以作為原材料配合于用于毛發(fā)生長(zhǎng)抑制、用于生毛或者養(yǎng)毛的抑制、或者用于除毛或者脫毛的組合物、醫(yī)藥、準(zhǔn)醫(yī)藥品、化妝品、飲食品、飼料、或者飲食品或飼料的原料中。上述醫(yī)藥或者準(zhǔn)醫(yī)藥品含有白薇或者其提取物作為有效成分。該醫(yī)藥或者準(zhǔn)醫(yī)藥品可以以任意的給藥方式給藥。給藥方式可以是經(jīng)口給藥，也可以是外用劑等非經(jīng)口給藥。例如，作為經(jīng)□給藥的形態(tài)，可以列舉如片劑、包覆片劑、顆粒劑、散劑、膠囊劑的固體給藥方式，以及如酏劑(elixir)、糖漿以及懸濁液的液體給藥方式；作為非經(jīng)口給藥方式，可以列舉注射、輸液、經(jīng)皮、經(jīng)粘膜、經(jīng)鼻、經(jīng)腸、吸入、栓劑、丸劑、貼劑等。上述醫(yī)藥或者準(zhǔn)醫(yī)藥品可以單獨(dú)含有白薇或者其提取物，或者也可以與藥學(xué)上允許的載體組合含有白薇或者其提取物。作為所述載體，例如可以列舉賦形劑、覆膜劑、結(jié)合齊U、增量劑、崩解劑、表面活性劑、潤(rùn)滑劑、稀釋劑、分散劑、緩沖劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、PH調(diào)節(jié)劑、分散劑、乳化劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、著色劑、紫外線吸收劑、保濕劑、增粘劑、活性增強(qiáng)劑、抗炎癥劑、殺菌劑、香料、矯味劑、矯臭劑等。另外，該醫(yī)藥品或者準(zhǔn)醫(yī)藥品，只要不失去白薇或者其提取物的毛發(fā)生長(zhǎng)抑制作用，也可以含有其它有效成分或者藥理成分。上述醫(yī)藥或者準(zhǔn)醫(yī)藥品可以由白薇或者其提取物，或者根據(jù)需要組合上述載體和/或其它有效成分或者藥理成分，按照常用方法進(jìn)行制造。該醫(yī)藥品或者準(zhǔn)醫(yī)藥品中的白薇或者其提取物的含量以提取物的干燥物換算通常為0.001 99.999質(zhì)量％，優(yōu)選為0.01 20質(zhì)量％。上述化妝品可以含有白薇或者其提取物作為有效成分。上述化妝品可以單獨(dú)含有白薇或者其提取物，或者也可以與作為化妝品允許的載體組合而含有白薇或者其提取物。作為所述載體，例如可以列舉賦形劑、覆膜劑、結(jié)合劑、增量劑、崩解劑、表面活性劑、潤(rùn)滑劑、稀釋劑、分散劑、緩沖劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、PH調(diào)節(jié)劑、分散劑、乳化劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、著色劑、紫外線吸收劑、保濕劑、增粘劑、活性增強(qiáng)劑、抗炎癥劑、殺菌劑、香料、矯味劑、矯臭劑等。另外，該化妝品只要不失去白薇或者其提取物的毛發(fā)生長(zhǎng)抑制作用，還可以含有其它的有效成分或者化妝成分，例如，保濕劑、美白劑、紫外線保護(hù)劑、細(xì)胞賦活齊U、清潔劑、角質(zhì)溶解劑、化妝成分(例如，底妝(makeup base)、粉底(foundation)、白粉、撲粉、腿紅、口紅、眼部彩妝、眉筆、睫毛膏、其它)等。作為化妝品的形態(tài)，可以列舉乳霜、乳液、化妝水、懸濁液、泡沫、凝膠、爽身粉、面膜、薄片、貼片(patch)、膏棒、粉餅等，可以列舉能在化妝品中使用的任意形態(tài)。優(yōu)選可以為除毛或者脫毛用的化妝水、乳液、乳霜、泡沫、凝膠等形態(tài)。上述化妝品可以由白薇或者其提取物，或者根據(jù)需要組合上述載體和/或其它有效成分或者化妝品成分，按照常用方法進(jìn)行制造。該化妝品中的白薇或者其提取物的含量以提取物的干燥物換算通常為0.0001 99.999質(zhì)量％，優(yōu)選為0.001 10質(zhì)量％。上述飲食品或飼料、或者其原料可以是含有白薇或者其提取物作為有效成分，以求毛發(fā)生長(zhǎng)抑制、生發(fā)或者養(yǎng)發(fā)的抑制、或者除發(fā)或脫發(fā)等功能，并且根據(jù)需要表達(dá)此功能的食品、功能性食品、病人用食品、特殊保健用食品、寵物食品等，或者這些的原料。上述飲食品的種類沒(méi)有特別地限定。作為飲料，例如可以列舉果汁飲料、碳酸飲料、茶類飲料、乳飲料、酒精飲料、清涼飲料等全部的飲料。食品的形態(tài)，可以是固體、半固體、液體等任意的形態(tài)，或者也可以是片劑形態(tài)、丸劑形態(tài)、藥片、膠囊形態(tài)、液劑形態(tài)、糖漿形態(tài)、粉末形態(tài)、顆粒形態(tài)等。例如，作為食品，可以列舉面包類、面類、糊狀物、膠狀食品、各種小吃類、蛋糕類、點(diǎn)心類、冰淇淋類、湯類、乳制品、冷凍食品、速熟食品(instant food)、其它加工食品、調(diào)味料、營(yíng)養(yǎng)品等。上述飼料的種類也沒(méi)有特別地限定，可以是用于任意動(dòng)物的飼料，其形態(tài)也可以是與上述食品的情況同樣的任意的形態(tài)。上述飲食品或飼料或者它們的原料可以單獨(dú)含有白薇或者其提取物，或者也可以與其它食材，或者溶劑、軟化劑、油、乳化劑、防腐劑、香料、穩(wěn)定劑、著色劑、抗氧化劑、保濕齊U、增粘劑等添加劑組合含有。該飲食品或飼料中的白薇或者其提取物的含量以提取物的干燥物換算通常為0.0OOl 99.999質(zhì)量％，優(yōu)選為0.001 10質(zhì)量％。在本發(fā)明的其它實(shí)施方式中，提供一種毛發(fā)生長(zhǎng)抑制方法，其特征在于給予白薇或者其提取物。在該方法中，白薇或者其提取物用于毛發(fā)生長(zhǎng)抑制、用于生毛或者養(yǎng)毛的抑制、或者用于除毛或者脫毛等，對(duì)需要這些的對(duì)象以有效量給藥?；蛘撸邹被蛘咂涮崛∥镉糜诿l(fā)生長(zhǎng)抑制、用于生毛或者養(yǎng)毛的抑制、或者用于除毛或者脫毛等，對(duì)需要這些的對(duì)象以有效量攝取。作為給藥或者攝取的對(duì)象，可以列舉動(dòng)物，優(yōu)選為人或者非人的哺乳動(dòng)物，更加優(yōu)選為人?；蛘?，給藥或者攝取的對(duì)象可以是來(lái)自動(dòng)物的組織、器官、細(xì)胞或者它們的分離物。該組織、器官、細(xì)胞或者它們的分離物優(yōu)選為具有毛發(fā)生長(zhǎng)能力的來(lái)自天然的或者生物學(xué)或生物工程學(xué)上經(jīng)過(guò)改變的組織、器官、細(xì)胞、或者它們的分離物。另外，優(yōu)選該組織、器官、細(xì)胞、或者它們的分離物來(lái)自皮膚。優(yōu)選將白薇或者其提取物施用于上述列列舉的對(duì)象的皮膚組織中希望毛發(fā)生長(zhǎng)抑制的區(qū)域。優(yōu)選的給藥量以及攝取量，可以根據(jù)對(duì)象的種類、體重、性別、年齡、狀態(tài)或者其它要因而變動(dòng)。給藥的用量、途徑、間隔、以及攝取的量或者間隔可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員適當(dāng)決定。例如，在涂布于人體的皮膚上的情況下，給藥量?jī)?yōu)選為，作為白薇提取物(提取物的干燥物換算)成人每I人為0.01 IOOOmg/天,更加優(yōu)選為0.1 IOOmg/天。實(shí)施例以下展示實(shí)施例，更具體地說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例1基于DnaJC6表達(dá)評(píng)價(jià)試驗(yàn)物質(zhì)

(I)順序(A)黃連提取液的調(diào)制在40g黃連根(新和物產(chǎn))中加入400mL50%的乙醇水溶液，在常溫下浸潰13天。將其過(guò)濾，得到黃連提取液。將該提取液濃縮，其固體成分為5.46g。提取液的固體成分濃度為 1.73wt%。(B)白薇提取液的調(diào)制在40g白薇根(新和物產(chǎn))中加入400mL50%的乙醇溶液，在常溫下浸潰27天。將其過(guò)濾，得到白薇提取液。濃縮該白薇提取原物，其固體成分為4.39g。提取液的固體成分濃度為1.33wt%。(C)培養(yǎng)物的調(diào)制將識(shí)別DnaJC6表達(dá)的人體培養(yǎng)細(xì)胞(293A、ATCC或者M(jìn)eWo，財(cái)團(tuán)法人HUMAN SCIENCE振興財(cái)團(tuán))在DMEM (Invitrogen公司，高糖，10%熱滅活胎牛血清(heat-1nactivated FBS))中在37°C、5%C02條件下培養(yǎng)。將試驗(yàn)物質(zhì)用50%乙醇調(diào)節(jié)至lmg/ml的濃度,添加到培養(yǎng)基中以使之成為0.lvol%(最終濃度為I μ g/ml)。對(duì)照組中，添加等量的50%乙醇溶液(溶劑(Vehicle))到培養(yǎng)基中。(D)人體DnaJC6啟動(dòng)子活性的測(cè)定使用LipofectAMINE2000reagent (Invitrogen 公司)將在人體 DnaJC6 啟動(dòng)子(序列號(hào)1:979bp[轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)-771 +208])的下游插入了熒火蟲(chóng)熒光素酶基因的hDnaJC6opP/pGL4.10[luc2]質(zhì)粒、以及為了修正轉(zhuǎn)染效率而在CMV啟動(dòng)子的下游導(dǎo)入了海腎螢光素酶的質(zhì)粒(pRL-CMV，PiOmega公司)轉(zhuǎn)染于293A細(xì)胞。8小時(shí)后交換培養(yǎng)基，添加試驗(yàn)物質(zhì)。進(jìn)一步在24小時(shí)之后分別測(cè)定各熒光素酶活性。突光素酶檢測(cè)使用Dual-Glo Luciferase Assay System (Promega 公司)進(jìn)行。在除去培養(yǎng)基之后，加入用PBS稀釋了 2倍的Dual-Glo luciferase reagent,攪拌之后,約20分鐘之后測(cè)定熒火蟲(chóng)熒光素酶活性。之后加入等量的Dual-Glo Stop&Glo reagent，攪拌之后測(cè)定海腎螢光素酶活性。另外，兩者的熒光素酶活性的測(cè)定時(shí)間都是2秒。通過(guò)將全部的DnaJC6啟動(dòng)子活性(螢火蟲(chóng)熒光素酶活性)除以用于修正轉(zhuǎn)染效率而導(dǎo)入的海腎熒光素酶活性來(lái)進(jìn)行修正。之后，按照以下的式子求得DnaJC6啟動(dòng)子活性阻礙率，算出試驗(yàn)物質(zhì)阻礙了多少百分?jǐn)?shù)的DnaJC6啟動(dòng)子活性。DnaJC6啟動(dòng)子活性阻礙率(％) = {(溶劑對(duì)照添加組_試驗(yàn)物質(zhì)添加組)/溶劑對(duì)照添加組} X100(E)實(shí)時(shí) RT-PCR在添加試驗(yàn)物質(zhì)之后，使用RNeasy Mini Kit (QIAGEN公司)從培養(yǎng)了 24小時(shí)的MeWo細(xì)胞中提取總RNA (total RNA)?？俁NA的調(diào)制按照附帶的使用說(shuō)明書(shū)實(shí)施。在使總RNA濃度一致之后在65°C下進(jìn)行5分鐘熱處理，急冷之后使用。在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中，使用一定量的總 RNA 和 Oligo (dT) 2(|，使用 ThermoScript RT-PCR SystemC Invitrogen 公司)，按照附帶的使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行反應(yīng)。RT樣品保存于-20 V直至使用。通過(guò)實(shí)時(shí)RT-PCR 定量 mRNA 表達(dá)是使用 POWER SYBR-green PCR Master MixCABI公司)，并且使用PCR產(chǎn)物自動(dòng)檢測(cè)/定量系統(tǒng)PRISM7500 (ABI公司)來(lái)實(shí)施的。在50 μ I的反應(yīng)液中，在擴(kuò)增條件為95°C下進(jìn)行15秒的變性反應(yīng)，在60°C下進(jìn)行I分鐘的退火及伸長(zhǎng)反應(yīng)。 DnaJC6mRNA基因表達(dá)量通過(guò)對(duì)照基因RPLPO mRNA表達(dá)量進(jìn)行修正。RT-PCR中使用的引物利用Primer Express ver.2.0 (ABI公司)設(shè)計(jì)。使用的引物如以下的表I所示。[表I]
權(quán)利要求
1.一種毛發(fā)生長(zhǎng)控制方法，其中， 所述方法包括控制毛囊組織中的Dnajce的活化水平的工序。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中， 所述控制工序?yàn)橥ㄟ^(guò)降低DnaJC6的活化水平來(lái)抑制毛發(fā)生長(zhǎng)的工序。
3.如權(quán)利要求1所述方法，其中， 所述控制工序?yàn)橥ㄟ^(guò)增強(qiáng)DnaJC6的活化水平來(lái)促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的工序。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中， 所述控制工序?yàn)榭刂艱naJC6蛋白質(zhì)的存在量、DnaJC6蛋白質(zhì)的活化、DnaJC6蛋白質(zhì)的表達(dá)、編碼DnaJC6蛋白質(zhì)的基因或mRNA的表達(dá)、或者編碼DnaJC6蛋白質(zhì)的基因的啟動(dòng)子的活化的工序。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中， 所述組織為人毛囊組織。
6.一種毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑的評(píng)價(jià)或者選擇方法，其中， 所述方法包括下述工序(A) (C): (A)在試驗(yàn)物質(zhì)的存在下以及不存在下測(cè)定能夠表達(dá)DnaJC6的細(xì)胞中的DnaJC6的表達(dá)量的工序；` (B)比較在試驗(yàn)物質(zhì)存在下的該細(xì)胞中的DnaJC6的表達(dá)量與在試驗(yàn)物質(zhì)不存在下的該細(xì)胞中的DnaJC6的表達(dá)量的工序；以及， (C)在試驗(yàn)物質(zhì)存在下和不存在下之間DnaJC6的表達(dá)量存在顯著性差異的情況下，選擇該試驗(yàn)物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑的工序。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中， 在所述(C)中，選擇使DnaJC6的表達(dá)量減少的所述試驗(yàn)物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)抑制劑，選擇使DnaJC6的表達(dá)量增加的所述試驗(yàn)物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)促進(jìn)劑。
8.如權(quán)利要求6或7所述的方法，其中， 所述DnaJC6的表達(dá)量為DnaJC6蛋白質(zhì)的表達(dá)、編碼DnaJC6蛋白質(zhì)的基因或mRNA的表達(dá)、或者編碼DnaJC6蛋白質(zhì)的基因的啟動(dòng)子的活化的量。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中， 編碼DnaJC6蛋白質(zhì)的基因或mRNA的表達(dá)量的測(cè)定通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法、或者Northern印跡法、或者RNA酶保護(hù)試驗(yàn)法、或者DNA陣列分析來(lái)進(jìn)行。
10.如權(quán)利要求8所述的方法，其中， DnaJC6蛋白質(zhì)的表達(dá)量的測(cè)定通過(guò)利用對(duì)DnaJC6蛋白質(zhì)特異性抗體的免疫印跡法、ELISA法、或者RIA法來(lái)進(jìn)行。
11.如權(quán)利要求6所述的方法，其中， 所述DnaJC6的表達(dá)量為通過(guò)編碼DnaJC6蛋白質(zhì)的基因的啟動(dòng)子控制的報(bào)告基因的表達(dá)產(chǎn)物的量，在所述(A)中，包括在能夠表達(dá)所述DnaJC6的細(xì)胞中預(yù)先導(dǎo)入該報(bào)告基因的工序。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中， 選擇使所述報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物的量減少的所述試驗(yàn)物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)抑制劑，選擇使該報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物的量增加的所述試驗(yàn)物質(zhì)作為毛發(fā)生長(zhǎng)促進(jìn)劑。
13.如權(quán)利要求11所述的方法，其中， 所述報(bào)告基因選自熒光素酶、氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶、半乳糖苷酶、葡萄糖醛酸酶以及綠色熒光蛋白質(zhì)。
14.如權(quán)利要求6或11所述的方法，其中， 能夠表達(dá)所述DnaJC6的細(xì)胞為存在于來(lái)自哺乳動(dòng)物皮膚的切片、培養(yǎng)細(xì)胞或者高次皮膚培養(yǎng)物中的細(xì)胞。
15.用于毛發(fā)生長(zhǎng)抑制的白薇或者其提取物。
16.如權(quán)利要求15所述的提取物，其中， 提取物為水提取物或者乙醇水溶液提取物。
17.白薇或者其提取物在用于毛發(fā)生長(zhǎng)抑制的醫(yī)藥或者化妝品的制造中的用途。
18.如權(quán)利要求17所述的用途，其中， 提取物為水提取物或者乙醇水溶液提取物。
19.如權(quán)利要求17所述的用途，其中， 乙醇水溶液為40 60體積％的乙醇水溶液。
20.一種毛發(fā)生長(zhǎng)抑制方法，其中， 所述方法包括將白薇或者其提取物施用于希望毛發(fā)生長(zhǎng)抑制的皮膚組織上。
21.如權(quán)利要20所述的方法，其中， 提取物為水提取物或者乙醇水溶液提取物。
全文摘要
本發(fā)明提供毛發(fā)生長(zhǎng)控制方法、毛發(fā)生長(zhǎng)控制劑的評(píng)價(jià)或選擇方法、以及毛發(fā)生長(zhǎng)抑制劑。本發(fā)明提供毛發(fā)生長(zhǎng)抑制劑的評(píng)價(jià)或選擇方法，所述方法包括對(duì)能夠表達(dá)DnaJC6的細(xì)胞給予試驗(yàn)物質(zhì)的工序；測(cè)定該細(xì)胞中的DnaJC6表達(dá)的工序；以及，基于該表達(dá)評(píng)價(jià)該試驗(yàn)物質(zhì)的毛發(fā)生長(zhǎng)抑制效果的工序。另外，本發(fā)明還提供含有白薇或者其提取物作為有效成分的毛發(fā)生長(zhǎng)抑制劑。
文檔編號(hào)A61K8/97GK103118661SQ20118004350
公開(kāi)日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2011年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月9日
發(fā)明者長(zhǎng)澤安曇, 一之瀬進(jìn) 申請(qǐng)人:花王株式會(huì)社